全 文 ：文章编号 :100028551 (2005) 032175206
离体培养条件对平贝母生物碱含量的影响
李　云1 　梁庆丰2 　曹孜义2 　钱永强1
(1. 北京林业大学生物科学与技术学院 ,教育部林木花卉遗传育种重点实验室 , 北京　100083 ;
2. 甘肃农业大学农学院 , 甘肃 兰州　730071)
摘 　要 :以平贝母试管苗为材料 ,通过测定生物量增殖倍数、折干率、生物碱含量等指标 ,对基本
培养基种类、培养方式、培养周期、植物生长调节剂种类及配比、蔗糖浓度、病毒唑用量等可能
影响平贝母生物碱产量的因素进行研究。结果表明 ,以LS 为基本培养基 ,附加 5 %蔗糖 ,固体
培养周期为 60d 时 ,利于提高鳞茎生物碱含量及生物碱产量 ;液体培养基虽有利于平贝母鳞茎
增殖与子贝的分化 ,但不利于增加生物碱产量 ;植物生长调节剂对刺激培养物生长有显著促进
作用 ,其中以 BA110 mgΠL 与 NAA015 mgΠL 组合为佳 ;5mgΠL 病毒唑能明显提高鳞茎的增殖倍
数。试验最佳离体培养基为LS + BA110mgΠL + NAA015 mgΠL + 病毒唑 5mgΠL + 5 %蔗糖 ;培养
60d 生物碱产量可达 1162mgΠL。
关键词 :平贝母 ;离体培养 ;生物碱
EFFECTS OF CULTURE CONDITIONS ON THE AL KALOID YIELD OF
Fritllarla ussurensis MAXIM FROM BULB in vitro
LI Yun1 　LIANG Qing2feng2 　CAO Zi2yi2 　QIAN Yong2qiang1
(1. Key Lab. for Genetics and Breeding in Forest Trees and Ornamental Plants , MOE ;
School of Biological Science and Biotechnology , Beijing Forestry University , Beijing , 100083 ;
21Agricultural college , Gansu Agricultural University , Lanzhou , Gansu ,730071)
Abstract :Factors (including culture media , culture methods , time , plant growth regulators , sucrose concentration
in the medium as well as ribavirin) influencing the alkaloid yield of Fritillaria ussurensis Maxim from bulb in vitro
were investigated by evaluation of the bulb growth , the alkaloid content , the ratio of dry weight and fresh weight
(DWΠFW) , the alkaloid yield , etc. The result showed that LS solid medium was better than others on the yield of
the alkaloid. The highest yield of 1162 mgΠL was achieved from LS solid medium with 110 mgΠL BA , 015 mgΠL
NAA , 5mgΠL ribavirin as well as 5mgΠL sucrose after culture 60 d. The yield and the content of alkaloid had no
significant increase on the LS liquid medium with the same condition as the solid one , however , liquid culture
stimulated the bulb propagation.
Key words : Fritillaria ussuriernsis Maxim ; culture in vitro ; alkaloid
收稿日期 :2004207220
基金项目 :农业部“948”项目“植物快速繁殖用生物反应器及配套技术 (201044)”
作者简介 :李云 (1963 - ) ,男 ,博士 ,副教授 ,从事林木育种和生物技术方面研究和教学工作。Email : yunli @bjfu. edu. cn
贝母为百合科 (LiLaceae)贝母属 ( Fritillaria L. )植物的鳞茎 ,在我国已有 2000 多年的药用历史 ,为重
要的中药材[1 ] 。但贝母类商品药材野生资源逐年减少 ,而其有性繁殖周期长 ,无性繁殖系数低 ,人工栽
培条件苛刻 ,难以满足市场需求[2 ] 。平贝母为我国东北长白山区特有的药用贝母 ,是目前国内四大药用
571　核 农 学 报　2005 ,19 (3) :175～180Acta Agriculturae Nucleatae Sinica
商品贝母之一。但其一年内两季休眠 ,且生长慢、繁殖难[3 ] ,加之过度采挖 ,自然蕴藏量锐减 ,已被《中国
珍稀濒危植物红皮书》定为渐危种[4 ] 。为了解决保护自然资源和生态环境与开发平贝母的药用价值之
间的矛盾 ,需要另辟途径。其中利用离体培养平贝母生产生物碱 ,不仅可提高平贝母利用率 ,增加平贝
母生物碱产量 ,同时也可有效保护平贝母野生资源 ,具有极大的社会效益和经济效益。为此 ,本文对平
贝母离体培养途径、培养条件等可能影响生物碱产量的因素进行研究 ,以期能提高药用生物碱的含量 ,
为进一步大规模生产应用提供依据。
1 　材料和方法
111 　试验材料
平贝母鳞茎干药材购自长春市药材市场。以平贝母鳞茎为外植体建立无菌培养体系。
112 　试验方法
以再生鳞茎作为外植体接种到预先称重的培养基 (pH518) 上 ,鳞茎 (尽量保持原培养平贝母丛生小
鳞茎状态)或愈伤组织切成直径约 015cm 的小块在培养皿中混匀 ,以保证每瓶鳞茎或愈伤组织无差异。
培养温度为 (21 ±2) ℃,光强 2000lx ,光照时间 12h/ d。
试验采用单因子对比及完全随机区组试验设计 ,测定项目为培养基中鳞茎干物质产量、折干率、鳞
茎总生物碱含量和每升培养基可增总生物碱产量等指标。
11211 　基本培养基对生物碱产量的影响
试验对 MS、B5 、LS、N6 四种基本培养基进行了选择 (均附加 KT110 mgΠL ,NAA015 mgΠL) ,每种培养基
接种 20 瓶 ,60d 时收获 ,测定。
11212 　培养方式对生物碱产量的影响
在LS 固体培养基中培养 ,每 10d 随机取样 20 瓶 ,共培养 80d 取样 8 次 ,同步测定。
液体培养基成分与固体培养基相同 ,区别仅在于不加琼脂。培养材料接种在装有 10ml 培养基的
50ml 三角瓶中 ,30d 时补加 10ml 液体培养基 (以防止初始培养时过多液体培养基淹没鳞茎组织) 。培养
30d 时开始取样 ,每 10d 随机取 20 瓶 ,共培养 80d 取样 6 次 ,同步测定。
11213 　培养周期对生物碱产量的影响
在LS 固体培养基中培养 20d 时开始取样 ,每 10d 随机取 20 瓶 ,共培养 80d 取样 7 次 ,同步测定。
11214 　植物生长调节剂对生物碱产量的影响
试验以LS 为基本培养基 ,共设 4 组处理。各处理添加生长调节剂浓度配比组合为 :A. KT110 mgΠL
+ NAA015 mgΠL ; B1 KT110 mgΠL + IAA015 mgΠL ; C. BA110 mgΠL + NAA015 mgΠL ; D. BA110 mgΠL +
IAA015 mgΠL。将平贝母鳞茎按上述材料与方法接种 ,每种培养基接种 20 瓶 ,培养 60d 收获。通过测定
培养物增殖倍数、折干率、生物碱含量等指标筛选出适合平贝母生长及提高生物碱产量的生长调节剂配
比。
11215 　蔗糖浓度对鳞茎增殖和生物碱产量的影响
在LS 培养基中添加不同浓度的蔗糖 ,浓度分别为 2 %、3 %、4 %、5 %、6 % ,共 5 组 ,每组培养 20 瓶。
60d 后 ,对培养物生长量和生物碱产量进行测定。
11216 　病毒唑对平贝母鳞茎生长及生物碱产量的影响
将不同浓度 (0、5、10 或 50 mgΠL)病毒唑在无菌状态下分别添加到LS 培养基中 ,共 4 组 ,每组接种 20
瓶。60d 后 ,对平贝母鳞茎生物碱产量进行测定。
11217 　平贝母总生物碱含量的测定方法
样品制备 :参考张兆瑞[5 ] 的方法 ,精密称取平贝母样品粉末 (过 3 号筛) 2g 于 50ml 容量瓶中 ,加
011 %盐酸乙醇液适量摇匀 ,定容至 50ml ,冷浸 48h ,去初滤液 ,取续滤液备用。以贝母甲素 (北京市药检
所提供)为标准样品 ,同法制备标准样品溶液。
波长选择 :用 UV2201 紫外分光光度计 ,在 300～500nm 波长范围内对样品及标准样品溶液进行扫
671 核　农　学　报 19 卷
描。结果表明平贝母样品和标准样品溶液的最大吸收波长同为 423nm ,故选择测定波长为 423nm。
标准样品溶液线性范围试验 :称取贝母甲素标准样品 919771mg ,溶于 50ml 容量瓶中 ,配成约 011 %
的盐酸乙醇溶液。分别吸取 0、012、014、016、018、110ml 于分液漏斗中 ,423nm 波长测定吸收度值 (y 值) ,
除空白外 (以氯仿为空白) 每一组设置两管平行。计算得回归方程为 : y = 011530 + 017912 x ( R2 =
019995) 。贝母甲素浓度在 216～13μgΠL 范围内与吸收度值存在良好的线性相关。
试验证明当平贝母样品提取液加样量为 014ml 时 ,其所测 OD 值均落在曲线的线性范围内 ,因此所
有样品的加样量均为 014ml ,以贝母甲素为标准样品 ,则所测样品的总生物碱含量计算如下 :
总生物碱含量 ( %) = (吸收度 - 011530) ×919771017912 ×014 ×2 ×1000 ×100 %
11218 　样品超声波处理及稳定性试验
超声波处理对生物碱含量的影响 :将 3 个样品置于超声波发生器中超声处理 30min ,每个样品重复
2 次 ,测定生物碱含量 ,发现处理与对照差异极不显著。故本试验在样品处理时均省去超声波处理程
序。
稳定性试验 :取曲线的线性范围试验允许取样量 (012～018ml) 的氯仿层溶液在室温下放置不同时
间测定其吸收度 ,观察稳定性。试验结果表明 ,放置 70min 内所测定数据变化不大 ,而 70min 后随放置
时间增加吸收度值增大 ,这一结果与徐建峰[7 ]相同。故确定样品测定的时间范围为 50～70min。
2 　结果与分析
211 　影响平贝母鳞茎增殖和生物碱产量的因素
21111 　基本培养基对生物碱产量的影响
将培养物接种到不同培养基中 ,培养 60d ,测定影响平贝母生物碱产量的各项指标 ,结果见表 1。
图 1 　液体培养与固体培养鳞茎增殖
倍数与折干率的变化
Fig. 1 　The comparison of bulb growth
and DWΠFW between liquid and
solid culture
A. 为固体培养基上平贝母鳞茎增殖倍数的变化曲线 ; B. 为
液体培养基上平贝母鳞茎增殖倍数的变化曲线 ; C. 为固体
培养基上生长平贝母鳞茎的折干率 ; D. 为液体培养基上生
长平贝母鳞茎的折干率。
A and C mean the change curves of propagation times of the
bulb and the ratio of DWΠFW( %) in solid culture respectively. B
and D mean the change curves of propagation times of the bulb and
the ratio of DWΠFW ( %) in liquid culture respectively.
由表 1 可知 ,培养物折干率在 4 种培养基上差别
不大 ,均在 1718 %～1911 %。B5 培养基有利于平贝
母鳞茎增殖 ,其增殖倍数较 MS、LS 和 N6 培养基分别
高 19190 %、24139 %和 14183 %。而LS 培养基上鳞茎
生物碱含量分别高出 MS、B5 和 N6 培养基 35177 %、
47162 %和 37178 %。且LS 培养基上鳞茎生物碱产量
最高达到 1123 mgΠL ,比 B5 培养基高出 1510 % ,因此
以生产平贝母生物碱为目的时 ,LS 培养基要优于 B5
培养基。
21112 　液体培养与固体培养对生物碱产量的影响
液体培养基对平贝母子贝的分化及生长速度有
很大的促进作用[6 ] 。本试验研究了平贝母鳞茎在液
体培养基上培养 30～70d 鳞茎生长和生物碱含量的
变化。
由图 1A、B 曲线可以看出 ,液体培养 30～40d
时 ,鳞茎增殖最快 ,而在固体培养中 ,鳞茎增殖高峰
期为培养 50～60d 时 ,比液体培养推迟 20d。调查还
发现鳞茎在接入液体培养基 2d 后 ,即有子贝产生。
由 C、D 曲线可知 ,培养物随培养时间延长 ,其折干率
在固、液两种培养基中均无明显变化 ,但在固体培养
基上始终高于液体培养基 ,说明液体培养虽然促进了子贝分化 ,但固体培养基更利于鳞茎干物质积累 ,
因此 ,对于生产生物碱来说 ,固体培养优于液体培养。
771　3 期 离体培养条件对平贝母生物碱含量的影响
21113 　培养周期对平贝母鳞茎生物碱产量的影响
表 1 　基本培养基对鳞茎生长及生物碱含量的影响
Table 1 　Effect of the basic media on bulb growth and the content of alkaloid
培养基
medium
增殖倍数
propagation
times
鲜重
fresh weight
(gΠL) 折干率DWΠFW ( %) 生物碱含量content ofalkaloid ( %) 生物碱产量yield of alkaloid(mgΠL)
MS 41870 ±01229A 39125 1812 01137 0198
B5 51839 ±013365C 44190 1819 01126 1107
LS 41694 ±012259A 34170 1911 01186 1123
N6 51085 ±012675B 37180 1718 01135 0191
　　注 : 图中大写字母表示 0101 显著水平 ;增殖倍数 = 增殖后鲜重Π增殖前鲜重 ; 生物碱产量 = 鲜重×折干率×生物碱含量。
Note :The capital letters in the table mean significant different at 1 % level ; propagation times = fresh weight after culture 60dΠfresh weight before
culture in medium ; yield of alkaloid = fresh weight ×(DWΠFW) ×content of alkaloid.
表 2 　培养周期对平贝母生长及生物碱产量的影响
Table 2 　Effect of the different culture time on bulb growth and the yield of alkaloid
培养天数
culture
time (d)
增殖倍数
propagation times
折干率
DWΠFW ( %) 干重产量dry weight(gΠL) 生物碱含量content ofalkaloid ( %) 生物碱产量yield ofalkaloid (mgΠL)
20 11157 ±010638 18174 0139 01145 0106
30 11768 ±011156 17167 1133 01128 0117
40 21147 ±011477 19142 3113 01107 0134
50 21673 ±011542 18133 3182 01132 0151
60 51013 ±014697 18106 7111 01139 0199
70 51116 ±013878 16188 7139 01132 0198
80 51013 ±013054 16173 8175 01123 1108
表 2 可看出 ,培养材料随培养天数增加 ,增殖倍数迅速提高 ,但增殖速度在各培养阶段差异较大 ;其
中在 50～60d 鳞茎生长最快 ,增殖倍数为 2134 ,70d 以后生长逐渐减慢。其折干率在培养 60d 内为
17167 %～19142 % ,变化不大 ,培养 60d 之后折干率明显下降 ,到 80d 时降至最低值为 16173 % ,说明培养
60d 之前是培养物干物质积累最佳时期。以每升培养基所得生物碱量计算 ,培养 30～40d ,生物碱仅增
加 01164mg ,40～50d 增加 01170mg ,50～60d 生物碱增加量达到高峰 ,净增 01483mg ,60d 以后生物碱几乎
不再增加 ,故平贝母鳞茎组织培养以 60d 为适宜采收期。
21114 　植物生长调节剂对生物碱产量的影响
植物生长调节剂种类及其浓度配比直接影响培养物的生长与代谢。培养物在含不同植物生长调节
剂组合的培养基中培养 60d ,测定影响生物碱产量的各项指标 ,见表 3。
表 3 　植物生长调节物质对平贝母鳞茎增殖倍数及生物碱产量的影响
Table 3 　Effect of the different combination of the plant growth regulators on bulb growth and the yield of alkaloid
处理
treatment
激素配比
combinations
(mgΠL) 增殖倍数propagationtimes 折干率DWΠFW( %) 生物碱含量content ofalkaloid ( %) 生物碱产量yield ofalkaloid (mgΠL)
A KT110 + NAA015 41870 ±012290aA 1812 01137 0198
B KT110 + IAA015 41760 ±012222aA 1819 01131 1146
C BA110 + NAA015 51119 ±013069abA 1711 01142 1155
D BA110 + IAA015 41811 ±012674aA 1914 01140 1152
　　注 : 图中小写字母与大写字母分别表示 0105 与 0101 水平的差异显著性。
Note : The small and capital letters in the table mean significant difference at 5 % and 1 % levels , respectively.
表 3 数据表明 ,C 组合对鳞茎增殖有明显促进作用 ,其增殖倍数较 A、B、D 组合分别高 5111 %、
7154 %、6140 %。而生物碱含量及折干率在 4 种培养基中差别不大 ,分别在 01131 %～01142 %及 1711 %
～1914 %范围内。说明要获得较高产量的生物碱 ,应选鳞茎增殖快的处理组合。可见 C 组合为本试验
最佳外源激素配比 ,即 BA110 mgΠL + NAA015 mgΠL。C 与 A 组合或 D 与 B 组合相比 ,即当 NAA 或 IAA
871 核　农　学　报 19 卷
用量相同时 , BA 比 KT更有利于生物碱产量增加 ;而 A 与 B 组合或 C 与 D 组合相比 ,即当 BA 或 KT用
量相同时 ,NAA 和 IAA 对生物碱产量影响无规律可循。
图 3 　病毒唑对增殖倍数的影响
Fig. 3 　Effect of ribavirin on bulb growth
图 2 　不同蔗糖浓度对平贝母
鳞茎增殖及生物碱影响
Fig. 2 　Effect of the different sucrose concentra2
tion on bulb growth and the alkaloid
A. 为不同蔗糖浓度对平贝母生物碱含量的影响曲线 ; B. 为
不同蔗糖浓度对平贝母鳞茎增殖倍数影响曲线 ; C. 为不同
蔗糖浓度对平贝母生物碱产量的影响曲线。
A ,B and C mean the change curves of the content of alkaloid , the
propagation times of the bulb and the yield of alkaloid in different
sucrose concentration , respectively.
21115 　蔗糖浓度对鳞茎增殖和生物碱产量的影响
蔗糖不仅提供培养基中的碳源 ,而且维持细胞
的渗透压。其浓度在很大程度上影响着培养物的生
长。培养物在含不同蔗糖浓度的培养基中培养 60d
时 ,调查平贝母鳞茎增殖倍数、生物碱含量及生物碱
产量 ,结果如图 2。
由 B 曲线看出 ,在含 4 %、5 %蔗糖的培养基中培
养物生长速率均最大 ,增殖倍数为 516 左右。而由
A、C曲线可知 ,在含蔗糖 5 %的培养基中生物碱产量
及其含量均最大 ,分别为 1162 mgΠL 及 01181 %。可
知 ,利于平贝母鳞茎生物碱积累的最适蔗糖浓度为
5 %。
21116 　病毒唑浓度对平贝母生物碱产量的影响
培养 30d 发现 ,在添加不同浓度病毒唑的培养基
上鳞茎生长有明显差异 ,随病毒唑浓度的增加 ,生长
明显增强。60d 收获时的增殖倍数统计结果 (图 3)表
明 ,添加 50mgΠL 病毒唑的增殖倍数最低 ,而添加
10mgΠL、5mgΠL 病毒唑的增殖倍数均显著高于对照 ,
其中以添加 5mgΠL 病毒唑的增殖倍数最高。在 60d
培养期内发现 ,随培养时间的延长 ,在含 50 mgΠL 病
毒唑的培养基上鳞茎出现枯黄直到停止生长。说
明 ,低浓度病毒唑对平贝母鳞茎生长有促进作用 ,但
高浓度病毒唑对平贝母鳞茎生长有负作用。
3 　讨论
液体悬浮培养因分散性好 ,生长迅速 ,培养周期
短的优点而倍受研究者的青睐。紫草素、人参、烟
草、长春花及银杏等植物利用悬浮培养生产次生代谢产物技术已经成熟 ,并部分进入产业化[9～12 ] 。本试
验发现 ,相比固体培养 ,平贝母鳞茎液体培养显著地促进子贝增殖率 ,但鳞茎干物质积累较低。因此 ,对
于平贝母生物碱的生产 ,固体培养基优于液体培养基。
Zenk 等[13 ]培养长春花时增加蔗糖浓度 ,吲哚生物碱的积累也随之增加。甜叶悬钩子的愈伤组织在
相同培养条件下 ,甜茶甙的含量在蔗糖浓度 7 %时为 5 %时的 2 倍[14 ] 。本试验也发现平贝母增殖倍数和
生物碱含量随外源蔗糖浓度增加而提高 ,当添加浓度为 5 %时达最大。病毒唑是一种强的单磷酸次黄
嘌呤核苷 ( IMP)脱氢酶抑制剂 ,它不仅作为一种抗生素在植物组织培养的培养物除菌方面应用较为广
泛[ 15 ] ,而且病毒唑对组织培养的丛生芽诱导也有较好的促进作用。潭丰苹等[8 ]将病毒唑用于暗紫贝母
鳞茎组织培养中发现 ,病毒唑能显著提高组培暗紫贝母小鳞茎的增殖倍数。本试验结果也证明了这一
点 ,同时还发现 ,高浓度的病毒唑对平贝母鳞茎的生长有负作用。
在培养基中增加特定产物的已知前体或诱导子可以提高次生代谢产物含量[16 ] ,利用诱导子提高植
物培养细胞中目的产物含量的研究近十几年来一直是国内外研究的热点。在辣椒及红豆杉细胞培养中
加入特定产物前体或诱导子均可明显提高次生代谢产物的含量[17～20 ] 。因此 ,为进一步提高生物碱产
量 ,有必要对平贝母生物碱单体进行分类后 ,在培养过程添加特定产量前体或诱导子。
971　3 期 离体培养条件对平贝母生物碱含量的影响
朱丹妮等[21 ]对组培及野生川贝鳞茎微量元素含量进行定性对比 ,发现有益元素在组培川贝鳞茎中
的含量比野生鳞茎高 ,且有害元素含量有所降低 ,平贝母与川贝母同为贝母属植物 ,推测他们具有相似
性 ,其鳞茎培养也有可能成为提供新药源的重要途径。
参考文献 :
[ 1 ] 　朱四易. 中国贝母属植物研究. 西安 :西北大学出版社 ,1995 ,15 :212～222
[ 2 ] 　蔡朝晖 ,李 萍 ,高山林. 中药贝母的组织培养研究概况. 中草药 ,1998 ,29 : (4) 274～277
[ 3 ] 　唐 巍 ,吴绛云. 平贝母体细胞胚胎发生的研究. 作物学报 ,1993 ,19 (2) :188～189
[ 4 ] 　国家环境保护局 ,中国科学院植物研究所. 中国珍稀濒危植物红皮书. 北京 :科学出版社 ,1995
[ 5 ] 　张兆瑞 ,葛 莉 ,马 莹 ,等. 平贝母总生物碱含量的测定. 中国中药杂志 ,1993 ,18 (8) :478～479
[ 6 ] 　周宝钧. 平贝母鳞茎组织培养的研究. 植物生理学通讯 ,1983 , (1) :11
[ 7 ] 　许建峰. 高山红景天愈伤组织颗粒悬浮培养生产红景天甙动力学与过程调控. 大连理工大学博士学位论文 ,1998
[ 8 ] 　谭丰苹 ,高山林. 生长调节物质对组培暗紫贝母小鳞茎生长的影响. 植物资源与环境 ,1999 ,8 (1) :9
[ 9 ] 　Furuya T , Yoshikawa T , et al . Studies of the culture conditions for Panax ginseng cells in jar fermentor. Journal of Natural Products , 1984 ,47 :70
～75
[10 ] 　Hashimoto T. Bioreactors for the large2scale culture of plant cells. In : Bajaj Y. P. S. ed. , Biotechnology in Agriculture and Forestry 4. Springer2
verlag ,1988 ,104～122
[11 ] 　Han Jian , Dai Jun2gui , et al . Biotransformation of artem isinin by Catharanthus roseus and Ginkgo biloba cell suspension cultures. Chinese
Traditional and Herbal Drugs , 2003 , 34 (2) : 166～168
[12 ] 　Dai Jun2gui , Gong Zhuo , et al . Biotransformation of gastrodin by cell suspension cultures of catharanthus roseus. Acta Botanica Sinica , 2002 , 44
(3) : 377～378
[13 ] 　Schlatmann J E , Koolhaas C M A , et al . The role of glucose in ajmalicine production by Catharanthus roseus cell cultures. Biotechnolog and
Bioengineering , 1995 ,47 (5) :525～534
[14 ] 　王　雷 ,王蜀秀. 培养基对甜叶悬钩子愈伤组织生长及甜菜甙产生的影响. 生物工程学报 ,1991 ,7 (2) :188～191
[ 15 ] 　Leifert C , Cassells A C. Microbial hazards in plant tissue and cell cultures. In vitro Cellular &Developmental Biology. Columbia : MarΠApr 2001 ,
37 (2) :133～138
[16 ] 　Dittrich H , Kutchan T M , et al . The jasmonate precursor 122oxo2phytodienoic acid , induces phytoalexin synthesis in Petroselinum crispum cell
cultures. FEBS Lett . ,1992 ,309 (1) :33～36
[17 ] 　Hirasuna TJ , Pestchanker L J , et al . Taxol production in suspension cultures of Taxus baccata. Plant Cell , Tissue and Organ Culture ,1996 ,44 (2)
95～102
[18 ] 　李家儒 ,管志勇 ,刘曼西 ,等. Cu2 + 对红豆杉培养细胞中紫杉醇形成的影响. 华中农业大学学报 ,1999 ,18 (2) :117～120
[19 ] 　Mirjalili N , Linden J C. Methyl jasmonate induced production of taxol in suspension cultures of Taxus cuspidate : ethylene interaction and induction
models. Biotechnology progress ,1996 ,12 (1) : 110～118
[20 ] 　苗志奇 ,未作君 ,元英进. 水杨酸在紫杉醇生物合成中诱导作用的研究. 生物工程学报 , 2000 ,16 (4) :509～512
[21 ] 　朱丹妮 ,高山林. 组织培养川贝母化学成分和药理作用的研究. 中国药科大学学报 ,1992 ,23 (2) :118～121
(上接第 221 页)
[ 1 ] 　鲁如坤. 土壤磷素化学研究进展. 土壤学进展 , 1990 , 18 (6) :1～5
[ 2 ] 　刘建玲 ,张凤华. 土壤磷素化学行为及影响因素研究进展. 河北农业大学学报 , 2000 ,23 (4) :36～45
[ 3 ] 　韩俊杰 ,马保国 ,韩宝坤 ,等. 麦稻轮作高产条件下施磷对土壤速效磷及作物产量的影响. 河北农业大学学报 ,2001 ,24 (3) :22～26
[ 4 ] 　马保国 ,韩俊杰 ,杨太新 ,等. 麦稻轮作高产条件下无机磷的形态转化及其生物有效性研究. 河北农业大学学报 , 2000 ,23 (4) :42～
45 ,61
[ 5 ] 　姜　东 ,于振文 ,李永庚 ,等. 冬小麦叶茎粒可溶性糖含量变化及其与籽粒淀粉积累的关系. 麦类作物学报 ,2001 ,21 (3) :38～41
[ 6 ] 　李永庚 ,于振文 ,姜　东 ,等. 冬小麦旗叶蔗糖和籽粒淀粉合成动态及与其有关的酶活性的研究. 作物学报 ,2001 ,27 (5) :658～664
[ 7 ] 　张振清 ,夏叔芳. 无机磷对叶片淀粉和蔗糖积累的影响. 植物生理学报 ,1982 ,8 (4) :385～391
[ 8 ] 　Doaglas C Doehlert , Steven C Haber. Regulation of spinach leaf sucrose phosphate synthase by glucose26phosphate ,inorganie phosphate and pH.
Plant Physiol , 1983 ,73 (4) :989～994
[ 9 ] 　王　忠. 植物生理学. 北京 :中国农业出版社 ,2000. 238～245
[10 ] 　蔡武城 , 袁厚积. 生物物质常用化学分析法. 北京 : 科学出版社 ,1982115～16
[11 ] 　Azimzadeh M ,Koochek A. Effect of different seeding rates and amount of phosphorus fertilizers on yield and yield components of dry land wheat in
northern Khorasan. Agricultural Science and Technology , 1999 ,13 (2) :131～139
081 Acta Agriculturae Nucleatae Sinica
2005 ,19 (3) :175～180