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核 农 学 报 一 , 一
瓜坛而护彻心 , 。拍眯加加‘的‘
中华称猴桃耐盐变异体筛选
、
王存喜 程炳篙
山东农业大学
李雅志 邹 琦
泰安 一。一
取 中华桥猴桃 才‘”‘ ‘ 尹‘ 品 系试管苗叶 片为外植体 , 诱
、
导愈伤
组织 , 将愈伤组织 移入含 的 培养基选择 次 , 培养基内 的浓度逐步增
加 , 丫针 线作 为诱 变剂 , 已 筛选 出耐叭 、
、 的 变异细 胞 系 , 并均
再生 出完整植株 。 试验结
一
果表明 , 一
,
是最 佳 的
脱分化培养基 十 是最佳 的分、化培养基 生根培养 塞
可 采用 十 。 。 可作 为耐盐 筛选 的盐分临界值
。 丫 射
线处理衬愈伤组织 的生长及细 胞 的 大小 均有显著的影响 , 可作为变异休 筛选的
诱变照针量 。
, · ‘ 、
关健饲 中华称猴桃 诱 变剂 耐盐筛选 变异体
前 七生口
土壤盐渍化已成为限制农业发展的一个重 要因素 〔‘
, “ ’ , 为开发利用盐碱地 , 选择抗盐
品种是很重要的 。 随着植物组织培养技术的发展 , 在细胞 组织水平上进行变异体的筛选 , 是
植物组织培养中引人注 目的领域之一 〔‘
, “ , “ , ‘ ” ’。 据报道 , 在耐盐筛选方面 , 烟草 〔“
, ‘ ’、 水
稻 ’ 〕
、 首着 ’ 〕
、
小黑麦 ‘ 」、 甘蔗 ’ 〕
、
酸橙
、
甜橙 ’。 〕
、
南洋金花 ’ 等植物 已获得耐盐
变异体或突变体
。
、
中华称猴桃 , 酸甜味浓 , 含量高 , 营养丰富 , 被人们称为 “ 果 中之王 ” , 曾引起 许多
科技工作者的兴趣
。 在组培方面 , 胚乳培养 〔“ 〕及茎叶离体培养 〔。
, 〕已获成功 , 为称猴桃育
种及良种繁殖开辟了新途径
。
但是 , 称猴桃的耐盐筛选工作至今未见报道
。 木试验利用辐射
诱变结合组培技术筛选 中华称猴桃耐盐优良品系
。
材 料 与 方 法
试验于 一 年在木校植物生理生化研究室 进行 。 试材山木校园艺系组培室提供的
巾华称猴桃 。 。 ’。。。 ’ 况 系的试管苗
。 取 试管苗叶片 切块 , 诱导愈伤组织 ,
, “ 。丫射线作 诱变剂 , 采用 正筛选的方法 〔“ ’
。 基木培养获为 , 附加不同浓度的玉
此文于一 年 月 日 友到 。
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期
米素 〔 ,
、 叫噪丁酸 班
电华称猴桃耐盐变异体筛选
、
茶乙酸
、 吼噪 乙酸 和 , 一 。 按
丫
不圈浓度添加在培养基 中 , 培养室温度为 士 ℃
, 光强 。一 曲 二
, 光照时间 , 小时 天
用醋酸洋鱿染色压片 , 在光学显微镜下观测细胞的划、及形状
。 一 ‘
结 果 与 分 析
一 愈偷姐奴的诱导及植株再生
愈拐组织的诱导 结果表明 表
, 接种 周后各培养基 均有愈伤组织发 生 。 月
后 , 统计每个仆卜块愈伤组织的生长量 , 各培养基差异不显著
。 但考虑到低浓度 , 一 对诱变
不利 , 高浓度
, 一 对分化又有后效作用 〔 。 因此 , 愈伤组织的诱导培养基用
, 一 。
表 不同培养攀对愈伤组织生传且的形晌
拜
培 养 基 外植体数
亡
平均生长量
丫 之 加
差异显著性
、 , 一 ‘
, 一
补 ‘
· “ 十 , , 一 ”·“
一
, 一
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、 竺
字母相同者表示无差异
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,
一
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‘
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一
‘ 乞云玄 、奋
,
公 。 卜
。 分 , 八 。
不定芽的诱导 将愈伤组织转至不同的分化培养基 , 分化培养基 按 ‘
’
正
交设计 结果表明 表 , 或 , 是最佳分化培养基
, 改变 的浓度 ,
峰低 培 养 基 ’朴 ‘一 水 平
一
,
哥 ”叫 , 或者用其它生长素代替‘尹, 均显著影响
分化率 。
、
一
队植株根的诱导 芽苏移入 扭 夕瀚生根培养基中
,
、
周后 , 即可见根的发生 ,
周后 , 的芽苗生根 一 一
一
二 和 丫射线对愈偷组组生长的影晌
对愈伤组织生长的影响 愈伤组织在含 不同浓度 的 , 一
培养基上的生长情况见表 字结果表明 , 浓度为
‘
时 , 极显著地影响愈仿组 织 的
生长 。 因此 , 可作为耐盐筛选的临界位 。 浓度和愈伤娜织相对生长量 的关
系式为
, ‘ “ · 吕 ”, ’ ,
式中 为愈伤组织相对生长量 , 为 浓度
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空帕 核 农 学 报 卷
表 不同培养墓对愈伤组织分化的影晌
才
培养基 差异显著性
似
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一腼一比巴﹃阱卜
一一
一一
一
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、仁,
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口︸召了产十净︸‘今︸
碑‘了盆、
几月‘门」
月又
、连﹄钊勺曰山︸
、
表 浓度对愈伤组织相对生长且的影晌
肠
接种愈伤组织数 平均相对生长量 差异显著性
台‘孟勺匀。
、
·
有
注 相对生长量
一 培养‘月后鲜重一接种鲜重 〔 〕
接种鲜重 了
“ 一 一 卫丝丛巡 , 哗 旦竺竿澄默留箫侃黑黔也
一旦 卫里丛些些‘
丫射线对愈伤组织生长的影响 辐照愈伤组织 在 , 一 培 养 基
上培养 月 , 结果 表 表明飞 丫 射线对愈伤组织 有明显影响 , 以上的照射量显著
影响 , 一 之向差异不显著
。 但是 , 若延长培养至 个月 处理的愈伤组织 大 部
分坏残
,
处理的全部坏死
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中华玲狠挑耐盐变异体筛选
襄 丫射峨对愈份组级相对生长盆的形晌
,
照射量
大 全
接种愈伤组织散 平均相对生长盆
,
差异显著性
介分 加 招 加肠
人匕。
。
曰︸﹄勺‘
。
。
︸,︸弓曰仁口
辐照愈伤组织对细胞大小和形态的影
一
响 辐燕处理导致细胞大小的变化 见 表
愈伤组织的细胞 , 其长度大多在 的 林 以下 , 辐射处理后 , 大多在 一 的 卜二之间 ,
并且有较多的巨型细胞 卜。 , 巨型细胞的数量随照射量的升高而增多 , 但死 亡 率
也增加 , 可见巨型细胞的出现是辐射损伤的一种表现形式
扮百一
‘
镇比长度分布
·
长 度
林
细胞数耳 奴 位
压二盏护﹄,
蜡门‘口
一
一
一
细咆数目
辐射处理不仅使细胞的大小发生变化 , 也影响细胞的形状
。 对照愈伍组织的细抱 ,
以上都为园形细胞 , 椭园抽
、 半园斌
’
梨形 、 肾斌 棒形和不规则形细胞较少 但辐射处理
后 , 园形细胞的比例减少 , 约占 , 而椭园形
、 半园形 、 肾形
、
特别是不规则形细胞相对
增加 处理既能显著地影响愈伤组织的相对生长量 , 又能导致巨型细胞的出现 , 因此 ,
在耐盐筛选时 , 可采用 的丫射线作为诱变照射量
。
兰 对盆女异体的称选
将愈伤组织移入 , 一 , 培养基 , 作第 轮选择 在第 轮
选择末 每轮选择时间为 个月 , 切割分离 , 挑选生长良好的愈街镇织
, 在筒样的 年件
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飞。 核 农 学 报 卷
下进行第 轮切割分离
、 选择 , 依次进行到第 轮 至第 轮末 , 将生长良好的愈伤组织转入
到不含 的培养基上 , 消除可能对选择剂 “ 上瘾 ” 的非抗性细胞系 ￡。 ’。 月后 , 转 入含
域不含 的 和 培养基诱导分化
。 再生植株称为 耐
的变异休 , 已获得盆栽苗 多棵 盆栽时未用 处理
从 , 选择的第 轮开始 , 切割分离 , 挑选生长良好的愈伤组织分别转入含。 、
。 的培养基上 , 作为第 轮选择 , 切割分离至第 轮 , 将生长良好的愈伤组织转入分
化培养基诱导分化 。
、
再生植株分别称为耐
、 。 的变异体 。 获得盆栽苗各 多
棵 盆栽时未用 处理 。
取经过 轮筛选 , 初步耐 。 的愈伤组织 , 用 丫射线辐照 , 然后移入 培
养基上 , 切割分离
、
选择 。 至第 轮末 , 移入分化培养基诱导分化 。 再生植株称为变异 体 。
一
经过 轮筛选 , 初步耐 。 的愈伤组织用 丫射线辐照 , 然后转入 培养
基 , 另取一部分直接转入 培养基 。 两种愈伤组织每轮的存活率及总存活率见 表 。
经 轮 选择后 , 辐照处理的愈伤组织存活率为 , 为 , 辐照处 理 明 显
提高了存活率 。 两种愈伤组织的存活率随选择次数的延长呈抛物线形式变化 。 曲线上最低点
所对应的 值 , 我们暂称 “ 选择临界期 ” 存活率最低时继代时间 , 见图
。
表 愈倪姐织的存活率
次继代 次继代
项 目
次继代 次继代
’
次继代
七
总存活串
肠
一一一
愈伤组织数
存活率
次继代
“
⋯
·“ ‘。· ’
⋯
⋯
⋯
。
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一
姗一
图互 愈伤组织存活率曲线
一 丫
注 曲线 , 辐照的愈伤组 织 曲线 , 愈伤
组织 。 曲线上的 点 、 点为选择临界期 。
丫 一
拐嘴卜川﹄。的
一
封
赞姐称
冷 ‘
蕊 进捧欢获 , 加姗她
公犷 上
笼 今
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期 中华琳狠挑耐盐变异体筛选
,
滋拐兹织的细胞基因型很复粉迪细胞对选择剂 · 的适应性不一样
, 即 各 种
细胞伺存在着生存竞争
。 选择临界期前 , 两种愈伤组织的存活率下降 , 表明非选择细胞逐渐
被淘汰 选择临界期后 , 两种愈伤组织的存活率上升 , 表明入选细胞增多 但是 , 两种愈伤
组织的选择临界期有明显的差异 。 辐照处理的选择临界期为 个月 , 而 为飞 个 月 表
明辐照处理诱发了变异细胞的出现
, 在较短时间内就淘汰了大部分非选择细脚
, 加速了选择
过程
讨 论
一
,
组培程序 众所周知 , 组织培养可以导致变异发生 , 许多学者评论了利用组培技术
创造突变体的意义 〔
· , , 一 本试验采用 , 一 和 结合的培养基完成了叶片脱分化过
程 , 根据正交试验设计找出了愈伤终织分化的最佳培养基 , 通过对辐照处理的观察与分析 ,
获得了最佳诱变照射量 , 从而建立了一套由中华称猴桃叶片诱导愈伤组织弄在愈伤组织水平
上筛选耐盐变异体的组培程序 , 愁
‘
二 选择时间 。 培养材料随继代时间的延长 , 变异频率增加 , 表现出变异积累的趋向
耐盐变异体的获得一般要经过若于次的筛选才能成功 , 很重要的条件是使培养材料尽可能长
时间地接受选择剂
、 激素等的诱变 , 使培养材料向着选择 目标演化 但是过长时间的继代筛
选 , 由于染色体结构和数 目的变花, 往往导致分化未降低
。 愈伤组织耐盐筛选的时间 , 可掌握
在选择临界期以后至分化率降抵尽前
。 一
根据舞们的试验 中华称猴桃耐盐筛选可在 一 , ”个
月 内进行
二
‘
寒翼羹尊黝巍器粼潺
中鑫饰组织块的大小无疑影响变异细抱的获得
。 因为存在于愈伤组织团中的变异细胞
, 其分
裂增难舞争不过周围的适应细胞系
, 不能尽快表现出来 。 随着对愈伤组织的切创分离 , 暴露
于培养基表面的细胞多 接触选择料帅机会也增多
, 增加了变异细胞与周围细胞对
竞争机会 , 有利于变异细胞的增殖 , 使之获得耐盐突变休
养成活 , 据我们的试验 , 可将愈伤组织切割成 娜左右 。
本校 级毕业生贾海惫同学参加部分土作 。
然而愈伤组织切割太小
书 的
, 不易培
今 考 文 旅
〔 〕周荣仁
〔 〕赵可夫
〔 〕罗士韦
〕张成和
。
〔 〕张正华
〔 〕杜旅林入
〔 〕辛垮刚
植物组织培养在选择耐盐植物方面的研究 曲阜师院学很 , 抗盐生理专刊、 “一
盐分过多对植物的伤害作用和伤害机理 曲阜师院学报 , 抗盐生理专刊 , 一
‘
高等植物突变细胞系的研究 细血生物杂志 , , 一
小黑麦单倍体愈伤组映 。二 附碱和附盐变异体的筛选和婆定 植物学报
, 。 , 。“ 一
木本植物组织培养及其应用 高辱教育出版社 , 一
游拱挑离休茎段愈伤组织的餐导箱植株再生 , 植物学摇 ,
十余种园艺植物组织培养研究简报 山东农业大学学报 , ,
, ‘ 。
一耳 ,
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滩亡 洲触 口勿 占阮介口
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〔幻 商效民 植物离体培养中染色体的变异 。 细胞生物杂志 , , 一
〔。 〕 五 , 士 十 ,
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