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水松的组织培养及植株再生



全 文 :植物生理学通讯 第42卷 第6期,2006年12月1136
水松的组织培养及植株再生
李博 李火根* 王光萍
南京林业大学林木遗传和基因工程江苏省重点实验室,南京210037
Tissue Culture and Plantlet Regeneration of Glyptostrobus pensilis (Lamb.) K.
Koch
LI Bo, LI Huo-Gen*, WANG Guang-Ping
The Key Laboratory of Forestry Genetics & Gene Engineering of Jiangsu Province, Nanjing Forestry University, Nanjing 210037,
China
收稿 2006-07-28 修定  2006-09-18
资助 上海市科技兴农重点攻关项目[沪农科攻字(2004)第3-
2号]。
*通讯作者(E-mail: hgli@njfu.com.cn, Tel: 025-
85428731)。
1 植物名称 水松[Glyptostrobus pensilis (Lamb.) K.
Koch]。
2 材料类别 无菌种子萌发苗茎段。
3 培养条件 诱导腋芽及不定芽培养基:(1) MS+
KT 0.1 mg·L-1 (单位下同)+维生素C (VC) 5.0;(2)
MS+ZT 0.1+VC 5.0。腋芽及不定芽伸长培养基:
(3) MS+NAA 0.01+VC 5.0;(4) MS+VC 5.0。生
根培养基:(5) 1/2MS+NAA 0.5+VC 5.0;(6) 1/2
MS+NAA 1.0+VC 5.0。上述培养基的琼脂和蔗糖
含量分别为0.54% 和 3%,培养基灭菌前pH 5.8。
培养温度为23~25℃,光照强度为20~25 mmol·m-2·
s-1,光照时间 12 h·d-1。
4 生长与分化情况
4.1 腋芽及不定芽的诱导 材料采自安徽黄山的水
松古树种子,树龄约 1 0 0 年。挑选颗粒饱满种
子,用洗洁净浸泡5 min左右,流水冲洗2 h后,
置于蒸馏水中浸泡30 min,使之充分吸胀,用75%
酒精消毒1 min,再用 0.1% 升汞灭菌8 min,无
菌水冲洗 4 次。取出后用滤纸吸干表面水分,将
其置入 MS 基本培养基中。15~20 d 后,种子萌
发,待其伸长到 6 cm 左右,将无菌苗剪成 2 cm
左右的茎段,插入培养基(1)和(2)中。1周后,腋
芽及不定芽开始萌动;35 d 左右,从基部及叶腋
产生大量不定芽。其中培养基(2)的诱导率最高达
到 90%,增殖系数为 4.2。
4.2 腋芽及不定芽的伸长 将腋芽及不定芽切下,
接种于培养基(3)和(4)中。30 d继代 1次,60 d
后,大部分腋芽及不定芽可伸长至 3~4 cm。
4.3 生根与移栽 将伸长到3 cm的腋芽及不定芽转
接到生根培养基(5)和(6)上。25 d后,其基部产
生大量黑色愈伤组织;40 d 后,黑色愈伤组织上
有白色的根尖生成;50 d 后,根伸长到 2 cm 左
右。每苗发根数一般为 2 ~ 3 个,其中,培养基
(5)的诱导生根率最高达到 60% 左右。打开瓶盖,
炼苗 3 d 左右。取出小苗,洗去琼脂,移植于
基质(草炭:珍珠岩=7:3)中,放置于阴凉处,用塑
料薄膜覆盖,每天喷水 3 次。注意保持空气的湿
度,30 d 后,成活率可以达到 70% 左右。
5 意义与进展 水松为杉科水松属的单种属树种,
是世界著名的“活化石”,现仅分布于我国南方
局部地区(珠江沿岸和闽江口等)及越南北部。水
松用途广,其根材可作木塞,种子可提炼紫色染
料。由于自然历史原因和现代人类活动的影响,
水松的个体数量日益减少,现已处于濒危状态,
1999年国务院公布的《国家重点保护野生植物名
录(第一批)》将其列为一级保护植物。采用组织
培养诱导水松植株再生,为水松的繁殖提供了一
条有效途径,对水松遗传资源的保护与开发利用
有一定的参考和应用价值,另对杉科其它树种的
组织培养可能也有一定的参考意义。水松的组织
培养及快速繁殖尚未见报道。