全 文 ：© 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net
核 农 学 报 ,
‘
肝片形吸虫神经系统内 一轻色胺的
定位和色胺能神经元超微结构的研究
·
黄世乐 成 冰
南京农业大学同位素应用教研组 南京
戎耀方
南京农业大学兽医药理教研组 南京
用间接免疫 关光技末鉴定 了肝 片形吸 虫神经 系统 内 一径 色胺 一 的定位 。 在
中枢 , 脑神经 节内胞体 、 突起 、连 合和发 出的纵神经 干均呈现免疫反 应 在外周 , 皮肌
层 、 肠 管壁 、 辛九和 卵巢止皮周 围 、 子宫和 卵模肌 内层 等的神经丛也有免疫反应 。 用电
镜技术进一 步研 究色胺能神经元的超微结构 , 发现其胞休集 中于神经 节 , 其终末纤维
有经典的 突触 结构 , 内含 一 颗拉 。 因此 , 一 作为肝 片形吸 虫 的神经递质有 了直
接证据 。
·
关键词 肝片形吸 虫 神经递质 一经 色胺 免疫荧光技术 超微结构
前 言
一经色胺 一 对肝片形 吸虫 ’ 有强兴奋作用 〔, ’, 但它作为一个神经递
质一直有争议 〔,
·
,
。 已经确证 , 肝片形吸虫体内存在 由色氨酸 、 一轻色氨酸合成 一 的系统和
由 一 降解为 一经叫噪乙酸的系统‘。 , 但 由于虫体还能从周围环境摄取 一 , 一 作为肝
片形 吸虫真正的神经递质的问题仍有待取得更 明确的证据 。
本文用免疫组织化学的方法 , 在光镜下鉴定肝片形吸虫神经系统内 一 的分布 用电镜
技术研究色胺能神经元的超微结构 , 以获取 一 作为肝片形吸虫的神经递质的直接证据 。
材 料 与 方 法
试剂 一经免胺硫酸肌醉 一 一 为上海化学试剂商店分装的瑞士产品 牛血清 白蛋
白 为中国科学院上海生物化学研究所产品 琼脂糖 由瑞典
厂生产 羊抗兔 荧光抗体为卫生部上海生物制品研究所产品 。 实验所用其他试剂均为
级 。
此文于 年 月 日收到 。
国家 自然科学基金资助项目 。
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期 肝片形吸虫神经系统内
一轻色胺的定位和色胺能神经元超微结构的研究
肝片形吸虫的采集与切片制备 肝片形吸虫的采集与保存方法同前文川 。 标本置 甲
醛溶液 由 一 配制 中固定 ℃ , 再置 蔗糖 中浸渍 ℃
,
其 间换 液 次 。 先 用 刀 片将 虫 体 切 成 头
、
身 、 尾 三 段 , 分 别 于 恒 冷 冰 冻 切 片机
, 一 ℃ 上 , 包埋在 蔗糖 中速冻 , 连续切片 , 厚度分别为 拜 免疫
染色用 和 一 。拼 电镜标本制备用 。 切片于 ℃冰箱内自然风干 , 备用 。
免疫组织化学 按黄世乐等法 〔 ,合成 一 一 复合物 , 制备兔抗 一 抗血清 。 分别用
双向琼脂扩散试验和免疫电泳检验抗血清的滴度和特异性 , 并用澳化氰亲和层析法纯化抗血
清 。 用 一 缓冲液 含 一 的 , 将抗血清稀释
成 。 切片先在室温下 一 ℃ 滴加 一 , 孵育 用稀释的抗血清将切片
孵育 ℃ 室温下用 的 漂洗 换液 次 一用 的羊抗免 荧光
抗体 稀释液同前 孵育 ℃ 室温下用 漂洗 , 取出冷风 吹干 在
一 荧光显微镜下观察 。 实验设 种对照染色 用正常兔血清代替 一 抗血清 用经 一
预先吸收处理过的抗血清代替 一 抗血清 直接用羊抗兔 荧光抗体染色 。
超微结构观察 选择上述免疫染色呈强阳性反应的切片的后续切片 一 拼 作标
本 , 制备超薄切片〔 , 。 超薄切片经醋酸铀和 柠檬酸铅复染色 , 于 一 透射 电镜
中观察并摄影 。
结 果
应用间接免疫荧光技术发现 , 肝片形 吸虫体内 一 分布广泛 , 不仅存在于 中枢神经 系
统 , 而且也伸向生殖系统和消化系统 。 中枢中以头部一对脑神经节免疫反应最强 , 内聚集大量
胞体和纤维 图版 卜 。 胞体呈双极长梭形或多极不规则星形 。 通向腹侧的连合亦有荧光反
应 。 连合与神经干之间连接的神经网及向后伸出的纵神经干均有免疫荧光反应 。 神经干 内仅
含少量胞体 , 并有纤维伸向皮肌层神经丛 。
在外周 , 广泛分布于皮肌层的神经丛呈免疫反应 , 内有少量胞体 图版 一 和供给肌 肉的
纤维 , 也有少数纤维伸向外皮 , 吸盘四 周 、 咽内和周围及两侧肠壁均有免疫反应的神经丛 。 生殖
系统如肇丸和 卵巢周围 , 子宫和卵模的肌 内层也呈较强的免疫反应性 。 卵黄腺 内有散在的
荧光颗粒 。 任何对照染色均呈阴性反应 。
电镜超微结构揭示 , 脑神经节 一 神经元细胞的胞核形态不规则 , 核周胞浆聚集有散在
的 一 颗粒 直径 一 功 和线粒体等 图版 一 。 其轴突发出的终末纤维有稀疏串珠
状膨大的膨体 体 , 内充满 一 颗粒囊泡 图版 一 。 纤维终端有与其它神经元的
树突构成突触的突触小体 , 内有突触小泡 图版 一 , 有的颗粒 已经排空 , 伸向皮肌层的突触
与肌纤维形成神经 一肌接头 图版 一 。 突触颗粒囊泡大小不等 , 呈椭园形 。
讨 论
前文用高压液相色谱和核素示 踪技术确证 , 肝 片形 吸虫体 内存在 一 生成与降解 系
统 〔。 。本文的定位研究揭示肝片形吸虫体内不仅存在 一 , 而且存在色胺能神经系统 。色胺能
神经的胞体和纤维大量集中于脑神经节 , 与前文头部 一 含量高于尾部的结果 〔们 一致 。 超微
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核 农 学 报 卷
图版
肝片形吸虫的中枢和外周神经系统中显示 一 反应的免疫荧光照片
头部神经节 、 腹侧连合和该区的神经网呈现对 一 的免疫反应 在神经节 内有胞体 箭头 。 神经节 一 腹
侧连合 神经网 标线长 拌
皮肌层富含 一 阳性的神经纤维 白色箭头 , 神经丛 内有细胞体 黑色箭头 。 一 外皮合胞体 一 纵肌层 。 标
线长 拜
免疫染色呈强 阳性反应的“ 头 ”段切片的后续切片中 , 色胺能神经超微结构的照片
一个色胺能神经元胞体其核周体有散在的 一 致密中心囊泡 箭头 。 一 细胞核 一 线粒体 。 标线长 。 拜 。
轴突末梢膨体内的 一 致密中心囊泡 箭头 标线长 拌 。
一个含 一 颗粒囊泡的轴突终末膨大 箭头 与树突分枝形成突触接触 双箭头 一 神经末梢 。 标线长 拌
一个含 一 突触小泡 箭头 的轴突的终末膨大与肌纤维终板形成神经一肌接头 。 肌纤维 终板
。 标线长
料
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期 肝片形吸虫神经系统内 一轻色胺的定位和色胺能神经元超微结构 的研究
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结构显示胞浆内 一 颗粒主要分布在胞核周围 , 表明肝片形吸虫色胺能神经元 一 的合
成中心可能与哺乳动物的一样 , 是在核周体 。 由于肝片形吸虫具有经典的突触形态结构和从外
界摄取 一 的能力 , 可以推测其 一 递质再摄入神经末梢 , 并进入膨体内的囊泡 。 已证明
缩小膜壳绦虫 五吵, 动 的色胺能神经就存在这种 一 再循环的过程 〔 , 。
皮肌层的超微结构显示 , 二 神经元的突起不仅包括经典的轴突 、 突触和突触间隙等不
同的形态结构 , 而且其内还含有充满 一 颗粒或释放后排空的不同形态特点的囊泡 , 有力地
证明了 一 是肝片形吸虫的一个递质
。 其色胺能神经在组化分布上与胆碱能神经相并列 〔幻 ,
在药理反应上二者相对立 , 即 一 引起虫肌兴奋 , 而 乙酞胆碱引起虫肌抑制‘, 〕 , 二者相互配
合 , 对虫体的活动进行调节 。
分布于具有肌 肉组织的吸盘 、 咽 、 肠壁 、 卵模和子宫的 一 神经丛 , 其功能可 以理解 , 但
伸向卵巢 、 皋丸和卵黄腺的 一 神经的作用难以解释 。 由于 一 有激活腺昔酸环化酶 , 促
使 的生成而影响肝片形吸虫糖代谢的作用 〔的 , 一 对这些生殖组织或许类似 内分泌
那样 , 起着调节肝片形吸虫生殖能力的作用 。
参 考 文 献
戎胭方等 肝片形吸虫与鸡蛔虫对某些神经递质及药物的反应比较
,
畜牧兽医学报 , ,
口 , ,
亏 , , ,
诸葛荣华等 肝片形吸虫体内 一经色胺的生成与降解 中国药理学报 , ,
黄世乐等 一轻色胺 一 丁 免疫原的合成与鉴定 核农学通报 , 的 ,
洪涛 生物医学超微结构与电子显微镜技术 北京 科学出版社 , ,
一 丁 云愁, 。‘ ‘ 二
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卜 仁 ,
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