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钩藤的组织培养与植株再生



全 文 :植物生理学通讯 第42卷 第6期,2006年12月 1127
钩藤的组织培养与植株再生
毛堂芬1 刘作易2,* 贺定祥3 刘涛4
1 贵州省生物技术研究所,贵阳 550006;2 贵州省农业生物技术重点实验室,贵阳 550006;3 贵州省黔东南州信邦中
药饮片有限责任公司,贵阳 556000;4 贵州省柑橘科学研究所,贵州罗甸 550100
Tissue Culture and Plantlet Regeneration of Uncaria rhynchophylla (Miq.) Jacks.
MAO Tang-Fen1, LIU Zuo-Yi2,*, HE Ding-Xiang3, LIU Tao4
1Guizhou Biotechnology Institute, Guiyang 550006, China; 2The Key Laboratory for Agricultural Biotechnology of Guizhou,
Guiyang 550006, China; 3Xinbang Traditional Chinese Medicine Limited Company, Eastsouth District of Guizhou Province,
Guiyang 556000, China; 4Guizhou Orange Institute, Luodian, Guizhou 550100, China
收稿 2006-07-10 修定  2006-09-18
资助 贵州省种植业结构调整综合配套技术试验示范项目(黔
农农[2005]08 号)。
*通讯作者(E-mail: liuzuoyi@yahoo.com.cn, Tel: 0851-
3761761)。
1 植物名称 钩藤[Uncaria rhynchophylla (Miq.)
Jacks.]。
2 材料类别 成熟种子。
3 培养条件 以 B5 为基本培养基。(1)种子萌发培
养基:加活性炭和不加活性炭的B5 (不含任何激
素); (2)增殖培养基:B5+6-BA 2.0 mg·L-1 (单位下
同)+NAA 0.2+0.2% 活性炭;(3)生根培养基:
B5+NAA 0.5+0.2% 活性炭。上述培养基均附加3%
蔗糖和0.8%琼脂粉,pH 5.8。培养温度为(25±2)℃,
光照时间12 h·d-1,光强为 30~40 mmol·m-2·s-1。
4 生长及分化情况
4.1 无菌材料的获得 参考张建康等(2005)的方法,
选取成熟饱满、色泽好且未开裂的蒴果,先用
70%的酒精进行表面消毒30 s,再用 0.1%的升汞
溶液加适量吐温-80浸泡消毒12 min,最后用无
菌水冲洗 5 次。随后以灭菌后的滤纸吸干蒴果表
面上的水分,用无菌的解剖刀切开蒴果,将里面
细小的种子撒播在培养基(1)上。经过20 d左右的
培养,在未加活性炭的培养基上种子开始萌动,
但萌发不整齐,生长缓慢,没有根的形成,叶
色黄绿;在添加有活性炭的培养基上培养 7 d 以
后,种子就开始萌发,可见白色的胚突破种皮,
萌发整齐,生长较快,同时产生细根,叶色浓
绿。待长成小苗后,去掉叶片和根,将其切成
带腋芽的小茎段竖插于增殖培养基(2)上。
4.2 丛生芽的诱导与增殖 以上接种的茎段在增殖
培养基(2)上培养10 d以后,腋芽开始萌动,1个
腋芽长出 2~5 个小芽。当丛生芽长大时,可切成
带腋芽的茎段,转接入新鲜的增殖培养基(2)中扩
繁。25~30 d 继代增殖培养 1 次。
4.3 生根培养 当丛生芽长到约1.5 cm高时,将其
分切成单苗,接入生根培养基(3)中。约20 d后,
幼苗的基部长出 3~6 条白色的细根,形成完整的
再生植株(图 1),生根率达 90% 以上。
图1 钩藤的生根培养
4.4 试管苗移栽 根长到2~3 cm时,将苗高4 cm
以上且根系发达、生长健壮的试管苗的培养瓶置
于室温自然散射光条件下炼苗2 d,然后揭去瓶口
的封口膜,炼苗 2 d,再用镊子轻轻从培养瓶中
夹出瓶苗,用自来水洗去附在根部的培养基,用
800 倍的多菌灵溶液浸泡消毒处理15 min,栽植
于用甲醛消毒处理过的基质(腐殖土:蛭石=1:1)中,
并浇水淋透,适当保湿遮荫。1 星期后再浇水,
并喷施 1/2MS 大量元素的营养液。移栽成活率可
达 85% 以上(图 2)。
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图2 钩藤组织培养苗移栽成活
5 意义与进展 钩藤又名鹰爪风,为茜草科钩藤属
多年生木质藤本植物。分布于我国贵州、云南和
广西等地。钩藤始载于《名医别录》,主要含
多种生物碱,如钩藤碱、异钩藤碱、赛鸡纳碱、
异赛鸡纳碱、去氢毛帽柱木碱、兜花木碱等。以
带钩枝条入药,具有熄风止痉和清热平肝等功
效,用于治疗头痛眩晕、感冒夹惊、惊悸抽搐、
妊娠子痫、高血压等症。尤其对小儿惊风具有独
特疗效,是中医儿科要药,也是治疗心脑血管疾
病等的原料药物。目前,钩藤的药源多为野生,
由于掠夺性的采收,野生资源大大减少,加上国
际市场对钩藤的需求量越来越大,现有的野生资源
已不能满足需求。在一般的自然条件下,人工栽
培采用播种、分株和扦插等方法繁殖,但其成活
率得不到有效保证,繁殖速度慢,无法满足市场
需求。采用组织培养方法建立的快速繁殖技术体
系,可以周年生产钩藤种苗。本文结果对保护这
一宝贵的中药材资源及其持续利用,可能有一定的
潜在应用价值。钩藤的组织培养尚未见报道。
参考文献
张建康, 石大兴, 蒋祺, 孙克燕(2005). 爱沙木的组织培养和快速
繁殖. 植物生理学通讯, 41 (2): 190