全 文 ：笼端磷二溢赢⋯漏
放射性银饱和法测定金属硫蛋白
汪俊强 陈子元 吴美文
浙江农业大学原子核农业科学研究所 杭州
斌 慧
杭州高等专科学校 杭州
利 用金属硫蛋 白 的热稳 定性及其与金属离子 的高度亲合性 , 以“ 。“ 为 示 踪
剂 , 在参考 等方法 的基础上 , 建立 了金属硫蛋 白放射性银饱和浏 定
法 试验确 定金属离子与金属硫蛋 白的相讨亲合 力大小 顺序为 扩 十
扩 , ’ 应 用银饱和法 , 浏 定 了由锌诱导的大鼠扦脏金属硫蛋 白 的含 量 ,
证明该方法 简便快速
、 灵敏可 靠 , 适 用于金属硫蛋 白的浏 定
。
关健词 金属硫蛋 白 大鼠 “ ““ 示踪剂
前 言
童属硫蛋 自 沁 , 是一类低分子量
、
高半胧氨酸含量
、 热稳 定 且
与金属离子有较高亲合力的蛋 白质 。 在调节动物体内微量金属元素的代谢以及重金属 离
子的贮存与解毒等方面具有重要的生理意义 。
的测定方法有紫外吸收法 、 电化学法 “ 、 镐饱和法 “ 和灵敏特异的 放 射 免疫
分析法 ’ , “ 。 最近 。五 和 了 ’丁建立了银饱和法 , 与镐饱和法相比 , 其 灵敏
度更高 , 受金属离子的千扰更小 , 适用范围更广 。
,
作者参照 和 加 血 的方法建立了金属硫蛋 白的银饱和测定法 。
材
,
料 与 方 法
试脸材料 化学试剂 , 分析纯
、 ‘ 、 甘氨酸等 ,
放射性同位素“ “ ’ , 由中国原子能研究院提供
雄性 大鼠 , 体重 。一 , 由浙江医科大学提供
。
羊血红细脸落血产物的翻奋 按 和 缺 〔。 法进行 从羊颈静脉采血 ,
加抗凝剂 , 用 溶液洗涤一离心 。℃
, 幼 , , 弃上清液一 ”
再用 溶液清洗一离心 。℃
, , 一 , 重复清洗两遍一 向 洗净的羊血红细胞中加入 无离子水 , 在室温条件下溶血 一一 离 心 ‘ ℃ , ,
此文于 年了月 日收到 。
冬 核 农 学 报 卷
, 弃 去细胞膜碎片 , 收集上层悬浮液 , 用于 银饱和测定
。
样品的制备 将大鼠同养于 鼠笼中 , 喂 词 卜 ‘ , 小时后取大鼠肝组织
左 右 , 加 为蔗 箱溶液 匀浆 , 离心 ℃ , 。。 , ” , 取上清液得 样品 。 同
时取未喂饲 ‘的大截肝组织
一
, 分别加 一 毛
、
犷“
、
, 培养 小时后 , 各
取 左右肝组织加 蔗糖液 , 经超声波破碎后 离心 , 取上清液得 样品 。
饱和法洲定 含 取 样品 闪于反应管 中 , 加“ “ ’ 溶液 ,
和 甘氨酸缓冲液 , 温 育 后 , 加 羊 溶 血 产 物
林。 , ℃ 热 , 离心 , 取上清液再加 羊溶血产物加热 , 重 复
该步骤 次 。 取 上清液于测定管中 , 用 一 井型 闪烁仪测定样品的放射性活度
。
试脸结果的计算 金属硫蛋 白与 结合达饱和时 , 抹分子金属硫蛋 白 结 合 个银离
子 〔 根据这一关系可导出样品 含量的计算式
一 奥华 十华军黔 样品稀释倍数
长州 七 一 七 ”
式中 待测样品 含量 , 每反应管中加入的银离子重量 , 十 与 的 摩
尔 光二 , 的平均分子量 , 银的原子量 , 待测样 品 ,
、 空 白管 , 二 每反应管总 。
将
、
与 值代入上式得
二
一
一 、 样品稀释倍数
结 果
一 落血产物分离过 的效果
在反应系统中加入溶血产物 。 , 使其 中灼血红蛋 白与过量的 十结合 ,
然后加热使各种蛋白质变性 , 而 是热稳定的 , 利用这一特点来达到 分离过量 的目的
川 “ “ ”’ 标记的 溶液与 甘氨酸缓冲液和 卜 半胧氨酸混合 , ℃温
育 , 加溶血产物 , 加热 、 离心处理后测定 , 结果表明 , 肠 以上的 十 可被除去 。 说 分 离
方法是有效的 。 此外将银饱和的样品测定液用 凝胶柱层 析 , 卜
溶液进行洗脱 , 洗脱曲线呈一条单峰曲线 见图 。 这说明洗脱液中 的 十 几
乎全部与 结合在一起 。
二 金月离子与 下的相对亲合力
为了估计金属离子 、
、 十 、 “ 十 、 在
一
甘氨酸缓冲液中与 的相对
亲
一
合力 , 将被“ “‘ 一 十 饱和的 与上述各种金属离子反应 金 属离子与 的摩尔 比为
, 过量的金属离子 与被置换出来的银离子经溶血产物
、 加热
、
离心处 理 次 , 测定
上清液。 , 计算被置换出来的银离子百分率 , 结果如下 不加任何金属离子时 , 银离子被
置 换 , 加 么 、 艺 、 十
、 十 、 时分别被置换 、
、 、
和 因此这些金属离子与 的相对亲 合力大小顺序为 “ 十
十 ’
三 银饱和法洲定大限肝脏 的平行性
期 放射性银饱和法测定金属硫蛋白
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洗脱管号 ￡
图 银饱和分析样品液的洗脱曲线
丁。 人犷 ,
取大鼠肝组织样 林
、 协 、 林 、 石。 林 和 卜 , 用银饱和法测定 含量 ,
结果基本上在一条直线上 图 , 说明测定结果不会因测定样品的稀释度不同而发生显著变
化 , 也即是该方法的平行性较好 , 测定结果精确
。
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时 、
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‘ 、
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图 不同稀释度样品 的银饱和法测定值
四 之大限肝细脸 对 的反碑
大鼠肝细胞 对 ’ 的剂量反应曲线 , 在 一 ’一 ‘ 的浓度范围内 , 随着 ’ 浓度
的增加 , 对 的诱导效应不断提高 见图 。 这一结果与 和 。 , ,
用镐饱和法的试验结果一致 , 间接说明
一
银饱和法的测定结果是正确的
。
结 语
一 银离子用于 的测定具有其内在的优越性 , 因为银离子 与硫蛋 白有较高的亲 合
力
。
试验结果表明 , 各种金属离子 与 的相对亲合力大小顺序为 容十 护 ’小
核 农 学 报 卷
一 吸
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图 沐同浓度的 沪 对大鼠肝细胞 的诱导效应
生 名 。 在 的条件下 , 可以将 结合的各种金属离子置换 出来 , 这些金 属
离子的存在对银饱和法测定的影响很小 , 而锡饱和法会受到 与 的千扰 , 尤其是 ,
它广泛存在于生物体的各种组织之中 。 银饱和法可以克服锡饱和法的这一缺点 。
二 银饱和法灵敏度较高
, 一方面是因为 与 饱和结合时 , 每分子 上可结 合
个 , 而 “ 只能结合 个 另一方面 , 十 与 的亲合力较高 , 测定的干扰较 小 ,
空 白管的 值较低
、
变异较小 , 因此测定的灵敏度较高
。 银饱和法的灵敏度仅次于放射免
疫分析法 。
三 银饱和法适用于各种样品金属硫蛋 白的测定 , 样品 含量可 以通过下式计算
一 , 一 , 。
经过一段时间的实际使用表明 , 银饱和法操作简便快速
、
灵敏可靠 , 是研究动物微量元
素与金属硫蛋 白及其相互关系的一种有价值的方法 。 ,
参
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考 文 献
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