全 文 ：核 农 学 报 。, , 一 。
众 助爪 伽份 抽 介 抽 翻由
菜粉蝶颗粒体病毒包涵体蛋白的特性
苏 金 付仓生 尤崇构
中国农业科学院原子能利用研究所 北京 。。。
菜粉蝶领杠体病毒京 农 株 一 , 经蔗糖梯度 离心 纯化 、 碳酸
钠溶解后 , 再 经 柱层析分 离纯化 , 纯化 的 一 包涵体蛋 白 ,
在 一 上 呈 条带 。 该蛋 白含有 种 氛基酸 , 其中天门冬氛酸
、 谷氛酸和脯
氛酸含量较 高 , 酸性 氛基酸含量 为碱性 氛基酸含量 的 倍 。 氛基酸组分值 可 作 为该
病毒标 准制 剂 的参考依据 。 一 包涵体蛋 白的分子量 为 道 尔 顿 , 紫
外吸收特性 。 。 二 。 。 二
。 其荧尤尤谱 , 在 时 , 激发最大值在 , 其
次在 , 最小 位 为 , 发射最 大值 为 在 时 , 激 发 光 语 为
, 发射尤谱为
关健词 颗杜体病毒 包涵体蛋 白 氛基酸 组分 荧尤尤谱
前 言
菜粉蝶颗粒体病 毒 尸‘“ 沁 ’ ““ “ ”畔“红 “ , 是一种 杆 状 病 毒
其颗粒体 由包涵体蛋 白
、
病毒粒子和包涵体外脾髯成 “ ,
, 病毒粒 子由蛋 白质包涵体包被
使其具有高抗逆性能 , 加 以它对寄主有较强的专 ,毛等 长
一
故近年来 , 国物不 少 地区将其
用于防治菜青虫 , 并已产生了较为显著的效果 ’。 有关菜粉蝶颗粒体病毒的研究 ‘ 已有不
少报道 , 如病毒的形态结构 , 在宿主细胞 内的复制 〔叨 , 应用 的安全性 〔‘ , 血清学及毒力测
定 〔”等 , 而对包涵体蛋白的氨基酸组分及其光谱特性 , 国 内至今未见报道 。 为进一步探讨该
病毒的高抗逆能力机理 , 更有效地利用这种病和岭菜青虫
, 在 分析了 一 ““
限制性内切酶图谱的基础上 〔吕 ’, 本文对其包涵体蛋白的某些特性进行了测定 。
材 料 与仿 法
供试毒株 选用菜粉蝶颗粒体病毒京农 株 一 , 毒源由北京
一
市农林科
学院植保所 昆虫病毒组提供 。
一 包涵体蛋白的分离纯化 的制备 采用前文 〔 〕报逍方法 。 纯化后
的 一 用透射 电镜鉴定纯度
。
碱解 经蔗搪梯度离心纯化的 忌浮液加等体积 。 一
此文于 年 月 日收到
核 农 学 报 卷
碱液 , 于 ℃恒温水浴中碱解 一 , 每隔 取样 , 透射 电镜观 察 ,
确定最适碱解时 间
。
包 涵体 蛋白的分 离纯化 一 溶解液经 离 心 后 , 上 清 液 对
反透析浓缩至蛋白含量为
。
再用 凝胶柱 一 层析分
离纯化 一 包涵体 蛋 白 , 用 一聚丙烯酞胺凝胶 电泳 ’‘ 】鉴定纯度
包涵体蛋白的特性分析 分子量测定 按 等 ‘ 」方 法 , 用 一 测 定
一 包涵体蛋 白分子 量
。
氨基酸组分分析 按王小风等 〔‘ 。 ’方法 , 一 包涵体蛋 白 在
中
、 ℃水解 小时 , 日立 一 。型氨基酸 自动分析仪测 定氨墓酸组分
。
半 胧氨酸 参
照 方法 〔“ 处理 , 色氨酸用 光谱法 ‘ “ 」测定
。
紫外 、 荧光光谱测定 包涵体 蛋自 用岛津 一 。分光光度 计于 。。一
范围内测定其紫外吸收光 谱 用 日立 一 荧光 分光光度计于 和 一卜分别测
定包涵体蛋 白的内源荧 光光谱
。
结 果 与 讨 论
一 一 包涵体蛋 白的分离和纯化
经蔗糖梯度 离心纯化后的颗粒体病毒见图版
。
由图版 可 以看出 , 采用蔗糖梯度离心
法获得了较纯的颗粒体病毒 。
图版 蔗搪梯度 离心纯化的菜 粉蝶颗粒 体
病毒 —京
二仅 株 电镜 图谱
,
一
纯化后的颗粒体病毒在相同温度下经不同时间碱解表明 , 最适碱解时间为 。 在该时
间内包涵体 被较为彻底地碱解 , 而病毒粒子则未被降解
。
碱解液经 柱层析分离
的结果见图 , 从 图 看出 , 在洗脱曲线上有两个峰 。 峰 为病毒粒子 及部 分 包涵体蛋 白团块 ,
峰 为纯化的包涵体蛋 白 。 与超速离心分离相 比 , 柱层 析分离 包涵体 蛋
白 , 简便易行 , 分离纯化效果较好
。 而 超速离心分离 , 小时 后的包涵体蛋 白 仍
含有病毒粒 子 照片略
。
期 菜粉蝶颗粒体病毒包涵体蛋 白的特性
图 一 一 碱解液
层析洗脱曲线
一
一
︵吕二︶
一
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,
,
一 早
,
,
,
图版 一 包涵 体蛋 白的 帕
一聚丙烯酸胺凝胶 电泳图
一。肠 一
一
一
标准蛋 白 包涵体蛋 白
一
洲门、
门‘内卜
﹃﹄
图 一 包涵体蛋 白的 分子 量
一
一
一 牛血清白蛋 白 , ,
卵清蛋 白 ,
胃蛋 白酶
牛胰蛋 白酶原 、 ,
日一孚球蛋 白 日一 一
溶菌酶 一
明妇工,
︶渗
‘芝
二 一 吻 包涵体蛋白的特性
分 尹量 一 测定 一 包涵体蛋 白分子 量的电泳图谱如图版 。 结
果表明 , 经 柱层析分离后的 包涵体蛋 白已被纯化 , 在 一 上 ,
呈现 条谱带
。 以标准蛋 白的相对迁移率为横坐标
、
分子量的对数值为纵坐标作图 图 表
明 , 一 包涵体蛋 白的分子量为 道尔顿 。 。
核 农 学 报 卷
表 一 包涵体蛋白氮基酸组分
一 一
氨基酸
重量百分 七匕 一 , 一 ‘子数
︹口山今工
一
一
﹃一
八占︵
天冬氨酸
苏氨酸
丝氨酸
谷氨酸
甘氨酸
丙氨酸
撷氨酸
蛋 氨酸
异亮氨酸
亮氨酸
酪氨酸
苯丙氨酸
赖氨酸
组氨酸
精氨酸
脯氨酸
半胧氨酸
色氨酸
氨
总 数
、
了 汤一
口
讨
七
刀
碱 。
图 一 包涵 体蛋 白紫外吸收光谱
一 一
区
氨基酸组分 经测定 , 一 包涵体蛋白 共 含有 种氨基酸 表
。
其 「“
、 和 。含量较高 , 且酸性氨基酸 、 占 , 约为碱性氨基酸
、
、
的 倍 。 曾报道 〔。 ’, 在高等植物中 , 酸性氨基酸和脯氨酸与 植 物 的 抗
寒
、
抗旱
、
耐高温等有关 。 一 包涵体蛋 白的酸性氨基酸和脯氨酸台量高 , 可能与
的高抗逆能力有关
期 菜 粉蝶颗粒体病毒包涵体蛋 白的特性 】
从 一 包涵体蛋 白分子量和所 含氨基酸重量百分 比推算 , 一 包涵体
蛋白 每个分子含有 一 个氨基酸残基
。 与 〔’“ 所报道的大菜粉蝶 颗粒体病毒
的测试结果相比 , 为 一 所特有 。 一 包涵体蛋 白的这些
、、
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、
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, 。 ‘ 二 ‘
图 一 包涵 体蛋 白荧光光谱
一 一
了 左 右 —激发光谱
一 ‘ 一发射光谱
了 一 皿
数据和特性可作为该病毒标准制剂的参考依据 。
紫外
、 荧光光谱 一 包涵体蛋 白的紫外光谱最大吸收在 , 最小吸收
在 , 二 。 二 。 图 。 一 包涵体蛋 白荧光光谱如图 。 在中 性 条
件 下 , 激发最大值在 , 其次 在 , 最 小 值 为 发 射 最 大 值 为
。 在碱性条件 下 , 激发光谱为 发射光谱为 。 说明 一
包涵体蛋白中含有色氨酸 , 与天然 一球蛋 自的荧光光谱基 本吻合 〔“ 。 包涵体蛋 白本身
具有荧光 , 这对于探讨它与病毒粒子 间的能量转移等是有益的 。
参 考 文 献
北京市农林科学院植保所 昆虫病毒组 菜粉蝶颗粒体病毒京农 株的安全性检定 及其 田 间防效探讨 北京农业科
学 , 了一
。
〔 〕管致和等 菜粉蝶颗粒体病毒 及其应用的研究 。 北京农业大学学报 , , 阳 一
。
〔 郭尧君 蛋 白质的荧光分析
。 荧光实验技术及其在分子生物学中的应用 , 科学出版社 , 一
〔 〕刘年翠等 菜粉蝶颗粒体病毒的分离
、
提纯
、
鉴定
、
超微结构和应用 , 武汉大学学报 , , 一 。
〔 〕南开大学昆虫教研室 昆虫病毒各属的主要特征
。 昆虫病理学
, 人民教育出版社 , 一
〔 〕播瑞炽等 植物的抗性生理 植物生理学 下册 , 人民教育出版社 , 了 一 。
〔 〕全国蔬菜害虫病毒协作组 菜粉蝶颗粒体病毒的应用研究 · 中国农业科学 , , 一 。 、
〔 〕苏 金等 菜粉蝶颗粒体病毒 限制性内切酶图谱分析
。
植物保护学报 , 一
〕万兴生等 大菜粉蝶颗粒体病毒和菜粉蝶颗粒体病毒的形态学
、
血清学以及毒力的比较
。
植物保护学报 , ,
一
〔。〕王小风等 我国大麦条纹花叶病毒的研究 外壳蛋 白氨基酸组成和 末端 微生物 学报 , , 四
一 。
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