全 文 ：第 源员 卷摇 第 源 期
圆园员源 年 愿 月
植摇 物摇 保摇 护摇 学摇 报
粤悦栽粤 孕匀再栽韵孕匀再蕴粤悦陨悦粤 杂陨晕陨悦粤
灾燥造援 源员摇 晕燥援 源
粤怎早援 摇 圆园员源
摇
基金项目院 河南省科技厅项目渊员圆圆猿园园源员园员圆苑冤袁棉花生物学国家重点实验室开放课题渊悦月圆园员猿粤圆猿冤
作者简介院 柴连琴袁女袁员怨苑圆年生袁副教授袁研究方向为昆虫生理生化袁 耘鄄皂葬蚤造院 糟澡葬蚤造蚤葬灶择蚤灶园圆岳 员远猿援 糟燥皂
收稿日期院 圆园员源 原 园员 原 园苑
棉铃虫 悦型凝集素抑制多角体病毒体内增殖
柴连琴员 摇 何世斌员 摇 王摇 楠员 摇 孟景会圆 摇 苗迎春员 摇 于摇 威猿
渊员援河南大学生命科学学院袁 棉花生物学国家重点实验室袁 开封 源苑缘园园源曰 圆援广东嘉应制药
股份有限公司袁 梅州 缘员源园园园曰 猿援通许县农林局袁 河南 通许 源苑缘源园园冤
摘要院 为探究 悦型凝集素渊悦鄄贼赠责藻 造藻糟贼蚤灶冤在病毒传播中的可能作用袁采用半定量 砸栽鄄孕悦砸 法检测了
棉铃虫 匀藻造蚤糟燥增藻则责葬 葬则皂蚤早藻则葬 不同 悦 型凝集素在核型多角体病毒渊灶怎糟造藻葬则责燥造赠澡藻凿则燥泽蚤泽 增蚤则怎泽袁 晕孕灾冤感
染后的表达变化袁并通过 则藻葬造鄄贼蚤皂藻 择孕悦砸和 砸晕粤干扰技术研究了 晕孕灾在棉铃虫体内的增殖状况及
对棉铃虫致死率的影响遥 结果显示袁在感染 晕孕灾 后袁棉铃虫血细胞 悦 型凝集素 匀葬鄄造藻糟贼蚤灶员 和 匀葬鄄
造藻糟贼蚤灶缘 基因表达变化明显袁其中 匀葬鄄造藻糟贼蚤灶员 在血细胞和脂肪体中的表达显著上调曰注射 凿泽砸晕粤 后袁
匀葬鄄造藻糟贼蚤灶员 基因相对于 葬糟贼蚤灶的表达量均值由 园援 员怨 下降到 园援 园源袁下降幅度达 苑怨豫 袁显示 匀葬鄄造藻糟贼蚤灶员 基
因被成功干扰遥 随着 匀葬鄄造藻糟贼蚤灶员 基因的沉默袁病毒滴度由 园援 园园员缘 快速升高到 员援 怨缘袁棉铃虫的死亡
率也随之增加到 怨苑援 苑豫 遥 表明 悦型凝集素能够抑制 晕孕灾在棉铃虫体内的增殖遥
关键词院 棉铃虫曰 悦型凝集素曰 砸晕粤干扰曰 棉铃虫核型多角体病毒
粤 悦鄄贼赠责藻 造藻糟贼蚤灶 枣则燥皂 贼澡藻 糟燥贼贼燥灶 遭燥造造憎燥则皂 蚤灶澡蚤遭蚤贼蚤灶早 晕孕灾 责则燥造蚤枣藻则葬贼蚤燥灶 蚤灶 增蚤增燥
悦澡葬蚤 蕴蚤葬灶择蚤灶员 摇 匀藻 杂澡蚤遭蚤灶员 摇 宰葬灶早 晕葬灶员 摇 酝藻灶早 允蚤灶早澡怎蚤圆 摇 酝蚤葬燥 再蚤灶早糟澡怎灶员 摇 再怎 宰藻蚤猿
渊员援 杂贼葬贼藻 运藻赠 蕴葬遭燥则葬贼燥则赠 燥枣 悦燥贼贼燥灶 月蚤燥造燥早赠袁 悦燥造造藻早藻 燥枣 蕴蚤枣藻 杂糟蚤藻灶糟藻泽袁 匀藻灶葬灶 哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠袁 运葬蚤枣藻灶早 源苑缘园园源袁 匀藻灶葬灶
孕则燥增蚤灶糟藻袁 悦澡蚤灶葬曰 圆援 郧怎葬灶早凿燥灶早 允蚤葬赠蚤灶早 孕澡葬则皂葬糟藻怎贼蚤糟葬造 悦燥皂责葬灶赠 蕴蚤皂蚤贼藻凿袁 酝藻蚤扎澡燥怎 缘员源园园园袁 郧怎葬灶早凿燥灶早 孕则燥增蚤灶糟藻袁
悦澡蚤灶葬曰 猿援 月怎则藻葬怎 燥枣 粤早则蚤糟怎造贼怎则藻 葬灶凿 云燥则藻泽贼则赠 燥枣 栽燥灶早曾怎 悦燥怎灶贼赠袁 栽燥灶早曾怎 源苑缘源园园袁 匀藻灶葬灶 孕则燥增蚤灶糟藻袁 悦澡蚤灶葬冤
粤遭泽贼则葬糟贼院 陨灶 燥则凿藻则 贼燥 藻曾责造燥则藻 贼澡藻 责燥泽泽蚤遭造藻 则燥造藻 燥枣 悦鄄贼赠责藻 造藻糟贼蚤灶 蚤灶 增蚤则葬造 凿蚤泽泽藻皂蚤灶葬贼蚤燥灶袁 贼澡藻 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶
造藻增藻造 燥枣 贼澡藻 糟燥贼贼燥灶 遭燥造造憎燥则皂 悦鄄贼赠责藻 造藻糟贼蚤灶泽 憎葬泽 凿藻贼藻糟贼藻凿 葬枣贼藻则 灶怎糟造藻葬则责燥造赠澡藻凿则燥泽蚤泽 增蚤则怎泽 渊晕孕灾冤 糟澡葬造造藻灶早藻曰
皂藻葬灶憎澡蚤造藻袁 则藻葬造鄄贼蚤皂藻 择孕悦砸 葬灶凿 砸晕粤蚤 憎藻则藻 怎泽藻凿 贼燥 泽贼怎凿赠 贼澡藻 糟澡葬灶早藻 蚤灶 责则燥造蚤枣藻则葬贼蚤燥灶 燥枣 晕孕灾 葬灶凿
皂燥则贼葬造蚤贼赠 燥枣 贼澡藻 糟燥贼贼燥灶 遭燥造造憎燥则皂援 栽澡藻 则藻泽怎造贼泽 泽澡燥憎藻凿 贼澡葬贼 贼澡藻 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 燥枣 澡藻皂燥糟赠贼藻泽 匀葬鄄造藻糟贼蚤灶员 葬灶凿 匀葬鄄
造藻糟贼蚤灶缘 糟澡葬灶早藻凿 燥遭增蚤燥怎泽造赠 葬枣贼藻则 晕孕灾 蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶袁 葬灶凿 匀葬鄄造藻糟贼蚤灶员 憎葬泽 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼造赠 怎责鄄则藻早怎造葬贼藻凿 蚤灶 澡藻皂燥糟赠贼藻泽
葬灶凿 枣葬贼 遭燥凿赠援 栽澡藻 皂藻葬灶 燥枣 匀葬鄄造藻糟贼蚤灶员 则藻造葬贼蚤增藻 贼燥 葬糟贼蚤灶 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 凿藻糟则藻葬泽藻凿 枣则燥皂 园援 员怨 贼燥 园援 园源 葬枣贼藻则
凿泽砸晕粤 蚤灶躁藻糟贼蚤燥灶袁 凿则燥责责蚤灶早 遭赠 苑怨豫 袁 憎澡蚤糟澡 蚤灶凿蚤糟葬贼藻凿 贼澡葬贼 匀葬鄄造藻糟贼蚤灶员 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 憎葬泽 泽怎糟糟藻泽泽枣怎造造赠
蚤灶贼藻则枣藻则藻凿援 宰蚤贼澡 贼澡藻 泽蚤造藻灶糟藻 燥枣 澡藻皂燥糟赠贼藻 匀葬鄄造藻糟贼蚤灶员袁 贼澡藻 增蚤则怎泽 贼蚤贼藻则泽 蚤灶糟则藻葬泽藻凿 则葬责蚤凿造赠 枣则燥皂 园援 园园员缘 贼燥
员郾 怨缘袁 葬糟糟燥皂责葬灶蚤藻凿 憎蚤贼澡 葬 怨苑援 苑豫 蚤灶糟则藻葬泽藻 燥枣 皂燥则贼葬造蚤贼赠 蚤灶 贼澡藻 糟燥贼贼燥灶 遭燥造造憎燥则皂援 栽澡藻 则藻泽怎造贼泽 泽怎早早藻泽贼藻凿 贼澡葬贼
悦鄄贼赠责藻 造藻糟贼蚤灶 糟燥怎造凿 蚤灶澡蚤遭蚤贼 晕孕灾 责则燥造蚤枣藻则葬贼蚤燥灶 蚤灶 匀藻造蚤糟燥增藻则责葬 葬则皂蚤早藻则葬援
运藻赠 憎燥则凿泽院 匀藻造蚤糟燥增藻则责葬 葬则皂蚤早藻则葬曰 悦鄄贼赠责藻 造藻糟贼蚤灶曰 砸晕粤蚤曰 匀葬晕孕灾
摇 摇 悦型凝集素渊悦鄄贼赠责藻 造藻糟贼蚤灶冤属于钙依赖型糖结
合蛋白超家族咱员暂 袁作为重要模式识别受体袁通过糖
识别区域渊糟葬则遭燥澡赠凿则葬贼藻 则藻糟燥早灶蚤贼蚤燥灶 凿燥皂葬蚤灶袁 悦砸阅冤结
合细菌表面脂多糖尧脂磷壁酸和肽聚糖形成包被和
结节咱圆 原 猿暂 袁于肠道隔离抗菌咱源暂 袁并作为上游检测子激
活酚氧化酶原系统咱缘暂 袁通过调理素作用提高机体的
先天免疫咱远暂 遥 悦型凝集素还通过识别真菌 茁鄄员袁猿 葡
聚糖和甘露聚糖介导真菌的结合尧摄取和杀伤咱苑暂 遥
近年来 悦 型凝集素在病毒感染过程中的作用
逐渐受到关注袁特别是在脊椎动物中常被病毒粒子
靶向结合袁作为病毒入侵受体颠覆宿主免疫以利于
病毒增殖和感染遥 在哺乳动物中袁位于树突状细胞
渊凿藻灶凿则蚤贼蚤糟 糟藻造造泽袁 阅悦泽冤的 圆 种跨膜型 悦 型凝集素
阅悦鄄杂陨郧晕和 蕴鄄杂陨郧晕袁作为单链 砸晕粤 人类免疫缺陷
病毒 员渊匀怎皂葬灶 蚤皂皂怎灶燥凿藻枣蚤糟蚤藻灶糟赠 增蚤则怎泽 员袁 匀陨灾鄄员冤的反
式受体在感染部位捕获 匀陨灾鄄员袁促进 匀陨灾鄄员 对靶细
胞的感染咱愿暂 遥 阅悦鄄杂陨郧晕还作为受体促进裂谷热渊则蚤枣贼
增葬造造藻赠 枣藻增藻则冤和乌库尼米渊怎灶噪怎灶蚤藻皂蚤冤病毒对 阅悦泽 细
胞的感染咱怨暂 遥 跨膜型 悦 型凝集素 蕴杂耘悦贼蚤灶袁以类似
匀陨灾的方式促进丙型肝炎病毒对肝细胞的感染咱员园暂 遥
此外袁蕴杂耘悦贼蚤灶也被埃博拉病毒 耘遭燥造葬 增蚤则怎泽咱员员暂 尧萨斯
病毒渊杂藻增藻则藻 葬糟怎贼藻 则藻泽责蚤则葬贼燥则赠 泽赠灶凿则燥皂藻袁 杂粤砸杂冤 咱员圆暂和
拉沙病毒 蕴葬泽泽葬 枣藻增藻则 增蚤则怎泽咱员猿暂捕获利用袁以类似的途
径感染靶细胞遥
对于 悦型凝集素在无脊椎动物病毒感染中的
作用报道不多袁这是因为无脊椎动物 悦 型凝集素基
因与脊椎动物间缺乏同源性袁即使在不同的无脊椎
动物中也没有显著可比性咱员暂 遥 研究显示当伊蚊 粤藻鄄
凿藻泽 葬藻早赠责贼蚤受到单链 砸晕粤 西尼罗病毒渊宰藻泽贼 晕蚤造藻 增蚤鄄
则怎泽袁 宰晕灾冤感染时袁其分泌型 悦型凝集素 皂燥泽郧悦栽蕴鄄员
作为病毒受体袁促进病毒在宿主体内的增殖咱员源暂 遥 但
也有报道证明 悦 型凝集素能够激活宿主免疫应答袁
抑制病毒感染遥 在日本对虾 酝葬则泽怎责藻灶葬藻怎泽 躁葬责燥灶蚤糟怎泽
中克隆到 猿 个 悦 型凝集素基因 酝躁蕴藻糟粤尧酝躁蕴藻糟月 和
酝躁蕴藻糟悦袁分别识别白斑综合症病毒渊宰澡蚤贼藻 泽责燥贼 泽赠灶鄄
凿则燥皂藻 增蚤则怎泽袁 宰杂杂灾 冤 囊 膜 蛋 白 灾孕圆远尧 灾孕圆愿 和
灾孕圆愿员袁体外试验显示结合有 酝躁蕴藻糟粤 或 酝躁蕴藻糟月 的
宰杂杂灾能够降低对宿主的感染咱员缘 原 员远暂 遥 棉铃虫 匀藻造蚤鄄
糟燥增藻则责葬 葬则皂蚤早藻则葬作为鳞翅目害虫的代表袁已报道具
有完整 糟阅晕粤的 悦型凝集素基因共 远 个袁在抵御外
界微生物侵害中可发挥多种功能袁其中血细胞 悦 型
凝集素能够促进血细胞对细菌和真菌的吞噬咱远袁员苑暂 袁
中肠 悦型凝集素具有葡聚糖酶活性咱员愿暂 袁脂肪体 悦型
凝集素能够增强血细胞对细菌的包被和黑化作
用咱圆袁员怨暂 袁但在病毒感染中的作用鲜有报道遥 本试验
利用半定量 砸栽鄄孕悦砸 和 则藻葬造鄄贼蚤皂藻 择孕悦砸 法袁拟通过
砸晕粤干扰技术研究血细胞 悦 型凝集素在棉铃虫重
要致死核型多角体病毒渊匀藻造蚤糟燥增藻则责葬 葬则皂蚤早藻则葬 灶怎糟造藻鄄
葬则责燥造赠澡藻凿则燥泽蚤泽 增蚤则怎泽袁 匀葬晕孕灾冤感染中的作用袁以期为
寻找新的害虫分子防治靶标奠定工作基础遥
员 材料与方法
员援 员 材料
供试昆虫及病毒院棉铃虫 匀援 葬则皂蚤早藻则葬 由本实验
室保种袁在 圆远 依 员 益尧蕴 颐 阅 越 员源 澡 颐 员园 澡尧相对湿度为
愿园豫条件下人工饲料喂养遥 人工饲料购自河南济源
白云实业有限公司遥 棉铃虫核型多角体病毒渊匀藻造蚤鄄
糟燥增藻则责葬 葬则皂蚤早藻则葬 灶怎糟造藻葬则责燥造赠澡藻凿则燥泽蚤泽 增蚤则怎泽袁 匀葬晕孕灾冤由
本实验室保种遥
试剂院栽则蚤扎燥造 购自美国 陨灶增蚤贼则燥早藻灶 公司曰酝鄄酝蕴灾
反转录试剂盒购自加拿大 云藻则皂藻灶贼葬泽 公司曰栽苑 砸蚤遭燥鄄
酝粤载栽酝 耘曾责则藻泽泽 砸晕粤蚤 试剂盒购自美国 孕则燥皂藻早葬 公
司曰圆 伊 杂再月砸 郧则藻藻灶 则藻葬造鄄贼蚤皂藻 孕悦砸 试剂盒购自日本
栽韵再韵月韵公司遥
仪器院远圆匀韵鄄员园园 砸燥贼燥则 郧藻灶藻 栽酝远园园园 荧光定量
孕悦砸仪袁澳大利亚 悦燥则遭藻贼贼公司遥
员援 圆 方法
员援 圆援 员 引物的设计与合成
根据 晕悦月陨核酸数据库中棉铃虫 悦型凝集素基
因序列袁应用 月藻葬糟燥灶 阅藻泽蚤早灶藻则 愿援 员园 软件设计引物
渊表 员冤曰经 晕悦月陨鄄月蕴粤杂栽 比对分析袁选取 匀葬鄄造藻糟贼蚤灶员
基因中 源员苑 遭责 与棉铃虫其它序列具有较低相似性
的区域袁参照在线软件 凿泽悦澡藻糟噪 设计 砸晕粤蚤 引物袁并
由生工生物工程渊上海冤股份有限公司合成遥
员援 圆援 圆 半定量 砸栽鄄孕悦砸分析
取 远 龄棉铃虫 员缘 头袁经 员圆 澡 饥饿处理后袁饲喂
喷洒 员园缘 辕 皂蕴 包涵体型 匀葬晕孕灾 磷酸缓冲液渊责澡燥泽鄄
责澡葬贼藻 遭怎枣枣藻则 泽葬造蚤灶藻袁 孕月杂冤缘 滋蕴的人工饲料约 园援 圆缘 糟皂圆袁
饲料用量以 愿 澡内吃完为宜遥 对照组 员园 头棉铃虫饲
喂等量 孕月杂 喷撒的饲料遥 用 栽则蚤扎燥造 提取病毒感染
圆源 澡的棉铃虫表皮尧中肠尧脂肪体及血细胞 源 种不同
组织总 砸晕粤袁经 员豫琼脂糖凝胶检测后用于 糟阅晕粤
的合成遥 取总 砸晕粤 缘 滋早袁利用 韵造蚤早燥 渊 凿栽冤员愿引物袁酝鄄酝蕴灾反转录酶合成的 糟阅晕粤 第一链为模板遥 以
茁鄄葬糟贼蚤灶 为参校基因袁分别用 造藻糟贼蚤灶员尧造藻糟贼蚤灶圆尧 造藻糟贼蚤灶猿尧
造藻糟贼蚤灶缘尧造藻糟贼蚤灶远 和 造藻糟贼蚤灶苑 引物袁通过半定量 砸栽鄄孕悦砸
法检测不同基因病毒感染后的表达变化遥
员援 圆援 猿 砸晕粤干扰试验
利用 蕴藻糟贼蚤灶砸晕粤蚤员 和 蕴藻糟贼蚤灶砸晕粤蚤圆 正反向引物
分别进行 圆 个独立 孕悦砸 反应袁获得具有 栽苑 砸晕粤 聚
合酶启动子序列的扩增产物袁经 孕悦砸 液体纯化遥 根
据 砸晕粤蚤试剂盒使用说明袁分别以纯化后的等量 孕悦砸
产物为模板袁经 砸晕粤聚合酶体外转录成单链 砸晕粤袁
怨远源源 期 柴连琴等院 棉铃虫 悦型凝集素抑制多角体病毒体内增殖
表 员 半定量 砸栽鄄孕悦砸和 则藻葬造鄄贼蚤皂藻 择孕悦砸以及 砸晕粤蚤的引物序列
栽葬遭造藻 员 孕则蚤皂藻则泽 怎泽藻凿 蚤灶 泽藻皂蚤鄄择怎葬灶贼蚤贼葬贼蚤增藻 砸栽鄄孕悦砸袁 则藻葬造鄄贼蚤皂藻 择孕悦砸 葬灶凿 砸晕粤蚤
基因
郧藻灶藻
正向引物渊缘忆鄄猿忆冤
云燥则憎葬则凿 责则蚤皂藻则 渊缘忆鄄猿忆冤
反向引物渊缘忆鄄猿忆冤
砸藻增藻则泽藻 责则蚤皂藻则 渊缘忆鄄猿忆冤
长度 渊遭责冤
蕴藻灶早贼澡
匀葬鄄造藻糟贼蚤灶员 粤粤郧粤郧郧悦栽郧郧栽栽粤悦郧粤栽粤粤 栽郧郧悦粤郧粤栽粤郧郧栽郧郧粤栽粤悦 员远猿
匀葬鄄造藻糟贼蚤灶圆 郧栽郧悦栽郧粤悦悦粤粤栽粤粤郧栽郧栽 粤郧栽栽悦栽悦栽郧粤栽郧粤悦悦栽郧粤 员猿猿
匀葬鄄造藻糟贼蚤灶猿 郧郧粤郧悦粤郧粤郧悦悦粤粤栽郧郧栽悦悦悦 郧栽栽悦悦栽悦粤郧悦粤郧粤粤栽悦粤栽郧郧 员愿圆
匀葬鄄造藻糟贼蚤灶缘 粤悦郧粤栽粤郧粤悦悦郧悦粤粤栽栽粤悦粤 悦粤郧栽粤栽栽悦悦郧悦悦栽栽悦悦粤栽粤 员员苑
匀葬鄄造藻糟贼蚤灶苑 悦栽悦栽郧悦粤粤郧悦悦郧悦粤郧栽粤悦栽 郧栽郧郧粤郧粤悦郧悦栽粤粤悦粤悦栽郧悦 员圆苑
蕴藻糟贼蚤灶砸晕粤蚤员 裕栽粤悦粤粤郧栽栽悦悦粤悦粤郧粤郧栽粤悦 栽栽悦栽栽悦粤栽悦粤郧悦悦郧栽粤郧郧 源员苑
蕴藻糟贼蚤灶砸晕粤蚤圆 栽粤悦粤粤郧栽栽悦悦粤悦粤郧粤郧栽粤悦 裕栽栽悦栽栽悦粤栽悦粤郧悦悦郧栽粤郧郧 源员苑
晕孕灾 云 粤粤悦粤粤悦悦郧栽郧粤悦粤郧栽粤粤悦 粤粤郧栽粤粤栽栽郧悦栽郧郧粤粤栽悦郧栽粤 员缘圆
葬糟贼蚤灶 悦郧悦悦粤粤郧栽郧栽郧粤悦栽粤栽栽悦 粤悦郧粤栽粤悦悦栽栽粤悦粤郧悦悦栽粤栽栽 员圆圆
摇 摇 裕表示 栽苑 砸晕粤聚合酶启动子序列 郧郧粤栽悦悦栽粤粤栽粤悦郧粤悦栽悦粤悦栽粤栽粤郧郧遥 裕 蚤灶凿蚤糟葬贼藻泽 葬 栽苑 砸晕粤 责燥造赠皂藻则葬泽藻 责则燥皂燥贼藻则 泽藻择怎藻灶糟藻 郧郧粤栽悦鄄
悦栽粤粤栽粤悦郧粤悦栽悦粤悦栽粤栽粤郧郧援
圆 管单链 砸晕粤 退火合成 凿泽砸晕粤袁经 砸晕葬泽藻 和 阅晕葬泽藻
于 猿苑 益孵育去除单链 砸晕粤 和 阅晕粤 模板遥 琼脂糖
电泳检测 凿泽砸晕粤的纯度和完整性遥
试验组选取 远 龄 员圆 澡内的棉铃虫共 员猿 头袁用焦
碳酸二乙酯渊凿蚤藻贼澡赠 责赠则燥糟葬则遭燥灶葬贼藻袁 阅耘孕悦冤处理过的
孕月杂 将 匀葬鄄造藻糟贼蚤灶员 凿泽砸晕粤 溶液稀释成 圆援 缘 滋早 辕 滋蕴遥
棉铃虫经冰浴麻醉袁用微量注射器从腹足间注射
员 滋蕴 匀葬鄄造藻糟贼蚤灶员 凿泽砸晕粤 和 圆 滋蕴 出芽型病毒渊遭怎凿凿藻凿
增蚤则怎泽袁 月灾冤粒子遥 源愿 澡 后分别提取每只棉铃虫总
砸晕粤袁并反转录成 糟阅晕粤遥 对照组注射绿色荧光蛋
白渊早则藻藻灶 枣造怎燥则藻泽糟藻灶贼 责则燥贼藻蚤灶袁 郧云孕冤凿泽砸晕粤袁其它试验
步骤与试验组相同遥
员援 圆援 源 砸藻葬造鄄贼蚤皂藻 择孕悦砸检测方法
将原浓度 糟阅晕粤依次稀释为 源园尧源 原员尧源 原圆尧源 原猿和
源 原源共 缘 个梯度袁优化反应条件袁使 匀葬鄄造藻糟贼蚤灶员尧晕孕灾 云
与内参 葬糟贼蚤灶 基因扩增效率相差在 缘豫之内袁建立标
准曲线遥 砸藻葬造鄄贼蚤皂藻 择孕悦砸反应体系为 圆缘 滋蕴袁其中 源园
倍稀释的原浓度 糟阅晕粤 圆 滋蕴尧圆 伊 杂再月砸 郧则藻藻灶 则藻葬造鄄
贼蚤皂藻 孕悦砸 酝葬泽贼藻则 酝蚤曾鄄责造怎泽 员圆援 缘 滋蕴尧员园 滋酝 正反向引
物各 园援 圆 滋蕴尧凿凿匀圆韵 员园援 员 滋蕴曰匀葬鄄造藻糟贼蚤灶员 的扩增程序
为院怨缘益 员皂蚤灶袁怨缘益 猿园 泽袁缘苑益 猿园 泽袁苑圆益 猿园 泽袁源园 个
循环遥 晕孕灾 云和内参 葬糟贼蚤灶 基因的扩增程序除了退
火温度分别为 缘怨援 猿 益和 缘缘 益外袁其它同上遥 独立
试验 猿 次重复遥
员援 圆援 缘 凿泽砸晕粤和 匀葬晕孕灾的饲喂方法
试验共分 源 组袁每组选取 猿 龄棉铃虫幼虫各
员园园 头遥 喷洒 员园源 辕 皂蕴包涵体型 匀葬晕孕灾磷酸缓冲液
缘 滋蕴与 员 滋蕴浓度分别为 园渊对照冤尧猿 及 缘 滋早 辕 滋蕴 匀葬鄄
造藻糟贼蚤灶 凿泽砸晕粤 的混合液于棉铃虫饲料表面 渊约
园援 圆缘 糟皂圆冤袁饲料用量以 愿 澡 内吃完为宜遥 饲喂经
员圆 澡饥饿处理的棉铃虫袁分别统计棉铃虫在 员尧猿尧缘
和 苑 凿的累计死亡率遥 每处理 猿 次重复遥
员援 猿 数据分析
采用 郧则葬责澡责葬凿 责则蚤泽皂 远援 园 进行数据处理和统计
分析袁基因沉默和死亡率分别应用非参数检验方法
酝葬灶灶鄄宰澡蚤贼灶藻赠 哉 和 运则怎泽噪葬造鄄宰葬造造蚤泽 匀 进行差异显著
性检验遥
圆 结果与分析
圆援 员 棉铃虫 悦型凝集素经匀葬晕孕灾诱导后的表达变化
匀葬晕孕灾感染棉铃虫 圆源 澡 后袁半定量 砸栽鄄孕悦砸 检
测不同 悦 型凝集素的表达变化遥 结果显示 匀葬鄄造藻糟鄄
贼蚤灶员 和 匀葬鄄造藻糟贼蚤灶缘 基因表达变化显著袁其中 匀葬鄄造藻糟鄄
贼蚤灶员 在血细胞和脂肪体中的表达明显上调曰匀葬鄄造藻糟鄄
贼蚤灶圆尧匀葬鄄造藻糟贼蚤灶猿尧匀葬鄄造藻糟贼蚤灶远 和 匀葬鄄造藻糟贼蚤灶苑 基因在不同
组织中的表达变化均较小渊图 员冤遥
圆援 圆 匀葬鄄造藻糟贼蚤灶员 基因沉默
选取 匀葬晕孕灾感染后基因表达变化较大的 匀葬鄄
造藻糟贼蚤灶员渊图 员冤袁和注射等量 郧云孕 凿泽砸晕粤 对照组相比袁
其 皂砸晕粤相对于 葬糟贼蚤灶的表达量均值由 园援 员怨 明显下
降到 园援 园源渊图 圆冤袁下降幅度达到 苑怨豫 遥 证实 匀葬鄄造藻糟鄄
贼蚤灶员 基因被成功干扰遥
圆援 猿 匀葬鄄造藻糟贼蚤灶员 基因沉默对 匀葬晕孕灾增殖的影响
匀葬鄄造藻糟贼蚤灶员 基因沉默后袁匀葬晕孕灾 在棉铃虫中的
滴度由 园援 园园员缘 急剧升高至 员援 怨缘渊图 猿冤袁升高幅度达
到 怨怨援 怨豫 遥 推测 匀葬鄄造藻糟贼蚤灶员 在棉铃虫遭遇 匀葬晕孕灾
侵染时袁能够抑制病毒在虫体内的增值遥 当 匀葬鄄造藻糟贼蚤灶员
基因表达量减少后袁病毒能够在虫体内快速复制遥
园苑源 植摇 物摇 保摇 护摇 学摇 报 源员 卷
图 员 匀葬晕孕灾感染棉铃虫后 悦型凝集素在不同部位的表达变化
云蚤早援 员 栽澡藻 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶葬造 糟澡葬灶早藻泽 燥枣 悦鄄贼赠责藻 造藻糟贼蚤灶泽 蚤灶 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 责葬则贼泽 燥枣 糟燥贼贼燥灶 遭燥造造憎燥则皂 葬枣贼藻则 匀葬晕孕灾 蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶
摇 摇 酝早院 中肠曰 耘责院 表皮曰 云遭院 脂肪体曰 匀糟院 血细胞遥 酝早院 酝蚤凿早怎贼曰 耘责院 藻责蚤凿藻则皂蚤泽曰 云遭院 枣葬贼 遭燥凿赠曰 匀糟院 澡藻皂燥糟赠贼藻泽援
图 圆 砸藻葬造鄄贼蚤皂藻 择孕悦砸检测 匀葬鄄造藻糟贼蚤灶员 基因在棉铃虫体内的沉默状况
云蚤早援 圆 匀葬鄄造藻糟贼蚤灶员 泽蚤造藻灶糟蚤灶早 蚤灶 糟燥贼贼燥灶 遭燥造造憎燥则皂 凿藻贼藻糟贼藻凿 遭赠 则藻葬造鄄贼蚤皂藻 择孕悦砸
摇 摇 图中点和水平线分别代表每头棉铃虫中 匀葬鄄造藻糟贼蚤灶员 辕 葬糟贼蚤灶 皂砸晕粤相对表达量和均值遥 经 酝葬灶灶鄄宰澡蚤贼灶藻赠 哉法检验对照组和试验组间
差异极显著渊孕 约 园援 园员冤遥 栽澡藻 凿燥贼泽 葬灶凿 澡燥则蚤扎燥灶贼葬造 造蚤灶藻泽 蚤灶凿蚤糟葬贼藻 贼澡藻 则葬贼蚤燥 燥枣 匀葬鄄造藻糟贼蚤灶员 辕 葬糟贼蚤灶 皂砸晕粤 葬灶凿 皂藻葬灶 增葬造怎藻 蚤灶 藻葬糟澡 遭燥造造憎燥则皂袁 则藻泽责藻糟鄄
贼蚤增藻造赠援 栽澡藻 则藻泽怎造贼 燥枣 酝葬灶灶鄄宰澡蚤贼灶藻赠 哉 贼藻泽贼 泽澡燥憎泽 贼澡葬贼 贼澡藻 凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻 遭藻贼憎藻藻灶 贼澡藻 糟燥灶贼则燥造 早则燥怎责 葬灶凿 贼澡藻 藻曾责藻则蚤皂藻灶贼葬造 早则燥怎责 蚤泽 澡蚤早澡造赠 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼
渊孕 约园援 园员冤援
图 猿 砸藻葬造鄄贼蚤皂藻 择孕悦砸检测 匀葬鄄造藻糟贼蚤灶员 沉默后 匀葬晕孕灾在棉铃虫体内的滴度变化
云蚤早援 猿 匀葬晕孕灾 贼蚤贼藻则 糟澡葬灶早藻泽 蚤灶 糟燥贼贼燥灶 遭燥造造憎燥则皂 凿藻贼藻糟贼藻凿 遭赠 则藻葬造鄄贼蚤皂藻 择孕悦砸 葬枣贼藻则 匀葬鄄造藻糟贼蚤灶员 泽蚤造藻灶糟蚤灶早
摇 摇 图中点和水平线分别代表每头棉铃虫中 晕孕灾 云 辕 葬糟贼蚤灶 皂砸晕粤相对表达量和均值遥 经 酝葬灶灶鄄宰澡蚤贼灶藻赠 哉法检验对照组和试验组间差
异极显著渊孕 约园援 园员冤遥 栽澡藻 凿燥贼泽 葬灶凿 澡燥则蚤扎燥灶贼葬造 造蚤灶藻泽 泽澡燥憎 贼澡藻 则葬贼蚤燥 燥枣 匀葬鄄造藻糟贼蚤灶员 辕 葬糟贼蚤灶 皂砸晕粤 葬灶凿 皂藻葬灶 增葬造怎藻 蚤灶 藻葬糟澡 遭燥造造憎燥则皂袁 则藻泽责藻糟贼蚤增藻造赠援
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员苑源源 期 柴连琴等院 棉铃虫 悦型凝集素抑制多角体病毒体内增殖
圆援 源 匀葬鄄造藻糟贼蚤灶员基因沉默对染病棉铃虫死亡率的影响
各时间处理下 猿援 园 滋早 或 缘援 园 滋早 凿泽砸晕粤 处理组
的死亡率均显著高于对照组遥 同时饲喂 匀葬鄄造藻糟贼蚤灶员
凿泽砸晕粤与 匀葬晕孕灾的棉铃虫幼虫袁前 猿 凿累计死亡率
为 猿缘豫 袁与仅饲喂 匀葬晕孕灾的棉铃虫幼虫在第 源 天
开始出现死亡相比袁起效更快渊图 源冤曰二者同时饲
喂时累计死亡率达到 怨缘豫需要 苑 凿左右袁而仅饲喂
匀葬晕孕灾时通常需要 员园 凿袁可使 匀葬晕孕灾 感染导致的
棉铃虫死亡时间缩短 员 辕 猿遥 比较不同浓度 凿泽砸晕粤
的饲喂效果袁当每头幼虫饲喂 猿 滋早 凿泽砸晕粤 病毒混
合液时即可产生较高的致死率袁在第 苑 天高达
怨苑援 苑豫 遥
图 源 匀葬鄄造藻糟贼蚤灶员 基因沉默对 匀葬晕孕灾感染棉铃虫死亡率的影响
云蚤早援 源 耘枣枣藻糟贼泽 燥枣 匀葬鄄造藻糟贼蚤灶员 泽蚤造藻灶糟蚤灶早 燥灶 皂燥则贼葬造蚤贼赠 燥枣 贼澡藻 糟燥贼贼燥灶 遭燥造造憎燥则皂 造葬则增葬藻 蚤灶枣藻糟贼藻凿 遭赠 匀葬晕孕灾
摇 摇 图中数据为平均数 依标准差遥 不同字母表示经 运则怎泽噪葬造鄄宰葬造造蚤泽 匀法检验在 孕 约 园援 园缘 水平差异显著遥 阅葬贼葬 葬则藻 皂藻葬灶 依 杂阅援 阅蚤枣枣藻则藻灶贼
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猿 讨论
棉铃虫中共克隆到 远 个完整的 悦 型凝集素袁
匀葬鄄造藻糟贼蚤灶员 与 匀葬鄄造藻糟贼蚤灶远 蛋白相似性最高袁达到
愿远豫 袁在 晕端和 悦端 圆 个糖识别功能域中的保守基
序 耘孕阅渊郧造怎鄄孕则燥鄄粤泽责冤和 耘孕晕渊郧造怎鄄孕则燥鄄粤泽灶冤相同袁
耘孕晕基序特异性识别甘露糖遥 但对于 匀葬晕孕灾 的感
染袁本试验中 匀葬鄄造藻糟贼蚤灶员 和 匀葬鄄造藻糟贼蚤灶缘 基因的表达变
化差别较大袁匀葬鄄造藻糟贼蚤灶缘 在棉铃虫血细胞中的表达上
调袁匀葬鄄造藻糟贼蚤灶员 在血细胞和脂肪体中的表达明显上
调遥 由此推测袁基因序列虽相似性很高袁保守序列亦
相同袁但基因其它序列的稍许差别也会影响基因功
能袁这可能是 悦 型凝集素超家族中基因多样化功能
的基础遥 匀葬晕孕灾出芽型病毒囊膜主要成分 云 囊膜
融合蛋白为高甘露糖基化咱圆园暂 遥 本研究通过 砸晕粤 干
扰技术袁发现 匀葬鄄造藻糟贼蚤灶员 基因沉默后袁匀葬晕孕灾 在棉铃
虫体内滴度明显增加袁推测 匀葬鄄造藻糟贼蚤灶员 蛋白通过糖
识别功能域 耘孕晕 基序与 月灾 高甘露糖基化的 云 囊
膜融合蛋白发生互作袁激活体内免疫反应袁具有抑制
核型多角体病毒在体内增殖的作用遥 匀葬鄄造藻糟贼蚤灶员 与
伊蚊 悦型凝集素 皂燥泽郧悦栽蕴鄄员 相比袁虽然均为分泌型
蛋白袁且同时具有识别甘露糖基序 耘孕晕 的功能袁但
其在病毒传播中的作用截然相反袁皂燥泽郧悦栽蕴鄄员 作为
病毒受体袁具有促进病毒在宿主体内增殖的
作用咱员源暂 遥
随着 月贼转基因棉长期广泛种植所导致的田间
棉铃虫抗性出现的大量报道咱圆员 原 圆圆暂 袁综合利用其它的
有效防治方法更为急迫遥 晕孕灾 作为最早开发的生
物农药袁宿主专一咱圆猿暂 尧环境友好且持效期长袁但由于
其杀虫效果较慢袁限制了其广泛应用遥 棉铃虫遭受
病毒入侵后免疫反应的激活可能是 月贼 和 晕孕灾 生物
类农药起效慢的主要原因之一遥 悦 型凝集素作为模
式识别受体袁在识别病原体尧激活免疫反应和保护宿
主免受微生物侵染中发挥着关键作用遥 通过饲喂
凿泽砸晕粤使 匀葬鄄造藻糟贼蚤灶员 基因发生沉默后袁匀葬晕孕灾 在棉
铃虫体内滴度快速升高袁提高了前 猿 凿 的累计死亡
率袁达到 猿缘豫 袁使病毒杀虫剂快速起效袁并且能够提
高杀虫效率袁大大减轻对作物的危害遥 包涵体型
匀葬晕孕灾田间喷洒用量一般不少于 圆 伊 员园愿 辕 皂圆曰增加
凿泽砸晕粤后袁仅为正常用量的 员 辕 员园园 就可显著增强
匀葬晕孕灾对棉铃虫的敏感性袁降低抗性产生的可能遥
本试验结果表明 悦 型凝集素 匀葬鄄造藻糟贼蚤灶员 能够抑
制核型多角体病毒在棉铃虫体内增殖袁阐明了 悦 型
凝集素在病毒感染过程中的作用袁是鳞翅目中第一
圆苑源 植摇 物摇 保摇 护摇 学摇 报 源员 卷
个鉴定出来具有抗病毒活性的凝集素袁将为害虫的
生物防治提供重要分子靶标遥
参 考 文 献 渊砸藻枣藻则藻灶糟藻泽冤
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悦澡蚤灶葬援 孕则燥糟藻藻凿蚤灶早泽 燥枣 贼澡藻 晕葬贼蚤燥灶葬造 粤糟葬凿藻皂赠 燥枣 杂糟蚤藻灶糟藻泽 燥枣 贼澡藻
哉灶蚤贼藻凿 杂贼葬贼藻泽 燥枣 粤皂藻则蚤糟葬袁 圆园员圆袁 员园怨渊圆远冤院 员园圆苑缘 原 员园圆愿园
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咱圆猿暂 刘艳荷袁张传溪援 棉铃虫核型多角体病毒分子生物学和基
因工程研究进展援 植物保护学报袁 圆园园源袁 猿员渊猿冤院 猿圆园 原 猿圆愿
渊责任编辑院李美娟冤
猿苑源源 期 柴连琴等院 棉铃虫 悦型凝集素抑制多角体病毒体内增殖