全 文 :DOI:10.11686/cyxb2015519 http://cyxb.lzu.edu.cn
任海伟,窦俊伟,赵拓,李雪雁,李志忠,李金平,孙文斌,黄娟娟.添加剂对玉米秸秆和莴笋叶混贮品质的影响.草业学报,2016,25(10):142-
152.
REN Hai-Wei,DOU Jun-Wei,ZHAO Tuo,LI Xue-Yan,LI Zhi-Zhong,LI Jin-Ping,SUN Wen-Bin,HUANG Juan-Juan.Effects of additives on the
mixed silage quality of corn stover and asparagus lettuce leaves.Acta Prataculturae Sinica,2016,25(10):142-152.
添加剂对玉米秸秆和莴笋叶混贮品质的影响
任海伟1,2,3,窦俊伟3,赵拓3,李雪雁3,李志忠3,李金平1,2*,孙文斌3,黄娟娟1,2
(1.兰州理工大学西部能源与环境研究中心,甘肃 兰州730050;2.甘肃省生物质能与太阳能互补供能系统重点实验室,
甘肃 兰州730050;3.兰州理工大学生命科学与工程学院,甘肃 兰州730050)
摘要:借鉴青贮原理,将干玉米秸秆与水分含量较高的废弃莴笋叶进行混贮,分析不同添加剂对二者混贮品质的影
响。设置了对照组(CK)、德氏乳杆菌组(LD)、甲酸组(FA)、复合添加剂组(LD+FA)4个处理,每个处理3次重
复,连续贮存50d,每间隔10d对干物质和木质纤维组分含量、发酵品质及微生物数量进行分析,比较筛选适宜的
添加剂。结果表明,50d贮存期内,与CK组相比,FA组的干物质损失最小,且添加甲酸青贮后显著降低了纤维
素、半纤维素和酸性洗涤木质素、氨态氮/总氮含量和青贮pH(P<0.05),乳酸含量显著增加(P<0.05),V-score
评分表现良好;LD组的干物质损失、氨态氮/总氮含量显著高于CK组(P<0.05),青贮pH均高于4.2,V-score评
分表现最差;LD+FA组在前30d的贮存品质较好,之后氨态氮/总氮含量显著增加(P<0.05),贮存品质变差。从
延长贮存时间和提高贮存品质等角度考虑,甲酸可以作为干玉米秸秆与莴笋叶混合贮存的添加剂,但应用过程中
需要注意成本问题。
关键词:干玉米秸秆;莴笋叶;混贮品质;添加剂;德氏乳杆菌;甲酸
*Effects of additives on the mixed silage quality of corn stover and asparagus lettuce
leaves
REN Hai-Wei 1,2,3,DOU Jun-Wei 3,ZHAO Tuo3,LI Xue-Yan3,LI Zhi-Zhong3,LI Jin-Ping1,2*,SUN Wen-
Bin3,HUANG Juan-Juan1,2
1.China Western Energy &Environment Research Center,Lanzhou University of Technology,Lanzhou730050,China;2.Gansu
Key Laboratory of Complementary Energy System of Biomass and Solar Energy,Lanzhou730050,China;3.School of Life Sci-
ence and Engineering,Lanzhou University of Technology,Lanzhou730050,China
Abstract:In this study,the effects of different additives on the mixed ensiling fermentation characteristics of
dry corn stover(DCS)and asparagus lettuce leaves(ALL)were investigated under laboratory conditions.Four
different treatments were measured:control(CK),formic acid(final concentration of 3.0mL/kg material,
fresh weight,FA),Lactobacillus delbrueckii(final concentration of 1×105 cfu/g material,LD)and a combi-
nation of formic acid and L.delbruecki(FA+LD).Silages were prepared in 1.5Llaboratory-scale glass silos
at ambient temperature for 50days.Ensiling samples were removed from the sealed containers for analysis ev-
ery 10days.The results showed that for the FA treatment,the pH value,celulose,hemicelulose and lignin
142-152
2016年10月
草 业 学 报
ACTA PRATACULTURAE SINICA
第25卷 第10期
Vol.25,No.10
* 收稿日期:2015-11-17;改回日期:2016-04-01
基金项目:国家自然科学基金(51366009,51666010),国家高技术研究发展计划(863)(2014AA052801),甘肃省自然科学基金(1506RJYA106,
1508RJYA097)和兰州市科技计划项目(2014-2-20)资助。
作者简介:任海伟(1983-),男,山西孝义人,副教授。E-mail:rhw52571119@163.com
*通信作者Corresponding author.E-mail:lijinping77@163.com
content,and the ammonia nitrogen to total nitrogen ratio(AN/TN)decreased significantly during the ensiling
process(P<0.05),while lactic acid(LA)content increased(P<0.05).After ensiling for 50days,the high-
est LA content,the lowest pH,AN/TN and dry matter(DM)loss were found in the FA treatment,indicating
good fermentation quality.The DM loss and AN/TN of the LD treatment were significantly higher than the
control(P<0.05).The pH value of the LD treatment was higher than 4.2.The silage quality the LD+FA
treatment was higher before 30days than at 40and 50days;the AN/TN increased substantialy after 40days
and was 10%higher than the recommended value for good quality silage.Based on these results,it is suggested
that formic acid can be used as an ensiling additive to improve silage fermentation quality and to prolong the
preservation of DCS.However,it is also necessary to consider the cost of formic acid.
Key words:dry corn stover;asparagus lettuce leaves;mixed silage quality;additives;Lactobacillus del-
brueckii;formic acid
农作物秸秆是动物青贮饲料的重要原料,但收获后的干黄秸秆因其缺乏足够的水分和糖分而无法直接进行
青贮。废弃蔬菜富含水分和糖分,与干黄秸秆在物理结构、养分和水分方面有很强互补性,二者混合贮存既能实
现干秸秆的长期保存,又能减少废弃蔬菜污染[1]。本课题组前期研究发现,干秸秆与废弃白菜在无任何添加剂情
况下能连续混贮60d,但由于原料自身所附着的乳酸菌数量较少,加之水溶性碳水化合物含量不足,导致混贮早
期pH难以快速下降[2],从而影响混贮品质。
合理的添加剂能改善青贮条件,加速发酵过程,降低发酵消耗,提高青贮品质。Aksu等[3]研究发现,添加甲
酸、糖蜜和微生物复合菌剂可显著提高青贮玉米秸秆的乳酸浓度。Acosta等[4]将复合添加剂BSM (Enterococ-
cus faecium,Lactobacillus plantarum 和Lactobacillus brevis)加入到青贮玉米秸秆中,发现青贮pH快速下降,
总有机酸、乳酸和乙酸浓度明显提高,且丁酸、乙醇及氨态氮浓度显著降低。Stocks等[5]将一种复合酶制剂添加
到青贮玉米秸秆中,降低了秸秆中结构性碳水化合物的含量,改善了玉米秸秆的发酵品质。郭艳萍等[6]发现,添
加乙酸能显著提高青贮料的乳酸含量;添加丙酸能显著降低青贮pH和氨态氮含量。刘辉等[7]发现乳酸菌接种
剂、甜菜粕、甲酸钠等单独或组合添加均不同程度地提高了青贮发酵品质,显著降低青贮pH和氨态氮含量。
目前,有关干玉米秸秆和废弃蔬菜混合青贮的研究报道较少。鉴此,本试验选取甲酸和德氏乳杆菌(Lacto-
bacillus delbrueckii)作为青贮添加剂,从干物质、纤维组分、发酵品质和微生物数量等指标考察德氏乳杆菌、甲酸
以及二者组合添加对干玉米秸秆和废弃莴笋叶混贮品质的影响,为该混贮模式的推广奠定基础。
1 材料与方法
1.1 试验材料
干玉米秸秆取自甘肃省定西市陇西县,玉米(Zea mays)品种为豫玉,采集时间2012年10月,摘穗后田间留
置1.5个月后收集,粉碎至0.5~1.0cm备用;废弃莴笋(Lactuca sativa var.angustana)叶采集自兰州市七里河
区职工菜市场,切碎至1~2cm备用。原料主要组分如表1所示。德氏乳杆菌来源于甘肃省工业微生物菌种保
藏中心。
1.2 青贮调制与试验设计
将干玉米秸秆和莴笋叶以11∶27质量比例混合,均匀喷洒事先调配好的添加剂,使混合后的水分含量为
70%左右,然后装填、密封于1.6L青贮瓶内,室温避光贮存。采用对比试验设计,设置了德氏乳杆菌组(LD组,
添加量为1×105 cfu/g)、甲酸组(FA组,添加量为3mL/kg鲜重)[8]、复合组(LD+FA,添加量同上)和对照组
(CK组,无添加剂)4个试验组,每组3个重复,连续贮存50d,共60个青贮瓶。每间隔10d对化学组分、发酵品
质和微生物数量进行分析。试验时间为2012年11月至2013年5月。
341第25卷第10期 草业学报2016年
表1 干玉米秸秆和莴笋叶的化学组分(干物质基础)
Table 1 Chemical composition of dry corn stover and lettuce leaves(dry matter basic) %
原料
Materials
干物质
Dry matter,
DM
中性洗涤纤维
Natural
detergent
fiber,NDF
酸性洗涤
纤维 Acid
detergent
fiber,ADF
酸性洗涤
木质素 Acid
detergent
lignin,ADL
纤维素
Celulose,
CL
半纤维素
Hemicelulose,
HC
综纤维素
Holocelulose,
HoC
可溶性碳水化合物
Water soluble
carbohydrates,
WSC
玉米秸秆Dry corn stover 83.99±0.17 74.05±0.19 55.23±0.21 0.59±0.09 54.64±0.12 18.72±0.20 73.36±0.16 4.06±0.33
莴笋叶Asparagus lettuce leaves 7.94±0.25 22.01±0.11 18.39±0.15 0.25±0.17 18.14±0.16 3.62±0.13 21.76±0.15 13.64±0.28
1.3 样品取样分析
按照四分法准确称取2份有代表性的样品20g,其中1份按1∶9质量比例加入蒸馏水打浆[9],依次通过4
层纱布和定性滤纸过滤,所得浸提液-20℃冷冻保存,用来测定pH、乳酸(lactic acid,LA)、氨态氮(ammonia ni-
trogen,AN)和挥发酸等。另1份样品用于微生物数量分析。剩余样品用来测定干物质(dry matter,DM)、中性
洗涤纤维(natural detergent fiber,NDF)、酸性洗涤纤维(acid detergent fiber,ADF)、酸性洗涤木质素(acid de-
tergent lignin,ADL)和总氮(total nitrogen,TN)等。
1.4 分析方法
DM测定采用105℃烘干恒重法;NDF、ADF、ADL用ANKOM 2000i全自动纤维分析仪测定,纤维素(cel-
lulose,CL)和半纤维素(hemicelulose,HC)通过公式计算得出,二者之和为综纤维素(holocelulose,HoC)。
CL=ADF-ADL,HC=NDF-ADF,HoC=CL+HC[10];TN测定采用凯氏定氮法;AN测定采用苯酚-次氯酸
钠比色法[3]4;pH用Sen Tix 41pH计测定;LA用SBA-40C生物传感器测定;可溶性碳水化合物(water soluble
carbohydrates,WSC)用蒽酮比色法测定;乙酸(acetic acid,AA)、丙酸(propionic acid,PPA)和丁酸(butyric acid,
BA)等挥发酸用SHIMADZE-10A高效液相色谱分析,色谱柱:Shodex Rspak KC-811S-DVB gel Column 30mm
×8mm,检测器:SPD-M10AVP,流动相:3mmol/L高氯酸,流速:1mL/min;柱温50℃,检测波长210nm,进样
量5μL。微生物菌落计数参考国标GB 478935-2010和GB 478915-2010。
1.5 发酵品质评定
采用V-score评分体系[11]对混贮样品的发酵品质进行评分,该评价体系以氨态氮/总氮和乙酸、丙酸、丁酸等
挥发酸含量来评定品质优劣,满分100分,依据表2评分标准用公式Y=YN+YA+YB 计算出Y值,并将混贮发
酵品质评定为3个等级,分别为:良好(Y>80),尚好(60≤Y≤80),不良(Y<60)。
表2 V-score评分标准(干物质基础)
Table 2 Calculate method of V-score(DM basic) %
项目Item V-score:Y=YN+YA+YB 级别 Mark
氨态氮/总氮 AN/TN,XN ≤5 5~10 10~20 >20
YN=50 YN=60-2XN YN=80-4XN YN=0 良好Favorable(Y>80)
乙酸+丙酸 AA+PPA,XA ≤0.2 0.2~1.5 >1.5 尚好 Average(60≤Y≤80)
YA=10 YA=(150-100XA)/13 YA=0 不良Bad(Y<60)
丁酸及以上VFA(C4以上)
BA and above VFA(above C4),XB
0~0.5 >0.5
YB=40-80XB YB=0
XN、XA、XB分别为氨态氮/总氮值(%)、乙酸+丙酸含量(%)、丁酸含量(%)。YN、YA、YB 分别为氨态氮/总氮、乙酸+丙酸、丁酸的得分,Y为总
评分。XN:The value of AN/TN(%);XA:The content of acetic acid+propionic acid(%);XB:The content of butyric acid(%).YN:The score of AN/
TN;YA:The score of acetic acid+propionic acid;YB:The score of butyric acid.Y:The total score.
441 ACTA PRATACULTURAE SINICA(2016) Vol.25,No.10
1.6 数据处理
图1 混贮过程中的干物质含量变化
Fig.1 Changes of dry matter(DM)during mixed ensiling
不同小写字母表示同一处理不同时间差异显著(P<0.05);不同大写
字母表示同一时间不同处理之间差异显著(P<0.05)。The different
lowercase letters indicate significant difference at P<0.05for the same
groups within different time.The different capital letters indicate sig-
nificant difference at P<0.05between different groups at the same
time.
试验数据经Excel 2007初步整理后,利用SPSS
18.0软件对试验数据进行单因子ANOVO模型处理,
结果以平均值±标准差表示,P<0.05代表数据存在
显著性差异。
2 结果与分析
2.1 添加剂对干物质(DM)含量的影响
由图1可知,随着贮存时间的延长,4个试验组的
DM含量均呈下降趋势,其中LD+FA组和FA组的
DM含量显著高于CK组(P<0.05),而LD组则显著
低于CK组(P<0.05),且30d时LD组的DM 损失
率最高达29.98%。另一方面,混贮20和30d时,FA
组的DM含量显著高于LD+FA组(P<0.05),FA
组的DM损失率相对较低;其余时间LD+FA组和
FA组的DM含量差异不显著(P>0.05)。
表3 混贮过程中木质纤维组分含量的变化(干物质基础)
Table 3 Changes of lignocelulose constituents during mixed ensiling(DM basic) %
处理
Treatment
时间
Time(d)
中性洗涤纤维
NDF
酸性洗涤纤维
ADF
纤维素
CL
半纤维素
HC
酸性洗涤木质素
ADL
综纤维素
HoC
对照组CK 10 70.52±0.03Aa 32.37±0.05Ba 27.65±0.03Ca 38.15±0.01Ab 1.87±0.04Ca 55.80±0.02Db
20 70.55±0.05Aa 34.21±0.03Aa 29.23±0.02Aa 36.34±0.02Ba 2.37±0.02Aa 65.57±0.02Aa
30 63.57±0.03Ca 31.50±0.02Ca 28.03±0.03Ba 32.07±0.04Ca 1.55±0.01Db 60.10±0.03Ca
40 67.22±0.01Ba 34.38±0.02Aa 28.92±0.04Aa 32.84±0.03Ca 2.12±0.02Bb 61.76±0.03Ba
50 63.49±0.02Ca 32.78±0.04Ba 28.12±0.01Ba 30.71±0.04Db 1.95±0.03Cb 58.83±0.02Cb
复合组
LD+FA
10 59.01±0.02Ab 25.48±0.03Bc 21.14±0.01Cc 33.53±0.03Ac 1.46±0.02Bb 54.67±0.02Bb
20 47.58±0.04Cd 23.04±0.03Cd 19.87±0.05Dd 24.54±0.06Dc 1.47±0.01Bc 44.41±0.05Dc
30 59.65±0.01Ab 28.73±0.02Ab 25.04±0.04Ab 30.92±0.02Bb 1.63±0.04Ab 55.96±0.03Ab
40 56.03±0.05Bb 27.34±0.05Bc 23.55±0.02Bb 28.70±0.05Cb 1.36±0.03Cc 52.25±0.04Cb
50 47.70±0.04Cc 24.50±0.01Cc 21.13±0.04Cc 23.20±0.01Ed 1.12±0.03Dd 44.43±0.03Dd
德氏乳杆菌组
LD
10 69.82±0.03Aa 30.29±0.03Bb 24.97±0.03Bb 39.53±0.03Aa 1.41±0.03Cb 64.50±0.03Aa
20 67.40±0.02Bb 30.52±0.04Bb 25.41±0.02Bb 36.89±0.04Ba 2.10±0.04Bb 62.30±0.03Ba
30 48.79±0.06Dc 24.01±0.03Cc 20.67±0.05Cd 24.78±0.03Ec 1.28±0.03Dc 45.45±0.04Dc
40 65.27±0.04Ca 32.77±0.02Ab 28.35±0.04Aa 32.49±0.02Da 2.29±0.04Aa 60.84±0.03Ca
50 67.25±0.03Ba 33.33±0.02Aa 28.33±0.02Aa 33.93±0.03Ca 2.10±0.02Ba 62.26±0.02Ba
甲酸组FA 10 56.91±0.02Bb 26.13±0.02Bc 21.80±0.05Cc 30.78±0.05Cd 1.46±0.02Bb 52.58±0.05Bc
20 58.71±0.02Ac 26.18±0.05Bc 22.48±0.03Bc 32.53±0.02Ab 1.42±0.03Bc 55.01±0.03Ab
30 59.30±0.03Ab 27.44±0.03Ab 23.55±0.04Ac 31.86±0.03Ba 1.99±0.03Aa 55.41±0.03Ab
40 47.51±0.01Dc 23.44±0.01Cd 20.58±0.02Dc 24.07±0.02Ec 0.86±0.04Cd 44.65±0.02Dc
50 53.12±0.04Cb 26.53±0.02Bb 23.38±0.03Ab 26.59±0.03Dc 1.37±0.02Bc 49.97±0.03Cc
同列不同小写字母表示相同时间不同处理组间差异显著(P<0.05),同列不同大写字母表示相同处理组不同时间差异显著(P<0.05)。The same
column with different lowercase indicate significant difference at P<0.05between different groups at the same column,the same column with differ-
ent capital letters indicate significant difference at P<0.05for the same groups within different time.
541第25卷第10期 草业学报2016年
2.2 添加剂对木质纤维组分影响
由表3可知,贮存过程中4个试验组的木质纤维组分含量变化趋势复杂,但从总体来看,随着贮存时间延长,
4个试验组的NDF、HC和 HoC含量均呈总体降低趋势(个别实验组除外),CK组、FA组和LD组的CL含量均
呈现增加趋势,而LD+FA组的CL含量则呈先增后减趋势;FA组和LD+FA组的ADL含量呈先增后减的变
化趋势,LD组的ADL含量总体呈升高态势,但CK组的ADL含量变化规律不明显。各试验组间比较可知,除
个别样品外,LD+FA组和FA组的NDF、ADF、CL、HC、ADL和HoC含量均显著低于CK组(P<0.05),LD组
的NDF、ADF、CL和ADL含量在30d之前显著低于CK组(P<0.05),50d时的NDF、HC、ADL和 HoC显著
高于CK组(P<0.05),ADF和CL虽高于CK组,但差异不显著(P>0.05)。
2.3 添加剂对混贮发酵品质的影响
图2 混贮过程中pH的变化
Fig.2 Changes of pH during mixed ensiling
不同大写字母表示同一处理不同时间差异显著(P<0.05);不同小写
字母表示同一时间不同处理之间差异显著(P<0.05)。The different
capital letters indicate significant difference at P<0.05for the same
groups within different time.The different lowercase letters indicate
significant difference at P<0.05between different groups at the same
time.
2.3.1 添加剂对pH的影响 由图2可知,4个试
验组的pH均呈先降后增趋势,混贮30d时的pH最
低。整个混贮周期内,CK组和LD组pH 始终高于
4.0,LD+FA组和FA组pH则低于3.2。另一方面,
混贮10d时,3个添加剂组的pH 均显著低于CK组
(P<0.05),尤其添加有甲酸的LD+FA组和FA组
的pH远低于LD组的pH(4.49,P<0.05)。40d时
4个试验组pH均显著升高(P<0.05),50d时3个添
加剂组的pH仍显著低于对照组(P<0.05)。
2.3.2 添加剂对氨态氮/总氮(AN/TN)的影响
由表4可知,随着贮存时间延长,LD+FA组的 AN/
TN呈逐渐增加趋势,CK组、LD组和FA组的 AN/
TN均呈先增后减趋势,这可能是因为贮存初期分解
蛋白质的梭菌等腐败微生物未被有效抑制使蛋白质发
生分解。LD+FA组(10~30d)和FA组(10~50d)
的AN/TN均显著低于对照组(P<0.05),且FA组
最低;而LD组显著高于CK组(P<0.05),说明添加甲酸有利于减少混贮料中蛋白质的分解,仅添加德氏乳杆菌
(Lactobacillus delbrueckii)则没有起到迅速降低pH、抑制腐败微生物的作用,这一点与图2中pH变化规律一
致。另外,LD+FA组的AN/TN在贮存前20d均低于10%,而FA组整个贮存期内均低于10%(30d时略高),
符合优质青贮料AN/TN的推荐限值[12]。
表4 混贮过程中氨态氮/总氮(AN/TN)的变化
Table 4 Changes of the ratio of ammonia nitrogen to total nitrogen(AN/TN)during mixed ensiling %
处理 Treatment
时间 Time
10d 20d 30d 40d 50d
对照组CK 22.89±0.05Ca 28.17±0.03Db 59.78±0.03Ab 22.51±0.02Cb 20.27±0.04Cb
复合组LD+FA 5.27±0.03Db 5.67±0.02Dc 12.46±0.04Cc 21.44±0.03Bb 23.53±0.02Ab
德式乳杆菌组LD 26.45±0.03Ea 34.17±0.02Da 78.57±0.04Aa 56.11±0.05Ba 50.13±0.03Ca
甲酸组FA 3.08±0.02Db 7.46±0.02Bc 10.89±0.01Ac 5.38±0.04Cc 3.82±0.02Dc
标准误 MSE 0.028 0.037 0.094 0.057 0.049
P值P-value 0.495 0.208 0.481 0.368 0.672
同列不同小写字母表示相同时间不同处理组差异显著(P<0.05),同行不同大写字母表示相同处理组不同时间差异显著(P<0.05)。The same
column with different lowercase indicate significant difference at P<0.05between different groups at the same time,the same row with different cap-
ital letters indicate significant difference at P<0.05for the same groups within different time.
641 ACTA PRATACULTURAE SINICA(2016) Vol.25,No.10
2.3.3 添加剂对有机酸组成及含量的影响 由表5可知,随着混贮时间延长,各组间有机酸变化规律不明显,
但总体上看(除个别样品外),LD组和LD+FA组的LA含量总体呈增加趋势,FA组呈先降后增趋势,CK组呈
下降趋势,4个试验组的AA和BA含量呈逐渐增加趋势;3个添加剂组的PTA和IA含量呈下降趋势,CK组和
LD+FA组的PPA含量呈增加趋势,LD组和FA组的PPA含量呈下降趋势。
在相同时间内(除个别样品外),3个添加剂组的LA、FA、AA和PPA含量均显著高于CK组(P<0.05),且
FA组的LA含量显著高于LD+FA组和LD组(P<0.05),FA组的BA和PTA含量显著低于LD+FA组和
LD组(P<0.05),FA组的AA含量在贮存前30d显著高于LD+FA组和LD组(P<0.05),40~50d仍显著高
于CK组和LD+FA组(P<0.05),但与LD组差异不显著(P>0.05)。LD+FA组和FA组的FA含量显著高
于对照组(P<0.05),LD组的FA含量在前30d与CK组无显著差异(P>0.05),40~50d则显著高于CK组
(P<0.05)。从LA/AA来看,3个添加剂组的LA/AA均显著低于CK组(P<0.05),且LD+FA组的LA/AA
显著高于FA组和LD组(P<0.05)。
表5 混贮过程中的有机酸含量变化(干物质基础)
Table 5 Changes of organic acids contents during mixed ensiling(DM basic) %
处理
Treatment
时间
Time(d)
乳酸
LA
甲酸
FA
乙酸
AA
丙酸
PPA
丁酸
BA
戊酸
PTA
异戊酸
IA
乳酸/乙酸
LA/AA
对照组
CK
10 35.23±0.06Bc 1.23±0.02Bc 10.91±0.02Bd 4.56±0.02Cc 1.26±0.02Cd 0.26±0.03Cc 1.05±0.02Bd 3.23±0.03Aa
20 34.32±0.04Cc 1.34±0.02Ac 11.23±0.03ABc4.62±0.02Bd 1.34±0.03Bc 0.29±0.03Bc 1.11±0.03Ad 3.06±0.01Ba
30 36.23±0.02Ac 1.29±0.01Bc 10.98±0.04Bd 4.71±0.03Ac 1.39±0.03ABd 0.32±0.04Ab 1.05±0.02Bc 3.30±0.02Aa
40 33.32±0.03Dc 1.36±0.03Ac 10.89±0.03Bc 4.66±0.03Bd 1.41±0.02Ad 0.33±0.01Ab 1.03±0.02Cc 3.06±0.01Ba
50 34.35±0.01Cd 1.12±0.01Cc 11.65±0.04Ac 4.65±0.02Bd 1.45±0.04Ad 0.32±0.02Ab 1.06±0.03Bb 2.95±0.04Ca
复合组
LD+FA
10 40.12±0.03Bb 1.54±0.03Aa 13.98±0.03Cc 7.65±0.02Bb 2.03±0.03Bb 0.49±0.03Aa 1.32±0.02Aa 2.87±0.01Bb
20 39.60±0.02Cb 1.56±0.02Aa 14.23±0.02Bb 6.98±0.03Cc 2.01±0.04Ba 0.39±0.02Bb 1.29±0.02Ba 2.78±0.01Cb
30 39.38±0.03Cb 1.49±0.05Ba 13.65±0.02Cc 7.32±0.02Bb 1.98±0.02Bb 0.38±0.02Bb 1.35±0.03Aa 2.88±0.02Bb
40 40.01±0.02Bb 1.52±0.03ABa13.54±0.03Cb 6.74±0.01Cc 2.23±0.02Bb 0.37±0.03Bb 1.31±0.04Ba 2.95±0.01Ab
50 45.65±0.03Aa 1.32±0.02Cb 16.32±0.01Ab 9.21±0.02Aa 2.65±0.03Aa 0.31±0.04Cb 1.11±0.03Ca 2.80±0.03Bb
德式乳
杆菌组
LD
10 40.65±0.03Cb 1.32±0.03Cb 14.98±0.02Cb 9.45±0.04Aa 2.32±0.02Ba 0.52±0.01Aa 1.23±0.01Ab 2.71±0.02Ac
20 41.32±0.02Bb 1.41±0.02Bb 15.34±0.03Ba 9.16±0.01ABa 2.12±0.02Da 0.52±0.03Aa 1.03±0.02Cc 2.69±0.02Ac
30 40.26±0.01Cb 1.33±0.04Cc 15.23±0.04Bb 8.98±0.03Ba 2.23±0.01Ca 0.49±0.03Ba 1.16±0.04Bb 2.64±0.04Bc
40 41.31±0.04Bb 1.45±0.02Bb 15.32±0.01Ba 9.23±0.05Aa 2.45±0.03Aa 0.54±0.03Aa 1.12±0.02Bb 2.70±0.04Ad
50 42.32±0.03Ac 1.65±0.01Aa 16.98±0.02Aa 6.36±0.02Cc 2.22±0.02Cc 0.42±0.03Ba 1.11±0.05Ba 2.49±0.02Cd
甲酸组
FA
10 45.33±0.01Aa 1.53±0.01Ba 16.65±0.03Ba 7.98±0.01Bb 1.70±0.01Cc 0.33±0.02Bb 1.12±0.04Ac 2.72±0.03Cc
20 44.31±0.02Ba 1.59±0.05Ba 15.98±0.01Ca 8.23±0.04Ab 1.81±0.03Bb 0.35±0.04Bb 1.11±0.02Ab 2.77±0.02Bb
30 44.30±0.03Ba 1.62±0.03Aa 16.45±0.04Ba 7.56±0.02BCb 1.79±0.03Bc 0.36±0.03Bb 1.03±0.05Bc 2.69±0.01Cc
40 43.32±0.04Ca 1.55±0.03Ba 15.32±0.03Ca 7.32±0.02Cb 1.77±0.02Bc 0.39±0.04Ab 1.13±0.02Ab 2.83±0.01Ac
50 44.35±0.02Bb 1.23±0.02Cbc 17.29±0.03Aa 7.65±0.03Bb 2.32±0.02Ab 0.23±0.02Cc 1.05±0.03Bb 2.57±0.02Dc
表中同列不同小写字母表示相同时间不同处理组差异显著(P<0.05),同列不同大写字母表示相同处理组不同时间差异显著(P<0.05)。The
means in the same column with different smal letters indicate significant difference at P<0.05between different treatments,the means in the same
column with different capital letters indicate significant difference at P<0.05within different treatments.
2.3.4 混贮发酵品质的V-score评分 由表6可知各试验组的评分结果差异显著。整个贮存期内,CK组和
LD组的评定结果均为不良,FA组的V-score评分均高于80分,表现良好。LD+FA组混贮前20d时评级为良
好,30d时尚好,40d后下降为不良。
741第25卷第10期 草业学报2016年
表6 不同试验组的V-score评分
Table 6 V-score evaluation of different silages
处理 Treatment
时间 Time
10d 20d 30d 40d 50d
对照组CK 不良Bad 不良Bad 不良Bad 不良Bad 不良Bad
复合组LD+FA 良好Favorable 良好Favorable 尚好 Average 不良Bad 不良Bad
德式乳杆菌组LD 不良Bad 不良Bad 不良Bad 不良Bad 不良Bad
甲酸组FA 良好Favorable 良好Favorable 良好Favorable 良好Favorable 良好Favorable
2.4 添加剂对微生物数量变化的影响
由表7可知,4个试验组在贮存前20d均有较高数量的乳酸菌,且3个添加剂组的乳酸菌数量显著高于对照
组(P<0.05),LD组和LD+FA组乳酸菌数量较高。30d后4个试验组的乳酸菌数量均显著降低(P<0.05)。
CK组、LD+FA组和LD组的酵母菌数量呈先降后升趋势,其中LD+FA组30d时的酵母菌数量最低,CK组和
LD组40d时最低,随后数量显著增加(P<0.05);FA组则呈先增后降趋势,20d时最高,之后显著下降(P<
0.05)。CK组的霉菌数量随时间延长而呈先增后减趋势,30d时数量最多,40d后显著下降(P<0.05);而FA
组和LD组的霉菌在贮存40d内均被有效抑制,50d时显著升高(P<0.05);LD+FA组的霉菌数量则逐渐减
少。另外,20~40d时LD组和FA组的霉菌数量显著低于CK组和LD+FA组(P<0.05)。
表7 混贮过程中的微生物数量的变化
Table 7 The amount changes of microorganism during mixed ensiling log10cfu/g FM
处理
Treatment
微生物种类
Microbe species
时间 Time
10d 20d 30d 40d 50d
对照组CK 乳酸菌LAB 6.15Ac 6.04Ac 5.61Bb 5.01Cb 4.98Cd
酵母菌Yeast 6.01Aa 5.93Aa 5.96Aa 5.07Cb 5.66Ba
霉菌 Mould 3.66Db 4.48Bb 5.30Aa 4.00Ca 3.77Dc
复合组LD+FA 乳酸菌LAB 6.48Ba 6.95Aa 5.60Cb 5.30CDa 5.03Da
酵母菌Yeast 5.90Aa 5.48Cb 5.00Db 5.75Ba 5.67Ba
霉菌 Mould 5.51Aa 5.00Ba 4.60Cb 4.11Da 4.32Da
德式乳杆菌组LD 乳酸菌LAB 6.48Ba 6.90Aa 5.70Ca 5.30Da 4.98Ea
酵母菌Yeast 4.62Ab 4.83Ac 3.75Bc 3.63Bc 3.81Bb
霉菌 Mould 3.72Bb 3.62BCc 3.86Bc 3.53Cb 4.38Aa
甲酸组FA 乳酸菌LAB 6.29Bb 6.45Ab 5.66Ca 5.00Db 4.77Eb
酵母菌Yeast 4.25Bb 4.75Ac 3.69Cc 3.52Dc 3.60Cc
霉菌 Mould 3.69Cb 3.54CDc 3.83Bc 3.45Db 4.18Ab
表中同列不同小写字母表示相同时间不同处理组差异显著(P<0.05),同行不同大写字母表示相同处理组不同时间差异显著(P<0.05)。The
same column with different lowercase indicate significant difference P<0.05between different groups at the same time,the same row with different
capital letters indicate significant difference P<0.05for the same groups within different time.LAB:Lactic acid bacteria.
3 讨论
3.1 添加剂对贮存过程pH和AN/TN的影响
根据青贮原理,将干玉米秸秆与莴笋叶进行混贮,实质是利用附着乳酸菌在厌氧环境中分解糖类产生乳酸,
使青贮pH快速下降并抑制有害微生物活动,达到长期保质贮存之目的[13]。若混贮发酵生成的乳酸含量偏低,
pH下降缓慢,则无法有效抑制腐败微生物活性,故pH是直接决定青贮品质的重要因素。本试验中3个添加剂
841 ACTA PRATACULTURAE SINICA(2016) Vol.25,No.10
组贮存10d时的pH均显著低于CK组(P<0.01),尤其加入甲酸使FA组和LD+FA组在50d贮存期内pH
始终低于优良青贮pH范围3.5~4.5[13]。高pH(>4.5)是发酵失败的标志之一[14],CK组和LD组pH接近或
高于4.5,发酵效果不理想。尽管德氏乳杆菌为同型乳酸发酵,但LD组pH(4.0~4.5)仍显著高于FA组和LD
+FA组,原因可能是贮存原料中缺乏足够含量糖分等营养物质,使乳酸菌及其代谢产物乳酸含量较少,不足以
迅速降低pH。另一方面,乳酸菌实际添加效果还受到植物本身附着的乳酸菌数量、可溶性糖利用效率及环境等
因素影响。仅从pH角度看,FA组和LD+FA组均能实现良好青贮,但郭旭生等[15]认为pH不宜作为青贮品质
评价的统一标准,发酵品质还受原料种类及其组分等影响。
氨态氮/总氮(AN/TN)是衡量青贮品质优劣的又一重要指标。王永新等[16]发现甲酸能显著改善白三叶
(Trifolium repens)青贮发酵品质,极显著降低青贮pH、乙酸和氨态氮含量。刘玲等[17]认为甲酸能极显著降低
青贮高冰草(Agropyron cristatum)的pH和氨态氮含量(P<0.01),提高乳酸生成量。邓海军等[18]也认为甲酸
能极显著降低青贮紫花苜蓿(Medicago sativa)的pH和氨态氮/总氮(P<0.01)。本试验中,LD+FA组和FA
组的AN/TN均显著低于CK组(P<0.05),且FA组在整个混贮期间(30d时略高于10%)的AN/TN均低于
优质青贮的AN/TN推荐值10%[12]。甲酸是一种发酵抑制剂,通过直接酸化作用迅速降低青贮pH值,有利于
限制植物酶活性和蛋白质的降解损失,该结果与高文俊等[19]、秦立刚等[20]和张晓庆等[21]研究结果一致。另据报
道,青贮料的蛋白质降解与pH密切相关,pH小于4.2时蛋白质分解为较稳定的氨基酸,并不造成损失。但若
pH高于4.2时,腐败菌的活动会使氨基酸分解成非蛋白氮(氨、胺等),造成蛋白质损失[13]。试验中LD组的pH
较高,肠细菌和梭菌等不良微生物的繁殖未能被有效抑制,导致蛋白分解损失和AN/TN过高,降低了发酵品质。
3.2 添加剂对贮存过程有机酸组成及含量的影响
乳酸、乙酸、丙酸和丁酸含量是评价发酵品质优劣的重要指标。试验中3个添加剂组的乳酸、乙酸和丙酸含
量均显著高于CK组(P<0.05),乳酸含量高意味着混贮pH下降快,其干物质和能量流失少[22]。乙酸具很强的
抗真菌能力,能有效抑制青贮料有氧暴露阶段酵母、霉菌的生长繁殖[23]。LA/AA反映了青贮过程同型发酵的程
度,其值越高表明同型发酵的程度越高[24]。3个添加剂组的LA/AA显著低于CK组(P<0.05),说明干玉米秸
秆与莴笋叶自然混贮过程中同型乳酸发酵程度较强,尽管甲酸能使pH迅速下降,但抑制腐败菌的同时也会对原
料自身附着的乳酸菌产生抑制。添加乳酸菌目的是调节青贮料内微生物区系,增加青贮发酵的乳酸菌数量,提高
乳酸生成量,迅速降低青贮料pH。但乳酸菌添加效果也不总是积极的。Muck等[25]总结了230个添加乳酸菌的
对比试验,其中能降低青贮饲料pH、促进乳酸发酵的占60%。试验中LD组未产生预期的促进乳酸发酵、pH快
速下降效果,可能是由于养分缺乏而未能使德氏乳杆菌充分生长繁殖,导致同型乳酸发酵未能得到强化。但3个
添加剂组的总有机酸含量提高,有利于避免二次发酵和提高有氧稳定性。刘晶晶等[14]和 Weinberg等[26]都认为
同型发酵乳酸菌会降低青贮料的有氧稳定性。Shao等[27]研究发现,青贮早期同型乳酸菌发酵占支配地位,到发
酵后期向异型乳酸发酵转变,因为异型乳酸菌对乙酸和pH 有更强的耐受力。CK组、FA组和LD+FA组的
LA/AA呈现先增后减趋势,3组分别在30、40和40d开始显著下降,说明混贮前期以同型乳酸发酵为主,后期
异型乳酸菌的活性开始增强,结果与Shao等[27]相似。LD组的LA/AA逐渐减小是因为青贮过程中葡萄糖是第
一发酵底物,优先被利用。当葡萄糖不足时,青贮微生物区系受到影响,异型乳酸菌的活性可能被促进[27],LD组
中较高的乙酸含量也印证了这一点。丙酸的酸性最弱,但其抗真菌活性最强,可抑制酵母菌生长,减少氨产生。
FA组的丙酸含量显著高于CK组(P<0.05),而AN/TN却显著低于CK组(P<0.05),恰能说明添加甲酸有效
抑制了蛋白质分解。丁酸是梭菌等不良微生物将青贮发酵已生成的乳酸或原料中的糖分解而成,同时伴随着能
量损失和蛋白质分解[15]。4个试验组的丁酸含量均略高于优质青贮的丁酸含量推荐值(<1%DM),其中FA组
的丁酸含量显著低于LD+FA组和LD组(P<0.05),说明甲酸对腐败梭菌发酵的抑制效果更明显,而德氏乳杆
菌因其未能促进乳酸发酵使得梭菌无法得到有效抑制。有报道认为丁酸含量可以直接反映青贮品质的好坏,丁
酸含量高于1%DM则意味着发酵腐败变质,但试验中FA组的V-score评分始终处于良好状态,说明发酵品质
的好坏是pH、乳酸、挥发酸组成和AN/TN等多种因素综合作用的结果。另外,FA组的丁酸含量略高于优质青
贮推荐值(<1%DM),这可能是低水平的甲酸添加量所致。荣辉等[28]认为4.4mL/kg以上甲酸添加量能有效
941第25卷第10期 草业学报2016年
地保存象草(Pennisetum purpureum)的营养物质。
3.3 添加剂对微生物数量的影响
50d混贮期间,除个别时间外,3个添加剂组的乳酸菌数量均显著高于CK组(P<0.05),说明添加剂的加入
有利于乳酸菌的繁殖和乳酸生成,但乳酸本身并不是高效的抗真菌剂,故霉菌和酵母菌的抑制还需要甲酸、乙酸
和丙酸等有机酸的协同作用。在自然发酵的青贮中,甲酸具有强烈的抗菌作用,乙酸是抗酵母菌的有效因子,丙
酸是有效的抗霉菌剂,可预防二次发酵[29-30]。从表5可知,3个添加剂组的甲酸、乙酸和丙酸三者之和远高于CK
组,3种酸能有效协同抑制腐败微生物的繁殖,其中FA组的酵母菌和霉菌数量最低。因为甲酸作为一种发酵抑
制剂,能够直接抑制或间接改善青贮发酵品质,从而抑制腐败微生物的生长。另一方面,LD组的乳酸菌数量最
高,这得益于添加剂德氏乳杆菌的生长繁殖。LD+FA组的乳酸菌数量与LD组相同,说明甲酸与德氏乳杆菌同
时添加会抑制乳酸菌的生长繁殖,缺乏组合效应,不适宜同时添加[13]。另外,3个添加剂组的霉菌和酵母菌在发
酵中前期抑制明显,40d或50d时数量显著增加,这可能与贮存后期青贮pH升高、甲酸作用弱化等因素有关。
荣辉等[28]研究发现,与较高添加量(4.4和6.6mL/kg)相比,低添加量甲酸(2.2mL/kg)的酸化作用随青贮时间
的延长而减弱,pH升高,对微生物抑制作用下降。因此,发酵后期的霉菌和酵母菌数量增加还可能与甲酸添加
量有关。
3.4 添加剂对干物质保存和木质纤维组分含量的影响
FA组和LD+FA组干物质含量始终高于CK组和LD组,干物质损失率较小,因为添加甲酸后青贮pH较
低,有效抑制了有害菌生长,减少了青贮早期植物呼吸作用对营养物质的消耗,更好地保留了其营养成分。蒋慧
等[23]研究认为低pH能减少DM损失和能量流失。王永新等[16]也认为添加甲酸能显著提高白三叶青贮料的干
物质保存率。
从木质纤维组分来看,与CK组相比,3个添加剂组的 NDF和 ADF含量均显著降低(除个别时间,P<
0.05),这与张晓庆等[21]添加甲酸能降低青贮麻叶荨麻Urtica cannabina)中的纤维组分(NDF和 ADF)结果一
致。另一方面,FA组和LD+FA组的纤维素、半纤维素(能源物质)和木质素含量显著低于CK组,原因在于添
加的甲酸使纤维组分部分降解转化为糖,供微生物代谢利用生成乳酸和其他有机酸,同时长时间酸性环境也使得
木质素组分部分软化溶解[23,31]。LD组的纤维素和半纤维素含量较高,说明同型发酵乳酸菌的添加有利于能源
物质的保存。王晓娟等[32]认为ADL对CL和 HC等碳水化合物既有物理性阻碍,又有牢固共价键束缚,使其对
酶或微生物作用有屏障保护。FA组的ADL相对较少,弱化了对纤维素等碳水化合物的束缚,有利于提高能源
转化效率。总之,添加甲酸能够有效减少DM损失,降低ADL含量,这与王莹等[33]研究结果一致。
4 结论
干玉米秸秆与莴笋叶自然混贮50d时品质较差,添加德氏乳杆菌后的混贮效果也不理想,同时添加甲酸和
德氏乳杆菌则能使二者连续混贮30d不变质,单独添加甲酸则能进一步延长贮存周期至50d,且能获得良好的
混贮品质。因此,甲酸可以用作干玉米秸秆与莴笋叶混合贮存的添加剂,但考虑到甲酸的使用成本和继续改善混
贮品质等因素,还需深入研究干玉米秸秆与其他高糖分、高水分原料的混贮过程,以期进一步延长干秸秆的贮存
时间,提高其贮存品质和饲料价值。
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《中国种业》征订启事
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