全 文 ：植物生理学通讯 第42卷 第1期，2006年2月82
紫花苜蓿胚状体形成中的二次诱导
庞晓斌* 李彦舫
吉林大学植物科学学院，长春 130062
Second Inducement in Medicago sativa L. Embryoid Inducement
PANG Xiao-Bin*, LI Yan-Fang
College of Plant Science, Jilin University, Changchun 130062, China
收稿 2005-09-12 修定 　2005-12-26
* E-mail: pxb0411@163.com, Tel: 010-66248735
1 植物名称 紫花苜蓿(Medicago sativa L.)。
2 材料类别 下胚轴。
3 培养条件 (1)胚状体诱导培养基：UM+KT 0.5
mg·L-1 (单位下同)+2,4-D 10.0+脯氨酸 2 300+葡萄
糖30 000；(2)胚状体增殖培养基：MS+2,4-D 0.4；
(3)生根培养基：1/2MS+NAA 0.05+IBA 0.5。以
上培养基均加入 7.0% 的琼脂，pH 5.8。培养温
度为(25±2)℃，光照时间 12 h·d-1，光强为 30
mmol·m-2·s-1 左右(周俊彦和郭扶兴1996)。
4 生长与分化情况
4.1 外植体的获得 种子在无菌条件下，用75%的
乙醇消毒10 min，再用 0.1% 的升汞溶液浸泡15
min，最后无菌水冲洗 4~5 次，接种于 1/2MS 培
养基中。温度(25±2)℃，光照时间 16 h·d-1，光
强为36~50 mmol·m-2·s-1。5~6 d后，诱导出幼苗，
以未出真叶时的下胚轴为外植体。
4.2 胚状体的诱导 下胚轴接种在培养基(1)上暗培
养30 d 后，仅呈浸润状的愈伤组织是胚性愈伤；
光照培养 7 d 后，胚性愈伤组织表面出现大量淡
绿色突起，形成球形胚前体；再转接到 MS 0 上，
经过 15 d 的培养，球形胚前体进一步发育，形
成光学显微镜下可见的球形胚、心形胚、鱼雷胚
和子叶胚(张万军和王涛2002)，胚状体的诱导率
达到 26.54%。
4.3 二次诱导的胚状体诱导率 以成熟的子叶胚为
外植体，切割成直径为0.2~0.5 cm 大小的试材，
重新接种于培养基(1)上进行二次诱导。30 d后，
这些外植体全部形成胚性愈伤组织；光照培养7 d
后，转接到MS0 上；15 d 后，胚状体的诱导率均
达到 1 0 0 % ，明显优于第 1 次的胚状体诱导率
(26.54%)，且胚状体的生长状态良好。重复 3
次，结果一致。前后 2 次诱导显示，成熟子叶
胚胚状体的诱导率明显高于下胚轴的诱导率，这
跟成熟子叶胚组织幼嫩，且大多细胞均处于高度
分化状态相关(袁澍等2003)。
4.4 胚状体增殖 将球形胚移入培养基(2)，每15
d 继代增殖 1 次。增殖过程中，及时把大量胚状
体分割，否则，胚状体成簇生长，互相竞争营
养，造成畸形。
4.5 试管苗根的诱导 将成熟的子叶胚转入MS0培
养基，待幼苗长到2~3 cm 时，转入培养基(3)上
进行生根诱导。20 d 后，生根率达到 90% 以上。
4.6 炼苗与移栽 待根长到2~3 cm时，去掉封口
膜，温室内炼苗 4~5 d。取出生根苗，洗净根部
的固体培养基，移入珍珠岩基质中。塑料薄膜覆
盖，温度 20~22℃，光照时间12 h·d-1，光强 30
mmol·m-2·s-1，保持基质湿润。20 d后移栽到含腐
植质的花盆中，30 d 后，成活率达 90% 以上。
5 意义与进展 紫花苜蓿在组织培养时分化率低，
一直是令人困扰的限制因素。本文采用二次培养
方法，结果紫花苜蓿胚状体的诱导率达到100%，从
而解决了紫花苜蓿胚状体诱导率不高的问题，同时
也为植物胚状体再生体系的建立提供了新的思路。
参考文献
袁澍, 贾勇炯, 林宏辉(2003). 诱导植物体细胞胚发生的几个生理
因素. 植物生理学通讯, 39 (5): 508~512
张万军, 王涛(2002). 紫花苜蓿愈伤成苗高频再生体系的建立及
其影响因子的研究. 中国农业科学, 35 (12): 1579~1583
周俊彦, 郭扶兴(1996). 细胞分裂素类物质在植物体细胞胚发育
中的作用. 植物生理学通讯, 32 (4): 247~253