全 文 ：核 农 学 报摇 圆园员猿袁圆苑渊怨冤院员圆苑远 耀 员圆愿源
允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
收稿日期院圆园员猿鄄园源鄄员缘摇 接受日期院圆园员猿鄄园愿鄄园员
基金项目院广东省自然科学基金渊杂圆园员员园源园园园员远缘猿冤
作者简介院杨加伟袁男袁主要从事植物分子生物学研究遥 耘鄄皂葬蚤造院 怨怨园员园远鄄赠躁憎岳 员远猿援 糟燥皂
通讯作者院庄楚雄袁男袁研究员袁主要从事植物分子生物学及植物基因工程研究遥 耘鄄皂葬蚤造院扎澡怎葬灶早糟曾岳 泽糟葬怎援 藻凿怎援 糟灶
文章编号院员园园园鄄愿缘缘员渊圆园员猿冤园怨鄄员圆苑远鄄园怨
水稻 韵泽着鄄糟燥责员基因表达模式及功能的初步分析
杨加伟员 摇 周玲艳圆 摇 余守和猿 摇 庄楚雄猿
渊员 遵义医学院生物化学教研室袁贵州 遵义摇 缘远猿园园猿曰圆 仲恺农业工程学院生命科学学院袁
广东 广州摇 缘员园圆圆缘曰猿 华南农业大学生命科学学院袁广东 广州摇 缘员园远源圆冤
摘摇 要院着鄄悦韵孕是真核生物中 悦韵孕 陨有被小泡的一个亚基袁其在植物中的生物学功能还未见报道遥 本研
究对水稻中编码 着鄄悦韵孕亚基的基因进行了生物信息学分析袁对其中的 韵泽着鄄糟燥责员 基因进行了时空表达分
析袁构建了 韵泽着鄄糟燥责员 的 砸晕粤干涉载体并转化水稻袁对转化植株的表达特性和表型性状进行了分析遥 生
物信息学分析结果表明袁编码 着鄄悦韵孕 的两个基因有很高的序列一致性袁其中的 韵泽着鄄悦韵孕员 蛋白与玉米尧
拟南芥和大豆同源蛋白也具有较高的序列一致性袁分别为 愿猿豫 尧远愿豫和 远圆豫 曰时空表达分析结果表明袁
韵泽着鄄糟燥责员 在穗部特异表达袁且在减数分裂期幼穗中表达量最高遥 砸晕粤干涉的研究结果表明袁韵泽着鄄糟燥责员 的
表达下调造成植株穗顶部死亡袁暗示该基因对水稻穗的发育具有重要作用遥 本研究初步揭示了 韵泽着鄄
糟燥责员 在水稻中的功能袁为进一步研究 悦韵孕陨有被小泡在植物中的功能奠定了基础遥
关键词院水稻曰韵泽着鄄糟燥责员曰表达曰砸晕粤干涉曰功能分析
摇 摇 真核生物的分泌途径主要是通过一系列的膜泡来
介导的咱员 原 猿暂 遥 分泌途径运输的蛋白首先进入内质网袁
然后以膜泡出芽和融合的形式被运输到各类细胞器袁
包括高尔基体尧溶酶体或回收到内质网等遥 被详细研
究的膜泡有 猿 种院悦韵孕陨陨 渊 悦燥葬贼 责则燥贼藻蚤灶 陨陨冤有被小泡尧
悦韵孕陨渊悦燥葬贼 责则燥贼藻蚤灶 陨冤有被小泡及 悦悦灾渊悦造葬贼澡则蚤灶冤有被
小泡咱源暂 遥 悦韵孕陨陨 主要将蛋白从内质网输出到高尔基
体袁悦韵孕陨负责蛋白在高尔基体内部的运输及从高尔基
体到内质网的蛋白回收袁而 悦悦灾则穿梭在反式高尔基
体尧内涵体 辕溶酶体系统尧质膜间遥 这 猿 种膜泡均起源
于其供体细胞器并最终与目标细胞器融合咱源暂 遥
悦韵孕陨有被小泡外被含 愿 个多肽袁为 员 个 粤阅孕 原核
糖化因子渊粤砸云冤和 苑 个 悦韵孕蛋白袁分别命名为 琢鄄悦韵孕
渊员远园 运阅冤尧茁鄄悦韵孕 渊员员园 运阅冤尧茁爷鄄悦韵孕 渊员园圆 运阅冤尧酌鄄
悦韵孕 渊员园园 运阅冤尧啄鄄悦韵孕 渊远园 运阅冤尧着鄄悦韵孕 渊猿远 运阅冤和 灼鄄
悦韵孕渊圆园 运阅冤 咱缘暂 遥 苑 个 悦韵孕蛋白按等分子比例在胞浆
中以复合体的形式存在袁被称为外被体渊悦燥葬贼燥皂藻则冤袁分
子量为 远缘园 耀 苑园园 运阅咱缘 原 苑暂 遥 利用脉冲追踪和免疫共沉
淀的方法发现体内 悦燥葬贼燥皂藻则 的形成是一个有序的过
程袁着鄄悦韵孕是最后一个组装上去的亚基袁这个过程需要
员 耀 圆 澡才能完成袁形成的蛋白半衰期为 圆愿 小时咱愿 原 怨暂 遥
在高盐离子浓度条件下袁外被体蛋白会发生解聚遥 解
聚后袁琢鄄悦韵孕袁茁忆鄄悦韵孕袁着鄄悦韵孕 三亚基可形成有功能的
亚复合体袁该亚复合体可正常运输带有双赖氨酸基序
渊运运载载冤的蛋白曰酌鄄悦韵孕 与 灼鄄悦韵孕袁茁鄄悦韵孕 与 啄鄄悦韵孕 也
可形成稳定的两个亚复合体遥 处于生理条件下袁各亚
基又重新聚合袁形成有功能的蛋白复合体咱愿暂 遥 粤砸云 是
一类高度保守袁大小为 圆员 噪阅 左右的 郧栽孕 结合蛋白袁
是外被体装配和去装配的信号袁在细胞中不断处于
粤砸云鄄郧阅孕与 粤砸云鄄郧栽孕互变的结合态中袁对 悦韵孕陨 形成
起着重要作用咱员园 原 员员暂 遥
现在 悦韵孕陨 的研究主要集中在动物细胞和酵母
中袁植物中的研究要远远落后遥 粤灶凿则藻藻增葬 等咱员圆暂通过
耘杂栽数据库查询表明了植物中 悦韵孕陨 蛋白同源物的存
在遥 悦燥灶贼则藻则葬泽等咱员猿暂利用哺乳动物 悦韵孕陨外被体蛋白抗
体检测到水稻细胞中的同源物袁发现水稻细胞含有
琢 原 尧茁 原 尧茁忆 原 尧酌鄄悦韵孕 及 粤砸云遥 而且袁哺乳动物的 茁忆鄄
悦韵孕抗体不仅能免疫沉淀水稻 茁爷鄄悦韵孕袁还能免疫沉
远苑圆员
摇 怨 期 水稻 韵泽着鄄糟燥责员 基因表达模式及功能的初步分析
淀 琢 原 尧茁 原 尧酌鄄悦韵孕袁说明水稻 悦韵孕陨 外被体组分与哺
乳动物一样以聚合形式存在遥 孕蚤皂责造 等咱员源暂以花椰菜为
材料对 悦韵孕陨进行了原位定位并体外诱导其表达遥 免
疫金标显示 悦韵孕陨 主要芽生于顺面高尔基体袁并从顺
面到反面逐渐减少至消失遥 体外诱导试验证明袁粤砸云
和外被体蛋白能被自动招募到由内质网和高尔基体膜
组成的混合物上袁揭示植物中可能有着和酵母及哺乳
动物类似的膜泡运输机制遥 此外袁阅燥灶燥澡燥藻 等咱员缘暂在拟
南芥和海藻中还发现了 圆 种类型的 悦韵孕陨院悦韵孕陨葬 和
悦韵孕陨遭遥 二者在小泡的形成方式尧密度尧被膜结构尧货
物尧出芽位点尧空间分布 远 个方面有着明显差异袁如院
悦韵孕陨葬出芽于高尔基体顺面囊泡袁分布在顺面高尔基
体与内质网之间的区域曰而 悦韵孕陨遭 则出芽于高尔基体
中部和反面囊泡袁进行高尔基体驻留蛋白的内部运输遥
然而袁尽管植物细胞中已发现 悦韵孕陨 小泡袁但其生物学
功能并不清楚袁悦韵孕陨运输小泡在植物中的功能将会是
下一步研究的重点遥
表 员摇 引物序列
栽葬遭造藻 员摇 杂藻择怎藻灶糟藻泽 燥枣 责则蚤皂藻则泽
引物名称
晕葬皂藻 燥枣 责则蚤皂藻则泽
引物序列
杂藻择怎藻灶糟藻 渊缘忆贼燥 猿忆冤
酶切位点
阅藻泽糟则蚤责贼蚤燥灶
韵泽着鄄糟燥责员鄄员枣 粤粤粤粤 郧粤粤栽栽悦栽郧悦粤郧悦粤栽悦栽悦郧郧粤粤栽悦粤郧 耘糟燥砸 陨
韵泽着鄄糟燥责员鄄员则 粤粤粤粤 郧郧粤栽悦悦郧栽粤悦悦栽悦粤悦栽粤悦郧栽郧悦悦栽栽悦 月葬皂匀 陨
韵泽着鄄糟燥责员鄄圆枣 粤粤粤粤 郧郧粤栽悦悦粤栽郧粤栽粤栽悦郧悦栽栽郧郧悦粤郧郧悦 月葬皂匀 陨
韵泽着鄄糟燥责员鄄圆则 粤粤粤粤 郧栽悦郧粤悦栽粤栽郧悦悦郧郧粤郧悦粤悦栽郧粤粤郧悦 杂葬造 陨
韵泽着鄄糟燥责员鄄猿枣 粤粤粤粤 郧栽悦郧粤悦栽郧郧栽郧郧郧粤悦栽粤栽郧郧粤粤栽栽郧 杂葬造 陨
韵泽着鄄糟燥责员鄄猿则 粤粤粤粤 悦栽郧悦粤郧栽郧粤栽悦粤郧粤悦悦栽郧栽郧悦粤栽悦栽郧 孕泽贼 陨
韵泽着鄄糟燥责员鄄源枣 粤粤粤粤 悦栽郧悦粤郧悦栽粤栽郧悦悦郧郧粤郧悦粤悦栽郧粤粤郧悦 孕泽贼 陨
韵泽着鄄糟燥责员鄄源则 粤粤粤粤 粤粤郧悦栽栽悦粤栽郧粤栽粤栽悦郧悦栽栽郧郧悦粤郧郧悦 匀蚤灶凿 陨陨陨
韵泽着鄄糟燥责员鄄砸栽枣 粤栽郧粤栽粤栽悦郧悦栽栽郧郧悦粤郧郧悦
韵泽着鄄糟燥责员鄄砸栽则 栽粤栽郧悦悦郧郧粤郧悦粤悦栽郧粤粤郧悦
匀责贼枣 栽悦悦郧郧粤郧悦悦栽悦悦郧悦栽悦郧粤粤郧栽粤郧
匀责贼则 悦栽郧粤粤悦栽悦粤悦悦郧悦郧粤悦郧栽悦栽郧栽悦
粤糟贼蚤灶枣 郧粤悦粤栽栽悦粤郧悦郧栽栽悦悦粤郧悦悦粤栽郧栽粤栽
粤糟贼蚤灶则 栽郧郧粤郧悦栽栽悦悦粤栽郧悦悦郧粤栽郧粤郧粤郧粤粤
摇 摇 本研究通过对编码水稻 着鄄悦韵孕 的基因渊韵泽着鄄糟燥责冤
进行生物信息学和时空表达特异性分析袁以及通过构
建 韵泽着鄄糟燥责员 砸晕粤 干涉载体并转化水稻获得 韵泽着鄄糟燥责员
在 砸晕粤 水平尧蛋白水平表达量下调的转基因植株袁初
步揭示 韵泽着鄄糟燥责员 在水稻中的生物学功能袁为进一步研
究 韵泽着鄄糟燥责以及 悦韵孕陨 有被小泡在植物中的功能打下
了坚实的基础遥
员摇 材料与方法
员郾 员摇 材料
员郾 员郾 员摇 植物材料摇 粳稻渊韵则赠扎葬 泽葬贼蚤增葬 蕴援 冤品种中花 员员
渊在匀员员冤袁由华南农业大学遗传工程实验室保存遥
员郾 员郾 圆摇 质粒与菌株摇 克隆测序载体为 责哉悦员愿袁购买于
栽葬噪葬则葬公司遥 双元表达载体为 责悦粤酝月陨粤 原 员猿愿园袁大肠
杆菌菌株为 阅匀员园月袁农杆菌菌株为 耘匀粤员园缘袁均由华南
农业大学遗传工程实验室保存遥
员郾 员郾 猿摇 引物序列摇 引物序列如表 员遥
员郾 圆摇 方法
员郾 圆郾 员摇 生物信息学分析 摇 韵泽着鄄糟燥责员 与 韵泽着鄄糟燥责圆 基因
核酸及蛋白水平的一致性分析尧韵泽着鄄悦韵孕 蛋白保守结
构与分析尧以及 韵泽着鄄悦韵孕蛋白不同物种间保守性分析
均在 晕悦月陨 网站 月蕴粤杂栽 页面渊 澡贼贼责院 辕 辕 遭造葬泽贼援 灶糟遭蚤援 灶造皂援
灶蚤澡援 早燥增冤进行遥
员郾 圆郾 圆摇 韵泽着鄄糟燥责员 基因的表达分析
员郾 圆郾 圆郾 员摇 砸晕粤 提取 摇 分别取水稻中花 员员 花粉母细
胞尧减数分裂尧单核和二核 源 个时期的穗子以及幼叶和
成熟叶 园郾 员 早放置于预冷的研钵中袁加入液氮袁快速研
磨成粉末状袁转至 员郾 缘皂蕴 离心管中袁加入 员皂蕴 栽砸陨扎燥造
提取液袁摇匀袁漩涡振荡 员园皂蚤灶袁加 圆园园滋蕴 氯仿袁混匀
缘皂蚤灶袁室温放置 缘皂蚤灶袁源益袁员猿 园园园则窑皂蚤灶 原员离心 员园皂蚤灶遥
苑苑圆员
核摇 农摇 学摇 报 圆苑 卷
吸取上清于另一干净的离心管中渊约 远园园滋蕴冤袁加入
源园园滋蕴异丙醇袁 原 圆园益沉淀 员园皂蚤灶袁员圆 园园园则窑皂蚤灶 原员离心
员园皂蚤灶遥 倒掉上清袁加入 员皂蕴 苑缘豫 乙醇袁轻弹袁愿 园园园则窑
皂蚤灶 原员离心 缘皂蚤灶袁倒掉上清袁重复 圆 次遥 砸晕粤 室温风
干袁加入 圆园 耀 猿园滋蕴 阅耘孕悦 处理水溶解袁超低温冰箱保
存备用遥
员郾 圆郾 圆郾 圆摇 晕燥则贼澡藻则灶 遭造燥贼摇 取 猿园滋早 砸晕粤 加入等体积的
圆 伊 砸晕粤载样缓冲液袁变性后置于琼脂糖凝胶电泳 员 耀
圆 澡左右后袁将凝胶在 阅耘孕悦水和 员园 伊 杂杂悦中分别洗涤
员缘 耀 猿园皂蚤灶袁于 员园 伊 杂杂悦中转膜 圆园 澡袁将 砸晕粤 转移至带
正电荷的尼龙膜上遥 紫外交联后袁于 阅耘孕悦 水和 圆 伊
杂杂悦溶液中分别洗涤 员缘皂蚤灶袁晾干遥 将尼龙膜放入杂
交管贴于管壁袁每 糟皂圆 膜面积加入 园郾 员皂蕴 杂交液袁
源圆益预杂交 猿 澡袁加入标记好的探针袁源圆益杂交 员远 耀 圆园
澡遥 倒出杂交液袁用杂交洗液 源圆益洗两次袁每次 猿园皂蚤灶遥
洗好后用保鲜膜包膜袁压磷屏袁月陨韵鄄砸粤阅 云载 自动成像
系统扫描分析杂交结果遥
图 员摇 韵泽着鄄糟燥责员 砸晕粤干涉载体示意图
云蚤早援 员摇 杂糟澡藻皂葬贼蚤糟 则藻责则藻泽藻灶贼葬贼蚤燥灶 燥枣 韵泽着鄄糟燥责员 砸晕粤 蚤灶贼藻则枣藻则藻灶糟藻 渊砸晕粤蚤冤 责造葬泽皂蚤凿
员郾 圆郾 圆郾 猿摇 砸栽鄄孕悦砸 分析 摇 分别取约 圆 滋早 的总 砸晕粤袁
员滋蕴 燥造蚤早燥 渊 凿栽冤 渊 员园园 灶早窑滋蕴 原员 冤袁 源滋蕴 缘 伊 砸藻增藻则泽藻
栽则葬灶泽糟则蚤责贼葬泽藻 遭怎枣枣藻则袁圆滋蕴 凿晕栽孕 皂蚤曾贼怎则藻 渊员园皂酝冤袁砸晕葬泽藻
蚤灶澡蚤遭蚤贼燥则 圆园 哉袁 圆滋蕴 粤酝灾 砸藻增藻则泽藻 栽则葬灶泽糟则蚤责贼葬泽藻袁 以
阅耘孕悦处理水将总体积补至 圆园滋蕴袁室温放置 员园皂蚤灶后袁
源圆益反应 员 澡袁冰浴 圆 耀 缘皂蚤灶袁 原 圆园益保存备用遥 以逆
转录获得的 糟阅晕粤 为模板袁以 韵泽着鄄糟燥责员 原 砸栽枣 和 韵泽着鄄
糟燥责员 原 砸栽枣为引物进行扩增袁水稻 粤糟贼蚤灶基因为内参渊引
物序列见表 员冤遥 扩增反应程序为院预变性 怨源益 圆皂蚤灶曰
怨源益 猿园 泽袁缘远益 猿园 泽袁苑圆益 猿园 泽曰苑圆益延伸 员园皂蚤灶袁扩增
循环数为 圆远 耀 猿园遥
员郾 圆郾 猿摇 砸晕粤干涉转化植株的获得
员郾 圆郾 猿郾 员摇 砸晕粤 干涉载体构建 摇 利用表 员 中所列引
物袁以水稻基因组 阅晕粤 为模板袁分别用引物 韵泽着鄄糟燥责员
原 员枣 垣 韵泽着鄄糟燥责员 原 员则尧韵泽着鄄糟燥责员 原 猿枣 垣 韵泽着鄄糟燥责员 原 猿则 孕悦砸
扩增 韵泽着鄄糟燥责员 的启动子和内含子片段曰以减数分裂期
穗 糟阅晕粤为模板袁分别用引物 韵泽着鄄糟燥责员 原 圆枣 垣 韵泽着鄄糟燥责员
原 圆则尧韵泽着鄄糟燥责员 原 源枣 垣 韵泽着鄄糟燥责员 原 源则 扩增正向外显子片
段和反向外显子片段遥 孕悦砸 扩增程序参照 员郾 圆郾 圆郾 圆遥
按图 员 所示袁选择相应的限制性内切酶将内含子尧反向
外显子和正向外显子片段组装到载体 责哉悦员愿 后袁利用
月葬皂匀 陨和 匀蚤灶凿 陨陨陨 双酶切鉴定并导入双元表达载体
责悦粤酝月陨粤 原员猿愿园袁最后通过 耘糟燥砸 陨 和 月葬皂匀 陨 双酶切
启动子后导入 砸晕粤 干涉单元上游遥 载体与目的片段
酶切尧连接及重组子转化方法参见文献咱员远 原 员愿暂 遥
员郾 圆郾 猿郾 圆摇 农杆菌介导的水稻遗传转化摇 农杆菌介导
的水稻转化方法参见文献咱员愿暂 袁主要过程如下院选取饱
满粳稻 在匀员员 成熟种子去壳消毒后接种于诱导培养基
上诱导愈伤组织袁圆园 凿 左右继代一次遥 挑选淡黄色尧
致密尧生长旺盛的颗粒状愈伤组织和农杆菌菌液渊韵阅
值为 园郾 员 左右冤混合袁摇动 圆园皂蚤灶袁静置 员园皂蚤灶袁取出愈
伤组织袁置于共培养培养基上暗培养 圆 耀 猿 凿遥 将共培
养后的愈伤组织取出接入合适筛选压的筛选培养基
上袁筛选 圆 次袁每次 圆 耀 猿 周遥 将筛选后存活的愈伤组
织置于预分化培养基上 员缘 凿左右袁然后接入分化培养
基袁获得再生幼苗遥 将再生的幼苗移入生根培养基上
培养袁待根系生长良好袁小苗长至 愿 耀 员园糟皂 时袁将其取
出袁并将根部培养基清洗干净袁移栽于室外遥
员郾 圆郾 猿郾 猿摇 转化植株的 孕悦砸鉴定摇 取转基因植株叶片
抽提基因组 阅晕粤袁以转化植株的基因组 阅晕粤 为模板
进行 匀责贼基因的 孕悦砸扩增渊引物序列见表 员冤遥
员郾 圆郾 源摇 转化植株 韵泽着鄄糟燥责员 的表达特性及表型分析
员郾 圆郾 源郾 员摇 砸栽鄄孕悦砸 分析 摇 取转化苗减数分裂期的幼
穗按照 员郾 圆郾 圆 中方法抽提 砸晕粤尧逆转录及 孕悦砸袁分析
韵泽着鄄糟燥责员 在 砸晕粤干涉转化植株中的表达情况遥
员郾 圆郾 源郾 圆摇 宰藻泽贼藻则灶 遭造燥贼 分析 摇 提取 栽员 阳性植株穗减
数分裂期总蛋白袁提取方法参见文献咱员愿暂 遥 将处理后的
蛋白样品点入上样孔袁远园 增左右电泳袁当样品进入分离
胶渊约 园郾 缘 澡冤后将电压调至 员园园 增左右袁当溴酚蓝跑至
胶底部时停止电泳遥 剪与凝胶大小等同的硝酸纤维膜
和 源 块滤纸袁在转移缓冲液中按照从负极到正极的顺
序进行以下组装院海绵垫 原滤纸 原凝胶 原硝酸纤维膜
原滤纸 原海绵垫袁注意要赶走气泡袁然后夹紧置于电转
愿苑圆员
摇 怨 期 水稻 韵泽着鄄糟燥责员 基因表达模式及功能的初步分析
仪中袁添加转移缓冲液袁恒流 圆园园 皂粤转移 员 耀 圆 澡遥 将
膜用 栽月杂清洗 员 次渊缘皂蚤灶冤袁浸入 缘豫脱脂奶粉渊栽月杂溶
解冤中 猿苑益封闭 员澡渊或 源益封闭过夜冤袁将膜取出袁栽月杂
清洗 员 次渊缘皂蚤灶冤曰在 缘豫脱脂奶粉渊栽月杂 溶解冤中按照
员院员园园园 的稀释比例加入一抗袁膜浸入其中袁猿苑益孵育 员
澡曰将杂交膜 员 伊 栽栽月杂清洗 缘 次袁每次 缘皂蚤灶曰在 缘豫脱脂
奶粉中按照 员院员园园园园 的稀释比例加入二抗渊辣根过氧
化物酶标记的羊抗兔 陨早郧冤袁将膜浸入其中袁猿苑益孵育 员
澡曰员 伊 栽栽月杂清洗 缘 次袁每次 缘皂蚤灶袁员 伊 栽月杂 洗 员缘皂蚤灶曰利
用 悦杂栽化学发光试剂盒进行发光后在暗室中压胶片袁
最后将胶片依次置于显影液和定影液中袁胶片干燥后
照相遥
员郾 圆郾 源郾 猿摇 表型性状观察与分析摇 对 韵泽着鄄糟燥责员 表达量
下降的转化植株的生长发育进行全程跟踪观察并拍
照遥
图 圆摇 韵泽着鄄悦韵孕员渊粤冤和 韵泽着鄄悦韵孕圆渊月冤蛋白保守结构域分析
云蚤早援 圆摇 悦燥灶泽藻则增藻凿 凿燥皂葬蚤灶 葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 韵泽着鄄悦韵孕员 渊粤冤 葬灶凿 韵泽着鄄悦韵孕圆 渊月冤 责则燥贼藻蚤灶泽
圆摇 结果与分析
圆郾 员摇 韵泽着鄄糟燥责基因的生物信息学分析
搜索 晕悦月陨数据库袁发现水稻基因组编码两个 着鄄
糟燥责基因袁将其命名为 韵泽着鄄糟燥责员渊晕酝赃园园员园远园缘怨缘郾 员冤和
韵泽着鄄糟燥责圆渊晕酝赃园园员园远园猿愿圆郾 员冤袁其 韵砸云 长度分别为 愿怨源
遭责和 愿远源 遭责袁分别编码 圆怨苑 和 圆愿苑 个氨基酸遥 在核酸
水平上袁两个同源基因编码区的一致性为 苑员豫 曰蛋白
水平上袁两者间的一致性为 远苑豫 遥 韵泽着鄄悦韵孕员 和 韵泽着鄄
悦韵孕圆 蛋 白 悦 端 都 含 有 一 个 保 守 的 栽孕砸
渊栽藻贼则葬贼则蚤糟燥责藻责贼蚤凿藻 则藻责藻葬贼 凿燥皂葬蚤灶冤结构域渊图 圆冤遥 该结
构域由 猿源 个氨基酸残基组成袁主要与 宰阅源园 重复结构
域互作咱员怨暂 遥 利用 晕悦月陨 网站渊 澡贼贼责院 辕 辕 遭造葬泽贼援 灶糟遭蚤援 灶造皂援
灶蚤澡援 早燥增冤分析 着鄄悦韵孕蛋白序列在不同物种间的保守性
发现袁韵泽着鄄悦韵孕员 与玉米尧拟南芥和大豆同源蛋白的一
致性分别为 愿猿豫 尧远愿豫和 远圆豫 曰而 韵泽着鄄悦韵孕圆 与玉米尧
拟南芥及大豆同源蛋白的一致性分别为 怨缘豫 尧苑怨豫和
苑员豫 袁表明 韵泽着鄄悦韵孕圆 在进化上更为保守遥 本研究选
取 韵泽着鄄糟燥责员 进行进一步的研究和功能分析遥
圆郾 圆摇 韵泽着鄄糟燥责员 基因的时空表达特性分析
本研究通过 晕燥则贼澡藻则灶 遭造燥贼 和 砸栽鄄孕悦砸 分析检测
韵泽着鄄糟燥责员 基因在水稻中的时空表达特性遥 晕燥则贼澡藻则灶
遭造燥贼结果表明袁韵泽着鄄糟燥责员 在水稻穗发育的减数分裂时
期有很强的杂交信号袁在二核期穗中也检测到了其微
弱的表达袁但在其它时期的穗材料以及幼叶和成熟叶
中均没有检测到明显杂交信号渊图 猿 原 粤冤遥 砸栽鄄孕悦砸
检测结果表明袁韵泽着鄄糟燥责员 在减数分裂期的幼穗表达量
最高遥 由于 砸栽鄄孕悦砸 有着更高的灵敏度袁在穗发育的
其它时期也检测到了 韵泽着鄄糟燥责员 较低的表达袁但在不同
的叶片中均未检测到 韵泽着鄄糟燥责员 信号渊图 猿 原 月冤遥 这些
结果表明袁韵泽着鄄糟燥责员 是一个在水稻穗部特异表达的基
因袁且减数分裂时期表达量最高袁说明该基因可能对穗
的发育起到重要作用遥
圆郾 猿摇 砸晕粤干涉转基因植株的获得
圆郾 猿郾 员摇 韵泽着鄄糟燥责员 砸晕粤干涉载体构建摇 为进一步研究
韵泽着鄄糟燥责员 基因在水稻中的功能袁本研究构建该基因的
砸晕粤干涉载体并转化水稻 在匀员员袁以获得表达下调的
转化植株并观察该基因表达下调后对水稻生长发育的
影响遥 为保证 砸晕粤 干涉的组织特异性袁本研究利用
韵泽着鄄糟燥责员 基因自身启动子来驱动干涉片段的表达咱员愿暂 遥
设计引物从粳稻 在匀员员 基因组中扩增一段 圆 噪遭的 韵泽着鄄
糟燥责员 基因启动子和 圆愿圆 遭责 基因内含子片段袁从幼穗
糟阅晕粤中扩增一段 缘员猿 遭责的正向外显子和反向外显子
片段遥 将这些片段用相应的限制性内切酶酶切后分别
连接到载体 责哉悦员愿 上袁用酶切方法鉴定重组子渊图 源 原
粤 原图 源 原 阅冤遥 每个重组子取两个单克隆进行测序袁
怨苑圆员
核摇 农摇 学摇 报 圆苑 卷
注院粤袁晕燥则贼澡藻则灶 遭造燥贼 分析曰月袁砸栽鄄孕悦砸 分析援 员袁花粉母细
胞时期的穗子曰圆袁减数分裂时期的穗子曰猿袁单核时期的
摇 摇 穗子曰源袁二核时期的穗子曰缘袁幼叶曰远袁成熟叶遥
晕燥贼藻院粤袁 晕燥则贼澡藻则灶 遭造燥贼 葬灶葬造赠泽蚤泽曰 月袁 砸栽鄄孕悦砸 葬灶葬造赠泽蚤泽援 员袁
责葬灶蚤糟造藻泽 燥枣 责燥造造藻灶 皂燥贼澡藻则 糟藻造造 泽贼葬早藻曰 圆袁 责葬灶蚤糟造藻泽 燥枣 皂藻蚤燥泽蚤泽
泽贼葬早藻曰 猿袁 责葬灶蚤糟造藻泽 燥枣 皂燥灶燥灶怎糟造藻葬则 泽贼葬早藻曰 源袁 责葬灶蚤糟造藻泽 燥枣
凿燥怎遭造藻鄄灶怎糟造藻葬则 泽贼葬早藻曰 缘袁 赠燥怎灶早 造藻葬枣曰 远袁 皂葬贼怎则藻 造藻葬枣援
图 猿摇 韵泽着鄄糟燥责员 基因表达特性的
晕燥则贼澡藻则灶 遭造燥贼和 砸栽鄄孕悦砸分析
云蚤早援 猿摇 晕燥则贼澡藻则灶 遭造燥贼 葬灶凿 砸栽鄄孕悦砸
葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 韵泽着鄄糟燥责员 早藻灶藻 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶
确保序列的准确性遥 韵泽着鄄糟燥责员 干涉载体各片段组装过
注院粤袁韵泽着鄄糟燥责员 启动子连接 责哉悦员愿 后酶切鉴定曰月袁正向外显连接 责哉悦员愿 后酶切鉴定子曰悦袁反向外显子连接 责哉悦员愿 后酶切鉴定曰阅袁
内含子连接 责哉悦员愿 后酶切鉴定曰耘袁内含子与反向外显子组装后酶切鉴定曰云袁正向外显子与内含子 垣反向外显子组装后酶切鉴定曰
郧袁正向外显子 垣内含子 垣反向外显子连接 责悦粤酝月陨粤 原 员猿愿园 后酶切鉴定曰匀袁启动子和正向外显子 垣内含子 垣反向外显子组装后酶
摇 摇 摇 摇 切鉴定援 箭头为目的片段曰员 原 源院不同单克隆遥
晕燥贼藻院粤袁 砸藻泽贼则蚤糟贼蚤燥灶 藻灶扎赠皂藻 凿蚤早藻泽贼蚤燥灶 蚤凿藻灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣 责则燥皂燥贼藻则 葬枣贼藻则 糟造燥灶藻凿 贼燥 责哉悦员愿曰 月袁 砸藻泽贼则蚤糟贼蚤燥灶 藻灶扎赠皂藻 凿蚤早藻泽贼蚤燥灶 蚤凿藻灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣
枣燥则憎葬则凿 藻曾贼则燥灶 葬枣贼藻则 糟造燥灶藻凿 贼燥 责哉悦员愿曰 悦袁 砸藻泽贼则蚤糟贼蚤燥灶 藻灶扎赠皂藻 凿蚤早藻泽贼蚤燥灶 蚤凿藻灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣 则藻增藻则泽藻 藻曾贼则燥灶 葬枣贼藻则 糟造燥灶藻凿 贼燥 责哉悦员愿曰 阅袁 砸藻泽贼则蚤糟贼蚤燥灶
藻灶扎赠皂藻 凿蚤早藻泽贼蚤燥灶 蚤凿藻灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣 蚤灶贼则燥灶 葬枣贼藻则 糟造燥灶藻凿 贼燥 责哉悦员愿援 耘袁 砸藻泽贼则蚤糟贼蚤燥灶 藻灶扎赠皂藻 凿蚤早藻泽贼蚤燥灶 蚤凿藻灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 葬枣贼藻则 蚤灶贼则燥灶 葬灶凿 则藻增藻则泽藻 藻曾贼则燥灶
造蚤早葬贼蚤燥灶曰 云袁 砸藻泽贼则蚤糟贼蚤燥灶 藻灶扎赠皂藻 凿蚤早藻泽贼蚤燥灶 蚤凿藻灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 葬枣贼藻则 枣燥则憎葬则凿 藻曾贼则燥灶 泽怎遭糟造燥灶藻凿 贼燥 蚤灶贼则燥灶 葬灶凿 则藻增藻则泽藻 藻曾贼则燥灶 责造葬泽皂蚤凿曰 郧袁 砸藻泽贼则蚤糟贼蚤燥灶
藻灶扎赠皂藻 凿蚤早藻泽贼蚤燥灶 蚤凿藻灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 葬枣贼藻则 枣燥则憎葬则凿 藻曾贼则燥灶 葬灶凿 蚤灶贼则燥灶 葬灶凿 则藻增藻则泽藻 藻曾贼则燥灶 糟造燥灶藻凿 贼燥 责悦粤酝月陨粤 原 员猿愿园曰 匀袁 砸藻泽贼则蚤糟贼蚤燥灶 藻灶扎赠皂藻 凿蚤早藻泽贼蚤燥灶
蚤凿藻灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 葬枣贼藻则 责则燥皂燥贼藻则 泽怎遭糟造燥灶藻凿 贼燥 贼澡藻 怎责泽贼则藻葬皂 燥枣 砸晕粤蚤 藻造藻皂藻灶贼援 粤则则燥憎泽 泽澡燥憎藻凿 贼葬则早藻贼 枣则葬早皂藻灶贼泽曰 员 原 源院 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 皂燥灶燥鄄糟造燥灶藻泽援
图 源摇 韵泽着鄄糟燥责员 砸晕粤干涉载体构建
云蚤早援 源摇 悦燥灶泽贼则怎糟贼蚤燥灶 燥枣 韵泽着鄄糟燥责员 砸晕粤蚤 增藻糟贼燥则
程如下院首先将反向外显子片段从载体 责哉悦员愿 上切下
来后将其与内含子组装在一起袁酶切鉴定渊图 源 原 耘冤曰
然后将正向外显子片段从载体 责哉悦员愿 上切下来袁将正
向外显子尧内含子尧反向外显子组装在一起袁酶切鉴定
渊图 源 原 云冤曰接着将组装在载体 责哉悦员愿 上的正向外显
子 垣内含子 垣反向外显子片段整体切下后袁导入双元
表达载体 责悦粤酝月陨粤 原 员猿愿园袁酶切鉴定渊图 源 原 郧冤曰最后
将启动子从载体 责哉悦员愿 上切下来袁导入表达载体袁将
启动子置于正向外显子 垣内含子 垣反向外显子片段的
上游袁酶切鉴定渊图 源 原 匀冤遥 鉴定结果表明袁成功构建
了 韵泽着鄄糟燥责员 基因的 砸晕粤干涉载体遥
圆郾 猿郾 圆摇 农杆菌介导转化水稻中花 员员摇 由于粳稻品种
胚性愈伤组织的形成和遗传转化相对容易咱圆园暂 袁因此选
取粳稻 在匀员员 为遗传转化受体材料进行 韵泽着鄄糟燥责员 基因
的 砸晕粤 干涉研究遥 通过愈伤组织诱导和挑取生长状
态良好的愈伤组织用于农杆菌侵染袁经共培养尧潮霉素
筛选培养后袁抗性愈伤组织表现淡黄色并且明显增殖袁
而非抗性愈伤逐渐褐化死亡渊图 缘 原 粤袁图 缘 原 月冤遥 生
长良好的抗性愈伤接入预分化培养基 员缘 凿 后袁部分愈
伤组织出现绿点渊图 缘 原 悦冤袁转入分化培养基培养 圆园
耀 猿园 凿后分化出大量小苗渊图 缘 原 阅冤遥 小苗移入生根
培养基 员缘 凿左右后生根良好袁待根系生长健壮袁移栽
室外遥 本研究共获得 员园 个独立转化的 栽园转基因株
系遥 摇 摇 摇 摇
圆郾 猿郾 猿摇 转基因植株的 孕悦砸检测摇 为筛选得到阳性的
园愿圆员
摇 怨 期 水稻 韵泽着鄄糟燥责员 基因表达模式及功能的初步分析
注院粤鄄月袁侵染后愈伤组织在筛选阶段的生长情况曰悦袁抗性愈伤在
预分化培养基上的生长情况曰阅袁抗性愈伤组织在分化培养基上
摇 摇 摇 摇 的生长情况遥
晕燥贼藻院粤鄄月袁 悦怎造贼蚤增葬贼蚤燥灶 燥枣 糟葬造造蚤 蚤灶 泽藻造藻糟贼蚤燥灶 责澡葬泽藻泽曰 悦袁 悦怎造贼蚤增葬贼蚤燥灶 燥枣
糟葬造造蚤 蚤灶 责则藻鄄则藻早藻灶藻则葬贼蚤燥灶 责澡葬泽藻曰 阅袁 悦怎造贼蚤增葬贼蚤燥灶 燥枣 糟葬造造蚤 蚤灶 则藻早藻灶藻则葬贼蚤燥灶
摇 摇 摇 摇 责澡葬泽藻援
图 缘摇 韵泽着鄄糟燥责员 干涉载体侵染水
稻愈伤组织后各阶段生长情况
云蚤早援 缘摇 悦怎造贼蚤增葬贼蚤燥灶 燥枣 在澡燥灶早澡怎葬员员 糟葬造造蚤 葬枣贼藻则 蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶 遭赠
粤早则燥遭葬糟贼藻则蚤怎皂 贼怎皂藻枣葬糟蚤藻灶泽 憎蚤贼澡 韵泽着鄄糟燥责员砸晕粤蚤 责造葬泽皂蚤凿
转基因植株袁本研究通过筛选标记基因潮霉素基因
渊匀责贼冤的 孕悦砸扩增对 员园 个转基因株系进行检测分析遥
结果显示袁其中 苑 个转基因株系可以扩增出约为 苑缘园
遭责的 匀责贼基因片段渊图 远 原 粤冤袁证明外源片断已导入
到水稻基因组曰另外 猿 个株系的植株没有扩增出相应
的条带渊图 远 原 粤冤袁可能这部分植株为非转基因植株遥
以同样方法对 栽员 植株进行检测分析遥 结果表明袁
部分转基因株系的 栽员 代植株 匀责贼基因在群体中呈 猿院员
的分离比渊图 远 原 月冤袁说明这些株系为外源基因单拷贝
插入遥
圆郾 源摇 转基因植株的 砸栽鄄孕悦砸和宰藻泽贼藻则灶 遭造燥贼分析
为分析 砸晕粤干涉的效果袁本研究通过 砸栽鄄孕悦砸 和
宰藻泽贼藻则灶 遭造燥贼 对 孕悦砸 检测阳性的 栽园和 栽员 转化植株
韵泽着鄄糟燥责员 的表达进行分析遥 结果显示袁栽园转化植株中
韵泽着鄄糟燥责员 基因的表达均下调袁且不同株系 韵泽着鄄糟燥责员 基
因的下调幅度有一定的差别渊图 苑 原 粤冤遥 为检测 韵泽着鄄
糟燥责员 基因表达的稳定性袁本研究选取两个单拷贝插入
株系的部分 栽员 阳性植株进行 砸栽鄄孕悦砸 检测遥 结果表
明袁韵泽着鄄糟燥责员 基因表达量同样发生下调渊图 苑 原 月冤遥 说
明 砸晕粤干涉片段在转基因后代植株中得到了稳定的
注院粤袁栽园转基因株系 匀责贼检测援 员 原 员园院不同转基因株系曰员员袁阳性
对照曰员圆袁阴性对照曰月袁转基因株系 员 的部分 栽员 植株 匀责贼 检测
摇 摇 图援 员 原 员圆院栽员 代植株曰员猿袁阳性对照曰员源袁阴性对照遥
晕燥贼藻院粤袁 孕悦砸 蚤凿藻灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣 匀责贼 蚤灶 栽园 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 责造葬灶贼泽援 员 原 员园院
凿蚤枣枣藻则藻灶贼 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 造蚤灶藻泽曰 员员袁 责燥泽蚤贼蚤增藻 糟燥灶贼则燥造曰 员圆袁 灶藻早葬贼蚤增藻 糟燥灶贼则燥造曰
月袁 孕悦砸 蚤凿藻灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣 匀责贼 蚤灶 栽员 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 早藻灶藻则葬贼蚤燥灶 燥枣 造蚤灶藻 员郾 员
原 员圆院 栽员 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 责造葬灶贼泽曰 员猿袁 责燥泽蚤贼蚤增藻 糟燥灶贼则燥造曰 员源袁 灶藻早葬贼蚤增藻 糟燥灶贼则燥造援
图 远摇 转基因植株潮霉素基因渊匀责贼冤孕悦砸检测
云蚤早援 远摇 孕悦砸 蚤凿藻灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣 匀责贼 蚤灶 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 责造葬灶贼泽
遗传和表达遥
为进一步确认 韵泽着鄄悦韵孕员 蛋白在 栽员 砸晕粤 干涉植
株中的表达是否也同样发生了下调袁本研究利用 韵泽着鄄
悦韵孕员 多克隆抗体对该基因核酸水平表达下调的植株
进行 宰藻泽贼藻则灶 遭造燥贼 检测遥 结果表明袁转化植株中 韵泽着鄄
悦韵孕员 蛋白水平的表达同样发生下调袁且同一植株在
核酸和蛋白水平的下调程度一致渊图 苑 原 悦冤遥
圆郾 缘摇 栽员 代转基因植株表型分析
对表达量下调的 栽员 转基因植株进行表型观察发
现袁转基因植株在生长早期与对照植株差异不大遥 随
着生长发育袁韵泽着鄄糟燥责员 表达下调的转基因植株穗顶部
出现个别小穗死亡的情况渊图 愿 原 月冤遥 此外袁这些植株
的高度较正常植株稍矮渊图 愿 原 粤冤遥 结果表明袁韵泽着鄄
悦韵孕员 蛋白对水稻顶部小穗的生长发育起着一定作
用遥
猿摇 讨论
尽管在动物细胞和酵母中袁悦韵孕陨结构与功能的研
究很多咱源袁圆员暂 袁但 悦韵孕陨在高等植物中的研究却很少袁其
中关于 着鄄悦韵孕在植物中的生物学功能更是未见报导遥
本研究以水稻为材料袁对编码 韵泽着鄄悦韵孕 的两个同源基
因进行了生物信息学分析袁并对其中的一个基因 韵泽着鄄
糟燥责员 进行了时空表达特异性分析遥 同时袁本研究利用
砸晕粤干涉技术分析了 韵泽着鄄糟燥责员 基因在水稻中的功能遥
本研究表明袁韵泽着鄄糟燥责员 是一个在水稻减数分裂期幼穗
中大量表达的基因袁对水稻穗顶部小穗的发育起着一
定的作用遥
员愿圆员
核摇 农摇 学摇 报 圆苑 卷
注院粤袁栽园阳性转基因株系 砸栽鄄孕悦砸 检测袁员袁圆袁猿袁缘袁愿袁员园院不同转
基因株系袁悦贼则造院对照袁下同曰月袁转基因株系 员 和 缘 部分 栽员 阳性
植株 砸栽鄄孕悦砸检测袁员 原 猿院转基因株系 员 的 员 号单株不同后代袁源
原 远院转基因株系 缘 的 圆 号单株不同后代袁下同曰悦袁转基因株
摇 摇 系 员 和 缘 部分 栽员 代植株 憎藻泽贼藻则灶 遭造燥贼检测遥
晕燥贼藻院粤袁 砸栽鄄孕悦砸 葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 栽园 责燥泽蚤贼蚤增藻 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 责造葬灶贼泽援 员袁圆袁猿袁
缘袁愿袁 员园院 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 造蚤灶藻泽袁 悦贼则造院 糟燥灶贼则燥造曰 月袁 栽鄄孕悦砸
葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 栽员 责燥泽蚤贼蚤增藻 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 责造葬灶贼泽 燥枣 造蚤灶藻 员 葬灶凿 缘郾 员 原 猿院
早藻灶藻则葬贼蚤燥灶泽 燥枣 造蚤灶藻 员 责造葬灶贼 员袁 源 原 远院 早藻灶藻则葬贼蚤燥灶泽 燥枣 造蚤灶藻 缘 责造葬灶贼 圆曰
悦袁 宰藻泽贼藻则灶 遭造燥贼 葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 栽员 责燥泽蚤贼蚤增藻 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 责造葬灶贼泽 燥枣 造蚤灶藻 员
葬灶凿 缘援
图 苑摇 栽园及 栽员 转基因植株的
砸栽鄄孕悦砸和宰藻泽贼藻则灶 遭造燥贼检测
云蚤早援 苑摇 砸栽鄄孕悦砸 葬灶凿 宰藻泽贼藻则灶 遭造燥贼 葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣
栽园葬灶凿 栽员 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 责造葬灶贼泽
在本研究中袁利用了 韵泽着鄄糟燥责员 基因自身启动子来
驱动 砸晕粤片段遥 有研究表明袁用基因自身启动子替代
组成型启动子来进行 砸晕粤干涉及反义 砸晕粤研究会有
更好的效果咱员愿暂 遥 本研究对阳性 栽园转基因植株进行
砸栽鄄孕悦砸检测表明袁在所有阳性植株中袁韵泽着鄄糟燥责员 基因
的表达均发生了下调袁说明 砸晕粤 干涉片段起到了效
果遥 不同转基因株系 韵泽着鄄糟燥责员 基因下调的程度不一
样袁可能是外源片段插入基因组的位置不一样等原因
造成的咱员愿暂 遥 通过种植 栽员 植株袁本研究获得了外源基
因单拷贝插入的转基因株系袁并对其中两个株系的植
株进一步进行了 砸栽鄄孕悦砸和 宰藻泽贼藻则灶 遭造燥贼 检测袁检测结
果显示 韵泽着鄄悦韵孕员 在核酸和蛋白水平均下调遥 而且袁
注院粤袁韵泽着鄄悦韵孕员 表达下调植株渊右冤和正常植株渊左冤曰
月袁韵泽着鄄悦韵孕员 表达下调植株穗子遥
晕燥贼藻院粤袁 栽澡藻 责造葬灶贼 憎蚤贼澡 凿藻糟则藻葬泽藻凿 韵泽着鄄悦韵孕员 渊则蚤早澡贼冤 葬灶凿 憎蚤造凿 贼赠责藻
责造葬灶贼 渊 造藻枣贼冤 援 月袁 杂责蚤噪藻造藻贼泽 燥枣 贼澡藻 责造葬灶贼 憎蚤贼澡 凿藻糟则藻葬泽藻凿 韵泽着鄄悦韵孕员援
图 愿摇 栽员 转基因植株表型分析
云蚤早援 愿摇 孕澡藻灶燥贼赠责藻 葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 栽员 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 早藻灶藻则葬贼蚤燥灶
相比 栽园植株袁某些 栽员 阳性植株中 韵泽着鄄糟燥责员 基因的下
调幅度更大遥 如院植株 员 原 员 原 圆尧员 原 员 原 源尧缘 原 圆 原 圆袁暗
示它们可能是纯合体转基因植株袁由于含有两个拷贝
的 砸晕粤干涉片段袁故 砸晕粤 干涉效果相比 栽园更强遥 对砸晕粤干涉植株表型分析表明袁韵泽着鄄悦韵孕员 蛋白的表达
下调导致了一部分小穗死亡袁显示了 韵泽着鄄悦韵孕员 蛋白
对穗发育的重要性遥 此外袁韵泽着鄄悦韵孕员 蛋白的减少对植
株其它部位的生长发育未造成明显影响袁也和该基因
只在穗中表达的特性相符遥 晕燥则贼澡藻则灶 遭造燥贼 和 砸栽鄄孕悦砸
均表明袁韵泽着鄄糟燥责员 基因减数分裂期穗中表达量最高袁暗
示 韵泽着鄄悦韵孕员 蛋白可能对幼穗在减数分裂期的蛋白质
运输起作用遥
在酵母中的研究发现咱圆圆暂 袁 着鄄悦韵孕 是一个维持
悦韵孕陨复合体稳定性的亚基袁但这种功能的体现有一定
的温敏特性遥 当酵母的生长温度处于 猿源益时袁其它 远
个亚基形成的复合体可以正常行使功能袁着鄄悦韵孕 的缺
失不会对酵母的生长带来明显的影响袁即此时 着鄄悦韵孕
对酵母的生长是非必需的遥 但是袁将缺乏 着鄄悦韵孕 的酵
母转移至 猿苑益培养时袁其它 远 个亚基形成的复合体便
解聚袁酵母的无法正常生长遥 在中国仓鼠卵巢渊悦匀韵冤
细胞中的研究发现咱圆源暂 袁着鄄悦韵孕基因序列的一个点突变
会造成 悦匀韵细胞条件性致死遥 该细胞在置于 猿怨郾 缘益
培养时袁内质网至高尔基体之间的逆向运输过程发生
中断袁且高尔基体的结构出现异常袁而在正常温度下细
胞的生长不受影响遥 以上的研究说明袁着鄄悦韵孕 倾向于
在逆境下对细胞的生长起作用袁而在正常条件下对细
胞的生长是非必需的遥 在本研究中袁利用 砸晕粤蚤 技术
圆愿圆员
摇 怨 期 水稻 韵泽着鄄糟燥责员 基因表达模式及功能的初步分析
下调 韵泽着鄄悦韵孕员 蛋白在水稻穗中的表达后袁并未对穗
的发育造成致命影响袁只是导致了小部分小穗的死亡袁
原因可能有两个院第一袁和酵母及 悦匀韵 细胞类似袁韵泽着鄄
悦韵孕可能只有在逆境下对穗的发育才是必需的袁砸晕粤
干涉植株可能具有一定的温敏特性袁本研究下一步将
对 砸晕粤干涉植株在穗发育时期进行高温和其它逆境
处理袁进一步验证 韵泽着鄄悦韵孕员 在水稻穗发育中的功能曰
第二袁水稻基因组编码两个 韵泽着鄄糟燥责 基因袁和 韵泽着鄄糟燥责员
基因在穗部特异性表达不同袁韵泽着鄄糟燥责圆 是一个组成型
表达基因袁在叶和穗中均大量表达渊未发表数据冤遥 由
于两基因在核酸及蛋白水平的相似性均较高袁而本研
究只下调表达了 韵泽着鄄糟燥责员 基因袁是否可能由于 韵泽着鄄
糟燥责圆 基因在穗中的表达弥补了 韵泽着鄄糟燥责员 基因的功能袁
还需将来进一步研究遥
总之袁本研究分析了 韵泽着鄄糟燥责员 基因的表达模式袁
并利用 砸晕粤干涉技术获得了该基因表达下调的 栽园代
及 栽员 代转基因植株袁探讨了其在水稻穗发育中的功
能袁对下一步研究 悦韵孕陨 小泡在水稻幼穗发育中的蛋
白运输功能具有重要的指导意义遥
参考文献院
咱 员 暂 摇 郧藻则凿藻泽 匀 匀援 酝藻皂遭则葬灶藻 贼则葬枣枣蚤糟 蚤灶 贼澡藻 泽藻糟则藻贼燥则赠 责葬贼澡憎葬赠咱允暂 援 悦藻造造怎造葬则
葬灶凿 酝燥造藻糟怎造葬则 蕴蚤枣藻 杂糟蚤藻灶糟藻泽袁 圆园园愿袁 远缘渊员愿冤院 圆苑苑怨 原 圆苑愿园
咱 圆 暂 摇 匀葬则贼藻则 悦袁 宰蚤藻造葬灶凿 云援 栽澡藻 泽藻糟则藻贼燥则赠 责葬贼澡憎葬赠院 皂藻糟澡葬灶蚤泽皂泽 燥枣 责则燥贼藻蚤灶
泽燥则贼蚤灶早 葬灶凿 贼则葬灶泽责燥则贼 咱 允暂 援 月蚤燥糟澡蚤皂蚤糟葬 藻贼 月蚤燥责澡赠泽蚤糟葬 粤糟贼葬袁 员怨怨远袁
员圆愿远渊圆冤院 苑缘 原 怨猿
咱 猿 暂 摇 孕藻造澡葬皂 匀 砸援 栽澡藻 凿赠灶葬皂蚤糟 燥则早葬灶蚤泽葬贼蚤燥灶 燥枣 贼澡藻 泽藻糟则藻贼燥则赠 责葬贼澡憎葬赠咱允暂 援
悦藻造造 杂贼则怎糟贼怎则藻 葬灶凿 云怎灶糟贼蚤燥灶袁 员怨怨远袁 圆员渊缘冤院 源员猿 原 源员怨
咱 源 暂 摇 运蚤则糟澡澡葬怎泽藻灶 栽援 栽澡则藻藻 憎葬赠泽 贼燥 皂葬噪藻 葬 增藻泽蚤糟造藻咱 允暂 援 晕葬贼怎则藻 砸藻增蚤藻憎泽
酝燥造藻糟怎造葬则 悦藻造造 月蚤燥造燥早赠袁 圆园园园袁 员渊猿冤院 员愿苑 原 员怨愿
咱 缘 暂 摇 宰葬贼藻则泽 酝 郧袁 杂藻则葬枣蚤灶蚤 栽袁 砸燥贼澡皂葬灶 允 耘援 耶 悦燥葬贼燥皂藻则爷院 葬 糟赠贼燥泽燥造蚤糟
责则燥贼藻蚤灶 糟燥皂责造藻曾 糟燥灶贼葬蚤灶蚤灶早 泽怎遭怎灶蚤贼泽 燥枣 灶燥灶鄄糟造葬贼澡则蚤灶鄄糟燥葬贼藻凿 郧燥造早蚤
贼则葬灶泽责燥则贼 增藻泽蚤糟造藻泽咱允暂 援 晕葬贼怎则藻袁 员怨怨员袁 猿源怨渊远猿园远冤院 圆源愿 原 圆缘员
咱 远 暂 摇 耘怎早泽贼藻则 粤袁 云则蚤早藻则蚤燥 郧袁 阅葬造藻 酝袁 阅怎凿藻灶 砸援 悦韵孕 陨 凿燥皂葬蚤灶泽 则藻择怎蚤则藻凿
枣燥则 糟燥葬贼燥皂藻则 蚤灶贼藻早则蚤贼赠袁 葬灶凿 灶燥增藻造 蚤灶贼藻则葬糟贼蚤燥灶泽 憎蚤贼澡 粤砸云 葬灶凿 粤砸云鄄
郧粤孕咱允暂 援 栽澡藻 耘酝月韵 允燥怎则灶葬造袁 圆园园园袁 员怨渊员缘冤院 猿怨园缘 原 猿园员苑
咱 苑 暂 摇 匀泽怎 灾 宰袁 再葬灶早 允 杂援 酝藻糟澡葬灶蚤泽皂泽 燥枣 悦韵孕陨 增藻泽蚤糟造藻 枣燥则皂葬贼蚤燥灶咱 允暂 援
云耘月杂 蕴藻贼贼藻则泽袁 圆园园怨袁 缘愿猿渊圆猿冤院 猿苑缘愿 原 猿苑远猿
咱 愿 暂 摇 蕴燥憎藻 酝袁 运则藻蚤泽 栽 耘援 陨灶 增蚤增燥 葬泽泽藻皂遭造赠 燥枣 糟燥葬贼燥皂藻则袁 贼澡藻 悦韵孕鄄陨 糟燥葬贼
责则藻糟怎则泽燥则咱 允 暂 援 栽澡藻 允燥怎则灶葬造 燥枣 月蚤燥造燥早蚤糟葬造 悦澡藻皂蚤泽贼则赠袁 员怨怨远郾 圆苑员
渊源愿冤院 猿园苑圆缘 原 猿园苑猿园
咱 怨 暂 摇 匀葬则葬 原 运怎早藻 杂袁 运怎早藻 韵袁 韵则糟蚤 蕴袁 粤皂澡藻则凿贼 酝袁 砸葬增葬扎扎燥造葬 酝袁
宰蚤藻造葬灶凿 云 栽袁 砸燥贼澡皂葬灶 允援 耘灶 遭造燥糟 蚤灶糟燥则责燥则葬贼蚤燥灶 燥枣 糟燥葬贼燥皂藻则 泽怎遭怎灶蚤贼泽
凿怎则蚤灶早 贼澡藻 葬泽泽藻皂遭造赠 燥枣 悦韵孕鄄糟燥葬贼藻凿 增藻泽蚤糟造藻泽咱允暂 援 栽澡藻 允燥怎则灶葬造 燥枣 悦藻造造
月蚤燥造燥早赠袁 员怨怨源袁 员圆源渊远冤院 愿愿猿 原 愿怨圆
咱员园暂摇 月藻糟噪 砸袁 砸葬憎藻贼 酝袁 宰蚤藻造葬灶凿 云 栽袁 悦葬泽泽藻造 阅援 栽澡藻 悦韵孕陨 泽赠泽贼藻皂院
皂燥造藻糟怎造葬则 皂藻糟澡葬灶蚤泽皂泽 葬灶凿 枣怎灶糟贼蚤燥灶咱 允暂 援 云耘月杂 蕴藻贼贼藻则泽袁 圆园园怨袁 缘愿猿
渊员苑冤院 圆苑园员 原 圆苑园怨援
咱员员暂摇 杂责葬灶早 粤援 粤砸云员 则藻早怎造葬贼燥则赠 枣葬糟贼燥则泽 葬灶凿 悦韵孕陨 增藻泽蚤糟造藻 枣燥则皂葬贼蚤燥灶咱 允暂 援
悦怎则则藻灶贼 韵责蚤灶蚤燥灶 蚤灶 悦藻造造 月蚤燥造燥早赠袁 圆园园圆袁 员源渊源冤院 源圆猿 原 源圆苑援
咱员圆暂摇 粤灶凿则藻藻增葬 粤 灾袁 运怎贼怎扎燥增 酝 粤袁 耘增葬灶泽 阅 耘袁 匀葬憎藻泽 悦援 孕则燥贼藻蚤灶泽
蚤灶增燥造增藻凿 蚤灶 皂藻皂遭则葬灶藻 贼则葬灶泽责燥则贼 遭藻贼憎藻藻灶 贼澡藻 耘砸 葬灶凿 贼澡藻 郧燥造早蚤
葬责责葬则葬贼怎泽院 圆员 责怎贼葬贼蚤增藻 责造葬灶贼 澡燥皂燥造燥早怎藻泽 则藻增藻葬造藻凿 遭赠 凿遭耘杂栽
泽藻葬则糟澡蚤灶早咱允暂 援 悦藻造造 月蚤燥造燥早赠 陨灶贼藻则灶葬贼蚤燥灶葬造袁 员怨怨愿袁 圆圆渊圆冤院 员源缘 原 员远园
咱员猿暂摇 悦燥灶贼则藻则葬泽 陨袁 韵则贼蚤扎鄄在葬责葬贼藻则 耘袁 悦葬泽贼蚤造澡燥 蕴 酝袁 粤灶蚤藻灶贼燥 云援
悦澡葬则葬糟贼藻则蚤扎葬贼蚤燥灶 燥枣 悦燥责 陨 糟燥葬贼 责则燥贼藻蚤灶泽 蚤灶 责造葬灶贼 糟藻造造泽 咱 允 暂 援
月蚤燥糟澡藻皂蚤糟葬造 葬灶凿 月蚤燥责澡赠泽蚤糟葬造 砸藻泽藻葬则糟澡 悦燥皂皂怎灶蚤糟葬贼蚤燥灶泽袁 圆园园园袁 圆苑猿
渊员冤院 员苑远 原 员愿圆
咱员源暂摇 孕蚤皂责造 孕袁 酝燥增葬枣藻早澡蚤 粤袁 悦燥怎早澡造葬灶 杂袁 阅藻灶藻糟噪藻 允袁 匀蚤造造皂藻则 杂袁
砸燥遭蚤灶泽燥灶 阅 郧援 陨灶 泽蚤贼怎 造燥糟葬造蚤扎葬贼蚤燥灶 葬灶凿 蚤灶 增蚤贼则燥 蚤灶凿怎糟贼蚤燥灶 燥枣 责造葬灶贼
悦韵孕陨鄄糟燥葬贼藻凿 增藻泽蚤糟造藻泽咱允暂 援 栽澡藻 孕造葬灶贼 悦藻造造袁 圆园园园袁 员圆渊员员冤院 圆圆员怨 原
圆圆猿远
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