全 文 ：热带亚热带植物学报 2004，12(6)：562—564
Journa／of Tropical and Subtropical Botany
腊叶标本中微小种子 SEM 样品制备
胡晓颖，马其侠，王瑞江 ，徐信兰
(中国科学院华南植物园，广东广州510650)
摘要：腊叶标本中微小种子表面的污染物会影响对其表面特征的观察。经低浓度洗洁精(0．001％)浸泡一超声波振动
(33kHz，50、^，)一系列酒精浓度清洗处理后，在 SEM下，处理后的种子表面比处理前更加清晰。此方法操作简便、效果
明显，并且安全和无污染。
关键词：腊叶标本；微小种子；SEM；样品制备
中图分类号：Q94-33 文献标识码 ：A 文章编号：1005—3395(2004)06—0562—03
SEM Sample Preparation for Small Seeds from
Herbarium Specimens
HU Xiao—Ying，MA Qi—Xia，WANG Rui—j iang‘，XU Xin一1ai1
(．sD“m China Botanicd Garden,the Chinese Academy ofSciences，Ouangzhou 510650，China)
Abstract： Seed surface iS unclearly observed of contaminated small seeds collected from herbarium specimens．
After being soaked in low concentration of commercial detergent(O．00 1％)，shaken in the ultrasonic wave bath
(33 kHz，50w)，and rinsed in series content of ethanol with weak shaking in ultrasonic wave bath，the treated seed
surface becomes more clear than untreated ones under SEM ．This method is easy to operate and obviously
efective．
Key words：Herbarium specimen；Smal seed；SEM；Sample preparation
目前，扫描电子显微镜(SEM)技术已广泛应用
于植物的比较形态学研究。植物种子的结构特征在
植物分类和系统演化研究中具有重要的意义 】。许
多植物学家常常采集腊叶标本上的种子进行 SEM
观察，但是由于保存条件所限，腊叶标本上的种子，
尤其是那些散落在果实外的微小种子表面往往被
菌丝或其它杂质所覆盖，这严重影响了对种子表面
结构的观察。为了能除去这些杂质，同时又不影响
种子表面结构，我们经过多次比较试验，筛选出了
一 种好的处理方法，在此做一介绍。
1材料和方法
华南植物研究所标本馆(IBSC)腊叶标本(表 1)。
种子处理和观察 取 3-4粒种子放入离心
管中，加入 0．00l％商品洗洁精溶液，浸泡 10-12 h，
然后用水浴超声波清洗器在 33 kHz(50w)强档振
荡 l-3 h(视种子大小及种皮硬度而定)，再用 70％、
80％、95％乙醇逐级替换(每级 2次)，每次换液后用
水浴超声波弱档振荡2 min，最后用 l00％ 乙醇弱档
清洗 5 min。种子取出后放到滤纸上 自然风干，然后
将种子粘在贴有双面胶带的样品台上，用 JFC—l 100
离子溅射镀金膜 10 nnl，利用 JSM—T300扫描电子显
微镜进行观察并拍照。以未经处理的种子作对照。
种子来源 选用螺序草属 Bl啪 e
2结果
(Rubiaceae)3种植物的种子，均采 自中国科学院 用此方法处理的螺序草属 3种植物种子，表面
收稿 日期：2004—04～05 接受日期 ：2004—05—28
基金项目：中国科学院分类区系特别支持费(2000)资助
通讯作者 Corresponding author
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第 6期 胡晓颖等：腊叶标本中微小种子SEM样品制备
表 l螺序草属 3种植物材料
Table l Sel~ted three species of iradiclis for seed preparation
清洁，种皮结构清晰(图版I：1，2，3)。两广螺序草(5．
cn)种皮表面为穴状纹饰，表面细胞轮廓清晰，而
且平周壁内部具少量较小乳突 (图版 I：4)，罗氏螺
序草 (S too~a)种皮表面细胞轮廓较清晰，平周壁
内部乳突比两广螺序草的大 (图版 I：5)；海南螺序
草(S ha／nanens／s)细胞轮廓不太明显，平周壁下陷
成穴状，在穴边缘具较大疣突 (图版 I：6)。
未用此方法处理的螺序草属3种植物种子，表
面杂质较多(图版I：7，8，9)。两广螺序草种皮表面上
有少量菌丝分布，影响观察表面纹饰 (图版I：10)；
罗氏螺序草种皮表面上的杂质将种皮表面纹饰全
部覆盖无法观察(图版I：1 1)；海南螺序草种皮表面
上菌丝杂质较多，影响种子微形态观察(图版 I：12)。
3讨论
在腊叶标本中，体积较大的种子受到杂质污染
后较易于清理，清理后可以直接在 SEM下进行观
察，但是对体积微小的种子来说，目前尚未见有报
道说明如何清理其表面杂质以便于 SEM观察。螺
序草属种子微小，种皮膜质 】，由于标本馆保存条
件有限，标本受杂质污染较重，种子表面常被杂质
覆盖，影响对种子表面的观察。用常规弱酸弱碱液
进行清洗也难以清除种子表面杂质。反复实验表明
低浓度商品洗洁精可以很好地去除种子表面的杂
质，这可能是洗洁精中含有表面活性剂，可引起种
皮表面杂质的水解，但洗洁精浓度不应过高，否则
会在一定程度上破坏种皮表面结构。用系列乙醇溶
液可以清洗残留在种皮上的洗洁精，避免影响种子
表面结构的清晰度。进行水浴超声波振荡时的关键
是掌握好时间，时间过久则会造成种子表面结构破
坏，过短又不能有效去除杂质，具体情况视种子大
小及表皮硬度而定。总体而言，此方法具有操作简
单、效果明显、化学试剂用量少以及安全无污染等
优点，可为需要做类似实验的植物学工作者提供参
考。
参考文献
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[3]How F C(侯宽昭)．ADictionary ofthe Families andGenera of
Chinese Seed Plants[M]．2 ed．Beijing：Science Press，1982．461．
(in Chinese)
图版说明
图版 I PlateI
l一6．处理过的种子整体和局部放大照片：7一l2．未经处理的对
照照片。Surfacesofentire(1，2and 3)andmagnifcationpart(4，5and
6)oftreated seed．Surfaces ofentire(7，8 and 9)and magnifcation part
(1O，ll and 12)ofuntreated seeds．1，4，7，lO．两广螺序草S．丘sc 2，
5，8，l1．罗氏螺序草S．1oana；3，6，9，12．海南螺序草S．ha／nanens／s：
Figs．1，2，3，7，8，9．Bar=100 um：Figs．4，5，6，10，ll，12．Bar=lO Bm
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胡晓颖等：阁椒 HUXiat~-y Lng et aj Plale
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