全 文 ：植物生理学报 Plant Physiology Journal 2014, 50 (11): 1699~1706　　doi: 10.13592/j.cnki.ppj.2014.0403 1699
收稿 2014-09-09　　修定 2014-10-15
资助 国家自然科学基金(31270651和31200514)。
* 通讯作者(E-mail: djli.rricatas@gmail.com; Tel: 0898-23301174)。
橡胶树胞质型谷胱甘肽还原酶基因的克隆与表达分析
邓治, 刘辉, 王岳坤, 李德军*
中国热带农业科学院橡胶研究所, 农业部橡胶树生物学与遗传资源利用重点实验室, 海南儋州571737
摘要: 根据橡胶树GR1基因(HbGR1)部分序列设计特异引物, 运用RACE和RT-PCR技术克隆HbGR1全长cDNA序列; 运用
DNAMAN、MEGA 6.06、ProtParam及SignalP 4.1 Server等生物信息学软件对HbGR1序列、GR1系统进化关系及HbGR1的
基本理化性质和亚细胞定位等进行分析; 利用实时荧光定量PCR技术研究HbGR1的表达模式; 构建原核表达载体pEASY-
E1-HbGR1, 并将其转入大肠杆菌BL21(DE3), 用IPTG诱导融合蛋白原核表达。获得2 082 bp的HbGR1全长cDNA, 其中5′非
编码区293 bp, 3′非编码区298 bp, 开放阅读框长1 491 bp, 共编码496个氨基酸, 其编码的蛋白分子质量约为53.68 kDa, 理论
等电点pI为6.18。序列分析发现HbGR1无信号肽, 在氨基酸水平上与其他植物GR1具有很高的同源性, 包含植物GR典型的
NADH结合结构域、二聚体结构域和高度保守的GGTCV[I/L]RGCVPKK[I/L]LVY基序。对植物GR进行系统进化分析表
明, HbGR1属于双子叶植物GR分枝, 与同属大戟科的蓖麻亲缘关系最近。实时荧光定量PCR结果表明HbGR1在橡胶树胶
乳、叶片、树皮和花中均表达; HbGR1表达受死皮、乙烯、茉莉酸、过氧化氢和伤害调控。SDS-PAGE电泳结果表明重组
质粒pEASY-E1-HbGR1在大肠杆菌BL21(DE3)中有效表达一个分子量约为55 kDa的融合蛋白。
关键词: 橡胶树; GR1; 氧化胁迫; 序列分析; 表达模式; 原核表达
Molecular Cloning and Expression Analysis of a Cytosolic Glutathione Reduc-
tase Gene from Hevea brasiliensis
DENG Zhi, LIU Hui, WANG Yue-Kun, LI De-Jun*
Key Laboratory of Biology and Genetic Resources of Rubber Tree, Ministry of Agriculture, Rubber Research Institute, Chinese
Academy of Tropical Agricultural Sciences, Danzhou, Hainan 571737, China
Abstract: The specific primers were designed according to EST sequence of HbGR1. The full-length cDNA of
HbGR1 was cloned using RACE and RT-PCR technology. The sequences of HbGR1, phylogenetic relationship
with plant cytosolic GRs, properties and subcellular localization of HbGR1 were analyzed by a variety of bioin-
formatics softwares such as DNAMAN, MEGA 6.06, ProtParam and SignalP 4.1 Server, etc. The expression
profiles of HbGR1 were analyzed by real-time PCR method. The recombinant plasmid pEASY-E1-HbGR1 con-
taining the coding sequence of HbGR1 was constructed and expressed via inducing with IPTG in E. coli
BL21(DE3). The full-length cDNA of HbGR1 was 2 082 bp in length, containing a 1 491-bp open reading
frame flanked by a 293-bp 5′-UTR and a 298-bp 3′-UTR. HbGR1 encoded a polypeptide of 496 amino acids
with a calculated molecular weight of 53.68 kDa and a PI of 6.18. Being high homology with other plant cyto-
solic GRs, HbGR1, without signal peptide sequence, contained a NADH binding domain, a dimerization do-
main and a highly conserved motif GGTCV[I/L]RGCVPKK[I/L]LVY. Phylogenetic analysis of plant GRs
showed that HbGR1 located in the dicot branch and was closely related to that of RcGR1, which also belongs
to Euphorbiaceae. Real-time PCR analysis indicated that HbGR1 was ubiquitously expressed in latex, leaves,
barks and flowers. The expression of HbGR1 was regulated by ethylene, jasmonic acid, hydrogen peroxide and
wounding treatments and tapping panel dryness (TPD). The SDS-PAGE analyses indicated that the recombinant
plasmid pEASY-E1-HbGR1, was effectively expressed in E. coil BL21(DE3) and the molecular weight was ap-
proximately 55 kDa.
Key words: Hevea brasiliensis; GR1; oxidative stress; sequence analysis; expression profiles; prokaryotic ex-
pression
橡胶树原产亚马逊河流域, 作为一种重要的
热带经济林木 , 是目前天然橡胶的唯一商业来
源。硫醇类化合物广泛存在于橡胶树胶乳中, 其
植物生理学报1700
主要成分为还原型谷胱甘肽(glutathione, GSH)。
它在橡胶树排胶和死皮发生过程中发挥重要作用,
能提高黄色体及其他细胞器的稳定性, 防止胶乳
原位凝固(Chrestin等1985), 死皮橡胶树最初表现
为胶乳硫醇含量下降(校现周1996)。谷胱甘肽还
原酶(glutathione reductase, GR) (EC 1.8.1.7)是一种
广泛存在于原核和真核生物中的黄素蛋白氧化还
原酶。它利用NADPH作为唯一的还原力和电子供
体, 催化氧化型谷胱甘肽(oxidized glutathione,
GSSG)还原为还原型GSH。GR对维持胞内高比率
GSH/GSSG有重要作用。作为一种重要的抗氧化
酶, GR通过抗坏血酸-谷胱甘肽(ascorbate-glutathi-
one, AsA-GSH)循环参与清除植物体内多余活性氧
(reactive oxygen species, ROS), 是还原型AsA和
GSH再生过程中的关键酶。自1951年首次发现植
物GR (Conn和Vennesland 1951)以来, 人们已对豌
豆(Creissen等1991)、玉米(Mahan和Burke 1987)、
拟南芥(Kubo等1993)、水稻(Kaminaka等1998)、
小麦(Lascano等2001)和烟草(Creissen和Mullineaus
1995)等植物GR进行了纯化鉴定及基因克隆。研
究发现70%~80%的GR定位在叶绿体, 此外细胞
质、线粒体、过氧化物酶体和乙醛酸体中也有GR
存在(Rao和Reddy等2008)。Rouhier等(2006)根据
GR蛋白N-末端氨基酸序列特征将GR分为短胞质
亚型GR1和长细胞器亚型GR2。GR多以同源二聚
体形式存在, 但也有特殊情况, 雷氏衣藻GR以单体
形式存在(Takeda等1993), 玉米和豌豆GR以异源二
聚体形式存在(Mahan和Burke 1987; Kalt-Torres等
1984)。高等植物GR为一个小的基因家族, 目前在
拟南芥(Kubo等1993)、烟草(Creissen和Mullineaus
1995)、豌豆(Creissen等1991; Stevens等1997)和豇
豆(Contour-Ansel等2006)等物种中均发现2个GR,
水稻和杨树中均发现3个GR (Rouhier等2006; Wu
等2013)。GR是一种受逆境胁迫调控表达的酶, 在
植物抵御氧化胁迫过程中发挥重要作用(Schaedle
和Bassham 1977)。干旱(Contour-Ansel等2006;
Khanna-Chopra和Selote 2007)、高盐(Wu等2013;
Hossain等2011)、低温(Huang和Guo 2005; Zhang
等2013)、臭氧(Kubo等1995)、重金属(Panda等
2011)、除草剂(Romero-Puertas等2006)等逆境胁迫
条件下GR活性或表达量明显增加。
本研究利用RT-PCR和RACE技术扩增并克隆
HbGR1全长cDNA; 利用生物信息学软件对该基因
及其编码氨基酸的性质和亚细胞定位进行预测;
采用real-time PCR技术研究该基因的表达模式。
利用pEASY-E1/BL21(DE3)系统原核表达HbGR1
蛋白。为进一步研究HbGR1在橡胶树中的功能提
供理论依据, 同时还将促进橡胶树乳管细胞活性
氧信号传导研究的发展。
材料与方法
1 实验材料与试剂
本研究所用样品均采自中国热带农业科学院
试验农场。各组织样品采自1990年定植的橡胶树
(Hevea brasiliensis Muell. Arg.)品系热研7-33-97。
以1997年定植的橡胶树品系PR107为实验树, 参照
中华人民共和国农业部(2006)农业行业标准采集不
同死皮(tapping panel dryness, TPD)等级橡胶树胶
乳和树皮样品。选用2003年定植的未开割热研
7-33-97幼树, 参照Hao和Wu (2000)方法进行乙烯
利(ET)和茉莉酸甲酯(MeJA)处理, 在处理0、4、
8、24、48和72 h后采集胶乳。参照Zhu等(2010)
和Tang等(2010)方法分别进行H2O2和伤害处理, 采
集处理后0、6、24和48 h胶乳。以不作任何处理
的未开割幼树为对照。
2×Taq PCR Master Mix聚合酶、大肠杆菌
DH5α和BL21(DE3)感受态细胞等为北京天根公司
产品, PyrobestTM DNA聚合酶、DNase I、克隆载
体pMD18-T和DNA Markers等为大连宝生物公司
产品, RevertAidTM First Strand cDNA Synthesis试剂
盒为Fermentas公司产品, SMARTTM RACE cDNA
Ampl i f ica t ion试剂盒为Clontech公司产品。
pEASY-E1表达载体购自北京全式金生物技术有限
公司。委托上海生工生物工程技术服务有限公司
进行引物合成和测序。
2 实验方法
2.1 总RNA提取及cDNA第一链合成
参照Xu等(2010)方法提取总RNA。RNA中残
留的少量DNA用DNase I去除。按照RevertAidTM First
Strand cDNA Synthesis Kit说明书合成第一链cDNA。
2.2 HbGR1全长cDNA克隆与序列分析
根据已知橡胶树GR1的EST序列(GenBank登
邓治等: 橡胶树胞质型谷胱甘肽还原酶基因的克隆与表达分析 1701
录号: EU526129)设计一对特异引物GR1F和GR1R
(表1), 用健康橡胶树胶乳cDNA作为模板进行PCR
扩增。扩增程序为94 ℃ 5 min; 94 ℃ 30 s, 50 ℃ 30
s, 72 ℃ 30 s, 共30个循环; 72 ℃ 7 min。PCR产物
回收后连接至pMD18-T载体, 挑取阳性克隆递交
公司测序。根据基因片段测序结果设计3′RACE引
物GR1-3R-GSP和GR1-3R-NSP, 5′RACE引物GR1-
5R-GSP和GR1-5R-NSP (表1)。参照SMART™
RACE cDNA Amplification试剂盒说明书进行
RACE扩增。5′RACE两轮扩增程序均为94 ℃ 5
min; 94 ℃ 30 s, 60 ℃ 30 s, 72 ℃ 2 min, 共25个循
环; 72 ℃ 7 min。3′RACE第1轮扩增程序为94 ℃ 5
min; 94 ℃ 30 s, 72 ℃ 2 min, 共5个循环; 94 ℃ 30 s,
70 ℃ 30 s, 72 ℃ 2 min, 共5个循环; 94 ℃ 30 s, 68
℃ 30 s, 72 ℃ 2 min, 共25个循环; 72 ℃ 7 min。
3′RACE第2轮扩增程序同5′RACE扩增程序。PCR
产物回收后连接至pMD18-T载体, 挑取阳性克隆
递交公司测序。根据橡胶树GR1的拼接结果设计
引物HbGR1F和HbGR1R (表1), 用PyrobestTM DNA
酶扩增全长序列。扩增程序为94 ℃ 5 min; 94 ℃
30 s, 55 ℃ 30 s, 72 ℃ 2 min, 共30个循环; 72 ℃ 7
min。PCR产物回收后连接至pMD18-T载体, 挑取
阳性克隆递交公司测序。
利用NCBI的ORF finder工具对序列的开放阅
读框进行查找。运用ExPASy的ProtParam工具对
蛋白质的分子量和等电点进行预测。利用SignalP
4.1 Server (http://www.cbs.dtu.dk/services/SignalP/)
分析信号肽。利用InterProScan sequence search
(http://www.ebi.ac.uk/interpro/search/sequence-
search)搜索保守结构域。对序列进行BLAST比对
分析, 选择与HbGR1同源的其他植物胞质型GR氨
基酸序列, 用MUSCLE程序进行多重比对, 运用
MEGA6.06软件的邻接法(NJ)构建系统进化树, 对
自展值(Bootstrap)进行1 000次重复来检验各分支
置信值。
2.3 Real-time PCR分析
采用real-time PCR对HbGR1的表达模式进行
分析。根据HbGR1全长序列设计特异引物Hb-
GR1-RTF和HbGR1-RTR (表1), 以cDNA为模板进
行扩增, 扩增程序为94 ℃ 30 s; 94 ℃ 5 s, 60 ℃ 20 s,
72 ℃ 20 s, 共45个循环。以橡胶树18S rRNA基因
为内参, 设计引物Hb18SF和Hb18SR (表1)。用
2-∆∆CT法计算相对表达量。采用SPSS 19.0统计软件
进行数据分析。
2.4 pEASY-E1-HbGR1原核表达载体的构建及
表达
根据HbGR1序列设计引物HbGR1-ORFF和
HbGR1-ORFR用于扩增开放阅读框(表1)。以橡胶
树胶乳cDNA为模板进行PCR扩增, 扩增程序为94
℃ 5 min; 94 ℃ 30 s, 55 ℃ 30 s, 72 ℃ 2 min, 共30
个循环; 72 ℃ 10 min。将回收后的扩增产物连接
至pEASY-E1载体, 并转化到大肠杆菌DH5α感受态
表1 HbGR1克隆和表达分析所用引物序列
Table 1 Primers sequences used in gene cloning and expression analyses of HbGR1
引物名称 引物序列(5′→3′) 用途
GR1F CATACCACCTTTGTCTGTAG 扩增EST片段
GR1R CTCAGCAGTAGAAGGGTGTA
GR1-5R-GSP CTGTCTTCTCTTGCCGTCCAGAG 5RACE
GR1-5R-NSP GCCTGCTCTTCACTGAGGCCT
GR1-3R-GSP GTGCGGAGCAACAAAGGCCCA 3RACE
GR1-3R-NSP AGCACGGTGGGAATACACCCT
HbGR1F ACGCGGGATACATCTTTCCA 验证cDNA全长
HbGR1R CGGATTAATCAAAATTTATTGTA
Hb18SF GCTCGAAGACGATCAGATACC 扩增内参
Hb18SR TTCAGCCTTGCGACCATAC
HbGR1-RTF GGGGTTAAGCTGCTTGAAGGA 检测HbGR1表达水平
HbGR1-RTR GGACGTTGAGCTCTATTTCCA
HbGR1-ORFF ATGGCGAGGAAGATGCTAAT 构建原核表达载体
HbGR1-ORFR TTATAGGCTTGTCTTTGGTT
植物生理学报1702
细胞中, 挑取阳性克隆递交公司测序。将测序正
确的阳性克隆摇菌提取质粒, 转化大肠杆菌BL21
(DE3)感受态细胞。挑取单克隆接种到LB液体培
养基(含100 μg·mL-1 Amp)中, 37 ℃振荡培养过
夜。将菌液按1%比例转接到新鲜LB液体培养基
(含100 μg·mL-1 Amp)中, 37 ℃振荡培养至菌液
OD600值为0.4左右, 加入IPTG至终浓度1 mmol·L
-1,
诱导表达4 h后离心收集菌体, 用0.1 mol·L-1 Tris-
HCl (pH 8.0)缓冲液将菌体沉淀洗涤2次, 重悬菌
体, 加入2×上样缓冲液, 水浴煮沸10 min, 12 000×g
离心5 min, 取适量上清用12%的SDS-PAGE分离
蛋白。以空载体及未诱导的重组表达载体作为
对照。
实验结果
1 HbGR1全长cDNA的克隆及序列分析
将EST序列和RACE测序结果进行拼接, 获得
橡胶树GR1基因全长cDNA序列。用引物对全长序
列进行PCR验证, 测序结果显示拼接序列正确, 该
序列长度为2 082 bp, 含有一个1 491 bp的开放阅读
框, 编码496个氨基酸, 5′端非翻译区为293 bp, 3′端
非翻译区为298 bp, 含有典型的真核生物加尾信号
AATAAA和poly (A)尾。序列分析表明HbGR1不
具有信号肽, 定位于细胞质, 202~276位氨基酸序
列为NADH结合结构域, 370~480位氨基酸序列为
二聚体结构域, 67~83位氨基酸序列为高度保守基
序。BLAST比对结果显示, 该基因翻译的氨基酸
序列与葡萄、梅花、川桑、可可、苹果、毛果杨
和蓖麻等植物胞质型GR氨基酸序列一致性达
85%~90% (图1)。据此, 将该基因命名为HbGR1
(GenBank登录号: GU952813)。HbGR1蛋白预测
分子量为53.68 kDa, 等电点为6.18。采用MEGA-
6.06软件构建植物胞质型GR系统进化树(图2)。结
果显示, 单子叶植物水稻和玉米聚为一支, 而双子
叶植物葡萄、梅花、川桑、可可、苹果、毛果
杨、蓖麻、橡胶树和拟南芥等聚为另一支。
HbGR1属于双子叶植物亚类, 与同属大戟科的蓖
麻亲缘关系最近。
2 HbGR1基因表达模式分析
以Hb18S rRNA为内参, 利用real-time PCR分
析HbGR1表达模式。组织表达结果显示, HbGR1
在花、树皮、叶片和胶乳中均表达, 其中胶乳中
表达量最高、叶片中表达量最低(图3)。与健康树
相比, 除3级死皮树胶乳中HbGR1表达升高外, 随
着死皮的进程胶乳中HbGR1表达逐渐下降; 与健
康橡胶树相比, 2级死皮树树皮中HbGR1表达量明
显升高, 其余等级死皮树树皮中HbGR1表达量均
下降, 并低于健康树(图4)。分析ET、MeJA、伤害
和H2O2等处理条件下HbGR1的表达模式, 结果显
示HbGR1表达受上述4种处理所调控。其中ET处
理4 h后HbGR1表达明显下调, 8 h表达量最低, 随
后逐渐上调, 至72 h时表达量最高。MeJA处理后
HbGR1的表达出现波动, 处理4 h后表达量显著下
调, 随后逐渐上调, 至48 h时表达量最高, 但72 h表
达量再次下调(图5-A)。H2O2处理后HbGR1表达量
逐渐升高, 48 h表达量达到最高。伤害处理后6 h表
达量明显增加, 随后逐渐降低(图5-B)。以上研究
结果表明HbGR1可能参与橡胶树死皮过程, 并在
抵御乙烯、JA、伤害和H2O2等处理引起的氧化胁
迫过程中发挥重要作用。
3 重组质粒pEASY-E1-HbGR1的构建及融合蛋白
表达
以橡胶树胶乳cDNA为模板, 扩增出一条1 500
bp左右的目的条带, 回收该条带, 与pEASY-E1载体
连接后挑取阳性克隆测序。重组质粒的测序结果
与HbGR1开放阅读框序列完全一致, 表明原核表
达载体pEASY-E1-HbGR1构建成功。把重组质粒
转入大肠杆菌表达菌株BL21(DE3), 挑取单克隆菌
落接种到LB液体培养基(含100 μg·mL-1 Amp)中,
经IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE分析。电泳结
果显示, 与对照菌株相比, pEASY-E1-HbGR1重组
菌中多出了1条约55 kDa左右的蛋白条带, 与预计
表达的pEASY-E1-HbGR1融合蛋白大小相符(图6),
说明HbGR1在大肠杆菌中成功表达。
讨　　论
割胶后排胶持续时间是决定橡胶树产量的主
要因子之一, 而橡胶树死皮是限制橡胶树产量提
高的主要因素。橡胶树乳管内黄色体的稳定性与
割胶后排胶时间和死皮密切相关。Chrestin等
(1985)认为硫醇是黄色体的稳定剂, 硫醇能清除
ROS或催化ROS转化为非毒性物质, 阻止ROS破坏
邓治等: 橡胶树胞质型谷胱甘肽还原酶基因的克隆与表达分析 1703
图1 HbGR1蛋白序列与其他植物胞质型GR蛋白序列比对
Fig.1 Sequence alignment of deduced HbGR1 and other plant cytosolic GR proteins
方框表示植物GR高度保守的GGTCV[I/L]RGCVPKK[I/L]LVY基序, *表示激活位点中两个关键的Cys残基。单下划线表示NADH
保守结构域, 双下划线表示二聚体结构域。氨基酸序列Genbank登录号分别为: 苹果(XP_008380593); 梅花(XP_008224600); 葡萄
(XP_002285672); 蓖麻(XP_002518118); 毛果杨(XP_002299276); 可可(XP_007034406); 川桑(EXB87094); 拟南芥(AAN13086); 水稻
(BAA37092); 玉米(AFW73983)。
不饱和脂肪酸, 从而保护黄色体及其他细胞器膜
的完整性, 防止胶乳原位凝固。目前生产中大规
模使用促进排胶的ET来刺激增产 , 本研究发现
HbGR1表达受ET调控, 在ET处理8 h之内, HbGR1
的表达量呈下调趋势, 而8 h后HbGR1的表达量逐
渐上调, 至72 h时达到最高。ET可诱导橡胶树产生
ROS, HbGR1可能通过再生GSH参与清除过量产生
的ROS以保护黄色体膜, 从而促进橡胶树乳管排
胶。Chrestin (1989)认为橡胶树死皮是由于ROS产
生与清除之间失衡而引起黄色体破裂所致。Ven-
katachalam等(2007)和Li等(2010)认为ROS在橡胶
树死皮发生过程中发挥重要作用。死皮橡胶树乳
管中ROS的非酶促解毒功能和代谢活性降低, 胶乳
硫醇含量明显下降, 这说明胶乳硫醇含量和死皮
发生过程密切相关。Li等(2010)和邓治等(2012)分
别从基因和蛋白水平发现健康树胶乳中GR基因表
植物生理学报1704
达量和酶活性高于死皮树, 但未对死皮不同等级
中GR表达量变化进行详细研究。本文从基因水平
研究HbGR1与橡胶树死皮进程间的关系, 取不同
死皮等级橡胶树胶乳和树皮为材料研究HbGR1表
达模式。研究结果表明, 随着死皮的进程, HbGR1
表达量除在3级死皮树胶乳中出现明显升高外, 其
余死皮等级橡胶树胶乳中HbGR1表达量总体上呈
逐渐下降趋势。随着死皮的进程树皮中HbGR1表
达量除在2级死皮树中明显升高外, 其他等级中均
低于健康树, 且下降幅度变化不大。死皮树胶乳
图2 植物胞质型GR系统进化关系
Fig.2 Phylogenetic analyses of plant cytosolic GR
图3 HbGR1组织表达模式
Fig.3 Expression profiles of HbGR1 in different tissues
各柱形上不同小写字母表示在P<0.05水平差异显著, 图4同。
中HbGR1表达量比树皮中下降明显。以上研究结
果说明, 在死皮的不同阶段橡胶树胶乳和树皮中
ROS清除能力可能出现波动, 胶乳中GSH/GSSG比
例对橡胶树死皮造成的影响可能比树皮更为明
显。MeJA处理橡胶树4 h后胶乳HbGR1表达量显
著下调, 随后逐渐上调, 至48 h时表达量最高, 但72
h表达量再次下调。伤害处理后6 h表达量明显增
加, 随后逐渐降低。伤害能诱导内源JA产生, JA是
植物响应伤害和环境胁迫的一个重要调节子, 它
与乙烯信号通路之间的交叉互作在植物抵御逆境
胁迫过程中发挥非常重要的作用。Xiang和Oliver
(1989)研究发现JA能诱导GR表达。Qiu等(2014)研
究发现JA处理能提高小麦幼苗GSH含量。用JA预
处理后的小麦幼苗在随后的盐胁迫条件下H2O2含
量降低, O2·ˉ产生速率降低。据此, 我们推测伤害和
JA可能通过诱导胶乳HbGR1表达, 提高胶乳GSH/
GSSG比例, 清除ROS产生, 以抵御伤害或环境胁
迫造成的橡胶树氧化胁迫。GR作为一种重要的受
逆境胁迫诱导表达的酶类, 参与抵御干旱、盐胁
迫、低温、臭氧、重金属、除草剂等逆境引起的
氧化胁迫。橡胶树幼苗叶片经H2O2处理后GR活性
增强, GSH/GSSG比例提高(邓治等2012)。本研究
发现H2O2处理能诱导HbGR1表达, 说明HbGR1可
能参与胁迫产生的ROS清除过程。
邓治等: 橡胶树胞质型谷胱甘肽还原酶基因的克隆与表达分析 1705
图6 pEASY-E1-HbGR1原核表达产物SDS-PAGE分析
Fig.6 SDS-PAGE analysis of the prokaryotic expression prod-
ucts of pEASY-E1-HbGR1
M: 蛋白分子量标准 ; 1 : 未经 IPTG诱导的BL21(DE3)/
pEASY-E1; 2: IPTG诱导4 h的BL21(DE3)/pEASY-E1; 3: 未经
IPTG诱导的BL21(DE3)/pEASY-E1-HbGR1; 4: IPTG诱导4 h的
BL21(DE3)/pEASY-E1-HbGR1。
图4 不同死皮程度橡胶树胶乳和树皮中HbGR1的表达模式
Fig.4 Expression patterns of HbGR1 in latex and bark from different TPD degrees of rubber trees
图5 HbGR1在不同处理条件下的表达模式分析
Fig.5 Expression patterns of HbGR1 under different treatments
A: ET和MeJA处理条件下HbGR1的表达模式; B: H2O2和伤害处理条件下HbGR1的表达模式。*和**分别表示同一处理时间下该处理
与对照之间在P<0.05和P<0.01水平的差异显著性。
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