全 文 ：文章编号 :100028551 (2009) 032385206
影响玉米幼胚愈伤组织再生率的因素分析
张桂玲　张素芝　荣廷昭
(四川农业大学玉米研究所Π作物基因资源与遗传改良教育部重点实验室 ,四川 雅安　625014)
摘 　要 :为探讨影响玉米幼胚愈伤组织再生率的因素 ,本试验以 3 个优良玉米自交系为材料 ,对影响幼胚
的胚性愈伤组织诱导率、克隆指数和分化率的因素进行了研究。结果表明 ,3 个玉米自交系幼胚的愈伤
诱导率差异极显著。生长环境对 975212 影响显著 ,对 182599 和 416051 影响不显著。182599 和 416051 的
胚大小为 2mm 时 Ⅱ型胚性愈伤组织的诱导率最高 ,而 975212 在胚大小为 215mm 时 Ⅱ型胚性愈伤诱导
率最高。3 个自交系的克隆指数和分化率一般在第 3 或第 4 代时达到最大值。综合分析表明 ,182599 和
416051 这 2 个自交系具有愈伤组织诱导率高、克隆能力强、易分化的优点 ,是玉米转基因研究中具有潜
在利用价值的优良自交系。
关键词 :玉米 ;幼胚 ;愈伤组织 ;再生率
ANALYSIS OF FACTORS INFLUENCING REGENERATION RATE OF
EMBRYOGENIC CALLUS FROM IMMATURE EMBRYO OF MAIZE
ZHANG Gui2ling 　ZHANG Su2zhi 　RONG Ting2zhao
( Maize Research InstituteΠKey Laboratory of Crop Genetic Resource and Improvement , Ministry of Education , Sichuan Agricultural University , Ya’an , Sichuan 　625014)
Abstract :In order to evaluate the factors , which affect embryogenic callus regeneration rate , immature embryos of 3 maize
inbred lines were used. The important parameters of immature embryo , such as the regeneration frequency , of embryogenic
callus , cloning index and differentiation frequency , were analyzed. The results revealed that differentiation frequency differed
significantly among the 3 maize inbred lines. The embryogenic callus induction rate of 975212 was affected notably compared to
416051 and 182599 inbred lines under different environment conditions. The highest embryogenic callus induction of 182599
and 416051 inbred lines were achieved as the immature embryo size was up to 2 mm , while that 215 mm of 975212 is
preferred. As to cloning index and differentiation rate , the highest finger could be got at the third or fourth generation.
Collectively , 182599 and 416051 inbred lines had high embryogenic callus induction rate , strong cloning ability and easily
differentiation , which made them as the candidates elite inbred lines for maize transformation.
Key words :maize ; immature embryo ; callus ; regeneration rate
收稿日期 :2008207209 　接受日期 :2009203217
基金项目 :国家重点基础研究发展计划 (973 计划) (2007CB108900) ,四川省公益性研究计划项目 (2008NG0013) , 四川省应用基础研究计划项目
(2008J Y0096) , 四川省教育厅资助科研项目 (07ZB065) , 四川农业大学青年科技创新基金 , 四川农业大学博士后基金
作者简介 :张桂玲 (19812) ,女 ,河南新乡人 ,在读硕士研究生 ,专业方向为作物遗传育种。E2mail : zhangguiling1999 @yahoo. com. cn
通讯作者 :张素芝 (19742) ,女 ,山东潍坊人 , 博士 ,副教授 ,研究方向为植物基因工程与分子生物学。Tel : 083522882455 ; E2mail : suzhi1026 @163.
com ;荣廷昭 (19362 ) ,男 ,重庆人 ,教授 ,研究方向为作物遗传育种。　　转基因玉米在抗病、抗虫、抗逆以及品质改良等方面的应用 ,显著地提高了玉米的品质与产量 ,逐渐被人们接受并迅速推广。在美国 ,转基因作物已成为农作物的主流 ,其中 ,转基因玉米占美国玉米总播种面积的 32 %。这些转基因作物不仅增加了农民的收入 ,而且对于日益凸显的环境问题也有一定的缓解。而国内外玉米的转基因研究严重依赖于 A188、B73、齐 319、P9210和综 31 等少数几个玉米自交系及其衍生系[1～7 ] 。
583　核 农 学 报　2009 ,23 (3) :385～390Journal of Nuclear Agricultural Sciences
目前我国生产上大面积推广的玉米杂交种 ,胚性愈伤
组织的诱导率普遍较低 ,很难为转基因研究提供足够
的受体 ,因而给转基因玉米的研究和推广造成了一定
的困难。
优良的玉米转基因自交系应当具有胚性愈伤组织
诱导率高、克隆能力强、易分化等特点 ,其中胚性愈伤
组织诱导率主要由细胞核基因控制 ,遗传效应复
杂[8～13 ] ,克隆能力和分化率与愈伤组织的生理状况有
关[14 ] 。本试验通过对 3 个优良的玉米转基因自交系
的胚性愈伤组织诱导率、克隆指数及分化率的研究 ,试
图找出影响玉米胚性愈伤组织再生率的主要因素 ,以
与前人的研究结果互为补充 ,建立一个稳定性好、通用
性强的玉米组织培养体系。
1 　材料和方法
111 　供试材料
供试材料为 182599、975212 和 416051 共 3 个玉米
自交系 ,由四川农业大学玉米研究所提供 ,2007 年 4
月和 7 月分别于云南元江实验基地和四川雅安多营农
场各取 3 个自交系授粉 9～15d 后 ,长至 2～3mm 的幼
胚作外植体。
112 　培养基
诱导培养基 :改良 N6 + 2mgΠL 2 ,42D + 0112gΠL 肌
醇 + 1138gΠL 脯氨酸 + 015gΠL 水解酪蛋白 + 30gΠL 蔗
糖 + 017 %琼脂 ,pH518 ;继代培养基 :改良 N6 + 1mgΠL
2 ,42D + 0112gΠL 肌醇 + 0169gΠL 脯氨酸 + 011gΠL 水解
酪蛋白 + 30gΠL 蔗糖 + 20gΠL 甘露醇 + 017 %琼脂 ,
pH518 ;分化培养基 :MS + 110mgΠL KT + 0112gΠL 肌醇 +
011gΠL 水解酪蛋白 + 30gΠL 蔗糖 + 017 %琼脂 ,pH518。
113 　试验方法
11311 　愈伤组织的诱导与培养　3 个自交系自交 9～
15d 后 ,剥取果穗 ,表面用 70 %酒精消毒后 ,于无菌条
件下用解剖刀削去 1Π3 胚乳 ,挑出幼胚 ,盾片向上接种
于改良的 N6 诱导培养基上。28 ℃暗培养 20d 后 ,按
Armstrong 介绍的标准[15 ] ,鉴别愈伤组织的胚性类型并
统计胚性愈伤组织的诱导率。愈伤组织诱导率的统计
方法 : Ⅱ型愈伤组织诱导率 = ( Ⅱ型愈伤组织数Π接种
幼胚数) ×l00 % , ( Ⅱ型 + Ⅰ型) 愈伤组织诱导率 =
[ ( Ⅱ型 + Ⅰ型) 愈伤组织数Π接种幼胚数 ] ×l00 % ( Ⅱ
型 + Ⅰ型愈伤组织的详细解释见 211) 。将 Ⅱ型胚性
愈伤组织转入 N6 继代培养基 ,28 ℃暗培养 ,每 20d 继
代 1 次 ,每次统计克隆指数。克隆指数的统计方法 :克
隆指数 = (继代前愈伤组织的重量/ 继代后愈伤组织的
重量) ×100 %。
11312 　愈伤组织的分化与再生 　取继代 1、2、3、4、5
次的 Ⅱ型愈伤组织分别转接于分化培养基上 ,28 ℃下
光照培养 ,待其现绿。当绿点长成 2～3cm 幼苗时 ,将
幼苗转接于生根培养基上 ,28 ℃下光照培养 3～4 周 ,
将根长至 2cm 左右的幼苗打开瓶盖炼苗 3d 左右 ,移栽
到营养钵中 ,实验室培养两周左右 ,最后移栽到大田。
愈伤组织在分化培养基上生长 20d 左右调查分化率 :
分化率 = (分化成 3cm 左右的幼苗植株数/ 接种的愈伤
总数) ×100 %。
2 　结果与分析
211 　基因型对胚性愈伤组织诱导率的影响
由于多数研究认为基因型是影响胚性愈伤组织诱
导率的一个重要因素[12 ,13 ] ,因此本试验集中研究了 3
个优良自交系的胚性愈伤组织诱导率。Armstrong
等[15 ]将愈伤组织质量分为 3 种类型 : Ⅰ型为乳白色 ,
结构紧密、坚硬不易分开 ,表面有条状突起 ,胚性差不
易长期继代 ; Ⅱ型淡黄色或黄色 ,结构松散、易碎 ,有明
显的颗粒状 ,具有分化胚状体的能力 ,且能长期继代培
养 ,是理想的胚性愈伤组织类型 ; Ⅲ型愈伤组织结构疏
松 ,绵软如絮 ,水渍状 ,白色透明或半透明 ,易褐化死
亡 ,不具有分化能力。本研究中发现 ,部分 Ⅰ型愈伤组
织经过继代培养可以转变成 Ⅱ型愈伤组织。因此在统
计数据时 ,除了统计 Ⅱ型愈伤组织的诱导率外 ,还统计
了 ( Ⅱ型 + Ⅰ型) 愈伤组织的诱导率。从表 1 可以看
出 , 416051 的 Ⅱ型愈伤组织的诱导率最高 , 达到
19167 % ;182599 的 Ⅱ型愈伤组织的诱导率次之 ,为
8144 % ;975212 的 Ⅱ型愈伤组织的诱导率最低 ,仅为
2198 %。u 测验结果表明 3 个自交系的诱导率两两之
间均达到极显著水平 ,其中 182599 与 975212 之间 u =
8157 ,182599 与 416051 之间 u = 6134 ,975212 与 416051
之前 u = 9186。
212 　生长环境对胚性愈伤组织诱导率的影响
生长环境对胚性愈伤组织诱导率的影响主要体现
在当年气候对生长材料的生理状态的影响。云南元江
4 月的气温和四川雅安 7 月的气温相当 ,且两地地力、
土壤及栽培管理措施相同。但是元江的湿度和昼夜温
差略高于雅安 ,由此可能对幼胚生长的生理状态造成
影响。为了减少试验误差 ,使两地取材到接种之间的
间隔天数相同。如表 2 所示 ,182599 的 Ⅱ型胚性愈伤
组织诱导率两地差异不大 ,均在 8 %～9 %之间 ,但 ( Ⅱ
型 + Ⅰ型)愈伤诱导率两地之间差异极显著 (u = 8100
683 核　农　学　报 23 卷
大于 u = 0101) 。416051 的 Ⅱ型胚性愈伤组织诱导率
在元江为 16106 % ,在雅安则为 21138 % ,方差分析显
示两地差异均不显著。975212 的 Ⅱ型胚性愈伤组织诱
导率在元江为 2157 % ,雅安为 6122 % ,方差分析显示 差异显著 (u = 2152 大于 u = 0105) 。但是总体看来 ,取材于雅安的 3 种材料 Ⅱ型愈伤组织诱导率高于取材于元江的材料。说明温度与湿度对材料的胚性愈伤组织具有一定影响。
表 1 　3 个玉米自交系的胚性愈伤组织诱导率
Table 1 　Embryogenic callus induction rate of three maize inbred lines
自交系
inbred lines
愈伤组织数目 (calli number)
Ⅰ型
type Ⅰ
Ⅱ型
type Ⅱ
Ⅲ型
type Ⅲ
接种幼胚数
number of inoculated
immature embryo
Ⅱ型愈伤组织诱导率
induction rate of
type Ⅱcallus( %)
( Ⅱ型 + Ⅰ型)愈伤组织诱导率
induction rate of
type ( Ⅱ+ Ⅰ) callus( %)
182599 748 328 2810 3886 8144 27169
975212 450 60 1503 2013 2198 25134
416051 84 84 259 427 19167 39134
Notes : u0101 = 2158 , u0105 = 1196. The same as the following tables.
表 2 　两种生长环境下自交系的胚性愈伤组织诱导率
Table 2 　Embryogenic callus induction rate of three inbred lines under two different growth conditions
生长环境
Growth
condition
自交系
inbred
lines
愈伤组织 callus
Ⅰ型
type Ⅰ
Ⅱ型
type Ⅱ
Ⅲ型
type Ⅲ
接种幼胚数
number of
immature embryos
Ⅱ型愈伤组织诱导率
induction rate of
Ⅱtype callus( %)
( Ⅱ型 + Ⅰ型)愈伤组织诱导率
induction rate of
( Ⅱ+ Ⅰ) type callus( %)
元江 Yuanjiang 182599 344 205 1832 2381 8161 23106
975212 396 46 1346 1788 2157 24172
416051 33 22 82 137 16106 40115
雅安 Ya’an 182599 404 123 978 1505 8117 35102
975212 54 14 157 225 6122 30122
416051 51 62 177 290 21138 38197
213 　胚大小对胚性愈伤组织诱导率的影响
有研究证明 ,基因型相同时幼胚的大小对愈伤组
织诱导率的影响最大。Ⅱ型胚性愈伤组织的诱导率在
很大程度上体现了一个优良转基因自交系的特点 ,而
Ⅰ型愈伤组织在有些情况下可以转变成 Ⅱ型胚性愈伤
组织。因此 ,本试验研究了胚大小对 Ⅱ型和 ( Ⅱ型 + Ⅰ
型)胚性愈伤组织诱导率的影响。图 1 分别是 182599
(A) 、975212 (B)和 416051 (C) 在胚大小为 115mm、2mm、
215mm、3mm、315mm 时的 Ⅱ型和 ( Ⅱ型 + Ⅰ型) 愈伤组
织诱导率。从图 12A 可以看出 ,182599 在胚大小不同
的情况下 ,其 ( Ⅱ型 + Ⅰ型) 愈伤组织诱导率总体来看
几乎相等。但 Ⅱ型愈伤组织诱导率在胚大小不同时差
异较大 ,当胚为 2 mm 时 ,其诱导率最高 ,为 10163 %。
975212 的 ( Ⅱ型 + Ⅰ型) 愈伤组织诱导率在幼胚为
315mm 时达到最高 35163 % ,但其 Ⅱ型愈伤组织在胚大
小不同时诱导率都较低 ,最高诱导率仅为 3148 % ,并
且此时的胚大小为 215mm (图 12B) ,这与前人报道的
胚大小为 115～2mm 时 Ⅱ型愈伤诱导率最大有一定的
差异 , 原因可能是由于 975212 属于大胚型材料。
416051 (图 12C)在胚大小为 2mm 时 Ⅱ型愈伤组织诱导
率最高 ,达 25112 % ,对该自交系而言 ,在胚大小相同 的条件下 ,其 Ⅱ型愈伤组织诱导率及 ( Ⅱ型 + Ⅰ型) 愈伤组织诱导率均高于 182599 和 975212。214 　取材2接种的时间间隔对胚性愈伤组织诱导率的影响玉米果穗采摘后可在低温放置一段时间后再进行接种 ,从而减少由于反复取材导致的工作量增加。而果穗从采摘到接种的时间间隔长短很可能会影响物质的代谢 ,从而对幼胚的生理状况造成影响 ,进而影响胚性愈伤组织诱导率。从表 3 可以看出 ,182599 从取材到接种间隔 1d 时 , Ⅱ型愈伤组织诱导率为 10110 % ,间隔 2d ,诱导率就降到了 5141 %。975212 从取材到接种间隔 1d 与间隔 2d 的材料 Ⅱ型愈伤组织诱导率差异不大 , ( Ⅱ型 + Ⅰ型)愈伤组织间隔 1d 时诱导率则略高于间隔 2d 的诱导率。416051 从取材到接种间隔 1d 时 ,其 Ⅱ型愈伤组织诱导率为 18190 % , ( Ⅱ型 + Ⅰ型) 愈伤组织诱导率为 42152 % ,间隔 2d 时的 Ⅱ型和 ( Ⅱ型 +Ⅰ型)愈伤组织诱导率为 14190 % 和 35110 %。方差分析显示 ,取材2接种的间隔时间对 182599 Ⅱ型愈伤组织诱导率和 ( Ⅱ型 + Ⅰ型)愈伤组织诱导率的影响均达到显著水平 , u 分别为 3199 和 2160 ,前者达极显著 ;对975212 的 ( Ⅱ型 + Ⅰ型)愈伤组织诱导率的影响达到显
783　3 期 影响玉米幼胚愈伤组织再生率的因素分析
图 1 　幼胚大小对胚性愈伤组织诱导率的影响
Fig. 1 　The effect of immature embryo sizes on
embryogenic callus induction rate
著水平 ,u = 2137 ;而对 416051 愈伤诱导率的影响不显
著。这表明愈伤组织的诱导既受基因型的影响 ,同时
还可能与幼胚的生理状况有关。
215 　基因型对克隆指数的影响
由于通过玉米胚性愈伤组织再生进行基因转化时
需要大量的胚性愈伤组织作为受体 ,因此 ,一个良好的
转基因自交系除了具有较高的愈伤组织诱导率外 ,还
应该具有较高的继代增殖能力 ,即克隆指数。从图 2
可以看出在连续继代 3、4 次后 ,3 个自交系克隆指数
普遍很高 ,基本上都在 300 %以上 ,从继代 1 次到 4 次 ,
克隆指数呈逐代上升的趋势。第 5 代以后 ,愈伤组织
开始分化 ,形成纤细的透明状嫩黄色芽 ,克隆指数开始
下降。不同自交系之间继代不同次数后克隆指数差异
显著 , 182599 幅度最大 ,在继代 4 次时 ,其克隆指数为
400 % ,在 3 个自交系整个继代过程中克隆指数最高 ,
但从第 5 代开始其克隆指数下降。975212 在继代 3 次
时克隆指数与 182599 相同 ,均为 350 % ,但第 3 代之后
克隆指数急速下降 ,下降幅度大于 182599 和 416051 ,
至第 5 代时克隆指数仅为 150 %。416051 的变化趋势
与 975212 类似 ,继代 3 次时的克隆指数高于其他
世代。　　
216 　基因型对分化率的影响
愈伤组织转接到分化培养基上以后 ,第 5 天时开
始出现绿点 ,20d 后愈伤组织颜色变得更加鲜黄 ,体积
明显变大 ,直径约为 115～310cm ,部分愈伤组织已分
化成绿色小苗。
从图 3 可以看出 ,由于基因型的不同 ,各自交系的
分化率有较大差异。随着培养时间的延长 ,182599 分
化率呈现逐步上升的趋势 ,继代 4 次时分化率最高为
100 % ,之后分化率下降 , 到继代 5 次时 , 下降为
8612 %。而 975212 在继代 1 次时分化率为 61154 % ,略
高于 182599 ,随后随着时间的推移 ,分化率逐渐下降 ,
到继代 5 次时分化率下降为 3019 %。416051 则在继代
3 次时分化率最高 ,为 8114 % ,继代 4 次时开始下降 ,
其各世代的分化率均低于 182599 ,略高于 975212。
3 　讨论
311 　影响玉米幼胚胚性愈伤组织诱导率的因素
本研究通过分析影响 3 个优良玉米自交系再生体
系的多个因素 ,发现基因型是影响幼胚胚性愈伤组织
诱导率的主要因素 ,这与前人的研究结果一致。对于
不同的玉米自交系而言 , Ⅱ型愈伤组织诱导率最高时
的胚大小不尽相同 ,115～2mm 大小的胚并不是通用标
准。本试验中的自交系 975212 属于大胚材料 ,它在
215mm 时的诱导率最高。同时 ,材料的生理状态、生活
环境等也影响着胚性愈伤组织诱导率。生长环境对
975212 自交系的影响最大 ,取材于四川雅安时 Ⅱ型愈
伤组织诱导率为 6122 % ,显著高于取材于云南元江时
的诱导率。取材到接种之间的间隔天数除了影响幼胚
的生理状态外 ,还可能影响幼胚的内源激素含量及激
883 核　农　学　报 23 卷
　　　　 表 3 　取材到接种间隔天数对胚性愈伤组织诱导率的影响
Table 3 　The influence of time space from ear picking to inoculating on embryogenic callus induction rate
自交系
inbred
lines
取材2接种间隔天数
time space from ear
picking to incubating
愈伤组织
callus
Ⅰ型
type Ⅰ
Ⅱ型
type Ⅱ
Ⅲ型
type Ⅲ
接种幼胚数
number of
immature embryos
Ⅱ型愈伤组织诱导率
induction rate of
type Ⅱcallus( %)
( Ⅱ型 + Ⅰ型)
愈伤组织诱导率
induction rate of
type ( Ⅱ+ Ⅰ) callus( %)
182599 1 185 164 1274 1623 10110 21150
2 159 41 558 758 5141 26139
975212 1 147 14 408 569 2146 28130
2 249 32 938 1219 2163 23105
416051 1 30 24 73 127 18190 42152
2 42 31 135 208 14190 35110
图 2 　基因型对克隆指数的影响
Fig. 2 　The effect of genotypes on clone index
图 3 　基因型对分化率的影响
Fig. 3 　The effect of inbred lines
on differentiation rate
素之间的协调作用 ,从而影响 Ⅱ型愈伤组织诱导
率[16 ] 。182599 和 416051 取材到接种间隔 1d 的材料的
愈伤诱导率高于间隔 2d 的材料 ,而 975212 则恰恰相
反 ,间隔 1d 的材料的 Ⅱ型愈伤诱导率为 2146 % ,间隔
2d 的为 2163 % ,后者略高于前者 ,原因可能在于材料
在 4 ℃贮存时生理状况和激素水平发生变化所致。四
川农业大学玉米研究所多年研究实践证明 ,182599 确
实是一个优良的、稳定的转基因受体自交系。而
416051 则是该所近年筛选得到的一个愈伤组织诱导率
很高的自交系[17 ] ,其 Ⅱ型愈伤组织的诱导率高达
19167 % ,比 182599 高 2 倍左右。因此 ,该自交系在玉
米转基因研究上具有很大的应用潜力。
312 　影响玉米幼胚胚性愈伤组织克隆指数和分化率
的因素
克隆指数和分化率与愈伤组织的生理状态有关 ,
随愈伤组织培养时间的增加 ,愈伤组织的再生能力降
低 ,导致经过一定世代后 ,克隆指数和分化率下降。这
可能因为继代过程中培养基部分营养物质的缺乏和有
害物质的积累 ,使得愈伤组织的生活力下降 ,具有体细
胞胚发生能力的细胞比例减少 ;或者由于培养时间的
延长使愈伤组织在细胞分裂过程中染色体变异积累 ,
各代遗传稳定性逐渐下降 ,形态发生潜力减弱或丧失。
182599 在继代 4 次时克隆指数最高 ,继代 5 次时开始
下降 ,975212 和 416051 则在继代 3 次时克隆指数最
高 ,从继代 4 次后开始下降。在分化率方面 ,182599 在
继代 4 次时分化率最高 ,为 100 % ;975212 从继代第 1
代开始 ,分化率就逐代下降 ;416051 则是在继代第 3 代
时分化率最高 ,继代第 4 代时分化率缓慢下降。综合
来看 ,416051 的 Ⅱ型愈伤组织诱导率高于 182599 ,但是
182599 各个世代的克隆指数均高于 416051。因此 ,182
599 比较适合在第 4 代时进行外源基因的转化 ,416051
则适合在早代进行外源基因的转化。本试验是国内首
次分析继代次数对分化率的影响 ,对玉米转基因研究
具有很好的参考价值。本试验认为 ,以愈伤组织为受
体做转基因试验时 ,可以根据试验材料的不同 ,继代适
当的次数后进行转化 ,不可一概而论 ,以避免继代次数
过多影响愈伤组织的分化率 ,降低转化效率。从本试
验的结果可以看出 ,416051 和 182599 都是具有潜在利
用价值的优良转基因受体材料。但是 ,由于在目前的
983　3 期 影响玉米幼胚愈伤组织再生率的因素分析
培养条件下 182599 自交系生根率较低 ,而 416051 则分
化率稍低 ,不利于转基因苗的获得 ,为了在以后的转基
因研究中能更好地利用这两个自交系 ,需要分别对其
生根和分化培养基进一步探索 ,以期提高外源基因的
转化效率。
参考文献 :
[ 1 ] 　Ishida Y, SaitoH ,Ohta S ,et al . High rate transformation of maize ( Zea
mays L. ) mediated by Agrobacterium tumefaciens [ J ] . Nature
biotechnology ,1996 ,14 (6) :745～750
[ 2 ] 　Songstad D D , Armstrong C L , Peterson W L , et al . Production of
transgenic maize plants and progeny by bombardment of Hi2Ⅱ immature
embryos [J ] . In Vitro Cellular&Developmental Biology ,1996 ,32 :179～
183
[ 3 ] 　张　荣 ,王国英 ,张晓红 ,赵虎基. 根癌农杆菌介导的玉米遗传转
化体系的建立 [J ] . 农业生物技术学报 ,2001 ,99 (1) :45～48
[ 4 ] 　周逢勇 ,戴景瑞 ,王国英 ,谢友菊 ,崔洪志 ,郭三堆. 玉米自交系
P9210 遗传转化体系的建立 [J ] . 科学通报 ,1998 ,43 (23) :2517～
2520
[ 5 ] 　赵云云 ,周小梅 ,王国英. 玉米组织培养及其转化的研究 [J ] . 山
西大学学报 (自然科学版) ,2006 ,29 (3) :308～312
[ 6 ] 　杨　会 ,王国英 ,戴景瑞. 玉米优良自交系综 3、综 31 的转化研究
[J ] . 农业生物技术学报 , 2001 ,9 (4) :334～337
[ 7 ] 　马　丽. 玉米自交系幼胚高效再生系统的建立 [J ] . 西北农业学
报 ,2007 ,16 (6) :85～89
[ 8 ] 　Carvalho C H S , Bohorova N , Bordallo P N , et al . Type Ⅱ callus
production and plant regeneration in tropical maize genotypes [J ] . Plant
Cell Reports ,1997 ,17 (1) :73～76
[ 9 ] 　Li W ,Sun G,Liu J ,et al . Inheritance of plant regeneration from maize
( Zea mays L. ) shoot meristem cultures derived from germinated seeds
and the identification of associated RAPD and SSR markers [ J ] .
Theoretical and Applied Genetics ,2004 ,108 (4) :681～687
[10 ] 　潘光堂 ,夏燕莉 ,刘玉贞 ,荣廷昭. 玉米幼胚培养胚性愈伤组织诱
导力的遗传变异分析[J ] . 作物学报 , 2003 ,5 (3) :386～390
[11 ] 　宋　芸 ,夏燕莉 ,魏 　昕 ,张志明 ,赵茂俊 ,荣廷昭 ,潘光堂. 四种
玉米幼胚培养性状的基因效应分析[J ] . 中国农业科学 ,2006 ,39
(1) :18～22
[ 12 ] 　Ahloowalia B S. Plant regeneration from callus culture in wheat[J ] . Crop
Science ,1982 ,22 :405～410
[13 ] 　Spencer T M ,Gordon2Kamm W J , Daincs R J ,et al . Biolaphos selection
of stable transformants from maize cell culture [J ] . Theor Appl Genet ,
1990 ,79 :625～631
[14 ] 　杜　刚 ,李启任 ,王 　玲. 水稻组织培养中培养时间与分化感受
态及决定作用形成的关系[J ] . 种子 ,2007 ,26 (7) :26～28
[15 ] 　Armstrong C L , Green C E. Establishment and maintenance of friable
embryogenic maize callus and the involvement of L2proline [J ] . Planta ,
1985 ,164 :207～214
[16 ] 　付凤玲 ,冯质雷 ,渠柏艳 ,李晚忱. 玉米幼胚胚性愈伤组织诱导率
与内源激素含量的关系[J ] . 核农学报 ,2006 ,20 (1) :10～14
[17 ] 　Wang Y, Fu S , Wen Y,et al . Selection of Maize Inbred Lines with high
regeneration and susceptibility to Agrobacterium tumifacien[J ] . Journal of
Genetics and Genomics ,2007 ,34 (8) :749～755
(上接第 384 页)
[15 ] 　王亦菲 , 陆瑞菊 , 周润梅 , 孙月芳 , 黄剑华. 以不结球白菜无菌
苗茎尖诱导筛选耐热变异体[J ] . 上海农业学报 , 2002 , 18 (2) : 6
～9
[16 ] 　王亦菲 , 黄剑华 , 陆瑞菊 , 孙月芳 , 周润梅 , 周志疆 , 谢祝捷 , 刘
成洪. 利用油菜单倍体茎尖筛选抗菌核病变异体 [J ] . 核农学
报 ,2002 , 16 (6) : 355～359
[17 ] 　陆瑞菊 , 王亦菲 , 孙月芳 , 周润梅 , 黄剑华. 利用青花菜单倍体
茎尖筛选耐热变异体[J ] . 核农学报 ,2006 , 20 (5) : 388～391
[18 ] 　Melchers G. Haploid Higher plants for plant breeding [ J ] . Z
Pflanzenphysiol , 1972 , 67 : 19～32
[19 ] 　Zenk M H. Haploids in physiological and biochemical research , In :
Haploids in Higher Plants. Advances and potential . Proceedings of the
First International Symposium [ M] . Guelph , Ontario , Canada , 1974 ,
339～354
[20 ] 　周容仁 , 杨燮荣 ,余叔文. 利用组织培养研究植物耐盐机理与筛
选耐盐突变体的进展[J ] . 植物生理学通讯 , 1989 , (5) : 11～19
[21 ] 　李周岐. 高等植物体细胞突变体离体筛选技术及其在林木抗盐
育种上的应用[J ] . 陕西林业科技 , 1994 , (4) : 50～55
[22 ] 　邹琦主编. 植物生理生化实验指导 [ M] . 北京 : 中国农业出版
社 , 1995 : 32～97
[23 ] 　陈　莉 , 窦秉德 , 白光宏 , 曹俊梅 , 朱大伟 , 张永霞 , 何　晔 , 孙
　瑞 , 侯北伟. 玉米成熟胚和茎尖愈伤诱导及其植株再生能力
的比较[J ] . 新疆农业大学学报 , 2006 , 29 (3) : 46～49
[24 ] 　王昌涛 , 杨爱国 , 高树仁 , 赵 　琦 , 赵玉锦 , 张世煌. 玉米不同
外殖体愈伤组织的诱导及植株的再生研究[J ] . 沈阳农业大学学
报 , 2005 , 36 (5) : 515～518
[25 ] 　周洪生. 甜玉米胚愈伤组织的诱导、继代、植株再生的研究 [J ] .
作物学报 , 1993 , 19 (1) :55～62
[26 ] 　王世玉 , 郑用琏 , 刘　亚 , 赵久然 , 张方东. 玉米成熟胚胚性愈
伤组织的诱导、高频再生及转化的研究[J ] . 作物学报 , 2008 , 34
(3) : 423～428
093 Journal of Nuclear Agricultural Sciences
2009 ,23 (3) :385～390