全 文 ：核 农 学 报摇 圆园员缘袁圆怨渊员园冤院员愿苑远 耀 员愿愿猿
允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
收稿日期院圆园员缘鄄园猿鄄圆远摇 接受日期院圆园员缘鄄园苑鄄圆愿
基金项目院国家自然科学基金项目渊猿员园远园圆远员冤袁国家自然科学基金项目渊猿员源远园缘员愿冤
作者简介院张树武袁男袁主要从事作物病害及其综合防治研究遥 耘鄄皂葬蚤造院 扎澡葬灶早泽憎苑园源岳 员圆远援 糟燥皂
通讯作者院徐秉良袁女袁教授袁主要从事作物病害及其综合防治研究遥 耘鄄皂葬蚤造院 曾怎遭造岳 早泽葬怎援 藻凿怎援 糟灶
文章编号院员园园园鄄愿缘缘员渊圆园员缘冤员园鄄员愿苑远鄄园愿
白粉病菌侵染对美洲南瓜不同抗性品种
孕粤蕴基因表达量的影响
张树武员 摇 徐秉良员 摇 刘摇 佳员 摇 薛应钰员 摇 陈荣贤圆
渊员 甘肃农业大学草业学院 辕草业生态系统教育部重点实验室 辕甘肃省草业工程实验室 辕中 原美草地畜牧业
可持续发展研究中心袁甘肃 兰州摇 苑猿园园苑园曰圆 甘肃省武威金苹果有限责任公司袁甘肃 武威摇 苑猿猿园园园冤
摘摇 要院为明确白粉病菌侵染对不同美洲南瓜抗性品种 孕粤蕴 基因表达量的影响袁采用室内接种和 择砸栽鄄
孕悦砸技术分别测定不同美洲南瓜抗性品种接种苍耳单囊白粉菌后发病率和病情指数袁并分析接菌后其
不同组织部位 孕粤蕴基因表达量的变化情况遥 室内测定结果表明袁抗病品种小三星 云圆 发病率和病情指
数显著低于感病品种金 员圆云圆袁尤其接菌后第 员猿 天袁小三星 云圆 发病率和病情指数分别为 员苑郾 猿豫和 员缘郾 远袁
而金 员圆云圆 发病率和病情指数分别为 怨猿郾 猿豫和 愿猿郾 园遥 孕粤蕴 基因表达量测定结果表明袁不同抗性美洲南
瓜接菌后袁孕粤蕴基因相对表达量显著升高袁且随着接种天数增加袁其不同组织部位 孕粤蕴 基因相对表达量
呈现出先增加后降低的趋势遥 抗病品种小三星 云圆 接菌后叶片中 孕粤蕴 基因相对表达量增加较为显著袁
叶柄和茎秆次之袁并且其相对表达量分别在第 苑 和第 怨 天达到最大值曰感病品种金 员圆云圆 接菌后叶片中
孕粤蕴基因相对表达量较抗病品种低袁但与对照相比袁其 孕粤蕴 基因相对表达量显著增加袁并分别在第 怨 和
第 员员 天达到最大值遥 因此袁孕粤蕴基因相对表达量与美洲南瓜抗白粉病强弱具有密切的关系遥 本研究可
为南瓜抗病品种的选育提供科学依据遥
关键词院苍耳单囊白粉菌曰孕粤蕴基因曰美洲南瓜曰抗病性曰组织部位
阅韵陨院员园郾 员员愿远怨 辕 躁援 蚤泽泽灶援 员园园鄄愿缘缘员郾 圆园员缘郾 员园援 员愿苑远
摇 摇 南瓜白粉病 渊 责怎皂责噪蚤灶 责燥憎凿藻则赠 皂蚤造凿藻憎冤是南瓜
渊悦怎糟怎则遭蚤贼葬 责藻责燥冤栽培中较为严重和普遍的一种世界性
病害咱员暂 袁其在温室和露地栽培中均可发生咱圆暂 遥 同时袁
近年来随着甘肃省南瓜种植面积的不断扩大袁南瓜白
粉病的发生越来越严重袁对南瓜产业的发展造成了严
重影响遥 目前有关南瓜白粉病的防治仍以化学防治为
主袁但因化学农药高残留尧难降解和污染环境等问题而
受到限制咱猿暂 遥 鉴于南瓜白粉病化学防治存在的缺陷袁
选育抗病品种已成为目前研究的重点和热点之一咱源暂 遥
目前袁有关苯丙烷代谢途径中与植物抗病性相关
的酶或基因已有报 道袁 表 明 苯 丙 氨 酸 解 氨 酶
渊责澡藻灶赠造葬造葬灶蚤灶藻 葬皂皂燥灶蚤葬鄄造赠葬泽藻袁 孕粤蕴冤是苯丙烷类代谢
途径中与抗菌功能产物形成相关的关键酶和限速酶袁
如其可将苯丙氨酸转化为肉桂酸袁为木质素和植保素
的合成提供前体咱缘暂 遥 木质素是植物防御反应中重要
的生理活性物质之一袁可通过加强细胞壁和增加组织
木质化程度来阻止病原菌的侵染咱远 原 愿暂 遥 相关研究表
明袁孕粤蕴在植物早期防卫反应中具有重要的作用咱怨暂 遥
当植物受到病原物侵染时袁植物体内许多防卫基因进
行表达袁其中 孕粤蕴 基因是 员 个较为重要的防卫基
因咱员园暂 遥 齐放军等咱员员暂研究表明水稻渊韵则赠扎葬 泽葬贼蚤增葬冤抗白
叶枯病渊载葬灶贼澡燥皂燥灶葬泽 燥则赠扎葬藻冤基因近等基因系和转基
因系材料与白叶枯病菌非亲和性互作的过程中袁水稻
编码苯丙氨酸解氨酶基因 孕粤蕴 的转录均受到白叶枯
病菌的诱导遥 江汉民等咱员圆暂利用实时荧光定量 孕悦砸 对
抗感黑腐病渊载援 糟葬皂责藻泽贼则蚤泽冤花椰菜渊月则葬泽泽蚤糟葬 燥造藻则葬糟藻葬冤
叶片中 孕粤蕴 基因相对表达量进行了分析袁结果表明抗
病材料 孕粤蕴基因表达量显著高于感病材料袁进而证实
了 孕粤蕴基因的表达与花椰菜对黑腐病的胁迫相关袁但
有关白粉菌侵染对美洲南瓜不同组织部位 孕粤蕴 基因
远苑愿员
摇 员园 期 白粉病菌侵染对美洲南瓜不同抗性品种 孕粤蕴基因表达量的影响
表达影响等方面的研究鲜见报道遥
本研究以不同美洲南瓜抗性品种为材料袁对其接
种苍耳单囊白粉菌后袁采用 择砸栽鄄孕悦砸 技术测定其叶
片尧叶柄和茎秆中 孕粤蕴基因相对表达量袁旨在明确 孕粤蕴
基因与美洲南瓜抗白粉病的关系袁进而为研究 孕粤蕴 基
因与植物抗病性关系和南瓜抗病育种提供科学依据遥
员摇 材料与方法
员郾 员摇 试验材料
员郾 员郾 员摇 供试南瓜品种摇 供试美洲南瓜抗病品种为小
三星 云圆袁感病品种为金 员圆云圆袁圆 份材料均由武威金苹
果有限责任公司选育和提供遥
员郾 员郾 圆摇 供试病原菌摇 供试病原菌为苍耳单囊白粉菌
渊孕燥凿燥泽责澡葬藻则葬 曾葬灶贼澡蚤蚤冤袁由甘肃农业大学植物病理学实
验室提供遥
员郾 员郾 猿摇 供试工具酶和生化试剂摇 郧则藻藻灶 原 圆 原 郧燥 择孕悦砸
酝葬泽贼藻则皂蚤曾荧光染料购自大连宝生物工程有限公司曰总
砸晕粤提取试剂盒购自北京天根生化科技有限公司曰
砸晕葬泽藻鄄枣则藻藻 阅晕葬泽藻试剂盒和 糟阅晕粤 第 员 链合成试剂盒
购自生工生物工程渊上海冤股份有限公司遥
员郾 员郾 源摇 引物设计与合成摇 根据刘佳等咱员猿暂已克隆的美
洲南瓜 孕粤蕴基因 糟阅晕粤全长序列袁利用分子生物学软
件 韵造蚤早燥 远郾 园 或 孕则蚤皂藻则 缘郾 园 进行特异性引物设计渊表
员冤袁并由生工生物工程渊上海冤股份有限公司合成遥
表 员摇 孕粤蕴和 粤糟贼蚤灶基因 孕悦砸扩增特异性引物
栽葬遭造藻 员摇 杂责藻糟蚤枣蚤糟 孕悦砸 责则蚤皂藻则泽 枣燥则 孕粤蕴 葬灶凿 粤糟贼蚤灶 早藻灶藻
引物编号
晕怎皂遭藻则 燥枣 责则蚤皂藻则泽
引物序列
孕则蚤皂藻则泽 泽藻择怎藻灶糟藻
责葬造渊云冤 缘忆鄄粤粤悦栽栽悦栽悦悦栽悦粤粤栽郧郧悦栽栽郧郧栽鄄猿忆
责葬造渊砸冤 缘忆鄄栽郧粤粤粤悦粤栽悦粤粤栽悦粤粤粤郧郧郧栽栽郧鄄猿忆
粤悦栽渊云冤 缘忆鄄栽早再早粤悦粤粤栽早早粤粤悦宰早早粤粤栽早鄄猿忆
粤悦栽渊砸冤 缘忆鄄悦粤栽悦栽早再栽早早粤粤砸早栽早悦栽早粤早鄄猿忆
摇 摇 晕燥贼藻院 再 越 悦 燥则 栽袁 宰 越 粤 燥则 栽袁 砸 越 粤 燥则 早援
员郾 圆摇 试验方法
员郾 圆郾 员摇 白粉菌孢子悬浮液配制和繁殖摇 将甘肃农业
大学植物病原实验室保存的白粉菌孢子经灭菌的蒸
馏水配制为孢子悬浮液袁其浓度为 员园 伊 员园 倍镜下每
个视野大约 缘园 耀 远园 个孢子咱员源暂 袁并置于 源益保存遥 采
用涂抹法将保存的孢子悬浮液接种于四叶期感病美
洲南瓜幼苗叶片袁每个叶片接种 缘园园 滋蕴 孢子悬浮
液袁并将幼苗置于 圆缘益 尧相对湿度 远园豫 尧光照和黑暗
分别为 员远 澡和 愿 澡的 郧载在智能光照培养箱渊宁波东
南仪器有限公司冤中培养遥 待发病后袁采用上述方法
转接于感病美洲南瓜幼苗叶片进一步纯化培养并保
存备用遥
员郾 圆郾 圆摇 不同抗感品种种植摇 于 圆园员猿 年 愿 月在温室中
种植美洲南瓜抗病品种小三星 云圆 和感病品种金
员圆云圆遥 挑选饱满且大小一致的不同品种种子袁将其经
缘豫 晕葬悦造韵消毒 猿 皂蚤灶袁无菌水冲洗 缘 次后袁置于无菌
水中浸泡 员圆 澡袁并将浸泡过的种子均匀摆放于铺有 员
层纱布和 圆 层滤纸的培养皿渊直径为 怨 糟皂冤内袁于 圆缘益
砸载在型智能人工气候箱渊宁波江南仪器厂冤中催芽袁待
露白后种植遥 每盆种植 愿 株袁每个品种种植 员圆 盆袁共
怨远株遥 试验在温度为 圆缘益尧相对湿度为 远园豫 尧光照和
黑暗分别为 员远 澡和 愿 澡的培养箱中培养遥
员郾 圆郾 猿摇 接种后发病率和病情指数统计摇 待供试植株
生长到四叶期时袁每盆选择长势较一致的植株 缘 株袁采
用涂抹法将白粉菌孢子悬浮液接种于植株叶部袁每个
叶片接种 缘园园 滋蕴孢子悬浮液袁每株接种 猿 个叶片袁且
每个品种处理组和对照组分别接种 远 盆渊怨园 个叶片冤袁
并以无菌水作为对照遥 然后将接种的幼苗置于温度为
圆缘益尧相对湿度为 远园豫 尧光照和黑暗分别为 员远 澡和 愿 澡
的温室中进行遥 接种后每隔 圆凿 观察并记录 员 次发病
情况袁并计算其发病率和病情指数遥 病情分级标准参
考王建设等咱员缘暂的方法遥 发病率和病情指数计算公式
分别为院
叶片发病率 越发病叶片数 辕调查总叶片数 伊员园园豫
病情指数 越 撞渊各级病叶数 伊病级数冤 辕 渊调查总叶
片数 伊最高级代表值冤 伊 员园园
员郾 圆郾 源摇 不同抗感品种 砸晕粤提取和检测摇 自接菌后第
员 天开始袁每隔 圆凿采集不同抗感品种处理组和对照组
叶片渊去除叶脉冤尧叶柄和茎秆各 园郾 缘 早袁每个处理和对
照均重复 远 次袁并用灭菌的锡箔纸包好置于 原 愿园益超
低温冰箱保存备用遥 采用植物组织总 砸晕粤 提取试剂
盒提取不同抗感品种叶片尧叶柄和茎秆中总 砸晕粤袁利
用 砸晕葬泽藻鄄枣则藻藻 阅晕葬泽藻试剂盒去除 阅晕粤后经 员豫琼脂糖
凝胶电泳检测所提取的 砸晕粤 完整性袁 并利用
晕葬灶燥孕澡燥贼燥皂藻贼藻则栽酝孕藻葬则造 紫外分光光度计渊德国 陨皂责造藻灶
公司冤对所提取 砸晕粤 的 韵阅圆远园 辕 圆愿园尧韵阅圆远园 辕 圆猿园和浓度进行
测定袁最后将提取的 砸晕粤分装后置于 原 愿园益超低温冰
箱保存备用遥
员郾 圆郾 缘摇 糟阅晕粤第 员 链合成摇 糟阅晕粤 第 员 链合成方法根
据生工生物工程渊上海冤股份有限公司提供的第 员 链
糟阅晕粤合成试剂盒渊酝鄄酝怎蕴灾 云蚤则泽贼 杂贼葬灶凿 阅晕粤 杂赠灶贼澡藻泽蚤泽
运蚤贼冤的使用方法进行合成遥
苑苑愿员
核摇 农摇 学摇 报 圆怨 卷
员郾 圆郾 远摇 内参基因和目的基因克隆摇 以 圆 个不同抗性
品种总 砸晕粤反转录获得的 糟阅晕粤为模板袁设计特异性
引物渊表 员冤扩增不同组织部位 孕粤蕴 和 粤糟贼蚤灶 基因咱员远暂 袁
然后将扩增片段切胶回收袁酶切后利用 栽源 阅晕粤 连接
酶与克隆载体 责哉悦缘苑 原 栽 载体连接袁连接后转化到大
肠杆菌感受态细胞渊阅匀缘琢冤袁经蓝白斑筛选后挑取白
色菌落进行 孕悦砸鉴定袁提取质粒后采用 孕泽贼陨和 月葬皂匀陨
对重组质粒进行酶切检测袁挑取阳性克隆测序袁并对测
序结果进行比对遥
员郾 圆郾 苑摇 白粉菌侵染对美洲南瓜 孕粤蕴 基因表达量的影
响摇 参照大连宝生物有限公司提供的 郧则藻藻灶 原 圆 原 郧燥
择孕悦砸 酝葬泽贼藻则皂蚤曾 说明书袁利用 杂贼则葬贼葬早藻灶藻 酝曾猿园园园责栽酝
砸藻葬造鄄贼蚤皂藻 孕悦砸 杂赠泽贼藻皂对不同组织部位 孕粤蕴基因 糟阅晕粤
进行扩增尧检测和相对定量分析遥 砸藻葬造鄄贼蚤皂藻 孕悦砸 反应
总体系 圆园 滋蕴院猿 滋蕴 糟阅晕粤尧员 滋蕴 源园园 灶皂燥造窑蕴 原员云燥则憎葬则凿
孕则蚤皂藻则尧员 滋蕴 源园园 灶皂燥造窑蕴 原员砸藻增藻则泽藻 孕则蚤皂藻则尧员园 滋蕴 郧则藻藻灶
原 圆 原 郧燥 择孕悦砸 酝葬泽贼藻则皂蚤曾 和 缘 滋蕴 砸晕葬泽藻鄄云则藻藻 凿凿匀圆韵遥
反应程序为院怨缘益预变性 员园 皂蚤灶曰怨缘益变性 员缘 泽袁远园益
退火延伸 远园 泽袁共 源园 个循环遥 试验中每个处理和对照
均重复 远 次遥 同时采用 圆 原吟吟悦贼方法咱员苑 原 员愿暂计算不同抗
感品种接菌后不同时间内不同组织部位 孕粤蕴 基因相
对表达量遥
员郾 猿摇 数据统计
采用 耘曾糟藻造 圆园园猿 进行数据处理和图表绘制袁采用
杂孕杂杂 员远郾 园 软件进行方差分析遥 采用单因素方差分析
和 贼 检验方法统计各处理平均数的差异并进行差异显
著性检验遥
表 圆摇 接种白粉菌后不同品种美洲南瓜发病率
栽葬遭造藻 圆摇 栽澡藻 凿蚤泽藻葬泽藻 蚤灶糟蚤凿藻灶糟藻 燥枣 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 增葬则蚤藻贼蚤藻泽 燥枣 悦怎糟怎则遭蚤贼葬 责藻责燥 葬枣贼藻则 蚤灶燥糟怎造葬贼藻凿 憎蚤贼澡 孕燥凿燥泽责澡葬藻则葬 曾葬灶贼澡蚤蚤 辕 豫
品种 灾葬则蚤藻贼蚤藻泽 天数 阅葬赠泽 辕 凿员 猿 缘 苑 怨 员员 员猿
金 员圆云圆摇 允蚤灶员圆云圆 园郾 园 园郾 园 员猿郾 猿 葬 源圆郾 猿 葬 愿园郾 园 葬 愿猿郾 猿 葬 怨猿郾 猿 葬
小三星 云圆摇 载蚤葬燥泽葬灶曾蚤灶早 云圆 园郾 园 园郾 园 园郾 园 遭 猿郾 猿 遭 员猿郾 猿 遭 员缘郾 苑 遭 员苑郾 猿 遭
摇 摇 注院表中数据均为平均数遥 不同小写字母表示在 孕 约 园郾 园缘 水平差异显著遥 下同遥
晕燥贼藻院 栽澡藻 凿葬贼葬 蚤灶 贼澡藻 贼葬遭造藻 葬则藻 皂藻葬灶援 阅蚤枣枣藻则藻灶贼 造燥憎藻则糟葬泽藻 造藻贼贼藻则泽 皂藻葬灶 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼 凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻泽 葬贼 园郾 园缘 造藻增藻造援 栽澡藻 泽葬皂藻 葬泽 枣燥造造燥憎蚤灶早援
圆摇 结果与分析
圆郾 员摇 不同抗性品种接种白粉菌后发病程度
感病品种金 员圆云圆 于接菌后第 缘 天开始出现症状袁
抗病品种小三星 云圆 于接菌后第 苑 天开始出现症状袁而
且病斑较小袁较稀疏遥 同时袁随着接菌时间的增加袁抗
病品种病斑扩展速度较慢袁而感病品种病斑扩展速度
较迅速遥 此外袁接菌后第 员猿 天袁感病品种整个植株叶
片被白色粉状霉层覆盖渊图 员 原 粤冤袁而对照均未发病
渊图 员 原 悦冤曰抗病品种叶片病斑较小且稀疏渊图 员 原 月冤袁
且对照均未发病渊图 员 原 阅冤遥
与对照相比袁不同抗感品种发病率和病情指数
存在显著差异遥 随着接菌时间增加袁其发病率和病
情指数也不断增加袁但感病品种发病时间明显早于
抗病品种袁以及其发病率和病情指数显著高于抗病
品种袁尤其接菌后第 员猿 天袁感病品种金 员圆云圆 发病率
和病情指数分别为 怨猿郾 猿豫和 愿猿郾 园袁而抗病品种小三
星 云圆 发病率和病情指数分别为 员苑郾 猿豫和 员缘郾 远 渊表
圆尧表 猿冤遥
注院处理组院粤院金 员圆云圆曰月院小三星 云圆遥 对照组院悦院金 员圆云圆曰
阅院小三星 云圆遥
晕燥贼藻院 栽则藻葬贼皂藻灶贼院 粤院 允蚤灶员圆云圆袁 月院 载蚤葬燥泽葬灶曾蚤灶早 云圆援 悦燥灶贼则燥造院
悦院 允蚤灶员圆云圆袁 阅院 载蚤葬燥泽葬灶曾蚤灶早 云圆援
图 员摇 不同品种美洲南瓜接种白粉菌 员猿凿后发病症状
云蚤早援 员摇 栽澡藻 泽赠皂责贼燥皂 燥枣 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 增葬则蚤藻贼蚤藻泽 燥枣 悦怎糟怎则遭蚤贼葬 责藻责燥
葬枣贼藻则 蚤灶燥糟怎造葬贼藻凿 憎蚤贼澡 孕燥凿燥泽责澡葬藻则葬 曾葬灶贼澡蚤蚤 燥灶 员猿贼澡 凿葬赠
愿苑愿员
摇 员园 期 白粉病菌侵染对美洲南瓜不同抗性品种 孕粤蕴基因表达量的影响
表 猿摇 接种白粉菌后不同品种美洲南瓜病情指数
栽葬遭造藻 猿摇 栽澡藻 凿蚤泽藻葬泽藻 蚤灶凿藻曾 燥枣 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 增葬则蚤藻贼蚤藻泽 燥枣 悦怎糟怎则遭蚤贼葬 责藻责燥 葬枣贼藻则 蚤灶燥糟怎造葬贼藻凿 憎蚤贼澡 孕燥凿燥泽责澡葬藻则葬 曾葬灶贼澡蚤蚤
品种 灾葬则蚤藻贼蚤藻泽 天数 阅葬赠泽 辕 凿员 猿 缘 苑 怨 员员 员猿
金 员圆云圆摇 允蚤灶员圆云圆 园郾 园 园郾 园 员猿郾 猿 葬 圆圆郾 圆 葬 源缘郾 猿 葬 缘园郾 苑 葬 愿猿郾 园 葬
小三星 云圆摇 载蚤葬燥泽葬灶曾蚤灶早 云圆 园郾 园 园郾 园 园郾 园 遭 猿郾 猿 遭 员员郾 员 遭 员猿郾 猿 遭 员缘郾 远 遭
圆郾 圆摇 砸晕粤完整性和质量检测
结果表明提取的 圆 个品种处理组和对照组中不同
组织部位总 砸晕粤 圆愿杂尧员愿杂 和 缘杂 条带清晰尧完整袁且
圆愿杂条带亮度约为 员愿杂 的 圆 倍遥 同时通过紫外分光光
度计测定提取的总 砸晕粤 的 韵阅圆远园 辕 圆愿园尧韵阅圆远园 辕 圆猿园和浓度袁
其 韵阅圆远园 辕 圆愿园均在 圆郾 园 左右袁韵阅圆远园 辕 圆猿园均大于 圆郾 园袁表明提
取的 砸晕粤质量较好渊图 圆冤遥
注院员尧圆 和 猿 分别表示金 员圆云圆 叶片尧叶柄和茎秆曰源尧缘 和
摇 摇 远 分别表示小三星 云圆 叶片尧叶柄和茎秆遥
晕燥贼藻院 员袁 圆 葬灶凿 猿 则藻责则藻泽藻灶贼 贼澡藻 造藻葬增藻泽袁 责藻贼蚤燥造藻 葬灶凿 泽贼藻皂 燥枣
允蚤灶 员圆云圆袁 则藻泽责藻糟贼蚤增藻造赠援 源袁 缘 葬灶凿 远 则藻责则藻泽藻灶贼 贼澡藻 造藻葬增藻泽袁
摇 摇 责藻贼蚤燥造藻 葬灶凿 泽贼藻皂 燥枣 载蚤葬燥泽葬灶曾蚤灶早 云圆袁 则藻泽责藻糟贼蚤增藻造赠援
图 圆摇 不同品种不同组织部位 砸晕粤提取
云蚤早援 圆摇 耘曾贼则葬糟贼蚤燥灶 燥枣 砸晕粤 枣则燥皂 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 贼蚤泽泽怎藻
葬灶凿 增葬则蚤藻贼蚤藻泽 燥枣 悦怎糟怎则遭蚤贼葬 责藻责燥
圆郾 猿摇 目的基因和内参基因检测及溶解曲线分析
经测序后将获得的 圆个品种 粤糟贼蚤灶和 孕粤蕴基因序列
输入 晕悦月陨中与已报道的 孕粤蕴 和 粤糟贼蚤灶 基因进行 月造葬泽贼载
比对袁结果表明所获得的 圆个品种 孕粤蕴基因与黄瓜 孕粤蕴
基因序列的相似性分别为 怨猿郾 猿员豫和 怨猿郾 圆缘豫袁圆个品种
粤糟贼蚤灶基因与黄瓜 粤糟贼蚤灶基因序列的相似性为 怨猿郾 缘猿豫和
怨圆郾 远苑豫袁表明所获得序列为不同品种美洲南瓜 孕粤蕴 和
粤糟贼蚤灶基因部分序列遥 溶解曲线分析结果表明袁不同品
种美洲南瓜 孕粤蕴 和 粤糟贼蚤灶 基因的溶解曲线均只有 员 个
栽皂值袁且无引物二聚体形成袁表明扩增所得的 孕粤蕴 和
粤糟贼蚤灶基因 孕悦砸产物均为目的片段遥
圆郾 源摇 白粉菌侵染对美洲南瓜 孕粤蕴基因表达量的影响
随着接菌时间的增加袁圆 个品种不同组织部位
孕粤蕴基因相对表达量整体呈现出先增加后降低的趋
势遥 与对照相比袁接菌后 圆 个品种不同组织部位 孕粤蕴
基因相对表达量显著增加袁抗病品种显著高于感病品
种袁并且接菌后不同时间和不同品种 孕粤蕴 基因相对表
达量存在显著差异遥 同时袁不同组织部位 孕粤蕴 基因相
对表达量呈现出叶片较高袁叶柄次之袁茎秆最低遥
抗病品种小三星 云圆 在接菌前 猿凿 内袁不同组织部
位 孕粤蕴基因相对表达量与对照无显著差异渊图 猿冤袁但
接菌处理 缘凿 后袁叶片中 孕粤蕴 基因相对表达量增加较
为显著袁并在处理后第 苑 天达到最大值渊图 猿 原 粤冤袁而
叶柄在处理后第 苑 和第 怨 天达到最大值渊图 猿 原 月冤袁茎
秆在处理后第 怨 天达到最大值渊图 猿 原 悦冤遥
感病品种金 员圆云圆 接菌处理后前 猿凿袁叶片尧叶柄和
茎秆中 孕粤蕴基因相对表达量增加幅度不显著袁且相对
表达量无显著差异渊图 猿冤遥 随着接菌时间的增加袁叶
片中 孕粤蕴基因相对表达量在第 怨 天达到最大值渊图 源
原 粤冤袁而叶柄和茎秆中表达量在第 员员 天达到最大值
渊图 源 原 月尧图 源 原 悦冤遥 随着处理后期发病严重程度的
增加袁孕粤蕴基因相对表达量呈现明显的下降趋势遥
圆郾 缘摇 不同品种接种白粉菌后 孕粤蕴 基因净增表达量测
定
接种白粉菌后袁圆 个品种叶片中 孕粤蕴 基因净增表
达量在接菌后 猿凿内无显著差异曰接菌后第 缘 和第 苑 天
其净增表达量增加较明显袁并且抗病与感病品种相比
存在显著差异袁而且在接菌后第 苑 天 孕粤蕴 基因净增表
达量达到最大值曰接菌后第 怨 天 圆 个品种叶片中其净
增表达量开始降低袁且在第 员员 和第 员猿 天显著降低渊图
缘 原 粤冤遥 叶柄中 孕粤蕴 基因净增表达量在接菌后前 猿凿
内无显著差异曰接菌后第 缘尧第 苑 和第 怨 天其净增表达
量增加较明显袁并且抗病与感病品种相比存在显著的
差异曰接菌后第 怨 天叶柄中 孕粤蕴 基因净增表达量达到
最大值袁但接菌后第 员员 天开始降低袁尤其第 员猿 天降低
较为显著渊图 缘 原 月冤遥 茎秆中 孕粤蕴 基因净增表达量在
接菌后第 员 天无显著差异曰接菌后第 猿尧第 缘 和第 苑 天
显著增加袁并且抗病与感病品种相比存在显著的差异曰
接菌后第 苑 天达到最大值袁而在接菌后第 怨 天开始降
低袁尤其在第 员猿 天显著降低渊图 缘 原 悦冤遥
怨苑愿员
核摇 农摇 学摇 报 圆怨 卷
注院粤院叶片曰月院叶柄曰悦院茎秆遥 图中数据为平均数 依标准误遥 下同遥
晕燥贼藻院 粤院 蕴藻葬增藻泽援 月院 孕藻贼蚤燥造藻援 悦院 杂贼藻皂援 栽澡藻 凿葬贼葬 蚤灶 贼澡藻 枣蚤早怎则藻 葬则藻 皂藻葬灶
依 杂耘援 栽澡藻 泽葬皂藻 葬泽 枣燥造造燥憎蚤灶早援
图 猿摇 接种白粉菌后抗病品种小三星 云圆 孕粤蕴基因表达量
云蚤早援 猿摇 悦澡葬灶早藻泽 燥枣 孕粤蕴 早藻灶藻 则藻造葬贼蚤增藻 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 蚤灶
载蚤葬燥泽葬灶曾蚤灶早 云圆 葬枣贼藻则 蚤灶燥糟怎造葬贼藻凿 憎蚤贼澡 孕燥凿燥泽责澡葬藻则葬 曾葬灶贼澡蚤蚤
猿摇 讨论
研究表明袁植物组织中 孕粤蕴 基因表达常常受病原
物尧病原菌诱导物尧乙烯尧生长发育和环境刺激等多种
因素诱导和调控袁且在不同因素影响下 孕粤蕴 基因表达
模式各不相同咱员怨暂 遥 赵英等咱圆园暂 研究表明炭疽病菌
渊悦燥造造藻糟贼燥贼则蚤糟澡怎皂 早造燥藻燥泽责燥则蚤燥蚤凿藻泽冤能够诱导抗病品种柱
花草渊杂贼赠造燥泽葬灶贼澡藻泽冤叶片中 孕粤蕴基因的表达量高于感病
品种遥 本研究表明袁接种白粉菌后抗感品种叶片尧叶柄
和茎秆中 孕粤蕴基因表达量显著增加袁且抗病品种 孕粤蕴
基因相对表达量显著高于感病品种袁进而表明 孕粤蕴 基
因与美洲南瓜对白粉病菌的抗性具有密切的关系遥 但
是袁相关文献表明 孕粤蕴基因在大多数植物根部和成熟
的花中表达量最高袁在茎杆中表达水平中等袁而在成熟
叶片中几乎不表达咱员怨袁圆员暂 遥 而本研究发现当白粉菌侵
染不同抗性美洲南瓜后袁孕粤蕴基因在叶片尧叶柄和茎秆
中均能够表达袁其原因可能是 孕粤蕴 基因在植物不同组
图 源摇 接种白粉菌后感病品种金 员圆云圆 孕粤蕴基因表达量
云蚤早援 源摇 悦澡葬灶早藻泽 燥枣 孕粤蕴 早藻灶藻 则藻造葬贼蚤增藻 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 蚤灶
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织部位的表达受植物病原物的诱导和调控袁如欧芹
渊孕藻贼则燥泽藻造蚤灶怎皂 糟则蚤泽责怎皂冤叶片中 孕粤蕴 基因 皂砸晕粤 的产生
与大豆疫霉病菌渊孕澡赠贼燥责澡贼澡燥则葬 皂藻早葬泽责藻则皂葬冤侵染有关袁
尤其在侵染位点附近长时间保持较高水平咱圆圆暂 遥 此外袁
本研究发现袁接菌后不同抗感品种叶片中 孕粤蕴 基因净
增表达量显著高于叶柄和茎秆袁且抗病品种 孕粤蕴 基因
相对表达量达到高峰的时间早于感病品种袁这可能与
孕粤蕴基因是一个多基因家族袁不同基因家族成员在不
同部位的表达特异性或表达模式有关咱圆猿 原 圆源暂 遥 同时袁可
能与不同植物不同的组织部位具有多种 孕粤蕴 同工酶袁
控制不同的代谢途径等有关咱圆缘 原 圆远暂 遥
陈刚咱圆苑暂研究表明不同抗感南瓜品种 悦悦砸 基因表
达量存在显著差异袁其整体呈现出先增加后降低的趋
势遥 韩泽刚等咱圆愿暂研究表明随着枯萎病菌渊云怎泽葬则蚤怎皂
燥曾赠泽责燥则怎皂冤 诱导时间延长袁 圆 个不同抗感陆地棉
渊郧燥泽泽赠责蚤怎皂 澡蚤则泽怎贼怎皂冤品种对枯萎病菌诱导响应的转录
因子家族和转录因子数量均呈现相似的先增加后降低
的变化趋势遥 本研究表明袁随着接菌时间的增加袁不同
抗性美洲南瓜 孕粤蕴 基因相对表达量整体呈现出先增
长后降低的趋势袁但是其不同组织部位表达量达到高
园愿愿员
摇 员园 期 白粉病菌侵染对美洲南瓜不同抗性品种 孕粤蕴基因表达量的影响
图 缘摇 接种白粉菌后不同品种美洲南瓜 孕粤蕴基因表达量
云蚤早援 缘摇 悦澡葬灶早藻泽 燥枣 孕粤蕴 早藻灶藻 则藻造葬贼蚤增藻 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 蚤灶 凿蚤枣枣藻则藻灶贼
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孕燥凿燥泽责澡葬藻则葬 曾葬灶贼澡蚤蚤
峰期的时间存在一定的差异袁其可能与 孕粤蕴 基因在植
物不同组织部位的表达特异性有关咱员怨暂 遥 此外袁本试验
接菌后 猿凿内不同品种叶片尧叶柄和茎秆中 孕粤蕴 基因
净增表达量均无显著差异袁且在接菌 猿凿 内增加较慢袁
而在接菌后第 缘尧第 苑 和第 怨 天增加较快袁然后于接菌
后第 员员 天逐渐下降袁其原因可能是在植物病原菌与寄
主互作初期袁二者处于相互识别和适应阶段袁进而对寄
主植物的诱导抗性作用较低袁但是相互识别或接种后
寄主在短期内启动防御体系咱圆怨暂 遥 侵染后期袁随着接种
时间或发病程度的增加袁白粉菌对寄主植物的胁迫作
用增强袁能够诱导寄主植物产生防卫反应抵抗病原菌
的侵入袁但是当病原菌的胁迫程度超过寄主植物抵抗
病原菌侵染的能力时袁其抗性就会失去或降低袁如在植
物病原菌与寄主植株互作的过程中袁寄主植物能够通
过防卫基因的表达尧过敏反应和系统获得性抗病等途
径抵抗病菌的侵染咱猿园暂 袁诱导植物体内 孕粤蕴 基因的表
达咱猿员暂 遥
因此袁白粉菌侵染对美洲南瓜 孕粤蕴 基因相对表达
量具有显著的影响袁且抗病品种 孕粤蕴 基因相对表达量
显著高于感病品种袁同时接菌后其表达高峰期在第 苑
和第 怨 天左右袁并且其表达量与美洲南瓜对白粉病的
抗性呈正相关袁但目前有关 孕粤蕴 基因在美洲南瓜抗病
作用过程中的作用机理还有待进一步深入的研究遥
源摇 结论
白粉菌侵染能够诱导不同抗性美洲南瓜 孕粤蕴 基
因相对表达量升高袁且 孕粤蕴 基因相对表达量与美洲南
瓜抗白粉病的强弱具有密切的关系遥 白粉菌侵染后袁
抗病品种小三星 云圆 发病率和病情指数显著低于感病
品种金 员圆云圆遥 白粉菌侵染能够诱导抗病品种小三星
云圆 和感病品种金 员圆云圆 孕粤蕴 基因相对表达量升高袁且
抗病品种不同组织部位 孕粤蕴 基因相对表达量显著高
于感病品种遥 因此袁该研究结果对提升南瓜抗病种质
资源和选育抗病品种等方面具有重要意义遥
参考文献院
咱 员 暂摇 梁巧兰袁徐秉良袁颜惠霞袁陈荣贤袁薛应钰援 南瓜白粉病病原菌鉴
定及寄主范围测定咱允暂 援 菌物学报袁圆园员园袁圆怨渊缘冤院远猿远 原 远源猿
咱 圆 暂摇 李淑琴袁刘运华袁于军华援 南瓜白粉病药剂防治技术的研究咱 允暂 援
吉林农业科学袁圆园园远袁猿员渊员冤院缘猿 原 缘缘
咱 猿 暂摇 颜惠霞援 南瓜白粉病品种抗病性及抗病机理研究咱阅暂援 兰州院甘
肃农业大学袁圆园园怨
咱 源 暂摇 徐坚袁陈先知袁王燕袁史建磊袁朱隆静袁王克磊援 黄瓜尧甜瓜和西瓜
酝蕴韵基因家族的比较基因组学分析咱 允暂 援 核农学报袁圆园员源袁圆愿
渊远冤院员园园远 原 员园员苑
咱 缘 暂摇 陈蕾袁李秋圆袁叶胜海袁金庆生袁张小明援 一个水稻木质素单体合
成突变体的鉴定及分析咱允暂 援 核农学报袁圆园员缘袁圆怨渊猿冤院源圆愿 原 源猿源
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咱 苑 暂摇 刘亚光袁李海英袁杨庆凯援 大豆品种的抗病性与叶片内苯丙氨酸
解氨酶活性关系的研究咱允暂 援大豆科学袁圆园园圆袁圆员渊猿冤院员愿缘 原 员怨愿
咱 愿 暂摇 方献平袁陈文岳袁马华升袁余红袁王淑珍袁忻雅援 植物应答病菌胁
迫的抗性蛋白研究进展咱允暂 援 核农学报袁圆园员源袁圆愿渊缘冤院愿圆缘 原 愿猿圆
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咱员员暂摇 齐放军袁高学文袁王金生袁何晨阳援 携带不同抗白叶枯病基因的
水稻防卫基因 责葬造和 糟澡泽 的转录特征咱 允暂 援 农业生物技术学报袁
圆园园园袁愿渊源冤院猿猿苑 原 猿源园
咱员圆暂摇 江汉民袁王楠袁赵换袁孙德岭袁宋文芹援 花椰菜苯丙氨酸解氨酶基
因的克隆及黑腐病菌胁迫下的表达分析咱允暂 援 南开大学学报院自
然科学版袁圆园员圆袁源缘渊源冤院愿苑 原 怨圆
咱员猿暂摇 刘佳袁徐秉良袁薛应钰袁张树武袁陈荣贤援 美洲南瓜种皮苯丙氨酸
员愿愿员
核摇 农摇 学摇 报 圆怨 卷
解氨酶基因克隆与表达分析咱 允暂 援 中国农业科学袁圆园员源袁源苑渊远冤院
员圆员远 原 员圆圆远
咱员源暂摇 方中达援 植病研究法咱酝暂援 第三版援 北京院中国农业出版社袁
员怨怨愿院愿园
咱员缘暂摇 王建设袁陈杭援 甜瓜抗白粉病鉴定咱 允暂 援 华北农学报袁圆园园园袁员缘
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咱员怨暂摇 董艳珍援 植物苯丙氨酸解氨酶基因的研究进展咱允暂 援 生物技术通
报袁圆园园远袁渊杂员冤袁猿员 原 猿源
咱圆园暂摇 赵英袁付海天袁田维敏袁蒋昌顺援 接种后柱花草防御酶活性变化
及 孕粤蕴基因表达分析咱允暂 援 草地学报袁圆园园愿袁员远渊远冤院缘愿缘 原 缘愿怨
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咱圆缘暂摇 欧阳光察袁薛应龙援 植物苯丙烷代谢的生理意义及调控咱允暂 援 植
物生理学通讯袁员怨愿愿袁圆源渊猿冤院怨 原 员远
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咱圆苑暂摇 陈刚援 美洲南瓜 悦悦砸基因与种皮发育和抗白粉病相关性研究及
其功能分析咱阅暂援 兰州院甘肃农业大学袁圆园员猿
咱圆愿暂摇 韩泽刚袁赵曾强袁何兰兰袁柴蒙亮袁李会会袁张薇援 枯萎病菌诱导
感尧抗陆地棉品种的转录因子表达变化咱 允暂 援 作物学报袁圆园员缘袁源员
渊圆冤院圆圆愿 原 圆猿怨
咱圆怨暂摇 骆蒙袁孔秀英袁霍纳新袁徐春晓袁贾继增援 白粉病菌诱导的小麦抑
制差减文库构建与杂交点阵膜制备咱 允暂 援 中国农业科学袁圆园园猿袁
猿远渊员冤院源怨 原 缘猿
咱猿园暂摇 吴金华袁张西平袁胡言光袁吉万全援 小麦抗白粉病相关基因 郧杂栽
克隆与表达咱允暂 援 西北植物学报袁圆园员猿袁猿猿渊员冤院猿源 原 猿愿
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