全 文 ：文章编号 :100028551 (2007) 042333206
小麦 SSCP 分子标记体系的优化
余桂红1 ,2 　唐克轩1 　马鸿翔2 　周淼平2 　张　旭2 　任丽娟2 　陆维忠2
(11 上海交通大学复旦 - 交大 - 诺丁汉植物生物技术研发中心 ,上海　200030 ; 21 江苏省农业科学院农业生物技术研究所 ,江苏 南京　210014)
摘　要 :SSCP 技术易受上样缓冲液、变性的时间及温度、电泳条件等诸多因素的影响。本研究对上样缓
冲液、变性的时间及温度、电泳条件等影响因素进行了研究 ,结果显示 :上样缓冲液中不添加甘油、用量
为 PCR 产物体积的 115～3 倍、变性温度 98 ℃、变性时间 10～15min、电泳缓冲液为 015 ×TBE , 常温下恒
功率 80W(2167WΠcm) 电泳 2 h 左右 ,单链 DNA 条带清晰 ,易于识别。
关键词 :小麦 ;SSCP ; 优化
OPTIMIZATION OF THE CONDITIONS AFFECTING SSCP TECHNIQUE IN WHEAT
YU Gui2hong1 ,2 　TANG Ke2xuan1 　MA Hong2xiang2 　ZHOU Miao2ping2
ZHANG Xu2 　REN Li2jian2 　LU Wei2zhong2
(11 Fudan2SJ TU2Nottingham Plant Biotechnology R&D Center , Shanghai Jiao Tong University , Shanghai 　200030 ;
21 Institute of Biotechnology , Jiangsu Academy of Agricultural Science , Nanjing , Jiangsu 　210014)
Abstract :Single Strand Conformation Ploymorphism (SSCP) technique is easy to be affected by a good many factors such as
loading buffer , denaturalization temperature and time , and electrophoresis factors. The influences of loading buffer ,
denaturalization temperature and time and electrophoresis factors ( electrophoresis temperature , electrophoresis buffer and
electrophoresis power) on SSCP technique were studied in wheat . The results were as follows when volume of the loading buffer
without glycerol was 115～3 times of the volume of the PCR buffer ; denaturalization temperature was 98 ℃; denaturalization
time was 10～15 minutes ; electrophoresis buffer was 015 ×TBE ; the electrophoresis temperature was about 25 ℃; the
electrophoresis power was 80W(2167WΠcm) , the bands of the Single Strand DNA was clear and easy to read.
Key words :wheat ; SSCP ; optimization
收稿日期 :2006212208
基金项目 :国家自然科学基金项目 (30671302)
作者简介 :余桂红 (19712) , 女 , 湖北随州人 , 硕士 , 助理研究员 , 从事小麦分子标记和转基因研究。Tel : 025284390293 ,13813979832 ; E2mail :
yuguihong @sjtu. edu. cn
通讯作者 :马鸿翔 (19662) ,男 ,江苏宝应人 ,博士生导师 ,研究员 ,从事小麦遗传育种研究。Tel :025284390300 ; E2mail : mahx @jaas. ac. cn　　SSCP(Single Strand Conformation Ploymorphism) 技术即 DNA 单链构象多态性技术 ,其原理是 DNA 分子中单个碱基的变化 ,可造成 DNA 单链构象的巨大变化。DNA 双链经变性后产生单链 ,DNA 单链在中性凝胶上由于分子内的氢键等二级键的作用 ,形成二级结构 ,从而产生单链构象。相同长度不同构象的 DNA 单链的电泳速率不同 ,电泳后在胶板上的位置不同 ,从而将在双链水平无法检测的 DNA 微小变异在单链水平上检测出来。Orita 等[1 ,2 ] 在 1989 年首先建立该方法 ,该方法可检测出微小的 DNA 突变或变异[3 ,4 ] 。目前该方法 在医学领域应用较多[4 ,5 ] ,在小麦的遗传学研究中的应用报道极少。SSCP技术自建立以来 ,经过十几年的发展 ,方法不断完善 ,操作也日趋简便 ,对突变和变异检测的敏感性也有了很大的提高。但因为 DNA 突变或变异的位置和性质不同 ,DNA 单链在非变性聚丙烯酰胺凝胶中的构象会产生很大的变化 ,因此 ,虽然不同的学者建立了各自最佳的 SSCP 技术条件 ,但由于 SSCP 技术易受上样缓冲液、变性的时间及温度、电泳条件等因素的影响 ,目前尚无一套在不同物种中通用的 SSCP 方法和实
333　核 农 学 报　2007 ,21 (4) :333～338Journal of Nuclear Agricultural Sciences
验条件[6 ] 。本文对小麦 SSCP 技术的影响因素进行了
研究 ,以期通过对小麦 SSCP 技术体系的优化来提高小
麦 SSCP 标记的稳定性与灵敏性。
1 　材料与方法
111 　试验材料
小麦材料为宁 7840、Clark、中国春、N3BT3A、
N3AT3B 和 N3DT3A ,于 2005 年秋至 2006 年春种植于
江苏省农业科学院农业生物技术研究所试验网室内。
112 　方法
11211 　DNA 提取 　采用小麦幼苗叶片 ,参照 Saghai2
Maroof 等[7 ]报道的 CTAB 法进行。
11212 　引物设计 　根据 NCBI 数据库内的小麦的 EST
序列设计引物 ,采用 Perpearl 软件设计 ,长度为 20～
24bp。共使用 3 对引物 ,第 1 对序列 ,正向引物 , 5′
ACAGTCATCGGCAAGATTCC3′, 反 向 引 物 , 5′
ACCCGGAATATCAATCACCA3′,第 2 对序列 ,正向引物 ,
5′GCTCCTAGCAAGTATGTCCC3′, 反 向 引 物 , 5′
TTTGCAGAGGTCCTAGATCCA 3′,第 3 对序列 ,正向引
物 , 5′GGAGAATTCCCTATGTGGTG 3′, 反向引物 , 5′
TCATCATCGTATTGCAAAGG3′。
11213 　PCR 反应 　PCR 反应体积为 20μl。反应混合
液包括 1 ×buffer ,115mmolΠL MgCl2 , 210mmolΠL dNTPs ,
250μmolΠL SSCP 引物 ,50～100ng 模板 DNA ,1U Taq 酶。
反应程序为 :94 ℃,5min ; 94 ℃45s ,55 ℃～70 ℃, 45s ,
72 ℃, 45s ,40 个循环 ;72 ℃,10min。反应在 PE 公司的
GeneAmp PCR System 9600 上进行。
11214 　SSCP 分析 　上样缓冲液含有 98 %的去离子甲
酰胺 ,10mmolΠL EDTA (pH 810) ,01025 %二甲苯氰 FF
和 01025 %溴酚蓝 ,加或不加 5 %的甘油 ,上样缓冲液
与 PCR 产物混匀后 ,在 PCR 仪上于 95 ℃或 98 ℃变性 3
～25min ,取出后置于碎冰上 5min 以上 ,上样 6μL 于
12 %的非变性聚丙烯酰胺凝胶上 (交联度为 29 :1 ,胶
尺寸为 320mm ×300mm ×014mm) ,电泳缓冲液为 015 ×
TBE或 1 ×TBE ,电泳槽为北京六一仪器厂的 DYCZ2
20C型。在 4 ℃或常温下电泳 ,电泳功率为 80、60 或
40W ,电泳完毕进行银染 ,并观察照相。
2 　结果与分析
211 　上样缓冲液对 SSCP 的影响
上样缓冲液选用测序胶的上样缓冲液 ,含有甲酰
胺 ,兼有变性和指示的作用。本试验对比了在上样缓
冲液中添加 5 %的甘油和不添加甘油两种情况 ,结果
显示 :在上样缓冲液中添加 5 %的甘油电泳后 ,单链
DNA条带没有不添加甘油的清晰 (图 1) 。如第 1 泳
道 ,在上样缓冲液中不添加甘油的情况下 ,两条变性的
单链 DNA 条带可完全分开 (图 12a) ,在上样缓冲液中
添加 5 %的甘油的情况下 ,两条变性的单链 DNA 条带
则不能完全分开 (图 12b) 。
图 1 　上样液添加或不添加 5 %甘油对电泳效果影响的对比图 (第 1 对引物)
Fig. 1 　The patterns of comparing effect of the loading buffer with or without 5 % glycerol (Primer 1)
a : 上样液不加甘油 ; b : 上样液中添加 5 %的甘油。1 :宁 7840 ;2 :Clark ;3 :中国春 ;4 :N3BT3A ;5 :N3AT3B ;6 :N3DT3A
a : loading buffer without glycerol ; b : loading buffer with 5 % glycerol1 1 : Ning 7840 ; 2 : Clark ; 3 : Chinese Spring ; 4 : N3BT3A ; 5 :N3AT3B ; 6 : N3DT3A
　　上样缓冲液用量的多少可直接影响到变性的好坏
和电泳单链条带的清晰度 ,上样缓冲液用量太少 ,变性
不充分、双链 DNA 的条带清晰 ,单链 DNA 的条带模
糊 ,出现弥散现象。上样缓冲液用量过多 ,变性虽然较
为充分 ,但 PCR 产物被稀释的程度大 ,导致电泳时单
链DNA 及双链 DNA 条带均较淡 ,影响读带。经反复
433 核　农　学　报 21 卷
试验 ,一般 35～40 个循环的 PCR 产物 ,上样缓冲液的
量为 PCR 产物 115～3 倍最佳 (图 2) ,低于 1 倍或高于 4 倍的用量均会影响单链 DNA 条带的清晰度。
图 2 　不同上样液量对电泳影响的效果对比图 (第 2 对引物)
Fig. 2 　The patterns of comparing effect of volume of the loading buffer (Primer 2)
1、4、7、10、13、16、19、22、25 :宁 7840 ;2、5、8、11、14、17、20、23、26 :Clark ;3、6、9、12、15、18、21、24、27 :中国春 1 上样液量ΠPCR 产物量 :
1～3 :1Π2 倍 ; 4～6 :2Π3 倍 ; 7～9 :1 倍 ; 10～12 :115 倍 ; 13～15 :2 倍 ; 16～18 :215 倍 ; 19～21 :3 倍 ;22～24 :4 倍 ; 25～27 :5 倍
1 ,4 ,7 ,10 ,13 ,16 ,19 ,22 and 25 :Ning 7840 ; 2 ,5 ,8 ,11 ,14 ,17 ,20 ,23 and 26 :Clark ; 3 ,6 ,9 ,12 ,15 ,18 ,21 ,24 and 27 :Chinese Spring1 Loading
bufferΠPCR Product :1～3 :1Π2 ×; 4～6 :2Π3 ×; 7～9 :1 ×; 10～12 :115 ×; 13～15 :2 ×; 16～18 :215 ×; 19～21 :3 ×; 22～24 :4 ×; 25～27 :5 ×
212 　变性温度及时间对 SSCP 的影响
选择了 95 ℃和 98 ℃两个变性温度 ,进行 PCR 产物
的变性。变性时间分为 5、8、10、15min 4 个不同的时
间 ,结果显示 :98 ℃的变性温度各个时间段的结果均优
于 95 ℃的变性温度。98 ℃的变性温度可使单链 DNA
条带清晰 ,而在 95 ℃的变性温度下单链 DNA 条带模
糊。在 98 ℃的变性温度的各个时间段中以 10min 和
15min 效果最好 (图 3) ,低于 10 min 的变性时间 ,将会
影响部分 PCR 产物变性条带的清晰度。在随后的试
验使用长达 25min 的变性时间 ,发现长时间的变性并
不影响单链 DNA 条带的清晰度。
图 3 　变性温度和时间对电泳影响的效果对比图 (第 1 对引物)
Fig. 3 　The patterns of comparing effect of the different denaturalization temperature and time (Primer 1)
a :变性温度为 98 ℃;b :变性温度为 95 ℃。1、7、13、19 :宁 7840 ;2、8、14、20 :Clark ;3、9、15、21 :中国春 ;4、10、16、22 :N3BT3A ;5、11、17、23 :N3AT3B ;
6、12、18、24 :N3DT3A ;1～6 :变性时间为 5 分钟 ;7～12 :变性时间为 8 分钟 ;13～18 :变性时间为 10 分钟 ;19～24 :变性时间为 15 分钟
a : the denaturalization temperature is 98 ℃; b : the denaturalization temperature : 95 ℃1 1 , 7 , 13 and 19 : Ning 7840 ; 2 , 8 , 14 and 20 : Clark ;
3 , 9 , 15 and 21 : Chinese Spring ; 4 , 10 , 16 and 22 : N3BT3A ; 5 , 11 , 17 and 23 : N3AT3B ; 6 , 12 , 18 and 24 : N3DT3A1 1～6 : the denaturalization
time is 5 min ; 7～12 : the denaturalization time is 8 min ; 13～18 : the denaturalization time is 10 min ; 19～24 : the denaturalization time is 15 min
533　4 期 小麦 SSCP 分子标记体系的优化
213 　电泳条件对 SSCP 的影响
21311 　电泳温度对 SSCP 的影响 　本试验在 29∶1 的
丙烯酰胺∶甲叉双丙烯酰胺配比、凝胶浓度为 12 %的
条件下 ,试验了 4 ℃左右低温和常温 (25 ℃左右) 但电
泳的 TBE缓冲液先预冷至 0 ℃～4 ℃左右条件下电泳
对单链 DNA 条带的影响 ,结果显示单链 DNA 条带在
常温下电泳更为清晰 , 特别是第 1 对引物的单链 DNA
条带在常温下电泳较低温下清晰 (图 4) 。但在低温条
件下 , 可使一些在常温条件下不能分开的两条单链
DNA 条带分开 , 如图 4 中的宁 7840、N3AT3B 和
N3DT3A 用第 2 对引物扩增的 PCR 产物经变性后的单
链 DNA 条带。
图 4 　不同的电泳温度对电泳影响的效果对比图
Fig. 4 　The patterns of comparing effect of the different electrophoresis temperature
a1 低温条件下的电泳图 ;b1 常温条件下的电泳图。1、7、13 :宁 7840 ;2、8、14 :Clark ;3、9、15 :中国春 ;4、10、16 :N3BT3A ;5、11、17 :N3AT3B ;6、12、18 :
N3DT3A ;a :1～6 第 3 对引物 , 7～12 第 2 对引物 , 13～18 第 1 对引物 ;b :1～6 第 1 对引物 , 7～12 第 3 对引物 , 13～18 第 2 对引物
a1 the electrophoresis temperature is about 4 ℃; b1 the electrophoresis temperature is about 25 ℃1 1 , 7 and 13 : Ning 7840 ; 2 , 8 and 14 : Clark ; 3 , 9 and 15 :
Chinese Spring ; 4 , 10 and 16 : N3BT3A ; 5 , 11 and 17 : N3AT3B ; 6 , 12 and 18 : N3DT3A1 a : 1～6 Primer 3 , 7～12 Primer 2 , 13～18 Primer 1 ;
b : 1～6 Primer 1 , 7～12 Primer 3 , 13～18 Primer 2
21312 　电泳时的离子强度对 SSCP 的影响 　本试验对
比了 1 ×TBE 电泳缓冲液和 015 ×TBE 电泳缓冲液对
电泳结果的影响 ,结果显示 :在 015 ×TBE 的电泳缓冲
液的离子强度下 ,电泳的单链 DNA 条带较在 1 ×TBE
电泳缓冲液的离子强度下清晰。
21313 　电泳时的功率对 SSCP 的影响 　本试验对比了
不同电泳功率 [ 80W (2167WΠcm) 、60W (2WΠcm) 、40W
(1133WΠcm) ]对电泳结果的影响 ,结果显示 ,80W 下单
链 DNA 条带较为清晰 ;60W 下同一 PCR 产物的单链
DNA 条带数增加 ,增加了一些模糊的单链 DNA 条带 ;
40W 下不但同一 PCR 产物的单链DNA 条带数增加 ,而
且所有单链 DNA 条带均变模糊。随电泳功率的下降 ,
电泳时间延长 ,80W 的电泳时间为 2h 左右 ;60W 的电
泳时间为 215～3h ;40W 的电泳时间为 315～4h。
通过对上述小麦 SSCP 技术影响因素的研究 , 确
定上样缓冲液中不添加甘油、用量为 PCR 产物体积的
115～3 倍、变性温度 98 ℃、变性时间 10～15min、电泳
缓冲液为 015 ×TBE , 常温下恒功率 80W (2167WΠcm)
电泳 2h 左右为最佳的条件组合。
633 核　农　学　报 21 卷
图 5 　不同离子强度的电泳缓冲液对电泳影响的效果对比图 (第 1 对引物)
Fig. 5 　The patterns of comparing effect of the different electrophoresis buffer (Primer 1)
a :电泳缓冲液为 015 ×TBE;b :电泳缓冲液为 1 ×TBE;1 :宁 7840 ;2 :Clark ;3 :中国春 ;4 :N3BT3A ;5 :N3AT3B ;6 :N3DT3A
a : the electrophoresis buffer is 015 ×TBE; b : the electrophoresis buffer is 1 ×TBE1 1 : Ning7840 ;
2 : Clark ; 3 : Chinese Spring ; 4 : N3BT3A ; 5 : N3AT3B ; 6 : N3DT3A
图 6 　不同电泳功率对电泳影响的效果对比图 (第 3 对引物)
Fig. 6 　The patterns of comparing effect of the different electrophoresis power (Primer 3)
a :电泳功率为 80W (2167WΠcm ) ;b :电泳功率为 60W (2100WΠcm) ;c :电泳功率为 40W (1133WΠcm) ;1 :宁 7840 ;2 :Clark ;
3 :中国春 ;4 :N3BT3A ;5 :N3AT3B ;6 :N3DT3A
a :the electrophoresis power is 80W (2167WΠcm ) ; b :the electrophoresis power is 60W (2100WΠcm) ; c :the electrophoresis power is 40W
(1133WΠcm ) 1 1 : Ning 7840 ; 2 : Clark ; 3 : Chinese Spring ; 4 : N3BT3A ; 5 : N3AT3B ; 6 : N3DT3A
3 　讨论
上样缓冲液兼有上样和变性的作用 ,在本试验的
预备试验中曾采用碱变性上样缓冲液 ,发现碱变性上
样缓冲液不适于小麦的 SSCP 分析 ,单链 DNA 条带模
糊 ,后采用含有变性剂甲酰胺的测序胶的上样缓冲液 ,
单链 DNA 条带变得较为清晰。在上样缓冲液中添加
甘油 ,造成了部分 PCR 产物的单链 DNA 条带模糊 ,可
能原因是电泳时甘油随 PCR 产物一起进入凝胶中 ,影
响了单链 DNA 的稳定构象的形成。上样缓冲液的用
量也会对 SSCP 造成影响 ,上样缓冲液的用量过少 ,变
性的单链 DNA 浓度较大 ,容易发生碰撞而聚合为双
链 ,上样缓冲液的用量过多 ,双链和单链 DNA 浓度均
太小 ,造成电泳时双链和单链 DNA 的条带均较淡 ,因
此必须有一个适宜的上样缓冲液的用量。Hayashi
733　4 期 小麦 SSCP 分子标记体系的优化
等[8 ]研究认为 PCR 产物的稀释倍数为 4 或 5 倍适于
SSCP 分析 ,低于 3 倍 ,会有大量单链完全复性或部分
复性 ,导致迁移速度改变。杨志惠等[9 ] 研究认为 PCR
产物用上样缓冲液稀释 4 倍最好。从本试验的结果来
看 PCR 产物用上样缓冲液稀释 115～3 倍最适于小麦
的 SSCP 分析。
温度对 SSCP 的影响表现在变性时的温度和电泳
时的室温两个方面。变性温度一般采用 95 ℃和 98 ℃
两种温度 ,从本试验的结果来看 ,98 ℃明显好于 95 ℃,
说明小麦的 PCR 产物需要较高的变性温度才能变性
的较为充分。电泳时环境温度对 SSCP 的影响可能表
现在环境温度的高低对单链 DNA 内和单链 DNA 间氢
键及其他二级键的形成的影响上 ,李卫等[10 ]报道 SSCP
的最适温度与 DNA 正链中的 C 的碱基数 (bp) 成正相
关 , 与 A 的碱基数 (bp)成负相关。姜运良等[7 ] 研究认
为 4 ℃左右的低温有利于 SSCP 的分析。Orita 等[2 ] 研
究认为 23 ℃较 17 ℃有利于 SSCP 分析 ,然而也有研究
表明室温条件也是适于 SSCP 分析的[6 ] 。从本试验的
研究的结果来看 4 ℃左右的低温可使一些在常温条件
下不能分开的两条单链 DNA 条带分开 ,然而也会造成
一部分引物的 PCR 产物的单链 DNA 条带模糊。在本
试验的预备试验中采用完全的室温条件也会造成部分
PCR 产物的单链 DNA 条带模糊 ,后进行改进采用电泳
缓冲液先预冷至 0～4 ℃左右 ,然后再进行电泳 ,有效
地克服了完全低温和完全室温造成的部分 PCR 产物
的单链 DNA 条带的模糊现象。同时从大量的试验经
验中 ,作者发现当室温超过 28 ℃时 ,也易造成部分
PCR 产物的单链 DNA 条带的模糊现象。温度对 SSCP
的影响是比较复杂的 ,作者认为在电泳的开始阶段 ,应
保持较低的温度 ,这样有利于保持单链 DNA 的单链状
态 ,不利于复性 ,而当电泳开始一段时间以后 ,两条单
链 DNA 已分开 ,较高的温度有利于单链 DNA 形成稳
定的单链构象。
双链 DNA 和单链 DNA 分子都含有一定的电荷 ,
同双链 DNA 一样 ,单链 DNA 分子内的电荷通过影响
单链 DNA 分子的二级结构 ,从而影响到单链 DNA 分
子电泳时的泳动速度。不同的电泳缓冲液的离子强度
不同 ,单链 DNA 分子的电荷受到离子强度的影响 ,从
而使单链 DNA 分子的二级结构产生一定的变异 ,当单
链 DNA 分子的二级结构的变异达到一定的大小时 ,将
会在电泳板上表现出来。姜运良等[11 ] 报道 1 ×TBE 的
电泳缓冲液有利于 SSCP 的分析[7 ] ,魏太云等[12 ] 报道
015 ×TBE电泳缓冲液有利于 SSCP 的分析[5 ] 。本试验
中 ,在 015 ×TBE 电泳缓冲液的离子强度下单链 DNA
条带清晰 ,而在 1 ×TBE 电泳缓冲液的离子强度下单
链 DNA 条带变得模糊。原因可能是 015 ×TBE 电泳缓
冲液的离子强度有利于小麦单链 DNA 形成稳定的构
象 ,电泳参数的不同主要也是影响到 DNA 分子的电
荷 ,从而对 DNA 分子的构象和泳动速度产生影响。姜
运良等[11 ] 、魏太云等[12 ] 研究认为在低电压、低功率的
电泳条件下过夜电泳有利于 SSCP 分析。而在本试验
的预备试验中发现在低电压、低功率的电泳条件下过
夜电泳 ,会造成小麦单链 DNA 的条带模糊。试验发现
高电压、高功率的条件有利于小麦的 SSCP 分析。在本
试验中采用恒定功率 ,电流电压自动调整的电泳参数
进行电泳。在恒定功率 80W 的条件下单链 DNA 条带
清晰 ,而降低电泳功率至 60W 和 40W 均出现了模糊的
单链 DNA 杂带。当电泳功率升至 100W 时 ,DNA 条带
出现微笑效应。因此小麦 SSCP 分析的电泳参数为恒
定功率 80W(2167WΠcm) 、电流电压自动调整。
参考文献 :
[ 1 ] 　Orita M , Suzuki Y, Sekiya T , et al1 Rapid and sensitive detection of
point mutation and DNA polymorphisms using the polymerase chain
reaction. Genomics , 1989 , 5 : 874～879
[ 2 ] 　Orita M , Iwahana H , Kanazawa H et al . Detection of polymorphisms of
human DNA by gel electrophoresis as single2strand conformation
polymorphisms. Proc Natl Acad Sci , 1989 86 : 2766～2770
[ 3 ] 　林含新 , 魏太云 , 吴祖建 , 等. 应用 PCR2SSCP 技术快速检测我
国水稻条纹病毒的分子变异. 中国病毒学 , 2001 ,16 (2) : 166～
169
[ 4 ] 　Ayan S , Gokce G, et al . K2Ras mutation in transitional cell carcinoma
of urinary bladder. International Urology and Nephrology , 2001 , 33 :
363～367
[ 5 ] 　Colombo F , Vallone L , Capoferri R , et al . Identification of Moulds
Belonging to the Penicillium Genus using a Polymerase Chain Reaction
( PCR2SSCP) Method Followed by ’Computer Assisted’Statistical
Analysis of the Electrophoretic Patterns. Veterinary Research
Communications , 2003 , 27 Suppl . 1 : 675～678
[ 6 ] 　姚海军 , 曹　虹 , 郭辉玉. PCR2SSCP 分析法及其研究进展. 生物
技术 ,1996 ,6 (4) : 1～4
[ 7 ] 　Saghai2Maroof M A. , Soliman K M , et al . Ribosomal DNA spacer2
length polymorphisms in barley : Mendelian inheritance , chromosomal
locations and population dynamics. Proc Natl Acad Sci , 1984 , 81 : 8014
～8018
[ 8 ] 　Hayashi K, Yandll D W. How sensitive is PCR2SSCP , Hum Mutat ,
1993 , 2 : 338
[ 9 ] 　杨志惠 ,周　斌 ,贾 　静 , 等. PCR2SSCP 分析参数的研究. 沪州
医学院学报 ,2005 , 28 (5) : 391～393
[10 ] 　李 　卫 ,高 　枫 ,林伟雄 ,等. 广西 B 地中海贫血基因突变类型
SSCP 分析. 广西医科大学学报 ,1999 , 16 (3) : 259～260
[11 ] 　姜运良 ,李 　宁 ,赵兴波 ,等. 影响 PCR2SSCP 的因素分析. 农业
生物技术学报 , 2000 , 8 (3) : 245～247
[12 ] 　魏太云 ,林含新 ,谢联辉. PCR2SSCP 分析条件的优化 , 福建农林
大学学报 (自然科学版) ,31 (1) : 22～25
833 Journal of Nuclear Agricultural Sciences
2007 ,21 (4) :333～338