全 文 ：第 3 2卷 第 2期
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.
3 2 No
.
2
植 物 研 究
L L B UE竹 N O FBOT AN IC AL B卫 SE R ACH
2 ( X )3年 4月
柳 r a, 2的 3
紫外分光光度法测定甘草黄酮含量 ’
吕 欣 , 付玉杰 2 王 微 2 祖元刚2
( 1
. 辽宁石化职业技术学院应用化学系 ,锦州 112 10 )
( 2
, 东北林业大学 ,哈尔滨 15 X( 拼 0 )
摘 要 采用分光光度法 ,刚定 了甘草中总黄酮的含量 ,检测波长为 s o yun , 标准曲线相关 系数
R “为 0 . 99 9 4 ,相对标准偏差为 0 . 20 % ,平均加样回收率为 10 . 20 % 。 结果表明 ,此法准确度较
高 , 为甘草生药及成品药中甘草黄酮含量侧定提供了一种切实可行的方法
关键词 甘草 ;黄酮 ;紫外分光光度法
D E T E R M I NA T I O N O F F L A V O N O ID S 刃N G L YC YRR H儿涟 U双A L E N S IS
F I S C H W I飞,H U L T R A V O I L E T S P E C T R O P H O T O M E T R Y
功 兀 n ` Fu Y u 一 Ji e Z w洲 e w e i Z 别 Y u an 一 ca n扩
( 1
.
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( 2
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K e y wo
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人类应用甘草有近 4 0( 刃 年的历史 , 称其为
“ 美草 、 蜜甘 、 国老 ” , 并冠以 “ 众药之王 ” 的称号 。
甘草作为一种重要的常用中药 , 为乌拉尔甘草 、光
果甘草和胀果甘草的根及根茎 ,隶属于豆科甘草
属 。 其中 以 乌拉 尔 甘 草 ( 倪产笋认汤 ~ l二站
ifs hc )分布最广 、产量最高川 。 甘草的植物化学成
分十分复杂 ,其药用的有效成分为甘草酸和黄酮
类化合物以及水溶性浸出物 、 还原糖 、 淀粉 、 氨基
酸 、 有机酸 、 生物碱和多种金属元素等川 。 许多
学者都对甘草化学成分的提取分离 、鉴定以及药
理作用进行了研究 3[ 一 ’ ] , 其中甘草黄酮具有明显
的抗氧化作用 , 可以预防肿瘤的发生 et1 , 且对 胃
溃疡 、 肝损害 、 病原微生物 、 酶及抗炎和抗变态反
应作用等方面的都有明显的药理作用卜 , 1 。 近年
来 , 随着人们对甘草药理作用的深人研究 ,表明甘
草黄酮类物质是非常有效的活性成分 , 已成为研
究的热点 。 而随着甘草资源的过度开发 ,甘草资
源已受到前所未有的破坏 。 如何有效地利用有限
的甘草资源成了亚待解决的问题 。 本文用分光光
度法测定了一年生 、 两年生及三年生乌拉尔甘草
根茎中黄酮含量 , 为合理开发利用甘草资源提供
质量评价手段 。
* 第一作者简介 : 吕欣 ( 19 67 一 ) ,女 ,工程师 , 主要从事应用化学研究 。
收稿日期 :么力2 一 03 一 03
2期 吕 欣等 :紫外分光光度法测定甘草黄酮含量
1仪器与材料
1
.
1实验仪器
WK 81 9型烘干箱 , 河北黄弊生产 ; A BI 以 型
电子天平 ,瑞士生产 ;紫外分光光度计 , 瑞典 hP a 卜
ma
e i a B i o t e e h 公司生产 ; KQ 一 2 5 o D B 型数控超声
波清洗器 , 昆山市超声仪器有限公司生产 。
1
.
2 实验试剂与材料
1
.
2
.
1 芦丁标准品 ,购于卫生部中国药品生物检
定所 ; 95 % 乙醇 ,分析纯 , 哈尔滨市化工试剂厂生
产 ;硝酸铝 ,分析纯 ,天津市大河化学试剂厂生产 ;
氢氧化钠 ,分析纯 ,沈阳市试剂五厂生产 ;亚硝酸
钠 ,分析纯 ,沈阳市东兴试剂厂生产 ;无水甲醇 ,分
析纯 ,哈尔滨市化工试剂厂生产 。
1
,
2
.
2 试验材料
乌拉尔甘草 , 2 0 2 年 9 月份采 自哈尔滨夏天
甘草研究所大庆种植基地 。
2 实验部分
2
.
1 标准曲线的绘制
精确称取在 10 5℃干燥恒重的芦丁对照品 10
m g
,用 95 % 乙醇溶解 , 摇匀 , 定容至 10 m L , 使之
成为浓度为 l m留 m L 的芦丁标准品溶液 ,作为贮
备液备用 。
精密量取上述溶液 0 、 0 . 1 、 0 . 2 、 0 . 3 、 0 . 4 、
0
.
5
、
0
.
6 m L
,分别加水至 3m L ,加 5% 亚硝酸钠水
溶液 0 . 5 m L ,放置 6 m in ,加 10% 硝酸铝 0 . 5 m L ,
混匀后放置 6 m in , 加人 5% 氢氧化钠溶液 2 . 5
m L
, 混匀 ,放置 巧 m in 后 , 蒸馏水定容至 10 m oL
用紫外分光光度计 ,在 入 = 50 n m 处测吸光度 ,结
果见表 1 ,以对照品浓度为横坐标 , 吸光度为纵坐
标做标准曲线 (见图 1 ) 。
样品号
N o
-
浓度 ( m岁m L )
Con e en tm t i o n
表 1 芦丁标准品吸光度值
T
a b』e 1 A b s o r ban e e of s t a n d ar d ur t in
吸光度 Ab s hot a n e e
1 2 3
平均值
A v e r a g e
1 0
.
0 1 0
.
0 8 1 0
.
0 8 3 0
.
0 82 0
.
0 8 2
悦én9一茜n,0,1,` J斗…00ù00户918240n甘00 . 18 50 . 2 9 10 . 4 10184290
0
.
5 0 0
.
5 10 0
.
5 1 1 0
.
5 10
0
.
6 30 0
.
6 2 9 0
.
6 29 0
.
6 2 9
J 声甘草总黄酮浓度 m岁m L
2
.
2 重现性试验
按绘制标 准曲线的方法 , 分 别精密量取
0
.
4 m L芦丁贮备液 5 份 ,按上述操作进行 , 测定
吸光度值 ,结果见表 2 。
表 2 芦丁标准品重现性试验结果
T ab l
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s ul t Of er p e t iit on e
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7654231000
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0
.
0 2 0
.
0 4 0
.
0 6 0
.
0 8
浓度 ( m g / m L ) 次数 吸光度值 平均值 标准偏差
iT m e s A b叨 br a n e e A ve 扭罗 tS an d耐 d vie iat o n
相对标准偏差
Rel at ive s tan d a n l
图 1 芦丁标准品吸光度 一浓度标准曲线
ir g
.
1 s t an dalrt iurt
n e
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of a b s o br a cn
e 一 co n e e n t ar t io n
以浓度为横坐标 X , 吸光度为纵坐标 Y ,进行
回归 ,得芦丁浓度 一 吸光度方程 :
Y 二 10
.
9 4X 一 0
.
0 3 2 1
相关系数 双 , = 0 . 9 9 9 4
根据方程得出如下甘草总黄酮浓度计算公
式 : X 二 ( Y + 0 . 0 3 2 1 ) / 10 . 9 4
1,-
~吸光度
d e vi at i o n
1 0
.
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0
.
4 1 0
4 (为 0 . 4的 8 . 3 7 x 10一 4 0 . 2 0
4 09
40 8
从表 2结果可以看出 , 用紫外分光光度法测
定芦丁含量 ,结果标准偏差和相对标准偏差均较
植 物 研 究 2 3卷
小 ,实验结果重现性较好 ,所得数据精确 。
表 3 甘草黄酮测定结果
T ab l
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甘草样品 甘草黄酮含量 (% )
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一年生 人~ 以 C之笋亨汀人ha 0
.
85
二年生 D ie n n ial g ”净汀 h如 1 . 12
三年生 irT en in al g 了甲诚如 2 14
2
.
3 样品的测定
2
.
3
.
1 样品的制备
取适量甘草根茎 , 在 60 ℃下烘干 24 h 至恒
重 ,粉碎至 60 目 , 精确称取 0 . 1 9 , 置于 5 m L 容量
瓶中 ,用无水甲醇为溶剂 , 定容 , 常温 、 20 H : 下超
声提取 Zh , 备用 。
2
.
3
.
2 样品的测定
取 O . Z m L 甲醇超声波提取液 ,按标准曲线下
操作进行 ,测吸光度值 , 由标准曲线计算出总黄酮
含量 ,结果见表 3 。
由测定结果得出 , 二年生甘草黄酮含量为一
年生甘草黄酮含量的 1 . 3 17 6 倍 , 三年生甘草黄
酮含量则为一年生甘草黄酮含量的 2 . 5 17 6 倍 。
在实验年度范围内 , 甘草中总黄酮含量与生长期
呈正相关 。 从药用价值及生物量双方面考虑 ,甘
草的采收不宜过早 ,应以三年为佳 。
2
.
4 加样回收率试验
分别精密量取已知总黄酮含量为 3 . 39 6 m留
m L 的 0 . s mL 提取液 5 份 ,分别加人一定量的芦
丁标准品 ,按上述操作方法进行 , 用 U V 法测定吸
光度 ,得出总黄酮含量 ,根据回收率公式计算出加
样回收率 ,结果见表 4 。
回收率 二混合后测得总黄酮含量 一样品中总黄酮含量芦丁标准品加人量
表 4 加样回收率试验结果
T abl
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4 eR
s以 t Of ecr vo e斗 art e e x ep ir m e nt
X 10 0%
样品号 样品中总黄酮含量 ( m g ) 芦丁加人量 ( m g ) 测定量 ( m g ) 回收率 (% )
N o
.
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v on io d s Of sam lP
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n at io n R ec o v e yr
平均回收率 ( % )
Av e功g e 卿 vo e yr
相对标准偏差
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3
.
4 10
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1
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1
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6 9 8
1
.
6 9 8
1
.
6 9 8
表 4 结果表明 , 以芦丁标准品为对照品 ,紫外
分光光度法测定提取液中总黄酮含量加样加样回
收率为 10 , 20 % ,相对标准偏差为 2 . 12 % , 回收
率较高 ,偏差较小 ,所以本方法准确度较高 。
3 结语
本文采用紫外分光光度法测定黄酮含量 ,研
究结果表明 ,甘草采收时间不宜过早 ,应以三年为
佳 。 紫外分光光度法准确度较高 ,偏差较小 ,为甘
草生药及成品药中甘草黄酮含量测定提供了一种
切实可行的方法 。
参 考 文 献
1
. 高素莲 ,王雪梅 . 甘草中皂贰和黄酮类化合物的提取分
离测定 . 安徽大学学报 , 2X() O , 24 ( 4 ) : 7 0 一 74
2
, 付玉杰 . 甘草黄酮和甘草酸提取纯化工艺研究 . [博士
论文〕. 哈尔滨 :东北林业大学 , 2X() l
3
. 付玉杰 ,祖元刚 ,李春英 ,等 . 超临界 CO Z萃取甘草中甘
草次酸的工艺研究 . 中草药 , 2X() 3 , 34( 1 ) : 31 一 3
4
. 王洋 ,张璞 ,于涛 ,等 . 高效液相色谱法测定红景天贰含
量方法的研究 . 植物研究 , 2 X() 1 , 2 1 ( l ) : 113 一 1 1 5
5
. 唐丹林 ,潭仲明 ,陈玮 . 芸苔属植物黄酮类化合物薄层
层析的研究 . 植物研究 , 19 6 , 16 ( 3 ) : 336 一 339
6
. 沈凤嘉 ,胡金峰 ,虞亚川 ,等 . 乌拉尔甘草化学成分的研
究 . 高等学校化学学报 , 19 95 , 16 (4 ) : 572 一 574
7
. 傅乃武 ,刘朝阳 ,张如意 ,等 . 甘草黄酮类和三菇类化合
物抗氧化作用的研究 . 中药药理与临床 , 19 4 , 10 ( 5 ) :
26 一 28
8
. 傅乃武 ,刘朝阳 ,张如意 ,等 . 9G 31 5 抗癌和抑制促癌物
诱发的脂质过氧化作用 . 中草药 , 19 5 , 26 ( 8 ) : 41 1 -
4 13
9
. 贾国惠 ,贾世山 . 甘草中黄酮的药理作用研究进展 . 中
国药学杂志 , 199 8 , 33 ( 9 ) : 5 13 一 5 16