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提取野生向日葵 DNA 的新方法
许素莲1 　朴铁夫2 　赵林淑3
(11 长春理工大学 ,吉林 长春　130022 ;21 吉林农业大学 ,吉林 长春　130118 ;31 吉林大学 ,吉林 长春　130022)
摘 　要 :本文报道了提取野生向日葵菊芋 DNA 的方法。
关键词 :野生向日葵 ;菊芋 ;DNA
收稿日期 :2001203226
作者简介 :许素莲 (1951～) ,女 ,吉林图门人 ,长春理工大学副教授 ,从事分析化学和生物化学研究
由于野生向日葵抗病、抗逆性强 ,所以利用野生向日葵的 DNA 转化栽培向日葵 ,是作物分子遗传育种研
究的一个重要方面。
1 　提取方法
将新鲜菊芋嫩叶 50g 冲洗干净 ,用吸水纸吸干 ,去掉叶脉 ,剪碎后在 - 20 ℃条件下冷冻 48h。将冷冻后的
菊芋叶组织加入研磨液 (wΠv ,含 014M NaCl ,014M 柠檬酸钠盐 ,011M EDTA ,1 %的 SDS ,pH 为 710) 研磨 5min 成
糊状物 ,然后倒入三角瓶内 ,加入等体积的氯仿2异戌醇混合液 (24∶1) ,摇晃 1min 使其成为乳浊液。用超速离
心机将乳浊液在 4000vpm转速下离心 5min ,用吸管吸取上清液 ,倒入三角瓶中 ,在 72 ℃温水浴锅中保温 5min ,
取出在室温条件下冷却。再加入等体积的氯仿2异戌醇 (24∶1vΠv)混合液 ,摇晃 1min ,使其成为乳浊液。用超速
离心机在 4000rpm转速下离心 5min ,用吸管吸取上层清液 ,放入三角瓶中 ,再放入氯仿2异戌醇混合液 (24∶1) ,
并摇晃 1min ,使其成为乳浊液。再用超速离心机在 4000rpm转速下离心 5min ,用吸管吸取上清液放入烧杯中。
在放入上清液的烧杯中 ,放入 3 倍于此溶液体积的预冷无水乙醇 (无水乙醇置于 - 20 ℃条件下 ,72h) 。用玻璃
棒轻轻搅动 ,此时会看到沉淀的核酸缠绕在玻璃棒上。用滤纸过滤放入乙醇的上清液 ,收集附着在滤纸上的
核酸胶状物。将此核酸胶物溶于 011ssc 溶液中 (含 01015M NaCl ,010015M柠檬酸二钠盐 ,pH710) ,待全部溶解
后 ,再加入 1Π10 体积的 10 ×SSC使其最终浓度为 1 ×SSC。在溶于 1SSC的核酸溶中加入 RNA 酶溶液 (用 0115M
NaCl , pH510 溶液溶解 ,RNA 酶最终浓度为 70μgΠml) ,在 37 ℃水浴下保温 30min ,以除去 RAN。再加入等体积氯
仿2异戌醇 (24∶1vΠv)混合溶液 ,轻轻摇晃 1min ,然后在 4000rpm 转速下离心 6min ,收集上层 DNA 水溶液。取上
清液加入预冷的二倍体积的无水酒精 (同时轻微搅拌) ,用玻璃棒卷起 DNA 纤丝 ,然后用 70 %酒精洗数次 ,将
获得的 DNA 溶入 15ml 的 1SSC中 ,置于冰箱中备用。
2 　讨论和小结
采用本方法可较快地获得野生向日葵菊芋的 DNA ,方法简便 ,重复性好 ,具有较好的实用价值。提取中
氯仿和异戌醇的作用是去掉菊芋细胞中染色体上附着的蛋白质 ,经过多次重复 ,便于核酸的析出。
研磨液中的 EDTA 可以鳌合二价钠金属离子 ,使用 SDS(十二烷基磺酸钠) 有助于植物细胞壁的破碎和细
胞中染色体的分离。使用 RNA 酶可以有效地除去溶液中的 RNA ,进一步保证了 DNA 的纯度。
INTRODUCING A METHOD OF EXTRACTING DNA FROM WILD SUNFLOWER
XU Su2lian1 　PIAO Tie2fu2 　ZHAO Lin2shu3
(1. Changchun Science and Engineering University , Changchun , Jilin prov . 　130022 ; 2. Jilin Agricultural University ,
Changchun Jilin prov . 　130018 ; 3. Jilin University . Changchun Jilin prov. 　130022)
87 Acta Agriculturae Nucleatae Sinica
2003 ,17 (1) :78