全 文 ：文章编号 :100028551 (2008) 032286205
不同培养条件对大花金挖耳愈伤组织生长
及黄酮产量的影响
李玉平1 ,2 　姜在民2 　冯俊涛1 　徐　珊2 　张　兴1
(1. 西北农林科技大学 无公害农药研究服务中心 ,陕西 杨陵　712100 ; 2. 西北农林科技大学 生命科学学院 ,陕西 杨陵　712100)
摘 　要 :以大花金挖耳愈伤组织为材料 ,通过测定愈伤组织生长量、黄酮含量和产量等指标 ,研究了不同
培养条件对大花金挖耳愈伤组织生长及其黄酮产量的影响 ,为大规模细胞培养生产大花金挖耳药用成
分黄酮奠定基础。结果表明 :不同外植体愈伤组织的黄酮含量为根 > 子叶 > 下胚轴 ,黄酮产量以根愈伤
组织为最高 ;继代次数在 3～12 代愈伤组织的黄酮产量较为稳定 ;愈伤组织生长及黄酮生物合成的适宜
培养温度为 25 ℃;10min 紫外线照射引起黄酮含量的提高 ;MS、B5、NT及其组合培养基中 , 大花金挖耳
愈伤组织生长及黄酮产量随培养时间的延长 ,均表现出先升高后降低的趋势 ,在接种 35240d 后愈伤组
织黄酮产量达到最高值 ,其中 NT培养基中黄酮产量高于其他培养基中愈伤组织黄酮产量。
关键词 :大花金挖耳 ;愈伤组织 ;培养条件 ;黄酮产量
EFFECTS OF DIFFERENT CULTURAL CONDITIONS ON CALLUS GROWTH
AND FLAVONOID YIELD OF Carpesum. macrocephalum
LI Yu2ping1 ,2 　J IANG Zai2min2 　FENGJun2tao1 　XU Shan2 　ZHANG Xing1
(1. Research and Developmemt Center of Biorational Pesticide , Northwest Sci2Tech University of Agriculture and Forestry , Yangling , Shaanxi 　712100 ;
2. College of Life Science , Northwest Sci2 Tech University of Agriculture and Forestry , Yangling , Shaanxi 　712100)
Abstract :The objective of the current study was to set a foundation for efficient large scale cultivation for biosynthesis of
flavonoids. The effect of several factors on callus growth amount , flavonoid content and yield in callus cultures of Carpesium .
macrocephalum Franch. et Sav were investigated. The results showed that : ①the flavonoid content and yield of root2induced
callus was higher than hypocotyl and cotyledon2induced callus ; ②the flavonoid yield of root2 induced callus was stable during
3～12 subculture generation ; ③the optimum temperature for callus growth and flavonoid cumulation was 25 ℃; ④the optimum
ultraviolet radiation time for callus flavonoid content was 10 min ; ⑤ the callus growth and flavonoid yield increased first and
then decreased at different culture medium , the flavonoid yield reached the maximum after 35～40 days of inoculation , and the
optimal culture medium to produce flavonoid was NT.
Key words : Carpesium . macrocephalum ;callus ; cultural condition ;flavonoid yield
收稿日期 :2007212226 　接受日期 :2008203204
基金项目 :国家“十五”攻关项目 (2002BA516A04)
作者简介 :李玉平 (19702) ,男 ,宁夏中宁人 ,讲师 ,主要从事药用植物资源的教学与研究。E2mail :Daliyuping @163. com
通讯作者 :张　兴 (19822) ,男 ,陕西周至人 ,教授 ,主要从事生物农药研究。E2mail :Zx @126. com　　近代药学研究结果表明 , 菊科 (Compositae)天名精属植物大花金挖耳 ( Carpesium . macrocephalum Franch. etSav) [1 ]含有黄酮、萜内酯、甾体等多种化合物 ,有清热、解毒、抗肿瘤、止血的医疗作用[2～6 ] ,并具杀虫、除草和抑菌等农药活性[7～9 ] ,其中菊科黄酮类多有消炎、止 咳、保肝、活血、抗肿瘤等作用[10 ] 。杨超等[4 ] 从大花金挖耳果实甲醇提取物中分离得到 3 ,4’,5 ,72四羟基双氢黄酮醇 ,发现其对枯草杆菌 ( Bacillus subtilis) 、大肠杆菌 ( Staphylococcus aureus ) 和金色葡萄球菌 ( Eshericiacoli)具有一定的活性。
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由于生长周期长 ,并受地域和环境限制 ,从自然栽
培的大花金挖耳中提取活性成分局限很大。因此 ,利
用细胞组织培养进行大花金挖耳黄酮的工业化生产是
其重要的研究方向之一。2002 年以来 ,我们在开展大
花金挖耳化学成分及其农药活性[5 ,7～9 ]研究的同时 ,还
进行了其组织培养[11 ]的试验 ,研究了外植体、温度、紫
外线辐射、继代次数、培养基等不同培养条件对大花金
挖耳愈伤组织生长及其黄酮产量的影响 ,以期为细胞
培养生产黄酮的研究提供依据。
1 　材料与方法
111 　材料和培养基
采集陕西太白山海拔1600m左右栎林带的大花金
挖耳果实 ,种子萌发后 ,以其无菌苗的幼根、下胚轴及
子叶诱导出的愈伤组织为材料 , 具体方法见文
献[11 ]。　　
所用培养基包括MS(Murashige 和 Skoog ,1962 年) 、
B5 ( Gamborg 等 ,1968 年) 、NT (Nagata 和 Takebe ,1971
年)三种基本培养基[12 ] 和 MS + NT、MS + B5 、NT + B5
三种组合培养基 ,其中三种组合培养基是以三种基本
培养基的标准质量浓度 (每种基本培养基都含有其固
有化合物组分的标准质量浓度) 为基础 ,按体积比 1∶1
进行两两组合而成的。各培养基均附加 310mgΠL NAA
+ 012mgΠL 62BA ,蔗糖浓度 45gΠL ,琼脂 715gΠL ,pH517。
基本培养条件 :100ml 三角瓶装 50ml 固体培养基 ,每瓶
接种量为愈伤组织鲜重 013g 左右 , 置 25 ℃±2 ℃,光
照强度 1500～2000lx 的光照培养架上 ,光照 12 hΠd ,15
- 20d 继代一次。
112 　不同培养条件对愈伤组织生长及黄酮产量影响
11211 　不同愈伤组织 　取大花金挖耳无菌苗幼根、下
胚轴及子叶等外植体诱导出的愈伤组织接种于 B5 培
养基中 ,在基本培养条件下光照培养 40d 后 ,测定愈伤
组织生长量及黄酮含量。
11212 　继代培养 　取培养 15220d 生长旺盛的幼根愈
伤组织接种于B5 培养基中 ,基本培养条件下继代培养
1、3、6、9 和 12 代 (每 15d 继代培养 1 次) ,分别收集各
代培养 40d 的愈伤组织 ,测定不同培养代数愈伤组织
生长量及黄酮含量。
11213 　温度条件 　取继代培养 3～6 代的愈伤组织接
种于 B5 培养基中 ,基本培养条件下培养 ,设 15 ℃±
2 ℃、25 ℃±2 ℃、30 ℃±2 ℃3 个处理温度 ,40d 取样。
11214 　紫外线照射 　将在基本培养基 B5 和基本培养
条件下继代培养 3～6 代的愈伤组织 ,在超净工作台内
松散地平铺在无菌培养皿内 ,于距离功率为 20 W 的紫
外灯下 35cm 处照射 10、20 和 30min 后分别转入 B5 培
养基于基本培养条件下进行培养。以上试验的每种处
理接种 10 瓶 ,重复 3 次。
11215 　不同培养基的影响 　取幼根愈伤组织分别接
种于前文所述的 6 种培养基中进行培养 ,每种培养基
接种 120 瓶 ,每隔 5d 随机取样 1 次。本试验重复 2
次。
113 　愈伤组织黄酮含量的测定及黄酮产量的计算
愈伤组织黄酮含量测定 :将供试愈伤组织在 60 ℃
下烘干至恒重 ,粉碎 ,过 60 目筛 ,取愈伤组织干粉 5～
10g ,丙酮振荡提取 3 次 ,每 24 h 提取 1 次 ,合并 3 次提
取液 ,减压浓缩 ,丙酮定容至 0150gΠml ,以芦丁为标样 ,
用亚硝酸钠2硝酸铝显色法测定提取物中的黄酮含量 ,
具体方法见文献[13 ]。
愈伤组织生长量测定以收获时的愈伤组织干重
(gΠ瓶)作生长指标 , 愈伤组织净生长量 = (收获时的
愈伤组织干重2接种时的愈伤组织干重)Π瓶。愈伤组
织黄酮产量 (mgΠ瓶) = 黄酮含量 ( %) ×愈伤组织生长
量 (gΠ瓶) ×1000。
114 　愈伤组织的生长、黄酮含量及产量动态曲线测定
取继代培养 3～6 代的幼根愈伤组织接种于前文
所述的 6 种培养基中 ,在基本培养条件下进行培养 ,每
瓶接种愈伤组织鲜重 013g 左右。每隔 5d 随机取样 1
次 ,同步测定愈伤组织净生长量、黄酮含量和产量 ,观
察 60d。试验结果为 2 次重复的平均值。
115 　统计分析
试验数据用 DPS 7105 统计软件进行单因素方差
邓肯式分析 ( P = 0105) 。
2 　结果与分析
211 　不同外植体愈伤组织的生长和黄酮含量的比较
将根、下胚轴和子叶诱导出的 3 种愈伤组织培养
40d 后 ,测定 3 种愈伤组织的生长量、黄酮含量及其黄
酮产量 ,结果见图 1。图 1 表明 :不同外植体所诱导出
的愈伤组织生长量和黄酮含量有显著差异。根诱导的
愈伤组织生长量最大 ,为每瓶 1117g ,下胚轴次之 ,为
1102g ,子叶最小 ,为 0193g ;根诱导的愈伤组织中黄酮
含量最高 ,达 0172 % ,子叶次之 ,为 0141 % ,下胚轴最
低 ,为 0138 %。黄酮产量以根诱导出的愈伤组织最
大 ,达 8146mgΠ瓶 ,其次是下胚轴和子叶 ,分别达 3185
和 3182mg。因此 ,下一步研究以根诱导出的愈伤组织
为高产愈伤组织无性系。
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RC:根愈伤组织 ;HC:下胚轴愈伤组织 ;CC:子叶愈伤组织
RC:root2induced callus ; HC:hypocotyl2induced callus ; CC:cotyledon2induced callus
图 1 　不同外植体诱导的愈伤组织生长和黄酮含量 (每瓶)的比较
Fig. 1 　Comparison of callus growth and flavonoid content in callus (per flask) induced by different explants
212 　继代次数对愈伤组织生长及黄酮产量的影响
由图 2 可见 ,大花金挖耳幼根来源的愈伤组织生
长量、黄酮含量和产量都在第 3 代后开始平稳 ,第 12
代稍有下降 ,其中第 3 代到第 9 代愈伤组织生长量、黄
酮含量和产量每瓶分别维持在 :1116～1117g、0172 %～
0176 %、8136～8189mg ,这也证明大花金挖耳愈伤组织
的黄酮是愈伤组织自身合成的 ,而不是其幼根遗留下
来的。
图 2 　继代次数对愈伤组织生长和黄酮产量 (每瓶)的影响
Fig. 2 　Effects of subculture generation on callus growth and flavonoid yeild (per flask)
图 3 　培养温度对愈伤组织生长和黄酮产量 (每瓶)的影响
Fig. 3 　Effects of cultural temperatures on callus growth and flavonoid yeild (per flask) in callus
213 　培养温度和紫外线照射对愈伤组织生长及黄酮
产量的影响
由图 3 可知 ,大花金挖耳愈伤组织生长及黄酮生
物合成的最适温度为 25 ℃±2 ℃。低温 (15 ℃±2 ℃)对
愈伤组织生长和黄酮的合成不利 ,其中 30 ℃±2 ℃时 ,
愈伤组织的生长量和黄酮产量接近于 25 ℃±2 ℃的 ,
愈伤组织的生长量分别为 1115、1117gΠ瓶 ,黄酮产量分
别为 8143、8187mgΠ瓶。
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图 4 　紫外线照射对愈伤组织生长和黄酮产量 (每瓶)的影响
Fig. 4 　Effects of ultraviolet irradiation time on callus growth and flavonoid yield (per flask) in callus
　　由图 4 可见 ,随紫外线照射时间的延长 ,愈伤组织
的生长量逐渐降低 ,说明紫外线对其生长有抑制作用 ,
适宜的紫外线照射时间 (10min) 对培养物中黄酮含量
的提高有促进作用 ,但不显著 ,产量低于对照 (25 ℃±
2 ℃、无紫外线照射) 。
214 　不同培养基中愈伤组织生长曲线及黄酮积累
规律
由图 5 可以看出 ,6 种培养基对愈伤组织净生长
量、黄酮含量及产量的影响随时间变化大致相似 ,均表
现为先升高后降低的趋势 ,即按逻辑生长模型 (Logical
Growth Model)进行变化。图 52A、B 显示愈伤组织的生
长明显地分为 3 个时期 :延迟生长期、指数生长期和静
止期。在延迟期 (025d) 内 , 愈伤组织净生长量增长缓
慢 ,这可能是由于刚接种的愈伤组织需要适应新的环
境 , 并且细胞处于细胞分裂时期 ,原生质体合成过程
较慢 ,细胞生长较慢 ;在指数生长期 (5240d) 内 ,原生质
合成速度加快 ,水分迅速进入 ,细胞体积迅速加大 , 愈
伤组织净生长量急剧增加 ;而到了静止期 (40260d) ,细
胞开始褐化 ,愈伤组织净生长量稍有下降 ,这可能是因
为培养基中养分几乎消耗殆尽 ,细胞合成速率低于消
耗速率。其中第 40245d 愈伤组织净生长量达到最高
值 , B5、MS + NT、MS、NT、B5 + NT和 MS + B5 培养基中
愈伤组织净生长量最大值分别是 1115、1112、1115、
1121、1113 和 1112gΠ瓶。
图 52C、D 显示 , 各培养基中愈伤组织黄酮积累量
在 5220d 时呈上升趋势 ,到第 20 天黄酮含量达到最高
值 , B5、MS + NT、MS、NT、B5 + NT 和 MS + B5 培养基中
的黄酮含量分别为 1131 %、1134 %、1128 %、1136 %、
1123 %和 1131 % ,接着又缓慢下行。
图 52E、F 显示 , 各培养基中愈伤组织黄酮产量在
5240d 呈上升趋势 ,第 35240 天达到最高值 , B5、MS +
NT、MS、NT、B5 + NT 、MS + B5 培养基中的黄酮产量分
别是 8163、8176、7169、9150、8178 和 8174mgΠ瓶 ,接着又
缓慢下行。可见所选培养基对黄酮产量的影响以 NT
最大。考虑到愈伤组织的增殖能力 ,结合黄酮的产量 ,
选择培养 15～20d 的愈伤组织进行继代 ,这时愈伤组
织生长旺盛 ,黄酮含量高 ,培养 35240d 后收获 ,这时愈
伤组织的黄酮产量达到最高。
3 　讨论
组织来源是影响植物愈伤组织、悬浮培养细胞中
次生物质积累的重要因素之一[14 ] 。本试验结果表明 ,
大花金挖耳幼根诱导的愈伤组织较下胚轴和子叶来源
的愈伤组织黄酮含量和产量要高 ,因此 ,以幼根为外植
体诱导出的愈伤组织 , 可作为进一步细胞培养黄酮活
性物质的材料。
本研究发现 ,大花金挖耳根诱导的愈伤组织在继
代过程中较为稳定 ,有利于黄酮的生产。大花金挖耳
愈伤组织在继代培养过程中随着继代次数的增加其黄
酮含量逐渐增加 ,在第 3～9 代达到一个比较稳定的高
峰值区后 ,第 12 代有下降趋势。这可能是因为愈伤组
织的分化程度随继代次数的增加而增加 ,培养到一定
时间后 ,分化过程基本稳定 ,而次生代谢物的合成与细
胞分化程度呈正相关[15 ,16 ] 。至于高峰区以后出现下
降 ,可能是因为愈伤组织染色体组在培养过程中发生
变异[17 ] ,分化能力下降所致[18 ] 。
本研究所用的 6 种培养基中 ,NT对大花金挖耳愈
伤组织生长及黄酮类生物合成的影响最明显 ,黄酮产
量最大 ,这可能与 NT培养基 N、P、Mg 含量与其他培养
基差异较大有关。另外 ,为了进一步提高大花金挖耳
愈伤组织黄酮产量 ,在培养过程添加前体 (苯丙氨酸、
乙酸钠等) 或诱导子 (水杨酸、硝酸银等) [19 ] 尚需进一
步研究。
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图 5 　不同培养基中愈伤组织生长及黄酮累积曲线
Fig. 5 　Curve of callus growth and flavonoid cumulation on different culture medium
参考文献 :
[ 1 ] 　中国科学院西北植物研究所. 秦岭植物志 (第一卷) . 北京 :科学
出版社 ,1985 :210
[ 2 ] 　KIM M R , KIM C S , HWANG K H , et al . Isolation and structures of
guaianolides from Carpesium macrocephalum . Journal of Natural
Product , 2002 ,65 (4) :583～584
[ 3 ] 　YANG C , SHI Y P , J IA Z J . Sesquiterpene lactone glycosides ,
eudesmanolides ,and other constituents from Carpesium macrocephalum.
Planta Medica ,2002 ,68 (7) :626～630
[ 4 ] 　杨　超. 四种旋覆花亚族植物的化学成分及生物活性研究. 兰州
大学博士学位论文 ,2002
[ 5 ] 　冯俊涛 ,苏祖尚 ,王俊儒 ,胡志彬 ,张 　兴. 大花金挖耳花蕾中精
油的化学组成及其杀菌活性研究. 西北植物学报 ,2007 ,27 (1) :
0156～0162
[ 6 ] 　谢宗万 ,余友芩. 全国中草药名鉴. 上海 :人民卫生出版社 ,1996 :
756
[ 7 ] 　郝双红 ,祝木金 ,冯俊涛 ,魏 　艳 ,张 　兴. 35 种菊科植物除草活
性初步测定. 西北农林科技大学学报 ,2005 ,32 (5) :22～26
[ 8 ] 　张宏利 ,冯俊涛 ,陈安良 ,张根良 ,张　兴. 秦岭山区 204 种植物对
粘虫生物活性测定. 西北林学院学报 ,2004 ,19 (3) :92～94
[ 9 ] 　李玉平 ,慕小倩 ,冯俊涛 ,张　兴. 几种菊科植物杀菌活性的初步
研究. 西北农林科技大学学报 ,2002 ,30 (1) :68～72
[10 ] 　周荣汉 ,段金廒. 植物化学分类学. 上海 :上海科学技术出版社 ,
2005 :969
[11 ] 　李玉平 ,龚　宁 ,王永宏 ,张　兴. 大花金挖耳愈伤组织诱导与增
殖. 西北植物学报 ,2006 ,26 (6) :1142～1149
[12 ] 　朱至清. 植物细胞工程. 北京 :化学工业出版社 ,2003 :206～209
[13 ] 　李玉平 ,王永宏 ,易晓华 ,张 　强 ,张 　兴. 大花金挖耳细胞培养
物中总黄酮的检测. 安徽农业科学 ,2007 ,35 (29) :9160～9161
[14 ] 　陈学森 ,邓秀新 ,章文才. 培养基及培养条件对银杏愈伤组织黄
酮产量的影响. 园艺学报 ,1997 ,24 (4) :373～377
[15 ] 　张　弘. 植物培养细胞的形态分化与次生代谢产物的生产. 植物
学通报 , 1994 , 11 (1) : 12～19. (下转第 279 页)
092 Journal of Nuclear Agricultural Sciences
2008 ,22 (3) :286～290
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表 5 　HW225 传接 5 代发酵效价
Table 5 　Titers of the strain HW225 subcultured for five generations
传代数 generations F1 F2 F3 F4 F5
发酵效价 titers (μgΠml) 47180 ±0108a 46195 ±0119a 47109 ±0191a 46196 ±0110a 46196 ±0150a
注 :a 表示在 5 %水平差异不显著 (DMRT)
Note : a indicates that the difference is not statistically significant by DMRT at p = 0105.
3 　讨论
星形孢菌素作为一种活性化合物 ,具有抗肿瘤、抗
真菌和杀虫的作用[7 ,8 ] 。1977 年由 Omura 等从链霉菌
AM22282 中发现 ,1978 年 Furasaki 等通过 X 射线分析
确定了星形孢菌素的化学结构。星形孢菌素市场价格
昂贵 ,目前只用于医学领域进行理论研究 ,要想真正应
用于农业生产 ,必须进行选育来提高产生菌的发酵效
价 ,但关于星形孢菌素产生菌的诱变研究未见报道。
在诱变筛选试验中 ,诱变剂量对产量性状的诱变
作用 ,有如下特点 : 处理剂量大 ,杀菌率高 ( 90 %～
99 %) ,单位存活细胞中负变菌株多 ,正变菌株少 ,但在
不多的正变株中仍有可能筛选到产量大幅度提高的突
变株[9 ] ,所以选择孢子致死率在 90 %～99 %之间的诱
变剂量。利用抗性物质进行筛选不仅提高工作效率 ,
而且获得突变株的可能性大大提高。近年来利用链霉
菌产抗生素能力与链霉素抗性基因之间的对应关系来
定向筛选正向突变株是目前农用抗生素科研领域的研
究热点[10 ] 。研究工作表明 ,抗生素生物合成有关的基
因与对抗生素的耐受性有关基因常常是连锁在一起
的 ,因此随着对自身产物耐受性的提高 ,很多产生菌合
成抗生素的能力同时得到提高 ,不仅如此 ,提高对来自
其他抗生素产生菌产物的抗性 ,也能使自身合成抗生
素的能力得到提高[11 ] 。本试验利用硫酸链霉素作为
抗性物质来筛选突变株 ,获得了优良菌株 HW225 ,比原
始菌株的效价提高了 284120 % ,但其发酵相对效价仍
然很低 ,有待进一步加强高产菌株的选育和发酵工艺
的研究。
参考文献 :
[ 1 ] 　Meksuriyen D , Gordell G. Biosynthesis of Staurosporine , 1 H and 13 C2
NMR assignments. Nature Production , 1988 , 51 (5) : 884～892
[ 2 ] 　Zhang B F , Peng F F , Zhang J Z , et al . staurosporine induce apoptosis
in NG108 - 15 cells. Acta pharmacologica sinica , 2003 , 24 (7) : 663～
669
[ 3 ] 　石洪武 , 任洪波 , 张兆山 ,等. 蛋白激酶 C抑制剂 staurosporine 对
HeLa 细胞周期影响. 中国生物化学与分子生物学报 ,2003 ,14
(1) :113～116
[ 4 ] 　Yang D J , Chen G Q , Chen W , et al . Streptomycin resistance
mutantion2study on the breeding of hinatamycin2producing strain.
Microbiology , 2003 , 4 :29～35
[ 5 ] 　靳　亮 ,童应凯 ,王泽立 ,等. 卑霉素高产菌株的选育. 中国抗生
素杂志 ,2006 , 31 (5) :303～305
[ 6 ] 　蒲小明. 链霉菌 4138 提取物杀虫活性及其应用研究 ,华南农业
大学硕士毕业论文 ,2007
[ 7 ] 　Daniel , Higganum , Kin , et al . staurosporine fermentation process. U S
Pat No 49735521
[ 8 ] 　McCoy , Karen M , Hatton ,et al . Insecticidal activity of staurosporineU.
S Pat No 4735039
[ 9 ] 　施巧琴 ,吴松刚. 工业微生物育种学. 北京 :科学出版社 ,2003
[10 ] 　姚朔影 ,夏枫耿 ,梁淑娃 ,等. 纳他霉素高产突变种的选育. 中国
食品添加剂 ,2006 , 114～117
[11 ] 　江洁姜彦 ,刘德宗. 抗生素产生菌对自身产物的耐受机制的研
究. 高师理科学刊 ,2000 , 20 (3) :60
(上接第 290 页)
[16 ] 　张美萍 ,王　义 ,孙春玉 ,李向高. 西洋参愈伤组织悬浮培养物细
胞分化与皂苷合成关系的研究. 核农学报 ,2004 ,18 (2) :152～154
[17 ] 　徐春霞 ,葛亚明 ,朱雪云 ,陈利萍. 榨菜继代培养愈伤组织及其再
生植株的变异性分析. 核农学报 ,2007 ,21 (3) :237～241
[18 ] 　郑成木 ,刘进平. 热带亚热带植物微繁殖. 长沙 :湖南科学技术出
版社 ,2001 :16
[19 ] 　李　燕 ,王春兰 ,郭顺星 ,肖培根. 植物组织和细胞培养物中黄酮
类物质积累影响因素的研究进展. 中国药学杂志 ,2006 ,41 (9) :
651～655
972Journal of Nuclear Agricultural Sciences
2008 ,22 (3) :276～279
© 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net