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里白的组织培养与快速繁殖



全 文 :植物生理学通讯 第 46卷 第 5期, 2010年 5月 473
里白的组织培养与快速繁殖
张延恒 1, 施琼 2, 哀建国 2,3,*, 陈玉琳 2, 夏国华 2
1杭州市农业科学研究院, 杭州 310024; 2浙江林学院林学基础实验教学中心, 浙江临安 311300; 3中国林业科学院亚热带林
业研究所, 浙江富阳 311400
Tissue Culture and Rapid Propagation of Hicriopteris glauca (Thunb.) Ching
ZHANG Yan-Heng1, SHI Qiong2, AI Jian-Guo2,3,*, CHEN Yun-Lin2, XIA Guo-Hua2
1Hangzhou Academy of Agricultural Sciences, Hangzhou 310024, China; 2Basic Experiment Teaching Center of Forestry, Zhejiang
Forestry College, Lin’an, Zhejiang 311300, China; 3Research Institute of Subtropical Forestry, Chinese Academy of Forestry,
Fuyang, Zhejiang 311400, China
收稿 2010-03-05 修定  2010-04-06
资助 浙江省科技厅重点项目(20 06C2 2076 )。
* 通讯作者(E-mail: aijiangguo@yahoo.com.cn; Tel: 0571-
6 3 7 3 2 7 6 1 )。
1 植物名称 里白[Hicriopteris glauca (Thunb.)
Ching]。
2 材料类别 成熟孢子。
3 培养条件 孢子萌发培养基: (1) 1/2 MS; 配子体
(原叶体)增殖培养基: (2) MS+6-BA 0.5 mg·L-1 (单位
下同)+IBA 0.1, (3) MS+6-BA 1.0+IBA 0.1, (4) MS+
6-BA 0.5+IBA 0.5, (5) MS+6-BA 1.0+IBA 0.5; 孢子
体诱导培养基: (6) 1/2MS+6-BA 0.5+IBA 0.1, (7)
1/2MS+6-BA 1.0+IBA 0.1; 生根培养基: (8) 1/2MS+
IBA 0.1。以上培养基均加入 30 g·L-1蔗糖和 5.8
g·L-1琼脂, pH 5.8, 培养温度为(22±2) ℃, 光照时间
为 12 h·d-1, 光照强度为 30~40 μmol·m-2·s-1。
4 生长与分化情况
4.1 无菌材料的获得 剪取孢子已成熟、孢子囊群
盖未开裂的孢子叶为外殖体, 用75%酒精浸泡消毒
10~15 s, 无菌水漂洗 2遍, 转入 0.1% HgCl2灭菌 6
min, 无菌水漂洗3遍, 用无菌滤纸吸干材料上的水
分, 孢子叶切割成 0.5 cm×0.5 cm大小, 叶片正面朝
下接种到培养基(1)上。
4.2 孢子体萌发 经过约45 d的培养, 孢子囊群吸水
膨胀开始萌发, 孢子囊群盖周边产生绒毛状丝状体;
再培养20~25 d, 形成绿色疏散状原叶体(图1-a), 随
着培养时间的延长, 形成颗粒状绿色小团(图 1-b)。
4.3 原叶体的增殖 用镊子小心将疏散颗粒状原叶
体分成团, 均匀接种在培养基(2)~(5)。培养 20 d
后形成配子体(图 1-c)。继续培养 10~15 d, 培养基
(4)、(5)中配子体的体积扩大了约 15倍, 培养基
(2)、(3)中的扩大了约 10倍。
4.4 孢子体的再生 将继代的原叶体小心分开成约
5 mm×5 mm小丛, 接种到培养基(6)、(7), 培养 45
d后发现有零星幼孢子体产生; 培养 75 d后开始产
生大量孢子体(图2-a), 在培养基(7)中产生的数量明
显多于培养基(6)。
4.5 生根与移栽 将已分化成苗的孢子体接种到培
图 1 里白孢子萌发及配子体形成
a: 绿色疏散状原叶体; b: 颗粒状原叶体; c: 配子体。
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养基(8), 培养 25 d后, 生根率达到85%以上(图2-b)。
继续培养 15 d后, 至孢子体长出 3~4片幼叶, 打开
瓶盖炼苗 5~8 d后, 从培养基中取出幼苗, 洗去附
着的培养基, 用混合基质(泥炭:珍珠岩2:1)栽植, 放
置阴凉处养护, 注意湿度控制在 90%左右。20 d
后小苗移栽成活, 成活率 85%以上。
5 意义与进展 里白为里白科里白属蕨类植物。原
产云南、贵州、四川、广西、广东、湖北、
江西、福建、浙江、台湾, 是一种优良的切叶植
图 2 里白孢子体再生
a: 孢子体诱导; b: 幼孢子体。
物和园林观赏植物。株型美观, 具有较高的应用前
景。根状茎入药, 具有行气止血、接骨的功效(张
朝芳和章绍尧 1993)。常规繁殖采用分株法, 繁殖
系数低, 成活率低, 采用组织培养可快速获得大量
种苗, 移栽成活率高。里白的组织培养与植株再生
尚未见报道。
参考文献
张朝芳, 章绍尧(1993). 浙江植物志(第 1卷). 杭州: 浙江科学技
术出版社, 39