全 文 ：文章编号 :100028551 (2004) 062423204
NTG诱导及核辐射改良稗草生防潜力菌研究
黄世文1 ,2 　余柳青2 　段桂芳2 　赵　航2 　罗　宽1
(11 湖南农业大学 ,湖南 长沙　410128 ; 21 中国水稻研究所 ,浙江 杭州　310006)
摘　要 :用亚硝基胍 ( nitrosoguanidine , NTG) 诱变稗草生防潜力菌禾长蠕孢稗草专化型菌株
(HGE) ,获得诱变菌株 I262 ,其孢子产量比原始菌株 ( HGE) 提高 5216 %。以 I262为出发菌株 ,用
60 Coγ射线 650Gy 辐照 57min ,有 7175 %的菌株产孢量高于出发菌株高 ,其中辐照菌株 F Ⅱ121 、F
Ⅱ116和 F Ⅱ140的产孢量分别比 I262提高 5414 %、5115 %和 4117 %。化学和物理技术相结合处理
稗草生防潜力菌 ,获得的突变菌株产孢量比原始菌株提高 1 倍以上。但高产孢突变菌株对稗
草的致病性、防效与原始菌株相当。
关键词 :稗草生防潜力菌 ;化学诱变 ;核辐射 ;改良
IMPROVEMENT OF BARNYARDGRASS POTENTIAL BIOCONTROL FUNGUS BY NTG INDUCING AND
60 Coγ2RAY IRRADIATION
HUANG Shi2wen1 ,2 　YU Liu2qing2 　DUAN Gui2fang2 　ZHAO Hang2 　LUO Kuan1
(11 Hunan Agricultural University , Changsha , Hunan , 410128 ; 21 China National Rice Research Institute , Hangzhou , Zhejiang , 310006)
Abstract : Helminthosporium gramineum Rabenh f . sp . echinochloae ( HGE) , the Barnyardgrass ( Echinochloa
spp . ) potential biocontrol fungus was induced by nitrosoguanidine (NTG,C2 H5N5O3 ) . The high yield of conidia
production of inducing strain I262 was obtained. Conidia production of I262 increased 5216 % compared with its origi2
nal fungus HGE. The experiments of nuclear irradiation were conducted by using I262 as starting strain. I262 was irra2
diated for 57 minutes by 60 Coγ2rays at the dose of 650Gy. Among selecting mutants , there are 7175 % strains’
conidia production higher than that of I262 . Among them , conidia production of mutants F Ⅱ121 、F Ⅱ116 and F Ⅱ140 in2
creased 5414 % ,5115 % and 4117 % compared with that of I262 , respectively. Conidia yield of mutants F Ⅱ121 and F
Ⅱ116 were doubled compared with their original fungus HGE when using chemical in combine with physical technolo2
gies to treat the barnyardgrass’pathogen. The pathogenicity and control efficacy to barnyardgrass of high yield
conidia production mutants were as the same as their original fungus HGE.
Key words :barnyardgrass potential biocontrol fungus ; chemical inducing ; nuclear irradiation ; improvement
收稿日期 :2003211208
基金项目 :国家自然科学基金 (30070505) 、国际合作 IPM、浙江省重点 (011102469)等项目资助
作者简介 :黄世文 (1962～) ,男 ,副研究员 ,博士 ,主要从事植物病理及生物防治研究。E2mail :hsw666 @sohu. com禾长蠕孢菌稗草专化型 ( Helminthosporium gramineum Rabenh f . sp . echinochloae ,HGE)是本研究室从自然感病稗草上分离、保存的稗草生防潜力菌。前期的研究表明 ,HGE 菌对稗草致病性强 ,对水稻等非寄主植物安全 ,但产孢能力弱[1 ,2 ] 。本研究通过亚硝基胍 (NTG) 诱导结合60 Coγ射线辐照诱变 HGE 菌孢子 ,以期获得对寄主稗草致病力强、产孢量多的改良菌种 ,为微生物除草剂的开发和应用打下基础。
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1 　材料和方法
111 　材料
原始菌株是从自然感病稗草标样分离纯化所获得的禾长蠕孢稗草专化型病原菌 ( Helminthosporium
gramineum Rabenh f . sp . echinochloae , HGE) ,液体石腊油封存。辐照出发菌为经亚硝基胍诱变获得的高
产孢菌株 I262 。
化学诱变剂亚硝基胍 (NTG,C2 H5N5O3 ) 、放线菌素D(Dactimomycin ,C62 H86N12O16 )均为进口原装 (Dxoid
公司) 。低渗培养基 (MMA)含 NaNO3 210g , KH2 PO4 110g , KCl 015g , MgSO4·4H2O 015g , FeSO4 0101g , 蔗
糖 2010g , 琼脂 1510～2010g , 蒸馏水 1000ml ;低渗营养培养基 (CMA) :在 MMA 中加入 015 %蛋白胨 ,
015 %酵母膏。
112 　方法
11211 　NTG最适诱变剂量和时间的确定 　将 HGE 原始菌株从斜面移至新鲜 PDA 平板 ,28 ℃黑暗培养
6d 后 ,用 pH 610 的无菌 011molΠL 磷酸缓冲液洗脱孢子 ,灭菌纱布过滤 ,滤液装无菌离心管 ,4500rpm 离
心 5min ,弃上清液 ,沉淀用缓冲液清洗 2 次。用缓冲液悬浮孢子 ,血球计数器测孢子浓度。称取 NTG置
带塞的无菌离心管中 ,用缓冲液配成 110mgΠml 的 NTG溶液 (先滴几滴甲酰胺 ,用旋涡振荡器振荡 ,使
NTG完全溶解 ,再加入缓冲液) ,用缓冲液稀释分别配成 012、014 和 016mgΠml 浓度的 NTG溶液 ,从 012、
014 和 016mgΠml 浓度的 NTG溶液中分别取出 012、014 和 016ml ,分别加入 018、016 和 014ml 的孢子悬浮
液 ,配成不同浓度的 NTG孢子悬液各 110ml。每浓度装 3 支带塞无菌离心管 ,分别在旋涡振荡器上振荡
10s ,使 NTG与孢子充分混合。将离心管置 28 ℃,220rpm 振荡处理 ,分别在 20、40、60min 时将各浓度的离
心管取出 1 支 ,立即在 4500rpm 下离心 5min ,弃上清液并用缓冲液洗涤 2 次 ,再用缓冲液悬浮孢子到原
体积。
上述 NTG孢子悬液以 10 - 1 、10 - 2和 10 - 3的稀释度分别涂 CMA 培养基平板 ,每浓度涂 3 皿。将未经
诱变处理的孢子悬液逐级稀释 ,以 10 - 3 、10 - 4和 10 - 5的浓度涂平板。置 28 ℃下黑暗培养 3d ,测定菌落
数 ,根据处理前后的活菌数计算死亡率 ,确定最佳的 NTG剂量及处理时间。
11212 　NTG诱变 　方法同 11211 ,将孢子在最佳 NTG剂量中处理适宜的时间 ,以 10 - 1 、10 - 2和 10 - 3的稀
释度分别涂 CMA 培养基平板 ,28 ℃黑暗培养 3d ,点种法挑选营养缺陷型菌株。另挑取 300 个生长较快
的菌落 ,接种于 PDA 斜面 ,28 ℃黑暗培养 10d ,将斜面保存于 4 ℃冰箱备测。
11213 　突变菌株的筛选及产孢量测定 　通过点种法挑取能在 CMA 平板上生长但不能在 MMA 平板上
生长的菌株 ,该菌株可能为营养缺陷型。按周德庆生长谱法鉴定营养缺陷型的类型[3 ] 保存于冰箱中的
斜面菌株 ,取小块菌苔移于新鲜 PDA 平板 ,28 ℃黑暗培养 7d ,取边缘生长旺盛的直径 710mm 菌块 ,接种
于直径 9cm 的 PDA 平板中央 ,28 ℃黑暗培养 14d ,用无菌水洗脱孢子 ,纱布过滤 ,血球计数器测定孢子
数。选择产孢量比出发菌株有较大提高的突变菌株作为进一步辐照诱变的出发菌株。
11214 　60 Coγ射线辐照诱变 　经亚硝基胍诱变获得的菌株 I262其产孢量比原始菌株提高 50 % ,以 I262为
出发菌株 ,用60 Coγ射线作进一步辐照诱变。
从 I262斜面菌种移菌苔到新鲜 PDA 平板 ,28 ℃培养 7d ,将菌龄为 7d 的菌块接种到新鲜 PDA 平板 ,
28 ℃黑暗培养 14d ,无菌水洗脱孢子 ,无菌纱布过滤 ,滤液离心 ,弃上清液 ,沉淀用生理盐水洗涤 2 次 ,用
生理盐水悬浮孢子 ,血球计数器测孢子数 ,调节孢子浓度为 n ×106Πml。将 015ml 孢子悬液装入 2ml 无
菌带塞试管 ,加适量放线菌素 D ,28 ℃处理 1h。
孢子悬液经60 Coγ射线辐照 ,设 3 个射线剂量和照射时间 :550Gy 48min ( F Ⅰ) 、650Gy 57min ( F Ⅱ) 、
750Gy 65min (F Ⅲ) 。辐照后置冰浴 2h。以稀释度 10 - 2 、10 - 3分别涂 10 套 PDA 平板 ,28 ℃黑暗培养 2～
3d ,统计菌落数 ,计算致死率。
从不同辐照剂量处理的平板上分别挑取 100～200 个菌株 ,按编号 F Ⅰ001～F Ⅰ200保存在 PDA 斜面。
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11215 　突变菌株的筛选及产孢量测定 　对保存的突变菌株进行产孢量测定 ,方法同 11213。获得产孢
量最高的突变菌株 F Ⅱ121和 F Ⅱ116 。
11216 　高产孢突变菌株对稗草致病力测定 　菌龄为 7d 的 F Ⅱ121 、F Ⅱ116 和 HGE 原始菌块移接到新鲜
PDA 平板 ,28 ℃黑暗培养 14d ,收集孢子 ,无菌水制备孢子悬液 ,加吐温 20 使其终浓度为 0105 %。以 5 ×
107 个孢子Πm2 的剂量喷雾 1～2 叶稗苗叶面 ,28 ℃保湿 (RH95 %以上) 24h ,将稗苗移至温室培养 ,观察发
病情况 ,14d 后测量稗苗株高、干重、病情指数、防治效果。
2 　结果和分析
211 　NTG最适诱变剂量
用 NTG处理生物体 ,既可以引起作用对象产生正向突变 ,也可以引起负向突变。一般认为 ,NTG对
病原菌的致死率在 70 %～75 %时 ,其剂量诱变效果较好。从试验结果看 ,NTG 012mgΠml 处理 20min 后 ,
其对 HGE菌的杀死率在 70 %～75 %之间 (表 1) 。以 NTG 012mgΠml 处理 20min 为最适诱变剂量及时间。
表 1 　HGE菌在不同 NTG诱变剂量下的死亡率
Table 1 　Death rate of HGE treated with
different dose of NTG
诱变剂浓度
NTG dose (mgΠml) 致死率 mortality rate ( %)20min 40min 60min
012 7417 7919 7915
014 7819 8313 9011
016 8619 8912 9017212 　突变菌株的筛选测定经 NTG诱变处理后挑选出的 300 个菌株在PDA 平板上的产孢量 ,所得数据用 SAS 统计软件进行方差分析。结果显示 ,挑出的 300 个诱变菌株中 ,只有I262 、I040等 9 个菌株的产孢量比原始菌株 HGE 有提高 ,其中 I262产孢量提高幅度最大 ,达 5216 % ,差异显著 ,另8 个诱变菌株的产孢量提高幅度均在 15 %以下。其它
大部分诱变菌株的产孢量都低于 HGE菌 (表 2) 。选择
以诱变菌株 I262为60 Coγ射线辐照诱变的出发菌株。
营养缺陷型菌株的筛选结果是获得了 Try - 、His - 双缺陷型菌株 I004 。该菌株将作为以后原生质体融
合的亲本之一。
表 2 　部分 NTG诱导菌株在 PDA培养基上的产孢量
Table 2 　Sporulation on PDA media of NTG induced strains
菌株
strains
孢子产量
sporulation ( ×106Πplate) 菌株strains 孢子产量sporulation ( ×106Πplate) 菌株strains 孢子产量sporulation ( ×106Πplate)
I262 817a I263 519bcdef I202 515bcdefghijk
I040 615b I301 517bcdefg I254 514bcdefhgijkl
I219 615b HGE(CK) 517bcdefg I297 514bcdefhgijkl
I232 614b I292 516bcdefgh I321 513bcdefhgijkl
I212 612bc I257 516bcdefghi I207 512bcdefhgijklm
I296 610bcd I204 515bcdefghij I047 510bcdefhgijklmn
I246 519bcde I043 515bcdefghij I295 510bcdefghijklmno
注 :只列出部分产孢量较多的诱变菌株 ;所有数据后面的小写字母表示差异显著性 ,表 3 同。
Note :Only some high sporulation induced strains were listed ; Letters follow the data represent the significant difference according to SAS , the same as in
table 3.
213 　60 Coγ射线辐照突变菌株的筛选
测定从经60 Coγ射线不同剂量处理中挑选出的 400 个菌株在 PDA 平板上的产孢量 ,所得数据用 SAS
统计软件进行方差分析和多重比较。结果有 31 个突变菌株的产孢量高于出发菌株 I262 ,占 7175 % ,其中
辐照菌株 F Ⅱ121 、F Ⅱ116和 F Ⅱ140的产孢量比出发菌株 I262分别提高 5414 %、5115 %和 4117 %(表 3) 。由表
3 统计可以看出 ,不同60 Coγ射线辐照处理 ,引起 I262菌株突变的效果不同 ,650Gy (F Ⅱ) γ射线剂量最佳 ,
产孢量高于出发菌株 I262的 31 个突变菌株中 ,有 18 个是由 650Gy ( F Ⅱ) 辐照引起 ,占 5811 % ,其次为
550Gy (F Ⅰ)剂量 ,占 2518 %。表 4 进一步证实 ,以 65Gy 剂量的γ射线辐照诱变效果较好。
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表 3 　部分60 Coγ射线辐照菌株在 PDA培养基上的产孢量
Table 3 　Sporulation on PDA media of 60 Coγ2ray irradiated strains
菌株
strains
孢子产量 ( ×106Π皿)
sporulation ( ×106Πplate) 菌株strians 孢子产量 ( ×106Π皿)sporulation ( ×106Πplate) 菌株strians 孢子产量 ( ×106Π皿)sporulation ( ×106Πplate)
F Ⅱ121 1519a 　　　　 F Ⅰ042 1214abcdefghij 　 F Ⅲ302 1019cdefghijklmnopqrs
F Ⅱ116 1516ab F Ⅱ105 1211abcdefghijk F Ⅲ331 1018cdefghijklmnopqrst
F Ⅱ140 1416abc F Ⅱ131 1118bcdefghijkl F Ⅰ024 1017defghijklmnopqrstu
F Ⅰ003 1412abcd F Ⅰ043 1115cdefghijklm I262 1013efghijklmnopqrstuv
F Ⅱ122 1411abcde F Ⅲ309 1115cdefghijklmn F Ⅱ146 1012fghijklmnopqrstuvw
F Ⅰ033 1410abcdef F Ⅱ170 1114cdefghijklmn F Ⅲ378 1011fghijklmnopqrstuvwx
F Ⅰ040 1319abcdef F Ⅱ120 1114cdefghijklmn F Ⅲ319 1011fghijklmnopqrstuvwx
F Ⅲ363 1315abcdefg F Ⅱ137 1113cdefghijklmno F Ⅱ111 1011fghijklmnopqrstuvwx
F Ⅱ152 1315abcdefg F Ⅰ005 1113cdefghijklmno F Ⅱ108 1010ghijklmnopqrstuvwx
F Ⅱ102 1313abcdefg F Ⅲ311 1113cdefghijklmno F Ⅲ308 1010ghijklmnopqrstuvwx
F Ⅱ115 1312abcdefg F Ⅱ143 1111cdefghijklmnop F Ⅱ156 1010ghijklmnopqrstuvwx
F Ⅰ004 1311abcdefgh F Ⅱ154 1111cdefghijklmnop F Ⅰ018 1010ghijklmnopqrstuvwx
F Ⅱ155 1215abcdefghi F Ⅱ177 1110cdefghijklmnopq F Ⅱ109 918ghijklmnopqrstuvwxy
F Ⅱ112 1214abcdefghij F Ⅱ150 1019cdefghijklmnopqr F Ⅱ128 918ghijklmnopqrstuvwxyz
表 4 　γ射线辐照诱变的致死率和高产菌株突变率
Table 4 　Death and mutation rate of high conidia
production strain I262 treated by
γ2ray irradiation
辐照剂量
irradiation dosage
( Gy)
致死率
mortality rate
( %)
高产菌株突变率
mutation rate of high
conidia production ( %)
F Ⅰ:550Gy 48min 8919 0
F Ⅱ:650Gy 57min 9119 1
F Ⅲ:750Gy 65min 9019 0214 　高产孢突变菌株对稗草致病力用经 NTG诱变和60 Coγ射线辐照的高产突变菌株 F Ⅱ121 、F Ⅱ116 ,以及稗草生防潜力菌 HGE 原始菌孢子喷雾处理稗苗 ,结果显示 ,在相同孢子浓度下 ,突变菌株与原始菌株对稗草的生长、生物产量、致病性及防效等无明显差异。3 　讨论
野生型微生物直接用作生防制剂一般都存在
着这样那样的缺点 ,或生长慢、或产孢能力差、或效价低等。因此 ,病原微生物在进行大规模试验或商品
化生产之前 ,多要采用各种技术手段进行改良 ,以克服其固有的不利因素的影响。
化学试剂、核辐射诱变等技术已广泛用于工业、农业、医药等领域的微生物、作物品种的改造、改良
上 ,获得了许多新的菌种 (株) 、品种 (系)及资源 ,创造了巨大的社会、经济效益[4～7 ] 。目前我国生产上大
面积使用的井冈霉素 ,其产生菌吸水链霉菌井冈变种 ( Streptomyces hygroscopicus var. Jinggangensis Yen) 其
原始菌株产生抗生素能力很低 ,为了在短期内使井冈霉素产生菌产生抗生素的能力达到生产要求 ,就采
用了多种出发菌株 ,多因素诱变育种 ,使菌株产生抗生素的能力得到逐步提高[8 ] 。
真菌微生物制剂主要是利用其孢子对寄主靶标进行感染 ,使其发病致死 ,达到防治目的。因此 ,生
防病原菌产孢能力的强弱 ,决定了其开发利用前景。禾长蠕孢稗草专化型病原菌 (HGE)经亚硝基胍与60
Coγ射线辐照 ,获得的突变菌株产孢量比原始菌株提高 1 倍以上 ,为该菌进一步开发成微生物除草剂打
下了很好的基础。本试验获得的高产孢突变菌株对稗草的致病性和防效与原始菌株相比没有实质性提
高。试验中获得了 Try - 、His - 双缺陷型菌株 I004 ,目前正利用 I004菌株进行原生质体融合 ,以提高其对稗
草致病力[9 ] 。
参考文献 :
[ 1 ] 　黄世文 ,余柳青. 稗草病原菌 Alternaria alternata 和 Curvularia lunata 的产孢特性研究. 孙鼐昌主编 ,面向 21 世纪中国农田杂草可持
续治理 ,南宁 :广西民族出版社 ,1999 ,165～170
[ 2 ] 　黄世文 ,段桂芳 ,余柳青 ,等. 三株病原真菌对稗草生防潜力的研究. 植物保护学报 ,2001 ,28 (4) :313～317
(下转第 419 页)
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3 　结论
辐射诱变水稻测 48、测 49、测 64 和明恢 77 等恢复系的后代获得 7 个水稻雄性不育突变体 ,遗传观
察表明它们都是单基因隐性遗传。雄性不育突变体之间双列杂交等位测验结果表明 ,其中 4 个雄性不
育突变体的不育基因相互不等位 ,它们是测 64ms、明恢 77ms21、明恢 77ms22 和测 48ms21。这 4 个雄性不
育基因与已报道的雄性不育基因相互关系 ,所在连锁群以及利用价值都有待进一步研究。
参考文献 :
[ 1 ] 　Morishima H and Khush G S. Report of Committee on Gene Symbolization. Rice Genetics Newsletter , 1997 , 14 :13～16
[ 2 ] 　鲍文奎. 植物雄性不育的综合理论和应用. 中国农业科学 ,1982 , (1) :32～36
[ 3 ] 　高明尉. 雄性不育与杂种优势育种. 作物学报 ,1980 ,6 (1) :57～62
[ 4 ] 　王乃元. 作物雄性不育遗传的核质关系浅析. 福建农学院学报 (自然科学版) 1993 ,22 (1) :16～22
[ 5 ] 　Elliott F C. Plant Breeding and Cytogeneties. New York :Mc Graw Hill Back Co Inc ,1958
[ 6 ] 　吴兆苏. 小麦育种学. 北京 :农业出版社 ,1988
[ 7 ] 　湖南省水稻雄性不育系研究协作组. 遗传育种学术讨论会文集. 北京 :科学出版社 ,1993
(上接第 426 页)
[ 3 ] 　周德庆主编. 微生物学试验手册. 上海 :上海科学技术出版社 1986 , 277
[ 4 ] 　杨宗渠 ,王柏楠. 食用菌诱变育种研究进展. 中国食用菌 , 1998 , 17 (2) :6～9
[ 5 ] 　王琳清. 中国植物诱变育种进展剖析. 核农学报 , 1992 , 13 (6) :283～295
[ 6 ] 　郭美锦 ,涂国全 ,曹秀香. 龟裂链霉菌原生质体诱变与筛选研究. 中国抗生素杂志 ,2000 ,25 (4) :21～25
[ 7 ] 　黄遵锡 ,幕跃林 ,周晶. 算性蛋白酶高产菌株的选育. 粮食与饲料工业 ,1999 ,3 :15～19
[ 8 ] 　包建中 , 古德祥主编. 中国生物防治. 太原 :山西科学技术出版社 , 1998 , p535～542
[ 9 ] 　段桂芳 , 黄世文 , 颜秋生 ,等. 稗内脐蠕孢菌( Drechslera monoceras) 原生质体制备和再生. 农业生物技术学报 , 2003 , 11 (3) :245～
248
(上接第 434 页)
[ 2 ] 　Broetjes C S , Roet G S , Bokelmann. Mutation breeding of Chrysanthemum morifolium Ram. Using in vovo and vitro adventitious bud techniques.
Euphytica ,1976 ,25 :11～19
[ 3 ] 　De Jong J ,Custers J B M. Induced changes in growth and flowering of Chrysanthemum after irradiation and in vitro culture of pedicels and petal epi2
demis. Euphytica ,1986 ,35 :137～148
[ 4 ] 　Huttema J B M ,Preil W De Jong. Methods for selection of low2temperature tolerance mutants of Chrysanthemum morifolium Ramat . using irradiated
cell suspension cultures Ⅲ. Plant Breeding ,1991 ,107 :135～140
[ 5 ] 　Preil W ,Huttema J B M ,De Jong J . Methods for selection of low2temperature tolerance mutants of Chrysanthemum morifolium Ramat . using irradiat2
ed cell suspension cultures. Ⅱ. Plant Breeding ,1991 ,107 :131～134
[ 6 ] 　傅玉兰 ,郑路. 冬菊新品种选育. 安徽农业大学学报 ,1994 ,21 (1) :59～62
[ 7 ] 　王彭伟 ,李鸿渐 ,张效平. 切花菊单细胞突变育种研究. 园艺学报 ,1996 ,23 (3) :285～288
[ 8 ] 　李鸿渐. 中国菊花. 南京 :江苏科学技术出版社 ,1993 ,4
[ 9 ] 　齐孟文 ,王化国. 我国花卉辐射育种的进展和剖析. 核农学通报 ,1997 ,18 (6) :288～290
[10 ] 　Broertjes C ,A Keen. Adventitious shoots :do they develop from one cell ? Euphytica , 1980 , 29 :73～87
[11 ] 　郭安熙 ,范家霖 ,杨保安 ,王柏楠 ,张建伟. 菊花花色辐射诱变研究. 核农学报 ,1997 ,11 (2) :65～73
914Acta Agriculturae Nucleatae Sinica
2004 ,18 (6) :416～419
© 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net