全 文 ：　 核 农 学 报　 ２０１３ꎬ２７(６):０７４３ ~ ０７４９
Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｕｃｌｅａｒ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ
收稿日期:２０１２￣０７￣０２　 接受日期:２０１２￣１１￣２８
基金项目:国家自然科学基金(３１１７１５２８)
作者简介:曾祥然(１９８７￣)ꎬ女ꎬ河北保定人ꎬ硕士研究生ꎬ研究方向:蛋白质组学ꎮ Ｔｅｌ:０３１２￣７５２８７８７ꎻ Ｅ￣ｍａｉｌ:ｚｅｎｇｘｉａｎｇｒａｎ＿ｍｂｂ＠ １２６. ｃｏｍ
通讯作者:刘国振(１９６４￣)ꎬ男ꎬ河北沧州人ꎬ教授ꎬ研究方向:植物分子生物学ꎮ Ｔｅｌ:１３５１１０３８１２０ꎻ Ｅ￣ｍａｉｌ:ｇｚｈｌｉｕ＠ ｇｅｎｏｍｉｃｓ. ｏｒｇ. ｃｎ
文章编号:１０００￣８５５１(２０１３)６￣０７４３￣０７
水稻核糖核酸酶 Ｔ２ 蛋白质在叶片生长和盐胁迫
过程中的表达研究
曾祥然　 魏　 健　 贾　 霖　 关明俐　 刘　 钊　 兰金苹　 刘丽娟　 李莉云　 刘国振
(河北农业大学生命科学学院ꎬ河北 保定ꎬ０７１００１)
摘　 要:核糖核酸酶(Ｒｉｂｏｎｕｃｌｅａｓｅｓꎬ ＲＮａｓｅꎬ ＲＮＳ)Ｔ２ 普遍存在于各种生物中ꎬ其保守性提示了功能的重
要性ꎮ 在水稻基因组中有 ８ 个 ＲＮａｓｅ Ｔ２ 成员ꎬ本试验采用基于抗体的蛋白质组学策略ꎬ用免疫印迹
(Ｗｅｓｔｅｒｎ ＢｌｏｔｔｉｎｇꎬＷＢ)技术检测了它们在叶片生长及盐胁迫条件下的表达ꎬ发现 ＯｓＲＮＳ１￣ＯｓＲＮＳ７ 蛋白
质在叶片中有表达ꎬ其中 ＯｓＲＮＳ４ 主要在苗期表达ꎬ提示其在苗期发挥作用ꎬ其它蛋白质主要在成株期
表达ꎬ但没有检测到 ＯｓＲＮＳ８ 的表达ꎻ水稻 ＯｓＲＮＳ４ 在盐胁迫条件下表达上调ꎬ提示其可能在盐胁迫应
答过程中发挥作用ꎬ其它 ＲＮａｓｅ Ｔ２ 蛋白质的表达大多随盐胁迫时间的延长而下降ꎮ 将 ＲＮａｓｅ Ｔ２ 蛋白
质的表达与转录信号进行比较ꎬ发现二者在部分基因中有一定的相关性ꎮ 本试验获得的数据为揭示水
稻 ＲＮａｓｅ Ｔ２ 基因的功能提供了线索ꎮ
关键词:水稻ꎻ核糖核酸酶(ＲＮａｓｅ)蛋白质ꎻ免疫印迹ꎻ基于抗体的蛋白质组学
　 　 核糖核酸酶(ＲｉｂｏｎｕｃｌｅａｓｅꎬＲＮａｓｅꎬ ＲＮＳ)的主要
功能是催化 ＲＮＡ 的水解ꎬ它作用于 ＲＮＡ 的 ３′ꎬ５′￣磷
酸二酯键ꎬ产物是 ５′￣磷酸核苷和 ３′￣磷酸核苷[１]ꎮ 核
糖核酸酶在生命活动中发挥着重要的调节作用ꎮ 生物
中的核糖核酸酶分为 ＲＮａｓｅ Ｔ１、ＲＮａｓｅ Ｔ２ 和 ＲＮａｓｅ Ａ
３ 种类型ꎮ ＲＮａｓｅ Ａ 类型主要存在于动物中[２]ꎬＲＮａｓｅ
Ｔ１ 在真菌和细菌中比较常见ꎬ而 ＲＮａｓｅ Ｔ２ 存在于几
乎所有的生物中ꎬ包括植物、动物、真菌、细菌及病毒
等[３ － ５]ꎮ
植物基因组测序的成果对系统了解核糖核酸酶编
码基因中的存在提供了方便ꎮ 在拟南芥基因组中有 ５
个 ＲＮａｓｅ Ｔ２ 成员ꎬ其中 ＡｔＲＮＳ１、ＡｔＲＮＳ３、ＡｔＲＮＳ４ 和
ＡｔＲＮＳ５ 属于 Ｃｌａｓｓ Ｉ 亚类成员ꎬ而 ＡｔＲＮＳ２ 属于 Ｃｌａｓｓ
ＩＩ亚类成员[６ － ７]ꎮ 现有报道表明ꎬＡｔＲＮＳ１ 是分泌蛋白
质[８]ꎬ受磷饥饿[９]、衰老[１０]、伤害[１１ － １２]和 ＡＢＡ[１３ － １４]
的诱导上调ꎬ用反义技术下调体内的 ＡｔＲＮＳ１ 可使拟
南芥的花色素含量提高[９]ꎮ ＡｔＲＮＳ２ 是胞内蛋白
质[８]ꎬ在花中高表达ꎬ且在根、茎和叶片中表达ꎬ在衰
老过程中ꎬＲＮＳ２ 在叶片和花瓣中的表达明显上升[１０]ꎮ
磷饥饿也能诱导 ＲＮＳ２ 的表达提高ꎬＡｔＲＮＳ２ 在拟南芥
中可能负责磷的转移[１４ － １５]ꎮ 另外ꎬＡｔＲＮＳ２ 对核糖体
ＲＮＡ(ｒＲＮＡ)的重复利用起关键作用ꎬ在 ｒｎｓ２ 突变体
中ꎬｒＲＮＡ 有更长的半衰期ꎬ而正常的 ｒＲＮＡ 降解速度
对保证细胞的代谢平衡是至关重要的[１６]ꎮ 下调体内
的 ＡｔＲＮＳ２ 也可使拟南芥的花色素含量提高[８]ꎮ 与
ＡｔＲＮＳ１ 不同ꎬＡｔＲＮＳ３ 在磷饥饿时的转录水平保持稳
定ꎬ在衰老过程中ꎬＡｔＲＮＳ１ 和 ＡｔＲＮＳ３ 都可被轻度的
诱导[９]ꎮ ＡｔＲＮＳ４ 和 ＡｔＲＮＳ５ 的功能尚未见报道ꎮ
在水稻基因组中共鉴定到 ８ 个 ＲＮａｓｅ Ｔ２ 成员ꎬ其
中 ＯｓＲＮＳ２ 和 ＯｓＲＮＳ６ 属于 Ｃｌａｓｓ Ｉ 亚类ꎬ ＯｓＲＮＳ１、
ＯｓＲＮＳ３、ＯｓＲＮＳ４、ＯｓＲＮＳ５、ＯｓＲＮＳ７ 和 ＯｓＲＮＳ８ 等 ６ 个
成员属于 Ｃｌａｓｓ ＩＩ 亚类ꎮ 用 ＲＴ￣ＰＣＲ 对成株期的水稻
根、叶片、茎和小花组织中 ＲＮａｓｅ Ｔ２ 基因的转录进行
分析发现ꎬＯｓＲＮＳ２、ＯｓＲＮＳ３、ＯｓＲＮＳ４ 和 ＯｓＲＮＳ８ 在 ４
种组织中呈组成型转录ꎬＯｓＲＮＳ１、ＯｓＲＮＳ５、ＯｓＲＮＳ６ 和
ＯｓＲＮＳ７ 的转录则具有一定的组织特异性ꎬ其中
ＯｓＲＮＳ１ 和 ＯｓＲＮＳ７ 只在根中转录ꎬＯｓＲＮＳ５ 在茎和小
花中转录ꎬＯｓＲＮＳ６ 在除叶片之外的组织中转录[１７]ꎮ
根据转录数据分析还发现ꎬ大多数水稻 ＲＮａｓｅ Ｔ２ 基因
都受非生物胁迫的诱导ꎬ如盐胁迫可以强烈诱导
３４７
核　 农　 学　 报 ２７ 卷
ＯｓＲＮＳ３、ＯｓＲＮＳ４ 和 ＯｓＲＮＳ５ 的转录ꎬ并抑制 ＯｓＲＮＳ１
的转录ꎬ干旱会诱导 ＯｓＲＮＳ３ 但抑制 ＯｓＲＮＳ１ 的转录ꎮ
此外ꎬＲＮａｓｅ Ｔ２ 基因的转录也受砷、冷和低氧胁迫的
影响[１７]ꎮ
目前对水稻 ＲＮａｓｅ Ｔ２ 的研究所依据的主要是转
录信息ꎬ对蛋白质表达的研究尚未开展ꎮ 蛋白质是生
物功能的主要执行者ꎬ显然ꎬ蛋白质的表达信息对了解
其功能将有直接的帮助ꎮ ＲＮａｓｅ Ｔ２ 蛋白质作为一类
重要的蛋白质家族ꎬ它们在水稻正常生长以及在盐胁
迫过程中功能也尚未报道ꎮ 为此ꎬ本试验制备了水稻
ＲＮａｓｅ Ｔ２ 蛋白质特异的抗体ꎬ借助免疫印迹(Ｗｅｓｔｅｒｎ
Ｂｌｏｔｔｉｎｇꎬ ＷＢ)技术分析了这些蛋白质在叶片生长和盐
胁迫条件下的表达谱ꎬ并与 ＲＮａｓｅ Ｔ２ 基因的转录进行
了分析比较ꎬ旨在为进一步进行水稻 ＲＮａｓｅ Ｔ２ 基因的
功能分析提供线索ꎮ
１　 材料与方法
１􀆰 １　 水稻材料
水稻品种 ９３ － １１ 的苗期培养条件为 ２６℃ꎬ光照 /
黑暗周期为 １２ ｈ / １２ ｈꎬ取幼苗株高为 １、２、５、１０ 和 １５
ｃｍ的地上部ꎬ分蘖期、孕穗期、开花期、成熟期的叶片
取自河北保定大田栽培的水稻ꎬ各时期的具体叶片形
态描述参见文献[１８]ꎮ 样品采集后液氮速冻ꎬ保存于
－ ７０℃冰箱中备用ꎮ
１􀆰 ２　 水稻幼苗的盐胁迫处理
用 １ / ２ 的 Ｈｏｇｌａｎｄ培养液[１９]在光照培养箱中培养
水稻幼苗ꎬ培养条件为 １２ｈ / １２ｈ 光照 /黑暗ꎬ培养温度
为 ３０℃ꎬ培养 １４ ｄ 的水稻幼苗用 ２００ ｍｍｏｌ􀅰Ｌ － １的
ＮａＣｌ进行胁迫处理ꎬ在胁迫处理后 ０ｈ、４ｈ、１２ｈ、１ｄ、２ｄ、
３ｄ、５ｄ、７ｄ 和 ８ｄ 取样ꎮ 地上部取材后经液氮速冻ꎬ保
存于 － ７０℃冰箱备用ꎮ
１􀆰 ３　 多克隆抗体的制备
抗 ＲＮＳ４ 的抗体制备以重组表达的蛋白质为免疫
原ꎬ具体做法是以水稻 ｃＤＮＡ文库的混合质粒 ＤＮＡ为
模 板ꎬ 以 上 游 引 物 ５′￣ＧＧＡＡＴＴＣ
ＡＴＧＧＡＧＣＡＧＡＧＧＡＡＡＴＴＴＴＴＧ￣３′ 和 下 游 引 物 ５′￣
ＣＣＣＡＡＧＣＴＴ ＴＴＡＧＧＣＣＡＧＣＡＣＡＧＴＴＴＣＡＧ￣３′ 进 行
ＰＣＲ扩增获得全长(２５２ 个氨基酸)的 ＲＮＳ４ 基因ꎬ克
隆到 ｐＧＳＴ表达载体中ꎬ在大肠杆菌中诱导表达纯化
后用作制备 ＲＮＳ４ 抗体的免疫原ꎬ详细步骤参见本实
验室以前的报道[２０]ꎮ 用 ＢＥＰＩＴＯＰＥ 软件[２１]进行其它
ＲＮａｓｅ Ｔ２ 家族蛋白质抗原决定簇的预测ꎬ合成的多肽
经孔钥兰(ｋｅｙｈｏｌｅ ｌｉｍｐｅｔ ｈｅｍｏｃｙａｎｉｎꎬＫＬＨ)偶联后免
疫新西兰大白兔获得多抗血清ꎬ抗体制备工作由北京
华大蛋白质研发中心有限公司完成ꎮ 水稻 ＲＮａｓｅ Ｔ２
家族的 Ｌｏｃｕｓ号、蛋白质分子量、多肽序列或克隆片段
等详细信息见表 １ꎮ
表 １　 水稻核糖核酸酶 Ｔ２ 蛋白质家族信息
Ｔａｂｌｅ １　 Ｆａｍｉｌｙ ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｒｉｃｅ ＲＮａｓｅ Ｔ２ ｐｒｏｔｅｉｎ
基因名称
Ｇｅｎｅ ｎａｍｅ
编号
Ｌｏｃｕｓ Ｎｏ.
注释
Ｂｒｉｅｆ ａｎｎｏｔａｔｉｏｎ
免疫原序列
Ａｎｔｉｇｅｎ ｓｅｑｕｅｎｃｅ
分子量
ＭＷ/ ｋＤａ
ＯｓＲＮＳ１ Ｏｓ０７ｇ４３６７０ Ｒｉｂｏｎｕｃｌｅａｓｅ Ｔ２ ｆａｍｉｌｙ ｄｏｍａｉｎ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎꎬ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ＳＤＤＥＳＹＳＬＧＳＩＲＤ ２８􀆰 ７
ＯｓＲＮＳ２ Ｏｓ０１ｇ６７１８０ Ｒｉｂｏｎｕｃｌｅａｓｅ Ｔ２ ｆａｍｉｌｙ ｄｏｍａｉｎ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎꎬ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ＴＹＤＰＩＶＨＡＮＳＴＲＥＩ ３１􀆰 ６
ＯｓＲＮＳ３ Ｏｓ０８ｇ３３７１０ Ｒｉｂｏｎｕｃｌｅａｓｅ Ｔ２ ｆａｍｉｌｙ ｄｏｍａｉｎ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎꎬ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ＳＫＶＳＤＬＬＧＳＭＲＳＥ ２４􀆰 ８
ＯｓＲＮＳ４ Ｏｓ０９ｇ３６６８０ Ｒｉｂｏｎｕｃｌｅａｓｅ Ｔ２ ｆａｍｉｌｙ ｄｏｍａｉｎ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎꎬ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ 全 长 ( ｆｕｌｌ ｌｅｎｇｔｈ )２５２ＡＡ ２８􀆰 ４
ＯｓＲＮＳ５ Ｏｓ０９ｇ３６７００ Ｒｉｂｏｎｕｃｌｅａｓｅ Ｔ２ ｆａｍｉｌｙ ｄｏｍａｉｎ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎꎬ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ＴＮＳＴＫＳＹＡＡＡＤＡＩＤ ２８􀆰 ４
ＯｓＲＮＳ６ Ｏｓ０１ｇ６７１９０ Ｒｉｂｏｎｕｃｌｅａｓｅ Ｔ２ ｆａｍｉｌｙ ｄｏｍａｉｎ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎꎬ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ＳＴＥＧＩＳＮＱＶＮＶＥＨ ３１􀆰 ６
ＯｓＲＮＳ７ Ｏｓ０７ｇ４３６００ Ｒｉｂｏｎｕｃｌｅａｓｅ Ｔ２ ｆａｍｉｌｙ ｄｏｍａｉｎ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ ＤＥＫＴＹＴＬＧＥＩＳＤＡＬ ２７􀆰 ２
ＯｓＲＮＳ８ Ｏｓ０７ｇ４３６４０ Ｒｉｂｏｎｕｃｌｅａｓｅ Ｔ２ ｆａｍｉｌｙ ｄｏｍａｉｎ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ ＫＮＫＡＧＤＴＬＬＳＥＶＲ ２９􀆰 ７
１􀆰 ４　 水稻样品总蛋白质的提取与ＷＢ检测
将冻存的水稻样品用预冷的研钵在液氮中充分研
磨ꎬ将粉末分装到预冷的离心管中ꎬ按 ３∶ ８(样品:蛋白
提取液) 的比例加入相应体积的蛋白质提取液
(６２􀆰 ５ｍｍｏｌ􀅰Ｌ － １ ＴｒｉｓꎬｐＨ 值 ７􀆰 ４ꎬ１０％甘油ꎬ２％ ＳＤＳꎬ
１ｍｍｏｌ􀅰Ｌ － １ ＰＭＳＦꎬ２ｍｍｏｌ􀅰Ｌ － １ ＥＤＴＡꎬ５％ β￣巯基乙
醇)ꎬ充分混匀 ５ 次ꎬ在冰上放置 １０ｍｉｎꎬ每隔 ２ ｍｉｎ 震
荡 １ 次ꎬ在低温下 １２ ０００ｒ􀅰ｍｉｎ － １离心 ２０ｍｉｎ 取上清ꎬ
获得水稻总蛋白质ꎮ 将总蛋白质用 ＳＤＳ￣ＰＡＧＥ 分离后
转膜进行 ＷＢ分析ꎬ具体检测步骤参见本实验室以前
的描述[１８]ꎮ 用 ａｎｔｉ￣ＨＳＰ抗体[２２]的检测结果作为蛋白
质等量加样的标志ꎮ
４４７
　 ６ 期 水稻核糖核酸酶 Ｔ２ 蛋白质在叶片生长和盐胁迫过程中的表达研究
１􀆰 ５　 ＷＢ信号的采集与分析
用 ＩｍａｇｅＭａｓｔｅｒ ２Ｄ Ｐｌａｔｉｎｕｍ软件扫描 Χ光片上的
ＷＢ条带信号ꎬ计算 ３ 次 ＷＢ 信号的平均值及方差ꎬ将
最高的 ＷＢ信号值设为 １０ꎬ相对比较不同样品表达信
号的强度ꎮ
１􀆰 ６　 水稻 ＲＮａｓｅ Ｔ２ 基因家族的转录信号分析
从 水 稻 ＭＰＳＳ ( Ｍａｓｓｉｖｅｌｙ Ｐａｒａｌｌｅｌ Ｓｉｇｎａｔｕｒｅ
Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ)网站(ｈｔｔｐ: / / ｍｐｓｓ. ｕｄｅｌ. ｅｄｕ / ＃ｒｉｃｅ / ) [２３]下
载水稻转录信息ꎬ从中挑选标明来自水稻不同时期的叶
片、１４ ｄ幼苗和盐胁迫处理材料的转录数据ꎬ用 ＲＮａｓｅ
Ｔ２基因序列筛选对应的表达 Ｔａｇ数ꎬ按每千万 Ｔａｇ数的
特定基因表达次数做图ꎬ进行基因转录的相对比较ꎮ
注:上部图片为用相应抗体检测叶片总蛋白质的 ＷＢ结果ꎻ中部为用 ＨＳＰ检测的结果(示样品的等量加样)ꎻ下部为采集 ３ 次 ＷＢ 数据ꎬ计算平均
值和方差绘制的折线图ꎮ 泳道 １ － ９ 分别代表苗期 １ｃｍ、２ｃｍ、５ｃｍ、１０ｃｍ、１５ｃｍ和分蘖期、孕穗期、开花期以及成熟期叶片的总蛋白质样品ꎮ
Ｎｏｔｅ:Ｕｐｐｅｒ ｐａｎｅｌｓ: ＷＢ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＲＮａｓｅ Ｔ２ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ａｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｔｉｍｅ ｐｏｉｎｔｓ ｉｎ ｒｉｃｅ ｌｅａｖｅｓꎻ Ｍｉｄｄｌｅ ｐａｎｅｌｓ: ＷＢ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ
ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＨＳＰ ｐｒｏｔｅｉｎ ｔｏ ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅ ｅｑｕａｌ ｌｏａｄｉｎｇꎻ Ｌｏｗｅｒ ｐａｎｅｌｓ: Ｐｌｏｔ ｏｆ ａｖｅｒａｇｅ ａｎｄ ｓｔａｎｄａｒｄ ｄｅｖｉａｔｉｏｎ ａｍｏｎｇ ｔｈｒｅｅ ｒｅｐｅａｔｓ ｏｆ ＷＢ ａｎａｌｙｓｉｓ. Ｌａｎｅｓ １
－ ９: Ｐｒｏｔｅｉｎ ｓａｍｐｌｅｓ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｒｉｃｅ ｌｅａｖｅｓ ａｔ １ｃｍꎬ ２ｃｍꎬ ５ｃｍꎬ １０ｃｍꎬ １５ｃｍ ａｔ ｓｅｅｄｌｉｎｇ ｓｔａｇｅ ａｎｄ ａｔ ｔｉｌｌｅｒｉｎｇꎬ ｂｏｏｔｉｎｇꎬ ｆｌｏｗｅｒｉｎｇ ａｎｄ ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ ｓｔａｇｅｓ.
图 １　 水稻 ＲＮａｓｅ Ｔ２ 家族蛋白质在叶片生长过程中的表达
Ｆｉｇ. １　 Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＲＮａｓｅ Ｔ２ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎ ｒｉｃｅ ｌｅａｖｅｓ
２　 结果与分析
２􀆰 １　 水稻 ＲＮａｓｅ Ｔ２ 家族蛋白质在叶片生长过程中
的表达
取水稻苗期不同株高地上部和分蘖期、孕穗期、开
花期和成熟期的叶片ꎬ提取总蛋白质ꎬ通过 ＳＤＳ￣ＰＡＧＥ
分离后用 ＲＮａｓｅ Ｔ２ 抗体进行 ＷＢ分析ꎬ结果如图 １ 所
示ꎮ ＲＮａｓｅ Ｔ２ 家族蛋白质的预期分子量大都在 ２４ －
３２ ｋＤａ 之 间ꎮ 由 图 １ 可 见ꎬ ＯｓＲＮＳ１、 ＯｓＲＮＳ２、
ＯｓＲＮＳ３、ＯｓＲＮＳ４、ＯｓＲＮＳ６ 和 ＯｓＲＮＳ７ 蛋白质的表观分
子量与预期接近ꎬＯｓＲＮＳ５ 蛋白质的表观分子量略高
于预期ꎬ可能是其修饰的产物ꎬＷＢ 结果提示这些
ＲＮａｓｅ Ｔ２ 蛋白质在正常生长的叶片中有表达ꎮ
ＯｓＲＮＳ８ 对应的抗体未能检测到清晰的条带(数据未
附)ꎬ提示 ＯｓＲＮＳ８ 在叶片中不表达或表达量极低ꎮ 总
体来看ꎬ虽然部分 ＷＢ 结果中也能看到一些非特异性
条带ꎬ但大都可以检测到清晰的主带ꎬ说明制备的抗体
具有较强的特异性ꎮ 比较 ＲＮａｓｅ Ｔ２ 蛋白质在叶片中
的表达可以发现ꎬ叶片中 ＲＮａｓｅ Ｔ２ 蛋白质的表达有不
同的模式ꎬＯｓＲＮＳ４ 主要在苗期表达ꎬ成株期后检测不
到 表 达ꎬ 而 ＯｓＲＮＳ１、 ＯｓＲＮＳ２、 ＯｓＲＮＳ３、 ＯｓＲＮＳ５、
５４７
核　 农　 学　 报 ２７ 卷
ＯｓＲＮＳ６ 和 ＯｓＲＮＳ７ 在苗期表达很低ꎬ在成株期的表达
提高ꎬ其中 ＯｓＲＮＳ２、ＯｓＲＮＳ３ 和 ＯｓＲＮＳ５ 的表达在成熟
期又有所下降ꎬ而 ＯｓＲＮＳ１、ＯｓＲＮＳ６ 和 ＯｓＲＮＳ７ 的表达
较为恒定ꎮ 根据 ＲＮａｓｅ Ｔ２ 蛋白质的表达模式可以推
测ꎬ ＯｓＲＮＳ４ 主要在苗期发挥作用ꎬ 而 ＯｓＲＮＳ１、
ＯｓＲＮＳ２、ＯｓＲＮＳ３、ＯｓＲＮＳ５、ＯｓＲＮＳ６ 和 ＯｓＲＮＳ７ 的功能
主要体现在成株期ꎮ
２􀆰 ２　 水稻 ＲＮａｓｅ Ｔ２ 基因在叶片生长过程中的转录
采集 ＭＰＳＳ数据库中 ＲＮａｓｅ Ｔ２ 基因的转录信息ꎬ
对苗期和分蘖期叶片的转录强度进行相对比较(图
２)ꎬ发现 ＯｓＲＮＳ１、ＯｓＲＮＳ６、ＯｓＲＮＳ７ 和 ＯｓＲＮＳ８ 未检测
到转录信号ꎬＯｓＲＮＳ２、ＯｓＲＮＳ３ 和 ＯｓＲＮＳ４ 的 ＭＰＳＳ 信
号略高ꎬ而 ＯｓＲＮＳ５ 的信号很低ꎮ 比较两个时期叶片
中的转录强度ꎬ可以看出 ＯｓＲＮＳ２ 和 ＯｓＲＮＳ３ 在苗期
叶片中转录水平高于分蘖期ꎬ而 ＯｓＲＮＳ４ 在分蘖期叶
片中转录水平较高ꎮ
注:横坐标为不同的水稻 ＲＮａｓｅＴ２ 基因ꎬ 纵坐标为每千万 ＭＰＳＳ ｔａｇ
中 ＲＮａｓｅＴ２ 基因的转录次数ꎮ 白框代表对照的苗期叶片 ＭＰＳＳ ｔａｇ
　 　 　 数ꎬ黑框代表分蘖期叶片 ＭＰＳＳ ｔａｇ数ꎮ
Ｎｏｔｅ:Ｘ￣ａｘｉｓ ｄｅｓｉｇｎａｔｅｓ ｔｈｅ ｎａｍｅ ｏｆ ＲＮａｓｅ Ｔ２ ｇｅｎｅｓꎻ Ｙ￣ａｘｉｓ ｄｅｓｉｇｎａｔｅｓ
ｔｈｅ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｓ ｐｅｒ １０ ｍｉｌｌｉｏｎ ＭＰＳＳ ｔａｇｓ ｆｏｒ ＲＮａｓｅ Ｔ２ ｇｅｎｅｓ.
Ｗｈｉｔｅ ｂｏｘｅｓ ｄｅｓｉｇｎａｔｅｓ ｔｈｅ ＭＰＳＳ ｔａｇ ｎｕｍｂｅｒｓ ｆｒｏｍ ｒｉｃｅ ｌｅａｖｅｓ ａｔ ｓｅｅｄｌｉｎｇ
ｓｔａｇｅꎬ ｂｌａｃｋ ｂｏｘｅｓ ｄｅｓｉｇｎａｔｅｓ ｔｈｅ ＭＰＳＳ ｔａｇ ｎｕｍｂｅｒｓ ｆｒｏｍ ｒｉｃｅ ｌｅａｖｅｓ ａｔ
　 　 　 ｔｉｌｌｅｒｉｎｇ ｓｔａｇｅ.
图 ２　 水稻 ＲＮａｓｅ Ｔ２ 家族基因在苗期
和分蘖期叶片中的转录分析
Ｆｉｇ. ２　 Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｒｉｃｅ ＲＮａｓｅ Ｔ２
ｇｅｎｅｓ ｉｎ ｌｅａｖｅｓ ａｔ ｓｅｅｄｌｉｎｇ ｓｔａｇｅ ａｎｄ ｔｉｌｌｅｒｉｎｇ ｓｔａｇｅ.
２􀆰 ３　 水稻 ＲＮａｓｅ Ｔ２ 蛋白质在盐胁迫条件下的表达
将培养 １４ ｄ的水稻幼苗用 ２００ ｍｍｏｌ􀅰Ｌ － １的 ＮａＣｌ
处理ꎬ在不同时间点的形态照片可参见文献[２４]ꎮ 在
盐胁迫处理的不同时间点取材ꎬ将总蛋白质进行 ＳＤＳ￣
ＰＡＧＥ分离后转移到 ＰＶＤＦ 膜上ꎬ用 ＲＮａｓｅ Ｔ２ 蛋白质
特异抗体检测其表达(图 ３)ꎮ 由图 ３ 可见ꎬＯｓＲＮＳ１ 蛋
白质在盐处理后 ４ ｈ的表达有所上调ꎬ随后表达下降ꎮ
ＯｓＲＮＳ２、ＯｓＲＮＳ５、ＯｓＲＮＳ６ 和 ＯｓＲＮＳ７ 的表达在盐处理
最初几天内表达上调ꎬ但随后表达下降ꎮ ＯｓＲＮＳ３ 的
表达未见到明显的变化ꎮ 有意思的是ꎬＯｓＲＮＳ４ 在盐
胁迫条件下持续表达升高ꎬ提示其在盐胁迫应答过程
可能具有独特的功能ꎮ 值得指出的是ꎬ在盐胁迫处理
后期ꎬ水稻幼苗已经处于濒死的状态ꎬ但用 ＨＳＰ 抗体
检测或对总蛋白质进行考染检测(数据未附)仍能看
到相似的总蛋白质含量ꎬ说明总蛋白质含量并没有发
生明显的变化ꎬ这一数据也为我们对 ＲＮａｓｅ Ｔ２ 蛋白质
的相对比较提供了较好的参照ꎮ
２􀆰 ４　 水稻 ＲＮａｓｅ Ｔ２ 基因的在盐胁迫条件下的转录
采集 ＭＰＳＳ 数据库中在盐胁迫条件下 ＲＮａｓｅ Ｔ２
基因的转录信息ꎬ与未经盐胁迫处理的对照植株的转
录强度进行相对比较(图 ４)ꎬ发现 ＯｓＲＮＳ２、ＯｓＲＮＳ３ 和
ＯｓＲＮＳ４ 在盐胁迫条件下均表现下调ꎬ说明这 ３ 个基
因的转录都受到了抑制ꎮ
３　 讨论
ＲＮａｓｅ Ｔ２ 属于核糖核酸酶家族ꎬ在各种生物中高
度保守ꎮ 虽然对其酶活特性有了一定的了解ꎬ但对其
生物功能的了解还十分有限ꎬ早期的报道表明核糖核
酸酶参与多种植物生理过程ꎬ如磷缺乏、衰老、机械伤
害、ＡＢＡ处理等[９ － １４]ꎮ 在全基因组测序的基础上ꎬ已
经鉴定出所有的 ＲＮａｓｅ Ｔ２ 基因ꎬ了解它们在正常生长
和逆境胁迫条件下的转录与表达信息将为了解其功能
提供基础数据ꎮ 本试验采用基于抗体的蛋白质组学策
略ꎬ通过制备 ＲＮａｓｅ Ｔ２ 蛋白质特异的抗体ꎬ采用免疫
印迹方法系统分析了其在叶片生长不同时间点和盐胁
迫条件下的蛋白质表达谱ꎬ并与水稻 ＲＮａｓｅ Ｔ２ 基因的
转录进行了比较ꎮ
本试验发现ꎬ在水稻正常生长叶片中 ＲＮａｓｅ Ｔ２ 蛋
白质的表达有不同的模式ꎬ其中 ＯｓＲＮＳ４ 蛋白质主要
在苗期表达ꎬ成株期后表达下降直至检测不到ꎬ而
ＭＰＳＳ数据表明随植株生长ꎬ其转录水平有所增加ꎮ
ＯｓＲＮＳ１、 ＯｓＲＮＳ２、 ＯｓＲＮＳ３、 ＯｓＲＮＳ５、 ＯｓＲＮＳ６ 和
ＯｓＲＮＳ７ 在苗期表达很低ꎬ但在成株盛期表达较高ꎬ其
中 ＯｓＲＮＳ２、ＯｓＲＮＳ３ 和 ＯｓＲＮＳ５ 的蛋白质表达在成熟
期又有所下降ꎬ与 ＯｓＲＮＳ２ 和 ＯｓＲＮＳ３ 的转录数据变
化趋势相吻合ꎮ 而 ＯｓＲＮＳ１、ＯｓＲＮＳ６ 和 ＯｓＲＮＳ７ 的蛋
白质表达较为恒定ꎮ 此外ꎬ我们还检测了 ＲＮａｓｅ Ｔ２ 蛋
白质在水稻种子萌发过程中的表达ꎬ均未检测到表达
信号(数据未附)ꎬ说明这些 ＲＮａｓｅ Ｔ２ 蛋白质是在种
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　 ６ 期 水稻核糖核酸酶 Ｔ２ 蛋白质在叶片生长和盐胁迫过程中的表达研究
注:上部图片为用相应抗体检测叶片总蛋白质的 ＷＢ结果ꎻ中部为用 ＨＳＰ检测的结果(示样品的等量加样)ꎻ下部为采集 ３ 次 ＷＢ 数据ꎬ计算平均
　 　 　 值和方差绘制的折线图ꎮ 泳道 １ － ９ 分别代表盐胁迫后 ０ｈ、４ｈ、１２ｈ、１ｄ、２ｄ、３ｄ、５ｄ、７ｄ和 ８ｄ的总蛋白质样品ꎮ
Ｎｏｔｅ: Ｕｐｐｅｒ ｐａｎｅｌｓ: ＷＢ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＲＮａｓｅ Ｔ２ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ａｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｔｉｍｅ ｐｏｉｎｔｓ ｉｎ ｓａｌｔ￣ｓｔｒｅｓｓｅｄ ｓｅｅｄｌｉｎｇｓꎻ Ｍｉｄｄｌｅ ｐａｎｅｌｓ: ＷＢ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ
ｔｈｅ ＨＳＰ ｐｒｏｔｅｉｎ ｔｏ ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅ ｅｑｕａｌ ｌｏａｄｉｎｇꎻ Ｌｏｗｅｒ ｐａｎｅｌｓ: Ｐｌｏｔ ｏｆ ａｖｅｒａｇｅ ａｎｄ ｓｔａｎｄａｒｄ ｄｅｖｉａｔｉｏｎ ａｍｏｎｇ ｔｈｒｅｅ ｒｅｐｅａｔｓ ｏｆ ＷＢ ａｎａｌｙｓｉｓ. Ｌａｎｅｓ １ － ９:
　 　 　 Ｐｒｏｔｅｉｎ ｓａｍｐｌｅｓ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｒｉｃｅ ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ ａｔ ０ｈꎬ ４ｈꎬ １２ｈꎬ １ｄꎬ ３ｄꎬ ５ｄꎬ ７ｄ ａｎｄ ８ｄ ａｆｔｅｒ ｓｔｒｅｓｓｅｄ ｂｙ ｓｏｄｉｕｍ ｃｈｌｏｒｉｄｅ.
图 ３　 水稻 ＲＮａｓｅ Ｔ２ 家族蛋白质在盐胁迫条件下的表达
Ｆｉｇ. ３　 Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＲＮａｓｅ Ｔ２ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｕｎｄｅｒ ｓａｌｔ￣ｓｔｒｅｓｓｅｄ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ａｔ ｓｅｅｄｌｉｎｇ ｓｔａｇｅ
子萌发后新合成的ꎬ其中大部分 ＲＮａｓｅ Ｔ２ 蛋白质的合
成可能受光的调控ꎮ 根据这些蛋白质的具体表达模
式ꎬ可以大致推测其发挥功能的时期和部位ꎬ比如
ＯｓＲＮＳ４ 主要在苗期发挥作用ꎬ而 ＯｓＲＮＳ１、ＯｓＲＮＳ２、
ＯｓＲＮＳ３、ＯｓＲＮＳ５、ＯｓＲＮＳ６ 和 ＯｓＲＮＳ７ 的功能主要体现
在成株期ꎮ
有报道表明ꎬＯｓＲＮＳ３、ＯｓＲＮＳ４ 和 ＯｓＲＮＳ５ 的转录
在盐胁迫过程中诱导上调[１６]ꎮ 在本试验中发现ꎬ在盐
胁迫处理条件下 ＯｓＲＮＳ１ 的表达明显下调ꎬ这种下调
趋势在胁迫 ４ ｈ后就可以观察到ꎻＯｓＲＮＳ３ 蛋白质的表
达较为恒定ꎬ没有明显变化ꎬ但其转录强度在盐胁迫后
有所下降ꎻＯｓＲＮＳ２、ＯｓＲＮＳ５、ＯｓＲＮＳ６ 和 ＯｓＲＮＳ７ 的表
达呈现先上调后下调的特点ꎬ推测这些蛋白质的表达
变化是盐胁迫条件下的瞬时反应ꎮ 由于转录信号过
低ꎬ无从了解其在胁迫过程中的转录变化ꎬ值得指出的
是ꎬＯｓＲＮＳ４ 的表达在盐胁迫条件下呈现持续表达升
高ꎬ推测该蛋白质在盐胁迫反应发挥作用ꎬ该蛋白质的
表达可以看做是盐胁迫条件下的标志物ꎬ对 ＯｓＲＮＳ４
功能的研究将是主要工作方向ꎮ
本试验通过制备 ＲＮａｓｅ Ｔ２ 蛋白质的特异抗体ꎬ利
用 ＷＢ技术分析获得了 ＲＮａｓｅ Ｔ２ 蛋白质在叶片生长
和盐胁迫条件下的表达谱ꎬ这种基于抗体的蛋白质组
学策略可以直观地鉴定特定蛋白质的表达变化[２５]ꎬ相
对于基于质谱的蛋白质组学策略而言ꎬ这种策略具有
更高的灵敏度、特异性并易于操作ꎮ 本试验中所制备
的抗体大都具有良好的检测效果ꎬ能够特异性地识别
目的条带ꎬ所以还可能用于 ＲＮａｓｅ Ｔ２ 家族的其它相关
研究ꎬ如检测它们在其它部位、其它生物或非生物逆境
胁迫条件下的表达ꎬ进行蛋白质的组织或亚细胞定位
以及调查与其它蛋白质的相互作用等ꎮ
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核　 农　 学　 报 ２７ 卷
注:横坐标为不同的水稻 ＲＮＳ 基因ꎬ 纵坐标为每千万 ＭＰＳＳ ｔａｇ 中
ＲＮＳ基因的转录次数ꎮ 白框代表正常水稻叶片 ＭＰＳＳ ｔａｇ数ꎬ黑框代
　 　 　 表盐胁迫处理条件下的叶片 ＭＰＳＳ ｔａｇ数ꎮ
Ｎｏｔｅ: Ｘ￣ａｘｉｓ ｄｅｓｉｇｎａｔｅｓ ｔｈｅ ｎａｍｅ ｏｆ ｒｉｃｅ ＲＮａｓｅ Ｔ２ ｇｅｎｅｓꎻ Ｙ￣ａｘｉｓ
ｄｅｓｉｇｎａｔｅｓ ｔｈｅ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｓ ｐｅｒ １０ ｍｉｌｌｉｏｎ ＭＰＳＳ ｔａｇｓ ｆｏｒ ＲＮａｓｅ
Ｔ２ ｇｅｎｅｓ. Ｗｈｉｔｅ ｂｏｘｅｓ ｄｅｓｉｇｎａｔｅｓ ｔｈｅ ＭＰＳＳ ｔａｇ ｎｕｍｂｅｒｓ ｆｒｏｍ ｎｏｒｍａｌ ｒｉｃｅ
ｌｅａｖｅｓꎬ ｂｌａｃｋ ｂｏｘｅｓ ｄｅｓｉｇｎａｔｅｓ ｔｈｅ ＭＰＳＳ ｔａｇ ｎｕｍｂｅｒｓ ｆｒｏｍ ｓａｌｔ￣ｓｔｒｅｓｓｅｄ
　 　 　 ｒｉｃｅ ｌｅａｖｅｓ.
图 ４　 水稻 ＲＮａｓｅ Ｔ２ 家族基因在盐胁
迫条件下的转录分析
Ｆｉｇ. ４　 Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｒｉｃｅ ＲＮａｓｅ Ｔ２
ｇｅｎｅｓ ｉｎ ｌｅａｖｅｓ ａｔ ｓｅｅｄｌｉｎｇ ｓｔａｇｅ ｕｎｄｅｒ ｓａｌｔ ｓｔｒｅｓｓ.
４　 结论
水稻 ＯｓＲＮＳ１￣ＯｓＲＮＳ７ 蛋白质在叶片中表达ꎬ其中
ＯｓＲＮＳ４ 主要在苗期表达ꎬ提示其在苗期发挥作用ꎬ其
它蛋白质主要在成株期表达ꎬ可能受光合作用的诱导
并在随后的生长中发挥作用ꎻ水稻 ＯｓＲＮＳ４ 在盐胁迫
条件下表达上调ꎬ提示其可能在盐胁迫应答过程中发
挥作用ꎬ其它 ＲＮａｓｅ Ｔ２ 蛋白质的表达大多随盐胁迫时
间的延长而下降ꎻ在水稻正常生长和盐胁迫条件下
ＲＮａｓｅ Ｔ２ 基因的转录和翻译信号有一定的相关性ꎬ但
二者间也有明显的区别ꎮ
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Ｒｉｂｏｎｕｃｌｅａｓｅ Ｌｅｖｅｌｓ ｉｎ ＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓꎬＡｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ＲＮＳ１ ｏｒ
ＲＮＳ２ Ｅｌｅｖａｔｅｓ Ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎ Ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ [ Ｊ] . Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙꎬ
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Ｇｒｅｅｎ Ｐ Ｊ. Ｔｈｅ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｒｉｂｏｎｕｃｌｅａｓｅ ｇｅｎｅ ＲＮＳ１ ｉｓ ｔｉｇｈｔｌｙ
ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｉｎ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｌｉｍｉｔａｔｉｏｎ [ Ｊ ] . Ｔｈｅ Ｐｌａｎｔ
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ＲＮＳ２:Ａ ｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅ￣ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ＲＮａｓｅ ｏｆ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｔ ｄｉｖｅｒｇｅｄ
ｆｒｏｍ ｔｈｅ Ｓ￣ＲＮａｓｅｓ ｂｅｆｏｒｅ ｓｐｅｃｉａｔｉｏｎ [ Ｊ ] . Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ
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ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌꎬＡＢＡ￣ｄｅｐｅｎｄｅｎｔꎬａｎｄ ＡＢＡ￣ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｐａｔｈｗａｙｓ ｏｎ
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ｕｎｄｅｒ Ｓａｌｔ￣ｓｔｒｅｓｓｅｄ Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ
ＺＥＮＧ Ｘｉａｎｇ￣ｒａｎ　 ＷＥＩ Ｊｉａｎ　 ＪＩＡ Ｌｉｎ　 ＧＵＡＮ Ｍｉｎｇ￣ｌｉ　 ＬＩＵ Ｚｈａｏ　 ＬＡＮ Ｊｉｎ￣ｐｉｎｇ
ＬＩＵ Ｌｉ￣ｊｕａｎ　 ＬＩ Ｌｉ￣ｙｕｎ　 ＬＩＵ Ｇｕｏ￣ｚｈｅｎ
(Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓꎬ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｈｅｂｅｉꎬ Ｂａｏｄｉｎｇꎬ Ｈｅｂｅｉ　 ０７１００１)
Ａｂｓｔｒａｃｔ:Ｒｉｂｏｎｕｃｌｅａｓｅｓ (ＲＮａｓｅꎬ ＲＮＳ)Ｔ２ ａｒｅ ｆｏｕｎｄ ｉｎ ａｌｍｏｓｔ ａｌｌ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ｏｒｇａｎｉｓｍｓꎬ ｔｈｅ ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｏｎ ｓｕｇｇｅｓｔｅｄ ｔｈｅ
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ａｎｔｉｂｏｄｙ￣ｂａｓｅｄ ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ ｓｔｒａｔｅｇｙꎬ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐａｔｔｅｒｎｓ ｏｆ ｔｈｅ ＲＮａｓｅ Ｔ２ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎ ｌｅａｖｅｓ ａｎｄ ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ ｕｎｄｅｒ ｓａｌｔ￣
ｓｔｒｅｓｓｅｄ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｗｅｒｅ ｓｕｒｖｅｙｅｄ ｂｙ Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ (ＷＢ). Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ＯｓＲＮＳ１￣ＯｓＲＮＳ７ ｐｒｏｔｅｉｎｓ
ｗｅｒｅ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｉｎ ｌｅａｖｅｓꎬ ｗｈｉｌｅ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＯｓＲＮＳ８ ｗａｓ ｎｏｔ ｄｅｔｅｃｔｅｄ. Ｉｎｔｅｒｅｓｔｉｎｇｌｙꎬ ｔｈｅ ＯｓＲＮＳ４ ｐｒｏｔｅｉｎ ｗａｓ
ｍａｉｎｌｙ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｉｎ ｓｅｅｄｌｉｎｇ ｓｔａｇｅꎬ ｒｅｖｅａｌｉｎｇ ｔｈａｔ ｉｔ ｐｌａｙｅｄ ａ ｒｏｌｅ ｉｎ ｓｅｅｄｌｉｎｇ ｓｔａｇｅ. Ｔｈｅ ｏｔｈｅｒ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｗｅｒｅ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｉｎ
ａｄｕｌｔ ｓｔａｇｅｓ. Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＯｓＲＮＳ４ ｐｒｏｔｅｉｎ ｗａｓ ｕｐ￣ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｕｎｄｅｒ ｓａｌｔ￣ｓｔｒｅｓｓｅｄ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎꎬ ｓｕｇｇｅｓｔｉｎｇ ｔｈａｔ ｉｔ ｐｌａｙｓ ａ
ｒｏｌｅ ｉｎ ｔｈｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ ｓａｌｔ￣ｓｔｒｅｓｓꎬ ｗｈｉｌｅ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ ｏｆ ｍｏｓｔ ｏｆ ｔｈｅ ｏｔｈｅｒ ＲＮａｓｅ Ｔ２ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｗｅｒｅ ｄｏｗｎ￣ｒｅｇｕｌａｔｅｄ
ｕｎｄｅｒ ｔｈｅ ｓｔｒｅｓｓｅｄ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ. Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｂｕｎｄａｎｃｅ ａｎｄ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ ｒｅｖｅａｌｅｄ
ｔｈａｔ ｃｅｒｔａｉｎ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｓ ｅｘｉｓｔｅｄ ｉｎ ｓｏｍｅ ｇｅｎｅｓ. Ｔａｋｅｎ ｔｏｇｅｔｈｅｒꎬ ｔｈｅ ｄａｔａ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｉｎ ｔｈｉｓ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｐｒｏｖｉｄｅｓ ｉｎｔｅｒｅｓｔｉｎｇ
ｃｌｕｅｓ ｆｏｒ ｕｎｃｏｖｅｒｉｎｇ ｔｈｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ｒｉｃｅ ＲＮａｓｅ Ｔ２ ｇｅｎｅｓ.
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ:Ｒｉｃｅ (Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ Ｌ. )ꎻ Ｒｉｂｏｎｕｃｌｅａｓｅｓ ｐｒｏｔｅｉｎｓꎻ Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇꎻ Ａｎｔｉｂｏｄｙ￣ｂａｓｅｄ ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ
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