全 文 ：核 农 学 报摇 圆园员猿袁圆苑渊苑冤院园怨圆圆 耀 园怨圆愿
允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
收稿日期院圆园员猿鄄园员鄄圆员摇 接受日期院 圆园员猿鄄园缘鄄猿园
基金项目院浙江省重大项目渊圆园园愿悦员圆园苑源冤袁浙江省农业科学院中科院合作项目渊圆园员员砸员怨再园猿耘园员袁圆园员圆砸员怨再园员耘园员冤
作者简介院陈笑芸袁女袁助理研究员袁研究方向院转基因检测与安全评价遥 耘鄄皂葬蚤造院赠曾糟澡藻灶苑苑岳 泽蚤灶葬援 糟燥皂
通讯作者院徐俊锋袁男袁副研究员袁研究方向院转基因检测与安全评价遥 耘鄄皂葬蚤造院灶躁躁枣曾怎岳 赠葬澡燥燥援 糟燥皂援 糟灶
文章编号院员园园园鄄愿缘缘员渊圆园员猿冤园苑鄄园怨圆圆鄄园苑
不同 栽粤陨蕴鄄孕悦砸通用引物在转基因大豆尧水稻尧
油菜侧翼序列分离中的应用评价
陈笑芸摇 汪小福摇 刘仁虎摇 张小明摇 周摇 育摇 缪青梅摇 徐俊锋
渊浙江省农业科学院袁浙江 杭州摇 猿员园园圆员冤
摘摇 要院为研究不同转基因作物 栽鄄阅晕粤插入位点侧翼序列分离中所用的通用简并引物对 栽粤陨蕴鄄孕悦砸的影
响袁本研究使用 缘 个通用简并引物分别对 愿 个转基因大豆尧猿园 个转基因水稻和 圆 个转基因油菜株系进
行了 栽粤陨蕴鄄孕悦砸分析袁结果表明袁缘 个简并引物在 栽粤陨蕴鄄孕悦砸 中的扩增效果存在显著差异袁同一简并引物
在不同转基因物种的扩增效果显著不同遥 粤阅员 引物在转基因水稻和转基因油菜中扩增效果较好袁粤阅圆
引物在转基因水稻尧油菜和转基因大豆中扩增效果均较好袁粤阅猿 引物在转基因水稻中扩增出 员 个株系袁
在转基因油菜中扩增出 员 个株系袁但 粤阅猿 引物与 责云郧悦缘怨源员 栽鄄阅晕粤 砸月 上游有匹配袁不适用于以
责云郧悦缘怨源员 为载体的转基因材料分析遥 粤阅源 和 粤阅缘 圆 个引物在 猿 个转基因物种的扩增均较差遥 对 粤阅员
和 粤阅圆 两个引物的 栽粤陨蕴鄄孕悦砸扩增产物进行测序袁结果表明袁扩增产物均对应转基因材料的侧翼序列遥
研究表明袁不同通用引物在不同转基因事件中侧翼序列的分离效果差异较大袁通用引物 粤阅员 和 粤阅圆
栽粤陨蕴鄄孕悦砸 成功率最高遥 不同通用引物的应用效果不仅与不同物种有关袁也与外源基因的插入位点有
关袁而且还与载体序列匹配程度相关遥 为提高 栽粤陨蕴鄄孕悦砸 中 栽鄄阅晕粤 插入位点侧翼序列分离成功率袁建
议同时采用多个通用引物平行扩增遥
关键词院栽粤陨蕴鄄孕悦砸曰简并引物曰转基因大豆曰转基因水稻曰转基因油菜曰侧翼序列
摇 摇 近年来袁随着转基因技术的发展袁通过转基因技术
育成的作物新品种袁在产量尧品质尧抗性及生产成本等
方面均具有显著的优势咱员 原 圆暂 遥 自从 员怨怨源 年美国 酝燥灶鄄
泽葬灶贼燥渊孟山都冤公司的抗草甘膦转基因大豆渊 砸燥怎灶凿怎责
则藻葬凿赠 泽燥赠遭藻葬灶袁 砸砸 大豆冤获得商业化种植许可后咱猿暂 袁
转基因大豆已经成为世界上种植面积最大的转基因作
物咱源暂 遥 水稻作为世界上最重要的粮食作物之一袁也是
重要的模式作物之一袁通过根癌农杆菌渊粤早则燥遭葬糟贼藻则蚤怎皂
贼怎皂燥则枣葬糟蚤藻灶泽冤转化技术袁已有涉及抗虫尧抗病尧抗除草
剂尧品质与农艺性状改良等多方面的转基因水稻获准
田间试验咱缘暂 袁但转基因水稻仍未能商业化生产遥 对转
基因水稻分子特征的安全性评价是推进水稻生物技术
育种的重要环节之一咱远暂 遥 侧翼序列是分子特征的重
要指标之一袁指位于基因组中某一特定位点两侧的核
苷酸序列咱苑暂 遥 分析转基因作物中 栽鄄阅晕粤 插入位点的
侧翼序列袁是掌握外源基因的整合位点的主要方法袁也
是转基因作物申请专利保护的重要证据袁还能够用于
转基因检测尧分子育种等方面咱愿 原 员园暂 遥
目前袁基于 孕悦砸 技术获取 栽鄄阅晕粤 插入位点侧翼
序列的方法有院质粒营救法渊孕造葬泽皂蚤凿 则藻泽糟怎藻冤 咱员员暂 尧反向
孕悦砸 法 渊 陨灶增藻则泽藻 孕悦砸袁 陨孕悦砸冤 咱员圆暂 尧 孕悦砸 步移法 渊 孕悦砸
憎葬造噪蚤灶早冤 咱员猿暂 以及热不对称交错 孕悦砸 法 渊 栽澡藻则皂葬造
葬泽赠皂皂藻贼则蚤糟 蚤灶贼藻则造葬糟藻凿 孕悦砸袁栽粤陨蕴鄄孕悦砸冤 咱员源 原 员缘暂等遥 其中
栽粤陨蕴鄄孕悦砸法是利用嵌套的特异引物渊 杂责藻糟蚤葬造 责则蚤皂藻则袁
杂孕冤和简并引物渊粤则遭蚤贼则葬则赠 凿藻早藻灶藻则葬贼藻袁 粤阅冤分别构成引
物组合袁以基因组 阅晕粤 为模板袁根据引物的特异性及
复性温度的差异设计不对称的温度循环袁先以高复性
温度让特异引物进行单向扩增袁增加特异引物结合位
点的模板丰度袁再以低温度循环进行对数扩增袁如此通
过 猿 次特异引物对扩增产物的特异性进行筛选袁最终
对产物进行测序获得 栽鄄阅晕粤 插入位点侧翼序列咱员远暂 遥
该技术操作简单袁成本低袁效率高袁具有较好的重复性袁
圆圆怨
摇 苑 期 不同 栽粤陨蕴鄄孕悦砸通用引物在转基因大豆尧水稻尧油菜侧翼序列分离中的应用评价
目前已被广泛采用咱员苑 原 圆园暂 遥 栽粤陨蕴鄄孕悦砸对于随机简并引
物是否高效袁目前还未见相关报道遥 本研究通过在转
基因大豆尧转基因水稻及转基因油菜中对不同随机简
并引物进行扩增袁研究了简并引物在 栽粤陨蕴鄄孕悦砸 扩增
应用中存在的差异袁对于选择高效随机简并引物袁提高
侧翼序列分离效率起着积极的作用遥
员摇 材料与方法
员郾 员摇 试验材料
转基因大豆材料 愿 个株系袁由浙江大学寿惠霞提
供袁是基于 责杂韵再员怨载体构建的 耘孕杂孕杂基因超量表达载
体咱圆员暂 袁用于增加对草甘膦除草剂的抗性遥 转基因水稻
材料 猿园个株系袁由浙江省农业科学院张小明提供袁是基
于 责孕在孕圆园员载体采用 砸怎遭蚤泽糟燥 启动子驱动 月贼 基因在水
稻叶片超量表达的独立转基因株系袁用于增强水稻的抗
虫性遥 转基因油菜 圆 个株系袁是基于 责云郧悦缘怨源员 载体构
建的 缘拷贝 栽澡葬灶葬贼蚤灶 抗菌肽融合表达载体咱圆圆暂 袁用于增
强油菜抗菌核病性袁由浙江省农业科学院刘仁虎提供遥
员郾 圆摇 主要试剂
基因组 阅晕粤提取试剂盒渊离心柱型冤购自北京天
跟公司袁栽葬早 阅晕粤聚合酶尧凿晕栽孕尧员园园遭责 阅晕粤 皂葬则噪藻则 均
购自大连 栽粤运粤砸粤 公司袁 琼脂糖凝胶回收试剂盒购
自生工生物工程渊上海冤有限公司袁栽粤陨蕴鄄孕悦砸 产物纯
化购自金斯瑞生物科技有限公司遥
员郾 猿摇 核酸提取
用于 栽粤陨蕴鄄孕悦砸 反应的 阅晕粤 样品按试剂盒说明
书的方法进行提取遥 然后取适量 阅晕粤 利用 圆豫琼脂
糖凝胶检测 阅晕粤 提取质量袁再利用 郧耘 公司的
怎造贼则燥泽责藻糟 员员园园 核酸和蛋白定量分析仪对 阅晕粤 试样进
行 韵阅圆猿园 辕 圆远园 辕 圆愿园值测定袁用于判断 阅晕粤浓度及质量遥
员郾 源摇 栽粤陨蕴鄄孕悦砸引物
转基因水稻特异引物根据转化载体 责孕在孕圆园员 原
砸怎遭蚤泽糟燥鄄月贼左边界上的 晕韵杂终止子序列设计咱圆园暂 袁转基
因大豆和转基因油菜特异引物分别根据转化载体
责杂韵再员怨 和 责云郧悦缘怨源员 右边界序列设计袁随机简并引物
序列根据刘耀光等咱员源暂的研究设计遥 特异引物使用
孕则藻皂蚤藻则 公司的 孕则蚤皂藻则 孕则藻皂蚤藻则 缘郾 园 软件设计袁引物合成
由上海英潍捷基渊上海冤贸易有限公司完成袁引物序列
见表 员遥
表 员摇 栽粤陨蕴鄄孕悦砸引物序列
栽葬遭造藻 员摇 孕则蚤皂藻则泽 枣燥则 栽粤陨蕴鄄孕悦砸
引物编号
孕则蚤皂藻则 晕燥援
引物名称
孕则蚤皂藻则 灶葬皂藻
引物序列渊缘忆 原 猿忆冤
孕则蚤皂藻则 泽藻择怎藻灶糟藻 渊缘忆 原 猿忆冤
员 砸月园遭 悦郧栽郧粤悦栽郧郧郧粤粤粤粤悦悦悦栽郧郧悦郧栽栽
圆 砸月员遭 粤悦郧粤栽郧郧粤悦栽悦悦粤郧栽悦悦郧郧悦悦悦粤粤悦栽栽粤粤栽悦郧悦悦栽栽郧悦粤郧悦粤悦粤栽悦
猿 砸月圆遭 郧粤粤郧粤郧郧悦悦悦郧悦粤悦悦郧粤栽悦郧悦悦悦栽栽
源 晕韵杂员 悦栽栽粤粤郧粤栽栽郧粤粤栽悦悦栽郧栽栽郧悦悦郧郧栽
缘 晕韵杂圆 郧郧栽栽栽栽栽粤栽郧粤栽栽粤郧粤郧栽悦悦悦郧悦粤粤
远 晕韵杂猿 郧悦郧悦郧悦郧郧栽郧栽悦粤栽悦栽粤栽郧栽栽粤悦栽粤
苑 缘怨源员砸月员 栽悦郧栽郧粤悦栽郧郧郧粤粤粤粤悦悦悦栽郧郧
愿 缘怨源员砸月圆 栽粤粤栽悦郧悦悦栽栽郧悦粤郧悦粤悦粤栽悦悦
怨 缘怨源员砸月猿 悦粤郧悦栽郧郧悦郧栽粤粤栽粤郧悦郧粤粤郧粤郧
员园 粤阅员 晕郧粤悦郧粤杂宰郧粤晕粤宰郧粤粤
员员 粤阅圆 晕郧栽悦郧粤杂宰郧粤晕粤宰郧粤粤
员圆 粤阅猿 粤郧宰郧晕粤郧宰粤晕悦粤宰粤郧郧
员猿 粤阅源 宰郧栽郧晕粤郧宰粤晕悦粤晕粤郧粤
员源 粤阅缘 栽郧宰郧晕粤郧杂粤晕悦粤杂粤郧粤
摇 摇 注院引物 员 原 猿 为转基因大豆特异性引物袁源 原 远 为转基因水稻特异性引物袁苑 原 怨 为转基因油菜特异引物袁员园 原 员源 为简并引物袁简并代码采用通用
代码袁砸 越 粤 辕 郧袁 再 越 悦 辕 栽袁 运 越 郧 辕 栽袁 杂 越 郧 辕 悦袁 酝 越 粤 辕 悦袁 宰 越 粤 辕 栽袁 月 越 郧 辕 悦 辕 栽袁 灾 越 粤 辕 郧 辕 悦袁 阅 越 粤 辕 郧 辕 栽袁 匀 越 粤 辕 悦 辕 栽袁 晕 越 粤 辕 郧 辕 悦 辕 栽遥
晕燥贼藻院 孕则蚤皂藻则泽 员 原 猿 葬则藻 泽责藻糟蚤葬造 责则蚤皂藻则泽 枣燥则 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 泽燥赠遭藻葬灶袁 孕则蚤皂藻则泽 源 原 远 葬则藻 泽责藻糟蚤葬造 责则蚤皂藻则泽 枣燥则 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 则蚤糟藻袁 孕则蚤皂藻则泽苑 原 员员 葬则藻 葬则遭蚤贼则葬则赠
凿藻早藻灶藻则葬贼藻泽援
猿圆怨
核摇 农摇 学摇 报 圆苑 卷
员郾 缘摇 栽粤陨蕴鄄孕悦砸产物测序分析
栽粤陨蕴鄄孕悦砸产物测序使用第 猿 轮 孕悦砸 反应的特异
引物为测序引物袁以过柱渊金斯瑞 匝怎蚤糟噪悦造藻葬灶 缘酝 运蚤贼冤
纯化的 孕悦砸产物为模板袁送交上海英潍捷基渊上海冤贸
易有限公司完成测序遥 测序后将所得序列与相应转化
载体序列比对检验是否含 栽鄄阅晕粤 序列及转基因材料
序列遥
圆摇 结果与分析
圆郾 员摇 转基因大豆的 栽粤陨蕴鄄孕悦砸扩增结果
以表 员 中引物 员 原 猿 为上游特异引物袁分别与随机
简并引物 员园 原 员源 成对在转基因大豆 阅晕粤样品中进行
栽粤陨蕴鄄孕悦砸扩增袁扩增结果如图 员 所示渊选取其中 猿 个
株系袁其余未提供图冤袁图 员 中 缘 张图分别为使用随机
简并引物 粤阅员 原 粤阅缘 扩增的结果遥 从图中可以看出袁
粤阅员 引物在 猿 个株系中扩增特异性均较差袁 粤阅猿 只在
员 个株系中扩增特异性较好袁粤阅圆 在 圆 个株系中扩增
的特异性很好袁粤阅源 和 粤阅缘 圆 个简并引物扩增效率较
差袁其中 粤阅源 引物在样品 员 的第 猿 轮循环中获得较亮
条带袁但片段较小袁非目的片段遥 其余 缘 个株系袁采用
粤阅圆 引物的扩增结果也很好袁显示出 粤阅圆 引物在转基
因大豆中的应用效果最好遥
圆郾 圆摇 转基因水稻的 栽粤陨蕴鄄孕悦砸扩增结果
以表 员 中引物 源 原 远 为上游特异引物袁分别与随机
简并引物 员园 原 员源 成对在转基因水稻 阅晕粤样品中进行
栽粤陨蕴鄄孕悦砸扩增袁扩增结果如图 圆 所示渊选取其中 远 个
株系袁其余未提供图冤袁粤阅员 和 粤阅圆 扩增的特异性很
好袁但都只有部分转基因株系有扩增产物遥 粤阅猿 和
粤阅源 引物扩增特异性稍差袁但带型偏大袁用第 猿 轮扩增
特异引物都未能获得有效测序数据遥 粤阅缘 引物在转
基因水稻上扩增特异性最差袁但也有个别株系特异性
很好袁如第 缘 个株系袁但该条带未测序袁不知是否含侧
翼序列遥 总之袁在水稻中 粤阅员 和 粤阅圆 引物扩增效果
最好袁且成功获得侧翼序列袁但是否有扩增产物与基因
插入位点关系很大袁一般需要采用多个简并引物进行
尝试遥
圆郾 猿摇 转基因油菜的 栽粤陨蕴鄄孕悦砸扩增结果
以表 员 中引物 苑 原 怨 为上游特异引物袁分别与随机
简并引物 员园 原 员源 成对在转基因油菜 阅晕粤样品中进行
栽粤陨蕴鄄孕悦砸扩增袁扩增结果如图 猿 所示袁随机简并引物
粤阅员 在株系 员 中扩增条带特异性较好袁且第 猿 轮扩增
的条带较亮袁其中株系 圆 虽然含 圆 个大片段杂带袁但不
影响测序袁测序结果显示最小片段含载体边界序列及
注院泳道 酝为 阅晕粤 酝葬则噪藻则袁最小至最亮带分别为 员园园尧圆园园尧猿园园尧源园园 和
缘园园遭责遥 域与芋分别代表 栽粤陨蕴鄄孕悦砸第 圆 次扩增与第 猿 次扩增遥 员 原 猿
摇 摇 分别代表 猿 个不同株系的转基因大豆遥 下同遥
晕燥贼藻院 蕴葬灶藻 造葬遭藻造藻凿 酝 蚤泽 贼澡藻 阅晕粤 皂葬则噪藻则援 月葬灶凿 泽蚤扎藻 蚤泽 员园园袁 圆园园袁 猿园园袁
源园园 葬灶凿 缘园园遭责袁 则藻泽责藻糟贼蚤增藻造赠袁 枣则燥皂 贼澡藻 泽皂葬造造藻泽贼 贼燥 贼澡藻 澡蚤早澡造蚤早澡贼藻凿 遭葬灶凿援
域葬灶凿 芋院 贼澡藻 泽藻糟燥灶凿 葬灶凿 贼澡藻 贼澡蚤则凿 则燥怎灶凿 燥枣 孕悦砸 责则燥凿怎糟贼援 员 原 猿院 贼澡则藻藻
摇 摇 蚤灶凿藻责藻灶凿藻灶贼 贼则葬灶泽枣燥则皂葬灶贼泽 燥枣 泽燥赠遭藻葬灶援 栽澡藻 泽葬皂藻 葬泽 遭藻造燥憎援
图 员摇 缘 个随机简并引物扩增转基因大豆 阅晕粤的结果
云蚤早援 员摇 栽粤陨蕴鄄孕悦砸 怎泽蚤灶早 贼澡藻 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 泽燥赠遭藻葬灶
阅晕粤 憎蚤贼澡 缘 葬则遭蚤贼则葬则赠 凿藻早藻灶藻则葬贼藻泽
源圆怨
摇 苑 期 不同 栽粤陨蕴鄄孕悦砸通用引物在转基因大豆尧水稻尧油菜侧翼序列分离中的应用评价
员 原 远 分别代表 远 个不同株系转基因水稻遥
员 原 远院 泽蚤曾 蚤灶凿藻责藻灶凿藻灶贼 贼则葬灶泽枣燥则皂葬灶贼泽 燥枣 则蚤糟藻援
图 圆摇 缘 个随机简并引物扩增转
基因水稻 阅晕粤的结果
云蚤早援 圆摇 栽粤陨蕴鄄孕悦砸 怎泽蚤灶早 贼澡藻 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟
则蚤糟藻 阅晕粤 憎蚤贼澡 缘 葬则遭蚤贼则葬则赠 凿藻早藻灶藻则葬贼藻泽
旁侧序列遥 随机简并引物 粤阅圆 在株系 员尧株系 圆 扩增
条带非特异袁且第 圆尧猿 轮扩增均出现双条带遥 但测序
结果显示采用 粤阅员 或 粤阅圆 扩增的片段中均含有 栽鄄
阅晕粤序列和插入位点的边界序列袁且获采用 粤阅员 和
粤阅圆 扩增获得的边界序列测序结果完全一致袁仅获得
的边界序列长度上有差别袁边界序列测序长度和凝胶
电泳最小片段指示大小一致遥 该结果表明采用 粤阅员
或 粤阅圆 在油菜 栽粤陨蕴鄄孕悦砸 中获得边界序列的成功率
高袁效果好遥 尽管 粤阅员 和 粤阅圆 引物在不同的株系中
都有可能获得多条杂带袁但这些杂带都不影响测序遥
以 缘怨源员砸月猿 为测序引物袁采用 孕悦砸产物直接测序的方
法袁都成功获得边界序列遥 测序结果显示边界序列都
包含在凝胶图上的最小片段中袁推测大片段可能为随
机简并引物的单引物扩增产物遥
然而袁粤阅猿 在株系 员尧株系 圆 中虽然也有清晰特异
的扩增条带袁但测序结果显示其都为未插入的载体序
列袁说明尽管转基因株系已自交至 栽缘 代袁细胞中仍可
能包含未插入的载体质粒遥 分析 粤阅猿 引物的序列特
征发现袁该引物与 责云郧悦缘怨源员 载体 栽鄄阅晕粤 砸月上游 员噪遭
左右有匹配袁因此在 圆 个株系中都扩增得到载体序列遥
表明 粤阅猿 引物不适宜用于以 责云郧悦缘怨源员 为转基因载体
的转基因材料的边界序列扩增遥
随机简并引物 粤阅源 在油菜的 圆 个转基因株系中
第 圆 轮扩增均未见条带袁第 猿 轮扩增中在一个株系出
现非特异扩增片段袁一个株系无条带遥 粤阅缘 引物在第
猿 轮扩增中袁株系 员 出现亮带袁株系 圆 出现弱带遥 但所
有 粤阅源 和 粤阅缘 的片段采用 缘怨源员砸月猿 引物测序均得不
到有价值信号遥
圆郾 源摇 栽粤陨蕴鄄孕悦砸扩增产物的 月蕴粤杂栽分析
将转基因大豆 粤阅圆 引物第 猿 轮扩增产物回收后
进行测序袁再使用 阅晕粤酝粤晕软件将测序结果与转化载
体进行 月蕴粤杂栽 分析结果如图 源 所示遥 从图 源 可以看
出袁孕悦砸 产物中含有转化载体序列遥 利用 阅晕粤酝粤晕
软件去除载体序列后袁在 澡贼贼责院椅憎憎憎援 责澡赠贼燥扎燥皂藻援 灶藻贼
网站 月蕴粤杂栽分析结果如图 缘 所示袁该段序列与大豆基
因组 郧皂园缘院 猿怨袁源苑苑袁怨圆员 原 猿怨袁源苑愿袁愿圆远 区域一致遥 按
同样方法将 粤阅员 和 粤阅圆 引物在转基因水稻中的扩增
产物进行分析袁结果表明 圆 个片段均含有水稻转化载
体序列袁且扩增产物均与水稻基因组 悦澡则圆院 员员源袁圆远缘 原
员员源袁缘猿源 区域一致遥
猿摇 讨论
本研究结果表明袁不同通用引物在不同转基因事
件中基因插入位点侧翼序列的分离效果差异较大袁即
与不同物种有关袁也与外源基因的插入位点有关遥 为
提高 栽粤陨蕴鄄孕悦砸中 栽鄄阅晕粤 插入位点侧翼序列分离成
功率袁建议同时采用多个通用引物平行扩增遥 栽粤陨蕴鄄
孕悦砸技术是分离研究侧翼序列的有效手段袁但是该技
术对引物的要求较高袁特异性引物和简并引物的选择
直接影响到扩增的效果遥 简并引物是否合适与其简并
度尧引物长度以及引物核苷酸序列组成具有较大关系袁
本研究使用 缘 个通用简并引物在转基因大豆材料中袁
只有 粤阅圆 引物获得了较好的结果袁其余引物均未能分
离出侧翼序列遥 周扬咱圆猿暂的研究利用 猿 个随机引物分
离大豆的侧翼序列袁其中 圆 个引物分别是本研究中的
粤阅圆 和 粤阅源袁另外 员 个引物为 晕栽悦郧粤杂栽宰栽杂郧宰郧栽栽袁
缘圆怨
核摇 农摇 学摇 报 圆苑 卷
员 原 圆 分别代表 圆 个不同株系转基因油菜遥
员 原 圆院 贼憎燥 蚤灶凿藻责藻灶凿藻灶贼 贼则葬灶泽枣燥则皂葬灶贼泽 燥枣 则蚤糟藻援
图 猿摇 缘 个随机简并引物扩增转基因油菜 阅晕粤的结果
云蚤早援 猿摇 栽粤陨蕴鄄孕悦砸 怎泽蚤灶早 贼澡藻 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 则葬责藻 阅晕粤 憎蚤贼澡 缘 葬则遭蚤贼则葬则赠 凿藻早藻灶藻则葬贼藻泽
图 源摇 转基因大豆 粤阅圆 简并引物扩增产物与转化载体的 月蕴粤杂栽分析
云蚤早援 源摇 月蕴粤杂栽 葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 增藻糟贼燥则 泽藻择怎藻灶糟藻 葬灶凿 贼澡藻 责则燥凿怎糟贼 葬皂责造蚤枣蚤藻凿 遭赠 粤阅圆 蚤灶 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 泽燥赠遭藻葬灶
图 缘摇 去除载体后产物序列与大豆基因组序列 月蕴粤杂栽分析
云蚤早援 缘摇 月蕴粤杂栽 葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 贼澡藻 责则燥凿怎糟贼 泽藻择怎藻灶糟藻 蚤灶 泽燥赠遭藻葬灶 早藻灶燥皂藻
其中 粤阅圆 和 晕栽悦郧粤杂栽宰栽杂郧宰郧栽栽引物均获得了较好
的扩增效果袁但 粤阅源 引物不能有效分离侧翼序列袁与
本研究的结果一致遥 缘 个随机引物在转基因水稻材料
的扩增结果显示有 圆 个引物 粤阅员 和 粤阅圆 扩增效果较
远圆怨
摇 苑 期 不同 栽粤陨蕴鄄孕悦砸通用引物在转基因大豆尧水稻尧油菜侧翼序列分离中的应用评价
好袁李丕顺等咱圆源暂研究利用 粤阅圆 引物在红莲型水稻不
育系中也成功分离了水稻的测序序列遥 因此袁选择合
适的简并引物是 栽粤陨蕴鄄孕悦砸 成功的关键袁可以通过对
更多的随机性引物进行验证从而获得合适的引物组
合遥
热不对称交错 孕悦砸渊栽粤陨蕴鄄孕悦砸冤技术因其简单尧灵
敏尧特异性高尧重复性好且试验周期短等优点袁目前已
经成为分离与已知序列邻近的未知序列的有效手段遥
本研究分别在转基因大豆和水稻材料中使用 栽粤陨蕴鄄
孕悦砸技术成功分离不同的材料的侧翼序列袁并在转基
因水稻和大豆中进行了验证遥 表明该技术能够有效分
离转基因植株的侧翼序列袁具有很好的适应性遥 虽然
栽粤陨蕴鄄孕悦砸技术操作比较简单袁但周扬咱圆猿暂的研究认为
栽粤陨蕴鄄孕悦砸的反应条件要求较高袁因为上下游引物的退
火温度不一致袁因此需要合适的退火温度才能有效地
分离侧翼序列遥 本研究中仅 圆 个引物获得较好的扩增
效果袁可能是由于反应条件的并未最优化袁下一步可以
对不同的引物组合选择最优的反应条件袁以期获得理
想的结果遥
参考文献院
咱 员 暂 摇 允葬皂藻泽 悦造蚤增藻援 圆园员员 年全球生物技术 辕转基因作物商业化发展态势
咱允暂 援 中国生物工程杂志援 圆园员圆袁渊员冤院 员 原 员源
咱 圆 暂 摇 允葬皂藻泽 悦造蚤增藻援 圆园员园 年全球生物技术 辕转基因作物商业化发展态势
咱允暂 援 中国生物工程杂志援 圆园员员袁渊猿冤院 员 原 员圆
咱 猿 暂 摇 叶兴国袁王艳丽袁丁文静援 主要农作物转基因研究现状和展望
咱允暂 援 中国生物工程杂志援 圆园园远袁渊缘冤院 怨猿 原 员园园
咱 源 暂 摇 程浩袁金杭霞袁盖钧镒袁喻德跃援 转基因技术与大豆品质改良
咱允暂 援 匀耘砸耘阅陨栽粤杂 渊月藻蚤躁蚤灶早冤 援 圆园员员袁渊猿猿冤院源猿员 原 源猿远
咱 缘 暂 摇 朱祯援 转基因水稻研发进展咱 允暂 援 中国农业科技导报援 圆园员园袁
渊圆冤院 怨 原 员远
咱 远 暂 摇 张茜袁张金凤袁付文锋袁张鸿景袁袁文军援 安全转基因技术研究进
展咱允暂 援 遗传援 圆园员员袁 猿猿渊缘冤院 源猿苑 原 源源圆
咱 苑 暂 摇 杨坤袁吴学龙袁朗春秀袁陈锦清援 优化反向 孕悦砸 法分离转基因油
菜外源 栽鄄阅晕粤 侧翼序列的研究 咱 允暂 援 安徽农业科学援 圆园员园袁
渊员园冤院 缘园园圆 原 缘园园缘
咱 愿 暂 摇 贾芝琪袁张忠华袁崔艳红袁李颖袁黄三文袁杜永臣援 利用外源基因
侧翼序列扩增筛选番茄纯合转基因植株咱 允暂 援 农业生物技术学
报援 圆园园怨袁渊缘冤院 愿圆园 原 愿圆源
咱 怨 暂 摇 载怎 允云袁 宰葬灶早 载云袁 悦澡藻灶 载再袁 宰葬灶早 载匝袁 在澡燥怎 再袁 酝蚤葬燥 匝酝援
匝怎葬造蚤贼葬贼蚤增藻 凿藻贼藻糟贼蚤燥灶 葬灶凿 择怎葬灶贼蚤覱糟葬贼蚤燥灶 燥枣 葬 悦则赠员粤 渊 遭冤 贼则葬灶泽早藻灶藻
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