全 文 ：© 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net
核 农 学 报 , 。 ‘
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标记斜纹夜蛾
病毒 探针的制备
林丽宽 丘泉发 尤祭新
中山大学生物系 广州
用‘ ““ 碘化 法标记针纹夜蛾病毒 一 , 所制备的‘“ “ 一
用 于膜上 一 分子杂交实验 。 结果证 明 , ‘““工一 一 探针 具有特
异性 , 可供应 用 。
关健词 探针 分子杂交 ‘“ “ 标记
箭 古目翎 口
放射性核素标记核酸分子探针已成为生物技术常用手段之一 。 目前制备放射性核素探针
多用 “ 核普三磷酸通过酶法标记核酸 , 但反应受酶特性影响 , 不够稳定 , 且需用进 口 “ “
核昔三磷酸 , 不易推广应用 。 我们根据文献 , 〕采用 ’“ “ 一碘化标记 方法 , 即直接化学
修饰法 , 条件较易控制 , 可用 国产的 ““卜碘化钠标记 , 价格较低 。 由于起始 标记 反应的催
化剂三氯化馆 来源困难 , 我们用氯化论 自 行 制 备 。〔 , 由 此制
备 一 探针进行分子杂交 , 木文报道有关的研究结果 。
材 料 与 方 法
‘ ““ 一碘化钠为中国原子能科学研究院产品 。 一 为进 口产品 , 其余试剂和
仪器均为国产品 。
斜纹夜蛾核型多角体病毒 以及从病毒粒子分离提纯 一 的方法见文献
‘ 。
三氯化论的制备见文献 〔 〕 , 并略有改进 。
用 ‘““ 标 记 一 探 针 的 方 法 如 下 取 林 纯 。 。
。。一 于 管中 , 经 水浴 , 变性后 , 依次力一入 ,
’ 一 , ‘ “ “ ‘“ “ , , 反 应 总
休积控制在 时 内 。 混合后在 ℃水浴 , 冰浴 , 再加入 倍于反应总休积的
的 ‘溶液以终止反应 。 反应物转入 一 柱 ,
‘
用 缓 冲液 洗脱 , 用旋
转柱层析方法 〔‘ 收集‘““卜 , 第一管所得的溶浪即为‘ “ 标记的 一 , 用井
型 计数器测量放射性活度 。
件文于 ’ ‘年 ”月“ 日收烈
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, 二 标记斜纹夜峨 夕 口 病毒 探针的制备
膜固相分子杂交按文献 〔 〕进行
。 用来标记的 一 和小 牛胸腺 各。 协
协 , 经 ℃水浴 变性后 , 分别滴在 同一张硝酸纤维滤膜上 , 晾干的滤膜置 于 塑 料
袋中的 预杂交液中 , 在 预杂交 , 随后加入经 变性的 ’“ “ 一
一 , 在 ℃下杂交 盛 。 杂 交 后 用 和 分别充分
洗去滤膜上未杂交的放射性物质 , 然后 将滤膜用 保鲜纸包好 , 干燥后进行放射 自显影 。
结 果 与 讨 论
一 ‘ “ 标记 一 探针的鉴定
用旋转柱层析法收集‘ “ 一 一 , 第一管即为标记 , 经光密度值 。 。
和放射性 钡, 定 , 二者峰值一致 图 , 图
。
我们用 ‘ ““ 标 记 协
一 , 比活性约为 , 经‘ “ “ 标记的 一 用 琼 脂糖 进 行
电泳后 , 在 紫外灯下可清楚 见到核酸谱带 图版 , 电泳凝胶 干燥后进行放时 性 自 显 影
图版 , ‘ “ 集中标记在核酸谱带上
。 由此说明‘ “‘ 标记结果令人满意 。
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管号
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图 用旋转柱层析法收集 一 的光密 度值变化
一
图 用旋转柱层析法收果 尸 一 的叩 变化
一
图版 ‘ “ 一 一 电泳图谱
一
,
图版
‘乞“ 一 一 电泳凝胶放射 自显影
, , 。 一 一
二 膜上 一 杂交
用’ ‘卜 一 作为探针
, 对未标记的 一 进 行 点 分 子杂交表明 ,
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滩必 助 介“ 扭 油 加扭
, 一 ,
, “ “ 一 一 具有特异性 图版 , 叩杂交后 一 呈阳 性结果
。
腺 呈阴性结果
。
阮介口
一
小牛胸
图版 ’忍 弓 标记探针与 一 点杂交自显影
一
一
小牛胸腺
人 一
,
龙繁新 特发表 在建立斜纹夜蛾核型 多角休病毒基因文库 时 , 用木 毛作 制备 的 ‘ ““
探针 , 确证取组质粒 粉纹夜蛾核型多角休病 毒 所 带 外 源 片段来自
一 。 由此看来 , ‘ “卜碘化法制备核酸分子探针有其实际应用价演 。
本研究系中山大学科学研究基金资助项 目
参 考 文 献
〔 〕
〔 〕
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一
韩广甸等编译 有机制备化学手册 上卷 石油 化学工业出版社 , 了
曼尼阿蒂期 , 等 分子克隆操作指南 科学出版社 。
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