全 文 ：稻曲病菌的 杂悦粤砸标记及其 孕悦砸检测
陈福如员 摇 林廷邦圆 摇 甘摇 林员 摇 杜宜新员 摇 阮宏椿员 摇 杨秀娟员鄢
渊 员援福建省农业科学院植物保护研究所袁 福州 猿缘园园员猿曰 圆援福建农林大学植物保护学院袁 福州 猿缘园园园圆冤
摘要院 为建立稻曲病菌 哉泽贼蚤造葬早蚤灶燥蚤凿藻葬 增蚤则藻灶泽快速尧灵敏的 孕悦砸早期检测技术袁以 杂猿愿园 为引物袁对稻
曲病菌和其它参试病原菌的 阅晕粤进行 砸粤孕阅鄄孕悦砸扩增遥 稻曲病菌 砸粤孕阅特异片段经回收尧克隆和
测序后袁根据序列用 孕则蚤皂藻则 缘援 园 软件设计了特异性 杂悦粤砸引物 哉杂鄄杂云渊缘忆鄄栽悦郧悦悦栽悦粤郧粤悦悦栽悦粤粤栽悦鄄
猿忆冤 辕 哉杂鄄杂砸渊缘忆鄄郧粤郧悦悦栽悦粤粤粤栽郧悦悦栽栽悦悦鄄猿忆冤和巢式 孕悦砸 引物 哉杂鄄晕云渊缘忆鄄粤郧悦郧栽悦栽悦悦栽郧悦粤粤悦悦鄄
粤悦鄄猿忆冤 辕 哉杂鄄晕砸渊缘忆鄄郧粤郧悦悦栽悦粤粤粤栽郧悦悦栽栽悦悦鄄猿忆冤遥 利用引物 哉杂鄄杂云 辕 哉杂鄄杂砸 通过常规 孕悦砸 对供试
稻曲病菌均可扩增出 员 条大小约 圆缘苑 遭责的清晰条带袁对其它植物病原菌 阅晕粤 的 孕悦砸 产物均无扩
增条带袁最低可检测到 员 责早 辕 滋蕴 的病菌基因组 阅晕粤曰而利用引物 哉杂鄄杂云 辕 哉杂鄄杂砸 和 哉杂鄄晕云 辕 哉杂鄄晕砸 通
过巢式 孕悦砸可从 员园 枣早 辕 滋蕴的病菌基因组 阅晕粤中扩增出 员 条大小约 圆员园 遭责的特异性条带遥 试验表
明袁巢式 孕悦砸检测灵敏度比常规 孕悦砸提高了 员园园 倍袁且巢式 孕悦砸可从接菌的水稻幼颖和自然感染
的谷粒中检测出稻曲病菌遥
关键词院 水稻曰 稻曲病菌曰 砸粤孕阅特异片段曰 杂悦粤砸标记曰 孕悦砸检测
杂悦粤砸 皂葬则噪藻则 葬灶凿 孕悦砸 凿藻贼藻糟贼蚤燥灶 燥枣 哉泽贼蚤造葬早蚤灶燥蚤凿藻葬 增蚤则藻灶泽
悦澡藻灶 云怎则怎员 摇 蕴蚤灶 栽蚤灶早遭葬灶早圆 摇 郧葬灶 蕴蚤灶员 摇 阅怎 再蚤曾蚤灶员 摇 砸怎葬灶 匀燥灶早糟澡怎灶员 摇 再葬灶早 载蚤怎躁怎葬灶员鄢
渊员援 陨灶泽贼蚤贼怎贼藻 燥枣 孕造葬灶贼 孕则燥贼藻糟贼蚤燥灶袁 云怎躁蚤葬灶 粤糟葬凿藻皂赠 燥枣 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽袁 云怎扎澡燥怎 猿缘园园员猿袁 云怎躁蚤葬灶 孕则燥增蚤灶糟藻袁 悦澡蚤灶葬曰
圆援 悦燥造造藻早藻 燥枣 孕造葬灶贼 孕则燥贼藻糟贼蚤燥灶袁 云怎躁蚤葬灶 粤早则蚤糟怎造贼怎则藻 葬灶凿 云燥则藻泽贼则赠 哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠袁 云怎扎澡燥怎 猿缘园园园圆袁 云怎躁蚤葬灶 孕则燥增蚤灶糟藻袁 悦澡蚤灶葬冤
粤遭泽贼则葬糟贼院 栽燥 凿藻增藻造燥责 葬 则葬责蚤凿 葬灶凿 泽藻灶泽蚤贼蚤增藻 贼藻糟澡灶蚤择怎藻 枣燥则 藻葬则造赠 孕悦砸 凿藻贼藻糟贼蚤燥灶 燥枣 哉泽贼蚤造葬早蚤灶燥蚤凿藻葬 增蚤则藻灶泽 蚤灶
责造葬灶贼泽袁 贼澡藻 责则蚤皂藻则泽 燥枣 杂猿愿园 憎藻则藻 怎泽藻凿 贼燥 葬皂责造蚤枣赠 阅晕粤 燥枣 哉援 增蚤则藻灶泽 蚤泽燥造葬贼藻泽 葬灶凿 燥贼澡藻则 责葬贼澡燥早藻灶 蚤泽燥造葬贼藻泽
贼藻泽贼藻凿 遭赠 砸粤孕阅鄄孕悦砸援 栽澡藻 泽责藻糟蚤枣蚤糟 砸粤孕阅 枣则葬早皂藻灶贼 燥枣 哉援 增蚤则藻灶泽 憎葬泽 糟燥造造藻糟贼藻凿袁 糟造燥灶藻凿 葬灶凿 泽藻择怎藻灶糟藻凿袁
遭葬泽藻凿 燥灶 贼澡藻 泽藻择怎藻灶糟藻 燥枣 砸粤孕阅 皂葬则噪藻则曰 贼澡藻 泽责藻糟蚤枣蚤糟 杂悦粤砸 责则蚤皂藻则泽 哉杂鄄杂云 渊缘忆鄄栽悦郧悦悦栽悦粤郧粤悦悦栽鄄
悦粤粤栽悦鄄猿忆冤 辕 哉杂鄄杂砸渊缘忆鄄郧粤郧悦悦栽悦粤粤粤栽郧悦悦栽栽悦悦鄄猿忆冤 葬灶凿 灶藻泽贼藻凿 孕悦砸 责则蚤皂藻则泽 哉杂鄄晕云 渊缘忆鄄粤郧悦郧栽悦鄄
栽悦悦栽郧悦粤粤悦悦粤悦鄄猿忆冤 辕 哉杂鄄晕砸渊缘忆鄄郧粤郧悦悦栽悦粤粤粤栽郧悦悦栽栽悦悦鄄猿忆冤 憎藻则藻 凿藻泽蚤早灶藻凿 遭赠 贼澡藻 泽燥枣贼憎葬则藻 孕则蚤皂藻则
缘援 园援 栽澡藻 糟燥灶增藻灶贼蚤燥灶葬造 孕悦砸 责则燥凿怎糟贼 燥枣 葬造造 贼藻泽贼藻凿 蚤泽燥造葬贼藻泽 燥枣 哉援 增蚤则藻灶泽 泽澡燥憎藻凿 葬 糟造藻葬则 葬灶凿 遭则蚤早澡贼 枣则葬早皂藻灶贼 燥枣
葬遭燥怎贼 圆缘苑 遭责 憎蚤贼澡 贼澡藻 杂悦粤砸 责则蚤皂藻则泽 哉杂鄄杂云 辕 哉杂鄄杂砸袁 遭怎贼 燥贼澡藻则 责葬贼澡燥早藻灶 澡葬凿 灶燥 责则燥凿怎糟贼 葬皂责造蚤枣蚤藻凿援 栽澡藻
皂蚤灶蚤皂葬造 早藻灶燥皂蚤糟 阅晕粤 贼燥 遭藻 凿藻贼藻糟贼藻凿 则藻葬糟澡藻凿 贼燥 员 责早 辕 滋蕴袁 遭怎贼 灶藻泽贼藻凿 孕悦砸 怎泽蚤灶早 贼澡藻 责则蚤皂藻则泽 哉杂鄄杂云 辕 哉杂鄄
杂砸 葬灶凿 哉杂鄄晕云 辕 哉杂鄄晕砸 糟燥怎造凿 凿藻贼藻糟贼 贼澡藻 泽责藻糟蚤枣蚤糟 枣则葬早皂藻灶贼 燥枣 葬遭燥怎贼 圆员园 遭责 枣则燥皂 员园 枣早 辕 滋蕴 燥枣 早藻灶燥皂蚤糟
阅晕粤援 栽澡藻 则藻泽怎造贼泽 泽澡燥憎藻凿 贼澡葬贼 凿藻贼藻糟贼蚤燥灶 泽藻灶泽蚤贼蚤增蚤贼赠 燥枣 贼澡藻 灶藻泽贼藻凿 孕悦砸 憎葬泽 蚤灶糟则藻葬泽藻凿 遭赠 员园园鄄枣燥造凿 糟燥皂责葬则藻凿
贼燥 贼澡藻 糟燥灶增藻灶贼蚤燥灶葬造 孕悦砸袁 葬灶凿 贼澡藻 哉援 增蚤则藻灶泽 枣则燥皂 则蚤糟藻 早造怎皂藻泽 蚤灶燥糟怎造葬贼藻凿 葬灶凿 早则葬蚤灶泽 蚤灶枣藻糟贼藻凿 灶葬贼怎则葬造造赠 糟燥怎造凿
遭藻 凿藻贼藻糟贼藻凿 遭赠 贼澡藻 灶藻泽贼藻凿 孕悦砸援
基金项目院 公益性行业渊农业冤科研专项渊圆园园怨园猿园猿怨鄄缘冤袁福建省科技厅公益类科研专项渊圆园员园砸员园圆远鄄猿冤袁福建省科技创新平台建设项目
摇 摇 摇 摇 渊圆园园怨晕圆园园缘冤
作者简介院 陈福如袁男袁员怨远员年生袁研究员袁研究方向为作物品种抗性及植物病害防治袁 耘鄄皂葬蚤造院 悦澡藻灶枣怎则怎岳 葬造蚤赠怎灶援 糟燥皂
鄢通讯作者渊粤怎贼澡燥则 枣燥则 糟燥则则藻泽责燥灶凿藻灶糟藻冤袁 耘鄄皂葬蚤造院 赠曾躁扎遭岳 员圆远援 糟燥皂
收稿日期院 圆园员猿 原 园愿 原 圆苑
第 源园 卷摇 第 远 期
圆园员猿 年摇 员圆 月
植摇 物摇 保摇 护摇 学摇 报
粤悦栽粤 孕匀再栽韵孕匀再蕴粤悦陨悦粤 杂陨晕陨悦粤
灾燥造援 源园摇 晕燥援 远
阅藻糟援 摇 圆园员猿
摇 摇 运藻赠 憎燥则凿泽院 则蚤糟藻曰 哉泽贼蚤造葬早蚤灶燥蚤凿藻葬 增蚤则藻灶泽曰 泽责藻糟蚤枣蚤糟 砸粤孕阅 枣则葬早皂藻灶贼曰 杂悦粤砸 皂葬则噪藻则曰 孕悦砸 凿藻贼藻糟贼蚤燥灶
摇 摇 由稻曲病菌 哉泽贼蚤造葬早蚤灶燥蚤凿藻葬 增蚤则藻灶泽 引起的稻曲病
渊则蚤糟藻 枣葬造泽藻 泽皂怎贼冤是一种重要的水稻穗部病袁广泛分
布在埃及尧美国尧日本尧中国尧菲律宾等 源园 多个国家
的水稻主产区咱员 原 猿暂 遥 稻曲病的发生不仅造成严重的
经济损失袁还能产生对人畜有害的毒素而污染稻
谷咱源 原 远暂 遥 稻曲病菌具有潜伏侵染特性袁在病菌侵入
植株早期不易被发现袁直到水稻开花后在稻穗上出
现稻曲球时才表现症状袁稻曲球病谷粒含有完整的
花序袁说明水稻开花之前已有稻曲病菌侵染遥 迄今袁
关于稻曲病菌侵染时期主要是根据田间条件下人工
接种的发病情况进行推测袁认为病菌侵染发生在孕
穗期至破口期咱苑暂 遥 然而对未显症状的水稻植株体
内是否存在稻曲病菌无法做出正确判断遥 近年来袁
显微技术及植物材料的超薄切片技术能够观察到稻
曲病菌的侵染过程袁但多限于人工接种对水稻目标
部位的局部观察咱愿 原 怨暂 遥 稻曲病菌生长十分缓慢袁采
用植物组织内生真菌分离法对未显症状水稻植株体
内稻曲病菌分离尧检测及稻株内分布的研究比较困
难遥 以 孕悦砸为基础的技术已经有效地应用于植物
病原菌的检测和鉴定袁为病菌在植株体内潜伏侵染
的早期快速检测与病害诊断提供了有效方法咱员园 原 员员暂 袁
因此袁开发稻曲病菌特异性和灵敏的 孕悦砸技术检测
未显症状的植株材料和探索稻曲病菌侵染循环等研
究极为重要遥
特征序列扩增区域 渊泽藻择怎藻灶糟藻 糟澡葬则葬糟贼藻则蚤扎藻凿 葬皂鄄
责造蚤枣蚤藻凿 则藻早蚤燥灶袁杂悦粤砸冤标记是 孕葬则葬灶 驭 酝蚤糟澡藻造皂燥则藻咱员圆暂
员怨怨猿 年开发的一种分子标记袁通过随机扩增多态性
阅晕粤 渊则葬灶凿燥皂 葬皂责造蚤枣蚤藻凿 责燥造赠皂燥则责澡蚤糟 阅晕粤袁砸粤孕阅冤技
术筛选出靶标种特异片段袁将目标 砸粤孕阅 片段进行
克隆和测序袁并根据此目标片段两端的碱基序列设
计特异性引物袁然后以该对特异性引物对原来基因
组模板 阅晕粤 进行再次 孕悦砸 扩增袁 进而将与原
砸粤孕阅片段相对应的单一位点鉴别出来遥 杂悦粤砸 标
记及其相关技术重复性好尧稳定性高尧操作简便袁在
生物种类鉴定和检测等方面已广泛应用遥 栽泽赠早葬灶噪鄄
燥增葬等咱员猿暂对黄单胞杆菌属 载葬灶贼澡燥皂燥灶葬泽尧假单胞菌属
孕泽藻怎凿怎皂燥灶葬泽 等病原菌进行鉴定袁发现所有 载援
糟葬皂责藻泽贼则蚤泽均能通过引物 运砸孕晕圆 扩增出 员 条约 远园园
遭责的片段袁并成功地将该特异片段转换成稳定可靠
的 杂悦粤砸 标记遥 郝保军等咱员源暂利用随机引物筛选到
小麦条锈菌的特异性 砸粤孕阅 片段袁获得了该菌株的
杂悦粤砸检测标记遥 戴杨等咱员缘暂 将生防真菌球毛壳
晕阅猿缘 的特异性 砸粤孕阅 片段成功转化成 杂悦粤砸 标记
之后袁通过 孕悦砸 扩增袁能将 远 种土传植物病原真菌
区分开遥 但稻曲病菌 杂悦粤砸分子标记及其检测技术
的研究尚未见报道遥 为此袁本研究采用 杂悦粤砸 标记
技术袁拟通过特异 砸粤孕阅 片段序列分析和 杂悦粤砸 特
异性引物设计袁建立一套快速尧灵敏的稻曲病菌分子
检测方法袁旨在为稻曲病菌的分子鉴定尧早期侵染和
潜伏侵染水稻植株的带菌检测及田间种群发生动态
监测提供技术支撑遥
员 材料与方法
员援 员 材料
供试菌株院稻曲病菌 哉援 增蚤则藻灶泽 菌株 愿 个遥 其它
病原真菌菌株 苑 个袁包括麦角菌 悦造葬增蚤糟藻责泽 泽责援 尧紫麦
角菌 悦造葬增蚤糟藻责泽 责怎则责怎则藻葬尧水稻稻瘟病菌 孕澡赠则蚤糟怎造葬则蚤葬
早则蚤泽藻葬尧水稻恶苗病菌 云怎泽葬则蚤怎皂 皂燥灶蚤造蚤枣燥则皂藻尧番茄早
疫病菌 粤造贼藻则灶葬则蚤葬 泽燥造葬灶蚤尧黄瓜枯萎病菌 云怎泽葬则蚤怎皂 燥曾鄄
赠泽责燥则怎皂 枣援 泽责援 糟怎糟怎皂藻则蚤灶怎皂尧辣椒疫霉病菌 孕澡赠贼燥责澡鄄
贼澡燥则葬 糟葬责泽蚤糟蚤袁除了麦角菌和紫麦角菌由上海来益生
物药物研究开发中心提供外袁其它病原菌菌株均分
离自福建本地袁并由福建省农业科学院植物保护研
究所植物病理实验室保存遥 大肠杆菌菌株 耘泽糟澡藻鄄
则蚤糟澡蚤葬 糟燥造蚤 阅匀缘倩袁由本实验室提供遥
供试水稻品种院两优培九袁由江苏省农业科学院
粮食作物研究所提供遥
主要培养基院菌株培养所用的培养基为马铃薯
蔗糖琼脂培养基渊 孕杂粤冤袁马铃薯蔗糖液体培养基
渊孕杂月冤遥
试剂和仪器院阅则藻葬皂 栽葬择 郧则藻藻灶 孕悦砸 酝葬泽贼藻则 酝蚤曾
渊圆载冤袁由德国 云藻则皂藻灶贼葬泽 公司提供曰 阅晕粤 皂葬则噪藻则尧
责酝阅员愿鄄栽 增藻糟贼燥则尧限制性内切酶等试剂袁购于宝生物
渊大连冤公司曰其它试剂均为进口或国产分析纯遥
阅再再鄄缘 型双稳定时电泳仪袁上海谱振生物科技有限
公司曰耘阅悦鄄愿员园 型 孕悦砸 仪袁北京东胜创新生物科技
有限公司曰晕粤晕韵阅砸韵孕圆园园园糟型紫外分光光度计袁美
国 栽澡藻则皂燥 公司曰猿再 郧粤杂 圆园园园 凝胶成像系统袁上海
富玛实验设备有限公司遥
员援 圆 方法
员援 圆援 员 菌株基因组 阅晕粤提取
供试的菌株在 孕杂粤 上培养 缘 凿 后袁沿菌落边缘
切取菌丝块转接到 孕杂月 中袁 圆愿益尧 员缘园 则 辕 皂蚤灶摇床上
圆愿源 植摇 物摇 保摇 护摇 学摇 报 源园 卷
振荡培养 苑 耀 员园 凿 后袁经冷冻真空抽滤后研磨成菌
丝粉袁之后采取十六烷基三甲基溴化铵渊 澡藻曾葬凿藻糟赠造
贼则蚤皂藻贼澡赠造 葬皂皂燥灶蚤怎皂 遭则燥皂蚤凿藻袁悦栽粤月冤法咱员远暂提取 阅晕粤遥
采用紫外分光光度法检测 阅晕粤含量和纯度后袁 原 圆园
益保存备用遥
员援 圆援 圆 砸粤孕阅特异片段分析尧克隆和测序
根据预试验和随机引物的筛选结果袁选用随机
引物 杂猿愿园 渊缘忆鄄郧栽郧栽悦郧悦郧粤郧鄄猿忆冤对供试菌株进行
砸粤孕阅特异性分析袁砸粤孕阅反应体系和反应程序参见
王舒婷等咱员苑暂 遥 孕悦砸 反应产物于含 园援 缘 滋早 辕 皂蕴 溴化
乙锭渊藻贼澡蚤凿蚤怎皂 遭则燥皂蚤凿藻袁 耘月冤的质量分数的 圆豫琼脂
糖凝胶上电泳分离袁电压为 愿 灾 辕 糟皂袁时间为 圆 澡 左
右袁在凝胶成像系统上检测并拍照遥
将稻曲病菌特异 砸粤孕阅目标 阅晕粤片段切胶袁并
按照 阅晕粤凝胶回收试剂盒的说明进行回收纯化袁与
责酝阅员愿鄄栽载体连接后转化大肠杆菌 阅匀缘倩袁提取质
粒袁经酶切鉴定后袁挑选出阳性克隆送生工生物工程
渊上海冤股份有限公司测序遥
员援 圆援 猿 引物设计及特异性验证
利用美国国立生物技术信息中心渊晕悦月陨冤核酸
数据库对所测序列进行月蕴粤杂栽在线比对袁分析其
与 郧藻灶月葬灶噪中已有序列的一致性遥 应用软件 孕则蚤皂藻则
缘援 园 设计 杂悦粤砸标记的特异引物 哉杂鄄杂云 辕 哉杂鄄杂砸 和巢
式 孕悦砸引物 哉杂鄄晕云 辕 哉杂鄄晕砸袁委托生工生物工程渊上
海冤股份有限公司合成遥 用合成的引物对参试菌株
的基因组 阅晕粤进行扩增袁检测其特异性遥 选用不同
的反应体系和循环参数进行 孕悦砸扩增袁选出最佳扩
增条件遥 孕悦砸反应体系为 圆缘 滋蕴袁包含每引物 员 滋蕴尧
阅晕粤模板渊员园园 灶早冤 员 滋蕴尧阅则藻葬皂 栽葬择 郧则藻藻灶 孕悦砸 酝葬泽鄄
贼藻则 酝蚤曾 渊圆载冤 员圆援 缘 滋蕴和 阅阅宰 怨援 缘 滋蕴遥 孕悦砸反应程
序院怨源 益预变性 源皂蚤灶袁怨源益变性 猿缘 泽袁缘缘益退火 猿缘 泽袁
苑圆 益延伸 源园 泽袁猿缘 个循环曰最后 苑圆 益延伸 苑 皂蚤灶袁员远
益保温遥 用无菌的 凿凿匀圆韵代替模板 阅晕粤 作阴性对
照袁孕悦砸反应产物于含 园援 缘 滋早 辕 皂蕴 耘月 质量分数的
员援 缘豫琼脂糖凝胶上电泳分离袁电压为 愿 灾 辕 糟皂袁时间
为 源缘 皂蚤灶左右袁在凝胶成像系统上检测并拍照遥
员援 圆援 源 引物灵敏度检测
采用 员园 倍浓度梯度系列稀释法袁将提取的稻曲
病菌纯 阅晕粤分别稀释为 员 滋早 辕 滋蕴尧员园园 灶早 辕 滋蕴尧员园 灶早 辕
滋蕴尧员 灶早 辕 滋蕴尧员园园 责早 辕 滋蕴尧员园 责早 辕 滋蕴尧员 责早 辕 滋蕴尧员园园 枣早 辕
滋蕴尧员园 枣早 辕 滋蕴 和 员 枣早 辕 滋蕴 备用遥 分别以各浓度的
阅晕粤为模板进行常规和巢式 孕悦砸反应袁阴性对照用
无菌的 凿凿匀圆韵 代替模板 阅晕粤遥 常规 孕悦砸 反应院以
特异 杂悦粤砸引物 哉杂鄄杂云 辕 哉杂鄄杂砸作为 孕悦砸反应引物袁
反应体系和程序同 员援 圆援 猿遥 巢式 孕悦砸 反应院取 员 滋蕴
第 员 轮 孕悦砸产物为模板与引物 哉杂鄄晕云 辕 哉杂鄄晕砸 组合
进行巢式 孕悦砸 扩增袁巢式 孕悦砸 反应体系同 员援 圆援 猿袁
孕悦砸 反应程序院怨源益预变性 源 皂蚤灶袁怨源益变性 猿缘 泽袁缘苑
益退火 猿缘 泽袁苑圆 益延伸 源园 泽袁猿园 个循环曰最后 苑圆 益延
伸 苑 皂蚤灶袁员远 益保温遥
员援 圆援 缘 水稻幼颖组织和稻穗谷粒病菌的检测
在可控温室条件下袁在水稻品种两优培九孕穗
期标记叶耳间距为 圆尧苑 和 员员 糟皂 时的稻穗苞袁分别
进行稻曲病菌的喷雾接种和注射接种袁其中稻曲病
菌接种体制备及人工注射接种方法参照杨秀娟
等咱员愿暂 袁喷雾接种采用接种体喷施穗苞表面袁以其周
围出现液滴为宜遥 然后分别从喷雾接种 猿 凿 后的水
稻上及从未进行人工接种渊近病株和隔离种植冤水
稻上采集标记穗苞样品袁并以从注射接种 猿 凿 后的
水稻上采集的穗苞样品为阳性对照袁其中近病株的
水稻指在该水稻孕穗初期袁其相邻种植的水稻稻穗上
出现了人工注射接种发病产生的稻曲球病粒遥 此外袁
无菌条件下用灭菌的镊子小心剥离穗苞叶鞘袁确保苞
内幼颖与叶鞘外表无接触袁并用灭菌的剪刀剪取幼
颖中部组织 员援 园 早袁按照 悦栽粤月 法咱员远暂提取 阅晕粤遥 参
照 员援 圆援 源 方法分别进行常规 孕悦砸和巢式 孕悦砸检测遥
在稻曲病发生的田块袁于水稻黄熟期采集健穗
和有稻曲球出现病穗的谷粒遥 在无菌条件下分别剥
取病穗上无病症谷粒的颖壳尧健穗谷粒的颖壳及温
室隔离种植的未进行人工接种水稻健康谷粒的
颖壳各 园援 缘 早袁按十二烷基磺酸钠渊 泽燥凿蚤怎皂 凿燥凿藻糟赠造
泽怎造枣葬贼藻袁 杂阅杂冤鄄悦栽粤月 改进法咱员怨暂提取 阅晕粤袁孕悦砸 检测
方法同 员援 圆援 源遥
圆 结果与分析
圆援 员 特异性片段的筛选
以 杂猿愿园 为随机引物袁对参试的稻曲病菌和其它
菌株 阅晕粤进行 砸粤孕阅鄄孕悦砸扩增遥 杂猿愿园 可将稻曲病
菌 阅晕粤扩增出大小约 猿愿园 遭责的特异性片段袁其它病
原菌株 阅晕粤均无此特异性片段渊图 员冤遥
圆援 圆 特异性片段的序列分析
将大小约 猿愿园 遭责的稻曲病菌特异的 砸粤孕阅片段
进行回收尧克隆尧测序袁测序结果如图 圆 所示遥 从序
列的上下游找到了随机引物 杂猿愿园 自身及其互补碱
基序列的位置遥所获得的特异片段长度为猿苑怨 遭责袁
与扩增产生的回收片段大小相一致遥 该特异性片段
猿愿源远 期 陈福如等院稻曲病菌的 杂悦粤砸标记及其 孕悦砸检测
图 员 随机引物 杂猿愿园 对稻曲病菌以及其它病原菌 砸粤孕阅鄄孕悦砸产物的扩增
云蚤早援 员 砸粤孕阅鄄孕悦砸 责则燥凿怎糟贼泽 燥枣 哉泽贼蚤造葬早蚤灶燥蚤凿藻葬 增蚤则藻灶泽 葬灶凿 燥贼澡藻则 责葬贼澡燥早藻灶泽 葬皂责造蚤枣蚤藻凿 憎蚤贼澡 则葬灶凿燥皂 责则蚤皂藻则 杂猿愿园
摇 摇 员 耀 愿院稻曲病菌曰怨院麦角菌曰员园院紫麦角菌曰员员院水稻稻瘟病菌曰员圆院水稻恶苗病菌曰员猿 耀 员远院阴性对照渊凿凿匀圆韵冤曰 酝院 员缘园园 遭责 阅晕粤 皂葬则噪鄄
藻则遥 员 原 愿院 哉援 增蚤则藻灶泽曰 怨院 悦造蚤葬增蚤糟藻责泽 泽责援 曰 员园院 悦援 责怎则责怎则藻葬曰 员员院 孕援 早则蚤泽藻葬曰 员圆院 云援 皂燥灶蚤造蚤枣燥则皂藻曰 员猿 原 员远院 灶藻早葬贼蚤增藻 糟燥灶贼则燥造 渊凿凿匀圆韵冤曰 酝院 员缘园园 遭责
阅晕粤 皂葬则噪藻则援
图 圆 稻曲病菌特异性 阅晕粤片段的序列
云蚤早援 圆 杂藻择怎藻灶糟藻 燥枣 贼澡藻 泽责藻糟蚤枣蚤糟 阅晕粤 枣则葬早皂藻灶贼 燥枣 哉泽贼蚤造葬早蚤灶燥蚤凿藻葬 增蚤则藻灶泽
的序列与 郧藻灶月葬灶噪中的数据库比对袁没有发现同源
序列袁为稻曲病菌的特异性序列遥 用软件 孕则蚤皂藻则
缘援 园 设计的第 员 轮 杂悦粤砸 引物 哉杂鄄杂云 辕 哉杂鄄杂砸 和第 圆
轮巢式 孕悦砸引物 哉杂鄄晕云 辕 哉杂鄄晕砸袁其碱基序列分别如
下院哉杂鄄杂云院缘忆鄄栽悦郧悦悦栽悦粤郧粤悦悦栽悦粤粤栽悦鄄猿忆 渊正向冤曰
哉杂鄄杂砸院缘忆鄄郧粤郧悦悦栽悦粤粤粤栽郧悦悦栽栽悦悦鄄猿忆渊反向冤遥 哉杂鄄
晕云院缘忆鄄粤郧悦郧栽悦栽悦悦栽郧悦粤粤悦悦粤悦鄄猿忆渊正向冤曰哉杂鄄晕砸院
缘忆鄄郧粤郧悦悦栽悦粤粤粤栽郧悦悦栽栽悦悦鄄猿忆渊反向冤遥
圆援 猿 引物特异性验证
利用 孕悦砸反应体系进行稻曲病菌的 杂悦粤砸 标
记引物 哉杂鄄杂云 辕 哉杂鄄杂砸 的特异性验证袁该引物组合可
以在供试的稻曲病菌 阅晕粤 中特异性扩增到大小为
圆缘苑 遭责的目标片段袁而在其它参试病原菌株 阅晕粤及
空白对照中均无扩增片段渊图 猿冤遥 说明该引物具有
较高的特异性遥
圆援 源 引物灵敏度检测
用特异 杂悦粤砸 引物对稻曲病菌 阅晕粤 进行第 员
轮扩增袁可特异性扩增出大小为 圆缘苑 遭责 的目标片
段袁获得 阅晕粤 的最低检测浓度为 员 责早 辕 滋蕴遥 而用巢
式 孕悦砸引物对第 员 轮扩增产物进行第 圆 轮扩增袁可
获得 圆员园 遭责的特异性片段袁获得 阅晕粤的最低检测浓
度为 员园 枣早 辕 滋蕴袁与 杂悦粤砸 引物扩增结果相比袁巢式
孕悦砸反应检测灵敏度可提高 员园园 倍渊图 源冤遥
圆援 缘 水稻幼颖组织及稻穗谷粒的带菌检测
用特异 杂悦粤砸引物对供试样品的 阅晕粤进行第 员
轮扩增袁在人工接种的穗苞幼颖尧病田水稻谷粒及未
进行人工接种近病株的水稻穗苞幼颖提取的 阅晕粤
中袁可扩增到大小为 圆缘苑 遭责 的特异性片段袁而未进
行人工接种隔离种植的水稻穗苞幼颖和谷粒提取的
阅晕粤中没有扩增片段遥 经巢式 孕悦砸 第 圆 轮检测袁供
试样品的带菌检测结果与第 员轮结果一致袁可获得大
小为 圆员园 遭责的特异性片段渊图 缘冤遥 表明所设计的引
物 哉杂鄄杂云 辕 哉杂鄄杂砸和 哉杂鄄晕云 辕 哉杂鄄晕砸的巢式 孕悦砸均可
从水稻孕穗组织中及稻穗谷粒上检测到稻曲病菌遥
源愿源 植摇 物摇 保摇 护摇 学摇 报 源园 卷
图 猿 稻曲病菌 杂悦粤砸引物 哉杂鄄杂云 辕 哉杂鄄杂砸特异性检测结果
云蚤早援 猿 杂责藻糟蚤枣蚤糟 凿藻贼藻糟贼蚤燥灶 燥枣 哉泽贼蚤造葬早蚤灶燥蚤凿藻葬 增蚤则藻灶泽 憎蚤贼澡 杂悦粤砸 责则蚤皂藻则泽 哉杂鄄杂云 辕 哉杂鄄杂砸
摇 摇 员 耀 愿院稻曲病菌曰怨院麦角菌曰员园院紫麦角菌曰员员院水稻稻瘟病菌曰员圆院水稻恶苗病菌曰员猿院番茄早疫病菌曰员源院黄瓜枯萎病菌曰员缘院辣椒疫霉
病菌曰员远院阴性对照渊凿凿匀圆韵冤曰酝院员 缘园园 遭责 阅晕粤 皂葬则噪藻则遥 员 原 愿院 哉援 增蚤则藻灶泽曰 怨院 悦造蚤葬增蚤糟藻责泽 泽责援 曰 员园院 悦援 责怎则责怎则藻葬曰 员员院 孕援 早则蚤泽藻葬曰 员圆院 云援 皂燥灶蚤造蚤鄄
枣燥则皂藻曰 员猿院 粤援 泽燥造葬灶蚤曰 员源院 云援 燥曾赠泽责燥则怎皂 枣援 泽责援 糟怎糟怎皂藻则蚤灶怎皂曰 员缘院 孕援 糟葬责泽蚤糟蚤曰 员远院 灶藻早葬贼蚤增藻 糟燥灶贼则燥造 渊凿凿匀圆韵冤曰 酝院 员缘园园 遭责 阅晕粤 皂葬则噪藻则援
图 源 稻曲病菌常规 孕悦砸和巢式 孕悦砸灵敏度检测
云蚤早援 源 杂藻灶泽蚤贼蚤增蚤贼赠 凿藻贼藻糟贼蚤燥灶 燥枣 哉泽贼蚤造葬早蚤灶燥蚤凿藻葬 增蚤则藻灶泽 憎蚤贼澡 糟燥灶增藻灶贼蚤燥灶葬造 孕悦砸 葬灶凿 灶藻泽贼藻凿 孕悦砸
摇 摇 员 耀 员园院员 滋早 辕 滋蕴尧员园园 灶早 辕 滋蕴尧员园 灶早 辕 滋蕴尧员 灶早 辕 滋蕴尧员园园 责早 辕 滋蕴尧员园 责早 辕 滋蕴尧员 责早 辕 滋蕴尧员园园 枣早 辕 滋蕴尧员园 枣早 辕 滋蕴和 员 枣早 辕 滋蕴曰员员 耀 员苑为阴性对照
渊凿凿匀圆韵冤曰酝院员园园园 遭责 阅晕粤 皂葬则噪藻则遥 员 原 员园院 员 滋早 辕 滋蕴袁 员园园 灶早 辕 滋蕴袁 员园 灶早 辕 滋蕴袁 员 灶早 辕 滋蕴袁 员园园 责早 辕 滋蕴袁 员园 责早 辕 滋蕴袁 员 责早 辕 滋蕴袁 员园园 枣早 辕 滋蕴袁 员园
枣早 辕 滋蕴袁 员 枣早 辕 滋蕴曰 员员 原 员苑院 灶藻早葬贼蚤增藻 糟燥灶贼则燥造 渊凿凿匀圆韵冤曰 酝院 员园园园 遭责 阅晕粤 皂葬则噪藻则援
图 缘 引物 哉杂鄄杂云 辕 哉杂鄄杂砸和 哉杂鄄晕云 辕 哉杂鄄晕砸对水稻幼颖组织中和谷粒上稻曲病菌的检测
云蚤早援 缘 阅藻贼藻糟贼蚤燥灶 燥枣 哉泽贼蚤造葬早蚤灶燥蚤凿藻葬 增蚤则藻灶泽 枣则燥皂 贼藻灶凿藻则 早造怎皂藻 贼蚤泽泽怎藻泽 葬灶凿 早则葬蚤灶泽
燥枣 则蚤糟藻 憎蚤贼澡 责则蚤皂藻则泽 哉杂鄄杂云 辕 哉杂鄄杂砸 葬灶凿 哉杂鄄晕云 辕 哉杂鄄晕砸
摇 摇 员 耀 圆院未接种近病株的水稻幼颖 阅晕粤曰猿 耀 缘院喷雾接种水稻幼颖 阅晕粤曰远 耀 苑院注射接种水稻幼颖 阅晕粤曰愿 耀 员源院喷雾接种水稻幼颖
阅晕粤曰员缘 耀 员远院病田健穗的谷粒 阅晕粤曰员苑 耀 员愿院病穗未显症的谷粒 阅晕粤曰员怨 耀圆园院隔离种植未接种水稻幼颖 阅晕粤曰圆员 耀 圆圆院隔离种植未接种
水稻谷粒 阅晕粤曰圆猿院阴性对照渊凿凿匀圆韵冤曰酝院员 园园园 遭责 阅晕粤 皂葬则噪藻则遥 员 原 圆院 阅晕粤 燥枣 贼藻灶凿藻则 早造怎皂藻 枣则燥皂 怎灶鄄蚤灶燥糟怎造葬贼藻凿 则蚤糟藻 灶藻葬则 贼燥 凿蚤泽藻葬泽藻凿
责造葬灶贼泽曰 猿 原 缘院 阅晕粤 燥枣 贼藻灶凿藻则 早造怎皂藻 枣则燥皂 则蚤糟藻 葬枣贼藻则 泽责则葬赠蚤灶早 蚤灶燥糟怎造葬贼蚤燥灶曰 远 原 苑院 阅晕粤 燥枣 贼藻灶凿藻则 早造怎皂藻 枣则燥皂 则蚤糟藻 葬枣贼藻则 蚤灶躁藻糟贼蚤燥灶 蚤灶燥糟怎造葬贼蚤燥灶曰 愿 原
员源院 阅晕粤 燥枣 贼藻灶凿藻则 早造怎皂藻 枣则燥皂 则蚤糟藻 葬枣贼藻则 泽责则葬赠蚤灶早 蚤灶燥糟怎造葬贼蚤燥灶曰 员缘 原 员远院 阅晕粤 燥枣 早则葬蚤灶泽 枣则燥皂 澡藻葬造贼澡赠 责葬灶蚤糟造藻泽 蚤灶 凿蚤泽藻葬泽藻凿 枣蚤藻造凿曰 员苑 原 员愿院 阅晕粤 燥枣
泽赠皂责贼燥皂造藻泽泽 早则葬蚤灶泽 枣则燥皂 凿蚤泽藻葬泽藻凿 责葬灶蚤糟造藻泽曰 员怨 原 圆园院 阅晕粤 燥枣 贼藻灶凿藻则 早造怎皂藻 枣则燥皂 怎灶鄄蚤灶燥糟怎造葬贼藻凿 则蚤糟藻 责造葬灶贼藻凿 蚤灶 贼澡藻 蚤泽燥造葬贼藻凿 糟燥灶凿蚤贼蚤燥灶曰 圆员 原 圆圆院
阅晕粤 燥枣 早则葬蚤灶泽 枣则燥皂 怎灶鄄蚤灶燥糟怎造葬贼藻凿 则蚤糟藻 责造葬灶贼藻凿 蚤灶 贼澡藻 蚤泽燥造葬贼藻凿 糟燥灶凿蚤贼蚤燥灶曰 圆猿院 灶藻早葬贼蚤增藻 糟燥灶贼则燥造 渊凿凿匀圆韵冤曰 酝院 员园园园 遭责 阅晕粤 皂葬则噪藻则援
缘愿源远 期 陈福如等院稻曲病菌的 杂悦粤砸标记及其 孕悦砸检测
猿 讨论
本研究利用随机引物 杂猿愿园 对所有被测的菌株
进行 砸粤孕阅鄄孕悦砸 分析袁筛选到稻曲病菌特异性
砸粤孕阅片段袁根据测序结果设计特异 杂悦粤砸 引物袁获
得了稻曲病菌特异的 杂悦粤砸 检测标记袁可以将侵染
水稻穗部的稻瘟病菌尧水稻种传的恶苗病菌与稻曲
病菌近缘的麦角菌等作物病原真菌区分开遥 使用设
计的稻曲病菌 杂悦粤砸 引物和巢式 孕悦砸 引物组合进
行巢式孕悦砸检测袁发现稻曲病菌阅晕粤检测灵敏度
提高了 员园园 倍遥 采用 杂悦粤砸 标记技术和巢式 孕悦砸
技术从田间自然感病病穗未显症的谷粒尧健穗谷粒
的颖壳表面以及从注射和喷雾接种的稻苞幼颖组织
中均可检测到稻曲病菌遥 表明建立的巢式 孕悦砸 检
测技术灵敏度高袁可有效用于稻曲病菌分子鉴定尧稻
谷带菌检测尧水稻体内病菌的早期快速检测及田间
病菌种群发生动态监测遥
在澡燥怎等咱圆园 原 圆员暂利用稻曲病菌核糖体基因内转录
间隔区渊则阅晕粤鄄陨栽杂冤序列种内保守性的特点袁设计特
异性引物袁建立了稻曲病菌巢式 孕悦砸 检测方法袁但
在其常规 孕悦砸 扩增中除能特异性扩增出 猿愿园 遭责 的
片段之外袁还能扩增出近 员园园 遭责 的片段曰王疏等咱圆圆暂
采用该技术检测到水稻生殖生长初期剑叶的叶耳间
有稻曲病菌附着或侵染曰粤泽澡蚤扎葬憎葬 驭 运葬贼葬燥噪葬咱圆猿暂在接
种和未接种的孕穗期水稻上都检出了稻曲病菌咱圆猿暂 遥
由于检测的样品均来自田间袁未经处理就直接提取
阅晕粤袁检测结果难以完全排除田间植株表面气传病
原菌孢子的干扰袁无法正确判断病菌是否侵入穗苞
内部遥 本研究将水稻种植在温室大棚内袁采用建立
的稻曲病菌 杂悦粤砸 标记及其 孕悦砸 检测技术对人工
喷雾接种稻曲病菌穗苞内的幼颖组织进行病菌检
测袁在标记的穗苞内部幼颖组织中均检出了稻曲病
菌袁后期观察发现袁在其它标记的相同类型的穗苞中
也均有稻曲病病粒出现遥 由此说明稻曲病菌分生孢
子可以从水稻穗苞外自然侵入到穗苞内袁并附着或
侵染幼颖遥 因此袁水稻孕穗初期至后期是稻曲病分
生孢子侵染的有效时期遥 此外袁在与病株相邻的水
稻穗苞幼颖样品中检出了稻曲病菌袁表明病穗上的
稻曲球厚垣孢子具有漂移和自然侵染的可能性袁但
其有效侵染体是以厚垣孢子直接侵染袁还是以厚垣
孢子萌发产生分生孢子间接侵染袁还有待深入研究遥
稻曲病菌的无性态为麦角菌科绿核菌属绿核
菌遥 月蚤泽糟澡燥枣枣等咱圆源暂通过对绿核菌属与麦角菌属的
则阅晕粤大亚基序列分析袁证明绿核菌属与麦角菌属
的亲缘关系很远遥 本研究对 圆 种麦角菌属菌株与稻
曲病菌群体之间 砸粤孕阅片段分析及其特异性检测结
果也支持上述观点遥 栽葬灶葬噪葬 等咱圆缘暂将稻曲病菌从麦
角菌属中独立出来袁将有性态定名为子囊菌亚门麦
角菌科真菌 灾蚤造造燥泽蚤糟造葬增葬 增蚤则藻灶泽 渊晕葬噪葬贼葬冤 耘援 栽葬灶葬噪葬 驭
悦援 栽葬灶葬噪葬遥 有研究发现袁许多禾本科牧草的内生真
菌多属于麦角菌科 悦造葬增蚤糟蚤责蚤贼葬糟藻葬藻的真菌袁如传播广
泛的香柱菌 耘责蚤糟澡造燥藻 贼赠责澡蚤灶葬与大多数禾本科牧草有
共生关系袁主要存在于宿主植物叶鞘的细胞间隙或
宿主植物的表皮层袁不进入宿主植物细胞咱圆远 原 圆苑暂 遥
栽葬灶早等咱怨暂研究认为袁稻曲病菌是水稻花丝专一性侵
染导致的水稻穗部病害袁病原菌不侵染水稻子房和
花药袁侵染模式属于花丝细胞外侵染和扩展袁病原菌
菌丝不直接穿透和进入寄主细胞袁只在细胞间穿行袁
说明稻曲病菌与麦角菌科其它真菌具有不同的侵染
模式遥 但是袁稻曲病菌在水稻孕穗前期是否已成功
侵染水稻的其它部位袁是否属于水稻的内生共生菌袁
这些问题尚不清楚袁还有待于应用建立的 孕悦砸 检测
技术作进一步验证遥
参 考 文 献渊砸藻枣藻则藻灶糟藻泽冤
咱员暂 粤贼蚤葬 酝 酝 酝援 砸蚤糟藻 枣葬造泽藻 泽皂怎贼 渊哉泽贼蚤造葬早蚤灶燥蚤凿藻葬 增蚤则藻灶泽冤 蚤灶 耘早赠责贼援
允燥怎则灶葬造 燥枣 孕造葬灶贼 阅蚤泽藻葬泽藻泽 葬灶凿 孕则燥贼藻糟贼蚤燥灶袁 圆园园源袁 员员员渊员冤院
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咱圆暂 砸怎泽澡 酝 悦袁 杂澡葬澡躁葬澡葬灶 粤 运 酝袁 允燥灶藻泽 允 孕袁 藻贼 葬造援 韵怎贼遭则藻葬噪 燥枣
枣葬造泽藻 泽皂怎贼 燥枣 则蚤糟藻 蚤灶 蕴燥怎蚤泽蚤葬灶葬援 孕造葬灶贼 阅蚤泽藻葬泽藻袁 圆园园园袁 愿源 渊员冤院
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咱猿暂 姜慎袁 唐春生袁 谭志琼援 国内外稻曲病研究现状援 热带农业
科学袁 圆园员园袁 猿园渊猿冤院远圆 原 远远
咱源暂 侯小华袁 李友荣袁 魏子生袁 等援 湖南稻曲病的发生与危害调
查分析援 湖南农业科学袁 圆园园怨 渊怨冤院愿苑 原 愿愿
咱缘暂 运燥蚤泽燥 再袁 蕴蚤 再袁 陨憎葬泽蚤噪蚤 杂袁 藻贼 葬造援 哉泽贼蚤造燥曾蚤灶泽袁 葬灶贼蚤皂蚤贼燥贼蚤糟 糟赠糟造蚤糟
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咱远暂 伍永炎援 禽畜稻曲菌毒素中毒调查与防治报告援 中兽医学
杂志袁 圆园园源渊缘冤院 圆园 原 圆圆
咱苑暂 高必达袁 钟杰援 稻曲病菌侵染过程研究进展援 湖南农业科
学袁圆园员员渊猿冤院 怨猿 原 怨苑
咱愿暂 代光辉袁 赵杰袁 何润梅袁 等援 稻曲病不同抗性水稻品种的组
织化学及分生孢子侵染途径的初步观察援 植物病理学报袁
圆园园缘袁猿缘渊员冤院 猿苑 原 源圆
咱怨暂 栽葬灶早 再 载袁 允蚤灶 允袁 匀怎 阅 宰袁 藻贼 葬造援 耘造怎糟蚤凿葬贼蚤燥灶 燥枣 贼澡藻 蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶
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远愿源 植摇 物摇 保摇 护摇 学摇 报 源园 卷
咱员园暂 高新明袁 李本金袁 兰成忠袁 等援 番石榴焦腐病菌的 陨栽杂 分
析及 孕悦砸检测援 植物保护学报袁 圆园员员袁 猿愿渊猿冤院 圆圆苑 原 圆猿圆
咱员员暂 卢梦玲袁 周晓云袁 曾伟达袁 等援 红掌细菌性疫病病原菌的
孕悦砸特异性检测援 植物病理学报袁 圆园员圆袁 源圆渊员冤院员 原 怨
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咱员源暂 郝保军袁王保通袁李强袁等援 小麦条锈菌水源 员员 类群的
砸粤孕阅分析及 杂悦粤砸标记的建立援 植物病理学报袁 圆园员园袁 源园
渊员冤院 员 原 远
咱员缘暂 戴杨 袁温丽伟 袁高克祥 袁等 援 生防真菌球毛壳 晕阅猿 缘
的 砸粤孕阅特异序列的标记转换援 山东农业科学袁圆园员员渊员园冤院
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咱员远暂 匀藻 再 匝援 粤灶 蚤皂责则燥增藻凿 责则燥贼燥糟燥造 枣燥则 枣怎灶早葬造 阅晕粤 责则藻责葬则葬贼蚤燥灶援
酝赠糟燥泽赠泽贼藻皂葬袁 圆园园园袁 员怨渊猿冤院 源猿源
咱员苑暂 王舒婷袁 林廷邦袁 甘林袁 等援 中国部分地区稻曲病菌培养
特性及其遗传多样性分析援 植物保护学报袁圆园员圆袁猿怨渊猿冤院
圆员苑 原 圆圆猿
咱员愿暂 杨秀娟袁王舒婷袁阮宏椿袁等援 水稻稻曲病室内人工接种技
术援 植物保护学报袁 圆园员员袁猿愿渊缘冤院猿怨缘 原 源园园
咱员怨暂 刘小勇袁田素忠袁秦国夫袁等 援 提取植物和微生物阅晕粤
的 杂阅杂鄄悦栽粤月改进法援 北京林业大学学报袁员怨怨苑袁员怨渊猿冤院
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咱圆员暂 周永力袁 谢学文袁 王疏袁 等援 采用 晕藻泽贼藻凿鄄孕悦砸从田间和水
稻植株上检测稻曲病菌援 农业生物技术学报袁 圆园园远袁 员源
渊源冤院 缘源圆 原 缘源缘
咱圆圆暂 王疏袁 潘雅姣袁 樊金娟袁 等援 水稻生殖生长期植株上稻曲
病菌的 孕悦砸检测援 辽宁农业科学袁 圆园园缘渊缘冤院 源远 原 源苑
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咱圆远暂 刘钢援 内生真菌香柱菌及其次级代谢援 微生物学报袁 圆园园猿袁
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贼赠责澡蚤灶葬 藻灶凿燥责澡赠贼藻泽 蚤灶 澡燥泽贼 葬灶凿 灶燥灶澡燥泽贼 云藻泽贼怎糟葬 葬灶凿 蕴燥造蚤怎皂
泽责藻糟蚤藻泽 燥枣 早则葬泽泽藻泽援 悦葬灶葬凿蚤葬灶 允燥怎则灶葬造 月燥贼葬灶赠袁 员怨愿苑袁 远缘渊员员冤 院
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渊责任编辑院谢小帆冤
苑愿源远 期 陈福如等院稻曲病菌的 杂悦粤砸标记及其 孕悦砸检测