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蓝果树的离体培养和植株再生



全 文 :植物生理学通讯 第 45卷 第 11期,2009年 11月 1107
收稿 2009-09-25 修定  2009-10-12
资助 国家科技支撑计划(2 006 BAD 03 A01 )。
* 通讯作者(E-mail: wcr1992@yahoo.com.cn; Tel: 0311-
8 7 6 8 4 9 6 2 )。
蓝果树的离体培养和植株再生
王春荣 1,*, 毕君 1, 曹福亮 2
1河北省林业科学研究院, 石家庄 050061; 2南京林业大学, 南京 210037
In vitro Culture and Plantlet Regeneration of Nyssa sinensis Oliv.
WANG Chun-Rong1,*, BI Jun1, CAO Fu-Liang2
1Hebei Academy of Forestry Science, Shijiazhuang 050061, China; 2Nanjing Forestry University, Nanjing 210037, China
1 植物名称 蓝果树(Nyssa sinensis Oliv.), 又名紫
树。
2 材料类别 幼嫩枝条。
3 培养条件 以MS为基本培养基。(1)腋芽诱导培
养基: 1/2MS (CaCl2全量)+6-BA 1.0 mg·L-1 (单位下
同)+IBA 0.1; (2)不定芽增殖培养基: MS+6-BA 1.0~
2.0+KT 1.0+IBA 0.1~0.3; (3)壮苗培养基: MS+6-BA
0.5+IBA 0.2; (4)生根培养基: 1/2MS+NAA 0.2~0.5+
IAA 0.5。以上培养基均加入3%蔗糖和0.6%琼脂,
pH值为 5.8~6.2。培养温度为(25±2) ℃, 光照时
间为 12 h·d-1, 光照强度为 20~25 μmol·m-2·s-1。
4 生长与分化情况
4.1 芽的诱导 于 6月中旬或9月中旬, 采集当年生
无病虫害、生长健壮的蓝果树枝条, 剪去叶片, 先
在自来水下用毛刷洗去表面尘土, 然后用流水冲洗
2~3 h, 于超净工作台上, 先用无菌水冲洗 2次, 再
用0.1% HgCl2灭菌5~8 min, 无菌水冲洗6~8次, 切
成 1.0~1.5 cm的茎段, 每段带 1个腋芽, 接种于培
养基(1)上。茎段在培养基(1)上经 7~14 d培养后
腋芽萌发, 20~25 d时腋芽可长出 2 cm左右新梢,
无丛生芽产生, 芽诱导率达 96.4%。
4.2 增殖培养 将诱导培养获得的无菌芽切成 1.0
cm左右、含一个腋芽的茎段和茎尖, 接种在培养
基(2)上进行增殖培养, 接种 10 d后在芽基部形成
的愈伤组织开始分化出丛生芽(图 1)。细胞分裂素
的类似物与生长素的类似物的配比以5~15为宜, 增
殖率较高, 生长正常。6-BA对蓝果树不定芽增殖
影响最大, 6-BA浓度在 1.0~2.0时, 有效增殖率均
在 4.2倍以上, 高于 2.0或低于 1.0不定芽有效增殖
率均降低, 约为 1.8~3.8; KT与 6-BA配合使用, 可
促进蓝果树不定芽增殖, 增殖率提高 21.2%。细胞
分裂素浓度相同时, 随着 IBA浓度的增加, 不定芽
增殖率降低, 但IBA浓度在0.1~0.3时, 变化不明显,
不定芽均生长正常, IBA高于0.5时, 不定芽生长良
好, 但增殖率降低。不定芽在培养基(2)上平均月
增殖系数为 5.23。
图 1 蓝果树增殖培养
4.3 壮苗 不定芽在培养基(2)上分化与增殖良好,
但苗丛较矮, 可能是细胞分裂素过高抑制了不定芽
的伸长, 将其转入培养基(3)上, 不定芽伸长迅速,
20~25 d后可长至 2~3 cm。
4.4 根的诱导 取生长健壮、高 2 cm以上的试管
苗单株, 转入添加NAA和IAA及其他植物生长物质
及其组合的 1/2MS培养基中诱导生根。单纯用
0.1~2.0 mg·L-1 IBA或 IAA的处理生根率均不足
20%, 基部也不形成愈伤组织; 用 0.1~2.0 mg·L-1
NAA的处理虽然生根率最高可达80%, 但根系不发
达, 侧根极少, 且基部形成 1~2 cm愈伤组织块, 不
利于试管苗移栽成活; NAA与IBA或IAA配合使用,
生根情况较好(图 2)。试管苗在培养基(4)上, 接种
10 d后开始生根, 15~20 d后根长 2~3 cm, 有须根
生出, 30 d时形成较发达的根系 , 平均根数为
8.6~11.7条 ·株 -1, 平均根长为 4~6 cm。根为白色,
生根率为 80%~100%。
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4.5 炼苗移栽 试管苗形成发达的根系后, 室内开瓶
炼苗 3~5 d, 取出苗后洗净根部的培养基, 用 1 000
倍多菌灵液浸泡 0.5 h, 取出移植到蛭石:珍珠岩:草
炭=1:1:1的基质中, 罩上塑料薄膜, 5 d后掀去塑料
薄膜, 适时叶面喷水, 温度保持在18~25 ℃, 相对湿
图 2 蓝果树生根
度为 80%~90%, 每 7~10 d期间喷一次杀菌剂。20
d后成活率在 95%以上, 可移入营养杯或大田, 移
栽成活率为 65%。
5 意义与进展 蓝果树为蓝果树科蓝果树属高大落
叶乔木, 因其核果成熟时果皮呈深蓝色而得名。蓝
果树喜光、喜酸性土壤, 适应性强, 其树干通直,
材质好, 枝叶稠密, 叶片宽大, 春季嫩叶紫红色, 秋
日叶变成绯红, 叶色艳丽, 成熟果实呈美丽的深蓝
色, 是一种集观赏与实用为一体的优良树种。蓝果
树的繁殖方法主要是种子繁殖, 种壳十分坚硬, 种
子出土很不整齐, 发芽率低, 一般为 25%~30%, 种
子繁殖后代变异大, 为保存种源与变异必须采取无性
繁殖, 采取组织培养方法可实现蓝果树工厂化育苗。
目前蓝果树的组织培养和快速繁殖尚未见报道。