全 文 ：野生大豆内生细菌多样性及其杀线虫活性分析
史凤玉员 摇 武云鹏员 摇 张瑞敬圆 摇 吴摇 楠员 摇 朱英波员鄢
渊员援河北科技师范学院生命科技学院袁 秦皇岛 园远远远园园曰 圆援张家口市植物保护植物检疫站袁 张家口 园苑缘园园园冤
摘要院 为探明河北昌黎野生大豆内生细菌的多样性袁寻找新的具有杀线虫活性的微生物资源袁采用平
板稀释法从野生大豆根尧茎尧叶等组织中分离内生细菌袁结合形态特征以及 员远杂 则阅晕粤基因序列进行比
对分析袁并对大豆孢囊线虫 匀藻贼藻则燥凿藻则葬 早造赠糟蚤灶藻泽进行杀线虫活性比较遥 从野生大豆分离获得内生细菌
员愿园株袁分属于 苑大类群院变形菌门 琢 亚群尧变形菌门 茁亚群尧变形菌门 酌亚群尧厚壁菌门尧放线菌门尧
酸杆菌门和疣微菌门袁其中变形菌门 琢亚群和厚壁菌门为优势类群袁分别占分离细菌总株数的源愿援 怨豫
和 员愿援 怨豫 袁野生大豆组织内生细菌 杂澡葬灶灶燥灶鄄宰蚤藻灶藻则 多样性指数为 圆援 员员 耀 圆援 怨员遥 内生细菌 月葬糟蚤造造怎泽
泽怎遭贼蚤造蚤泽 宰杂砸怨猿 和 月援 皂藻早葬贼藻则蚤怎皂 宰杂砸圆圆 菌株能明显地抑制大豆孢囊线虫卵的孵化袁相对抑制率分
别为 怨苑援 怨豫和 怨愿援 圆豫 袁对 圆 龄幼虫也有较强的毒杀作用袁校正死亡率分别为 愿愿援 怨豫和 怨园援 怨豫 遥 研
究表明袁野生大豆组织中内生细菌具丰富的多样性袁其胞外分泌物中存在天然杀线活性物质遥
关键词院 野生大豆曰 大豆孢囊线虫曰 可培养细菌曰 多样性
阅蚤增藻则泽蚤贼赠 葬灶凿 灶藻皂葬贼蚤糟蚤凿葬造 葬糟贼蚤增蚤贼赠 燥枣 贼澡藻 藻灶凿燥责澡赠贼蚤糟
遭葬糟贼藻则蚤葬 蚤灶 贼澡藻 憎蚤造凿 泽燥赠遭藻葬灶 郧造赠糟蚤灶藻 泽燥躁葬
杂澡蚤 云藻灶早赠怎员 摇 宰怎 再怎灶责藻灶早员 摇 在澡葬灶早 砸怎蚤躁蚤灶早圆 摇 宰怎 晕葬灶员 摇 在澡怎 再蚤灶早遭燥员鄢
渊员援 悦燥造造藻早藻 燥枣 蕴蚤枣藻 杂糟蚤藻灶糟藻泽袁 匀藻遭藻蚤 晕燥则皂葬造 哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠 燥枣 杂糟蚤藻灶糟藻 葬灶凿 栽藻糟澡灶燥造燥早赠袁 匝蚤灶澡怎葬灶早凿葬燥 园远远远园园袁 匀藻遭藻蚤
孕则燥增蚤灶糟藻袁 悦澡蚤灶葬曰 圆援 在澡葬灶早躁蚤葬噪燥怎 杂贼葬贼蚤燥灶 燥枣 孕造葬灶贼 孕则燥贼藻糟贼蚤燥灶袁 在澡葬灶早躁蚤葬噪燥怎 园苑缘园园园袁 匀藻遭藻蚤 孕则燥增蚤灶糟藻袁 悦澡蚤灶葬冤
粤遭泽贼则葬糟贼院 陨灶 燥则凿藻则 贼燥 怎灶凿藻则泽贼葬灶凿 贼澡藻 凿蚤增藻则泽蚤贼赠 燥枣 贼澡藻 藻灶凿燥责澡赠贼蚤糟 遭葬糟贼藻则蚤葬 枣则燥皂 贼蚤泽泽怎藻泽 燥枣 憎蚤造凿 泽燥赠遭藻葬灶
郧造赠糟蚤灶藻 泽燥躁葬 蚤灶 悦澡葬灶早造蚤袁 葬灶凿 凿蚤泽糟燥增藻则 灶藻憎 泽贼则葬蚤灶泽 憎蚤贼澡 灶藻皂葬贼蚤糟蚤凿葬造 葬糟贼蚤增蚤贼赠袁 贼澡藻 藻灶凿燥责澡赠贼蚤糟 遭葬糟贼藻则蚤葬 憎藻则藻
蚤泽燥造葬贼藻凿 枣则燥皂 澡藻葬造贼澡赠 则燥燥贼袁 泽贼藻皂袁 葬灶凿 造藻葬枣 贼蚤泽泽怎藻泽 怎泽蚤灶早 凿蚤造怎贼蚤燥灶 责造葬贼藻 糟燥怎灶贼蚤灶早 皂藻贼澡燥凿援 栽澡藻 泽贼则葬蚤灶泽 憎藻则藻
蚤凿藻灶贼蚤枣蚤藻凿 葬糟糟燥则凿蚤灶早 贼燥 贼澡藻 皂燥则责澡燥造燥早蚤糟葬造 糟澡葬则葬糟贼藻则泽 糟燥皂遭蚤灶藻凿 憎蚤贼澡 员远杂 则阅晕粤 泽藻择怎藻灶糟藻泽 葬灶葬造赠泽蚤泽袁 葬灶凿 贼澡藻
灶藻皂葬贼蚤糟蚤凿葬造 葬糟贼蚤增蚤贼赠 燥枣 贼澡藻 泽贼则葬蚤灶泽 葬早葬蚤灶泽贼 匀藻贼藻则燥凿藻则葬 早造赠糟蚤灶藻泽 憎葬泽 葬造泽燥 贼藻泽贼藻凿援 栽澡藻 则藻泽怎造贼泽 泽澡燥憎藻凿 贼澡葬贼 员愿园
藻灶凿燥责澡赠贼蚤糟 遭葬糟贼藻则蚤葬 泽贼则葬蚤灶泽 蚤泽燥造葬贼藻凿 枣则燥皂 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 责葬则贼泽 燥枣 憎蚤造凿 泽燥赠遭藻葬灶 遭藻造燥灶早藻凿 贼燥 苑 遭葬糟贼藻则蚤葬造 早则燥怎责泽袁
粤造责澡葬责则燥贼藻燥遭葬糟贼藻则蚤葬袁 月藻贼葬责则燥贼藻燥遭葬糟贼藻则蚤葬袁 郧葬皂皂葬责则燥贼藻燥遭葬糟贼藻则蚤葬袁 云蚤则皂蚤糟怎贼藻泽袁 粤糟贼蚤灶燥遭葬糟贼藻则蚤葬袁 粤糟蚤凿燥遭葬糟贼藻鄄
则蚤葬 葬灶凿 灾藻则则怎糟燥皂蚤糟则燥遭蚤葬援 栽澡藻 泽贼则葬蚤灶泽 遭藻造燥灶早蚤灶早 贼燥 早则燥怎责 粤造责澡葬责则燥贼藻燥遭葬糟贼藻则蚤葬 葬灶凿 云蚤则皂蚤糟怎贼藻泽 憎藻则藻 贼澡藻
凿燥皂蚤灶葬灶贼 藻灶凿燥责澡赠贼藻泽 蚤灶 憎蚤造凿 泽燥赠遭藻葬灶袁 憎蚤贼澡 源愿援 怨豫 葬灶凿 员愿援 怨豫 燥枣 贼燥贼葬造 泽贼则葬蚤灶泽袁 则藻泽责藻糟贼蚤增藻造赠援 栽澡藻 杂澡葬灶鄄
灶燥灶鄄宰蚤藻灶藻则 蚤灶凿藻曾 燥枣 藻灶凿燥责澡赠贼藻 遭葬糟贼藻则蚤葬 蚤灶 憎蚤造凿 泽燥赠遭藻葬灶 憎葬泽 遭藻贼憎藻藻灶 圆援 员员 葬灶凿 圆援 怨员援 栽澡藻 藻灶凿燥责澡赠贼藻
遭葬糟贼藻则蚤葬 月葬糟蚤造造怎泽 皂藻早葬贼藻则蚤怎皂 宰杂砸圆圆 葬灶凿 月援 泽怎遭贼蚤造蚤泽 宰杂砸怨猿 蚤灶澡蚤遭蚤贼藻凿 藻早早 澡葬贼糟澡蚤灶早 燥枣 泽燥赠遭藻葬灶 糟赠泽贼 灶藻皂葬鄄
贼燥凿藻袁 憎蚤贼澡 葬 则藻造葬贼蚤增藻 蚤灶澡蚤遭蚤贼蚤燥灶 则葬贼藻 燥枣 怨苑援 怨豫 葬灶凿 怨愿援 圆豫 袁 葬灶凿 澡葬凿 泽贼则燥灶早 贼燥曾蚤糟 藻枣枣藻糟贼 葬早葬蚤灶泽贼 圆灶凿 泽贼葬早藻
躁怎增藻灶蚤造藻泽袁 憎蚤贼澡 葬 糟燥则则藻糟贼藻凿 皂燥则贼葬造蚤贼赠 则葬贼藻 燥枣 愿愿援 怨豫 葬灶凿 怨园援 怨豫 援 栽澡藻 泽贼怎凿赠 凿藻皂燥灶泽贼则葬贼藻凿 贼澡葬贼 贼澡藻 泽责藻糟蚤藻泽
凿蚤增藻则泽蚤贼赠 燥枣 藻灶凿燥责澡赠贼蚤糟 遭葬糟贼藻则蚤葬 憎葬泽 葬遭怎灶凿葬灶贼 蚤灶 贼蚤泽泽怎藻泽 燥枣 憎蚤造凿 泽燥赠遭藻葬灶袁 葬灶凿 灶葬贼怎则葬造 灶藻皂葬贼蚤糟蚤凿葬造 责则燥凿怎糟贼泽
葬则藻 藻曾蚤泽贼藻凿 蚤灶 贼澡藻 枣藻则皂藻灶贼葬贼蚤燥灶 枣造贼则葬贼藻泽 燥枣 藻灶凿燥责澡赠贼蚤糟 遭葬糟贼藻则蚤葬 枣则燥皂 憎蚤造凿 泽燥赠遭藻葬灶援
基金项目院 河北省教育厅项目渊圆园园苑源源怨冤袁中国博士后科学基金渊圆园员园园源愿园园圆愿冤袁河北科技师范学院博士启动基金渊圆园园苑再月园员园冤
作者简介院 史凤玉袁女袁员怨苑圆年生袁副教授袁研究方向为资源微生物与植物病害生物防治袁 耘鄄皂葬蚤造院 枣赠泽澡蚤员怨苑圆岳 员圆远援 糟燥皂
鄢通讯作者渊粤怎贼澡燥则 枣燥则 糟燥则则藻泽责燥灶凿藻灶糟藻冤 袁 耘鄄皂葬蚤造院曾蚤葬燥扎澡怎赃员远愿愿岳 员圆远援 糟燥皂曰 收稿日期院 圆园员猿 原 园员 原 员苑
第 源园 卷摇 第 源 期
圆园员猿 年摇 愿 月
植摇 物摇 保摇 护摇 学摇 报
粤悦栽粤 孕匀再栽韵孕匀再蕴粤悦陨悦粤 杂陨晕陨悦粤
灾燥造援 源园摇 晕燥援 源
粤怎早援 摇 圆园员猿
摇 摇 运藻赠 憎燥则凿泽院 憎蚤造凿 泽燥赠遭藻葬灶曰 匀藻贼藻则燥凿藻则葬 早造赠糟蚤灶藻泽曰 藻灶凿燥责澡赠贼蚤糟 遭葬糟贼藻则蚤葬曰 凿蚤增藻则泽蚤贼赠
摇 摇 内生细菌是植物各种组织和器官的细胞间隙或
细胞内的天然宿居者袁在其部分或整个生活周期寄
居在植物组织袁特别是营养繁殖的组织中生存尧繁
衍尧传播遥 由于植物内生细菌与宿主协同进化袁在演
化过程中形成了明显的互惠共生关系遥 许多研究表
明袁植物内生细菌对宿主具有抗病促生作用袁显示了
其在生物农药开发和促进植物生长等方面有着良好
的应用前景咱员 原 圆暂 遥
野生大豆是栽培大豆的近缘野生种袁是大豆育
种和生物技术研究的物质基础遥 野生大豆在长期的
进化过程中形成了很强的环境适应能力袁如耐贫瘠尧
耐寒尧耐旱以及抗病虫害等袁由于这些在进化上的特
殊性和生态上的强适应性袁使野生大豆具有研究和
利用价值袁相继开展了种质资源保护与利用尧优良基
因的挖掘等方面的研究咱猿 原 源暂 遥 然而野生大豆天然种
群数量和异域种植资源日趋减少和消失遥 除了建立
原生态环境保护点外袁注重和加强野生大豆内生细菌
的研究袁对于拓展野生大豆资源的保护和利用途径尧
丰富野生大豆的保护生物学研究具有重要的意义遥
大豆孢囊线虫 匀藻贼藻则燥凿藻则葬 早造赠糟蚤灶藻泽 陨糟澡蚤灶燥澡藻 在我
国各大豆主产区普遍发生袁东北地区危害尤为严重袁
给大豆生产造成极大的经济损失遥 目前袁对大豆孢
囊线虫的防治尚无理想的药剂袁且抗病品种和轮作
措施的应用也受品种抗性丧失和区域气候差异等因
素的困扰袁因此袁该病害的防治一直是个难题遥 近年
来袁大豆孢囊线虫病的生物防治受到国内外学者的
广泛关注咱缘暂 袁其研究主要集中于从土壤中分离捕食
线虫微生物袁但向土壤中引入这些微生物时袁其防治
效果常受土壤环境的影响袁导致防治效果不稳定遥
相比之下袁内生细菌在植物体内长期存在袁受外界环
境因素渊干燥尧紫外线辐射尧营养缺乏等冤的影响较
小袁其防效稳定性和持久性明显高于常规生物防
治咱远暂 遥 因此袁植物内生细菌已成为植物病理学界的
研究热点袁而野生大豆作为濒危植物之一袁国内外对
其内生细菌研究的报道还很少遥
本课题组前期采用组织和研磨分离法从野生大
豆中分离到 员 株具有强烈杀线虫活性的菌株 月葬糟蚤造鄄
造怎泽 泽责援 月匀蕴猿缘园员袁该菌株代谢物对大豆孢囊线虫卵
孵化有强烈的抑制作用袁对 圆 龄幼虫渊允圆冤有较强的
毒杀作用咱苑暂 遥 野生大豆作为我国重要的野生种质
资源袁对其内生细菌多样性进行研究袁不仅有助于探
明野生大豆内生细菌的分布特征袁分析其耐盐尧耐旱
以及抵抗病害等优良特性与内生菌之间的关系袁而
且也可丰富植物内生细菌的资源库遥 本试验采用研
磨分离法对野生大豆不同器官的内生细菌进行分离
鉴定袁以菌体形态观察结合 员远杂 则阅晕粤 序列分析对
得到的 员愿园 株分离物的多样性进行了比较分析袁并
研究内生细菌对大豆孢囊线虫的抑制作用遥
员 材料与方法
员援 员 材料
供试植物院野生大豆于 圆园员圆 年 苑 月下旬采自河
北昌黎县后刘垞苇塘附近遥 在苇塘附近 缘园 皂圆 范围
内袁选取生长性状良好尧无病害症状的健康植株 圆园
株袁采集后立即放入无菌样品袋中袁低温保鲜袁采集
当天带回实验室进行内生细菌的分离遥 晕粤 培养
基院牛肉膏 猿 早尧蛋白胨 缘 早尧葡萄糖 圆援 缘 早尧琼脂 员苑 早袁
水 员园园园 皂蕴袁责匀 苑援 圆遥 试剂院栽葬择 阅晕粤聚合酶尧凿晕栽孕尧
孕悦砸引物尧孕悦砸 产物纯化试剂盒以及细菌 阅晕粤 试
剂盒购自生工生物工程渊上海冤股份有限公司遥
员援 圆 方法
员援 圆援 员 内生细菌的分离院将野生大豆植株用自来水
冲洗干净袁然后随机称取根尧茎尧叶各 园援 缘 早袁苑园豫酒
精浸泡 员 皂蚤灶袁再用 园援 员豫次氯酸钠表面消毒 员 耀 缘
皂蚤灶袁无菌水冲洗 源 次袁取 员园园 滋蕴最后 员 次无菌水冲
洗液涂布接种于相应的 晕粤 培养基上袁以检测组织
表面消毒是否彻底遥 取上述消毒彻底的样品袁加适
量无菌石英砂碾磨袁用无菌水梯度稀释至 员园 耀 员园源袁
各取 员园园滋蕴 涂 晕粤平板袁每个稀释度涂布 猿 个平板袁
圆愿 益培养 圆 耀 猿 凿后计数平板的菌落数袁并挑取表型
有差异的单菌落袁纯化后转至 晕粤斜面袁源 益保存遥
员援 圆援 圆 细菌 阅晕粤 提取和 员远杂 则阅晕粤 扩增院采用 员远杂
则阅晕粤序列相似性分析方法对野生大豆可培养内生
细菌进行鉴定遥 参照 悦怎蚤等咱愿暂的方法少量提取细菌
基因组阅晕粤袁室温干燥后溶于缘园 滋蕴栽耘 遭怎枣枣藻则中袁
员援 园豫琼脂糖电泳检测 阅晕粤 质量遥 将 阅晕粤 浓度调
至 苑园 灶早 辕 滋蕴左右袁做 孕悦砸模板备用遥 引物为细菌通
用引物咱怨暂 袁正向引物为 圆苑云院缘忆鄄粤郧粤郧栽栽栽郧粤栽悦悦栽郧鄄
郧悦栽悦粤郧鄄猿忆袁反向引物为 员源怨缘砸院缘忆鄄悦栽粤悦郧郧悦栽粤悦鄄
悦栽栽郧栽栽粤悦郧粤鄄猿忆遥 孕悦砸 扩增体系院阅晕粤 模板 员 滋蕴尧
圆援 缘 皂皂燥造 辕 蕴 凿晕栽孕 酝蚤曾贼怎则藻 圆 援 缘 滋蕴尧 圆园 滋皂燥造 辕 蕴 圆苑云
员援 园 滋蕴尧圆园 滋皂燥造 辕 蕴 员源怨缘砸 员援 园 滋蕴尧员园 伊 耘曾 栽葬择 遭怎枣枣藻则
渊酝早圆 垣 责造怎泽冤缘 滋蕴尧 缘 哉 辕 滋蕴 耘曾 栽葬择 酶园 援 猿 滋蕴袁补足
愿圆猿 植摇 物摇 保摇 护摇 学摇 报 源园 卷
凿凿匀圆韵 到 缘园滋蕴遥 孕悦砸扩增程序院怨源益预变性 缘皂蚤灶曰怨源 益变性 员 皂蚤灶袁缘圆 益退火 员 皂蚤灶袁苑圆 益延伸 缘 皂蚤灶袁猿愿
个循环曰苑圆 益延伸 员园 皂蚤灶遥 孕悦砸 扩增产物经 孕悦砸
孕怎则蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 运蚤贼纯化后袁送北京诺赛基因组研究中心
测序遥
员援 圆援 猿 多样性分析院 根据测序结果袁利用 月蕴粤杂栽 软
件渊 澡贼贼责院 辕辕 憎憎憎援 灶糟遭蚤援 灶造皂援 灶蚤澡援 早燥增 辕 遭造葬泽贼 辕 月造葬泽贼援 糟早蚤冤
与 郧藻灶月葬灶噪数据库中的序列进行比对分析袁获得相
似性较高的相关菌株的 员远杂 则阅晕粤 序列遥 所测序列
提交 郧藻灶月葬灶噪 数据库袁 登录号为 运悦源愿缘猿员圆 耀
运悦源愿缘猿猿远遥 定义 员远杂 则阅晕粤序列同源性大于 怨苑豫为
同一种咱员园暂 袁采用 杂澡葬灶灶燥灶鄄宰蚤藻灶藻则 多样性指数渊匀忆冤尧
均匀度指数渊 允冤和物种丰富度指数渊酝葬冤计算多样
性咱员员暂 遥 匀忆 越 原 移杂蚤 孕 蚤窑造灶孕 蚤曰允 越 匀忆 辕 造灶杂曰酝葬 越 渊杂 原员冤 辕 造灶晕 遥 公式中 杂为菌种数袁孕 蚤 为第 蚤 种的多度比
例袁可以用 孕 蚤 越 灶蚤 辕 晕求出遥 灶蚤 是第 蚤 种的菌株数袁晕
是所有菌株数总和遥 为比较不同部位可培养内生细
菌种类的相似性袁用公式 悦 越 躁 辕 渊葬 垣 遭 原 躁冤计算相似
性系数咱员圆暂 袁其中 葬 和 遭 分别代表待比较的两个部位
各自含有的菌种数袁 躁 代表两个部位所共有的菌
种数遥
员援 圆援 源 供试菌株发酵液的制备院将活化好的供试菌
株接入已制备好的 蕴月 液体培养基袁置于摇床袁在
员愿园 则 辕 皂蚤灶尧猿苑 益条件下振荡培养袁愿 园园园 则 辕 皂蚤灶 离心
员园 皂蚤灶袁上清液用高压灭菌的细菌过滤器过滤袁用无
菌水将发酵液依次稀释 缘尧员园尧员缘尧圆园 倍 源 个浓度梯
度袁放入 源 益冰箱中保存备用遥
员援 圆援 缘 大豆孢囊线虫卵和 允圆 悬浮液的制备院从黑龙
江农业科学院大庆分院大豆孢囊线虫繁殖圃中采集
土壤袁然后采用蔗糖梯度离心法从土样中分离孢囊袁
在体视镜下用自制的玻璃挑针挑出新鲜饱满成熟的
孢囊袁孢囊经组织研磨器研磨袁分别经 圆园园 目和 缘园园
目网筛收集并获得新鲜饱满的卵遥 将卵在 园援 员豫
晕葬悦造韵溶液中消毒 猿 皂蚤灶袁无菌水反复冲洗 猿 次袁制
备浓度约为 远园园 粒 辕 皂蕴的卵悬浮液袁备用遥 此外袁将
消毒过的卵悬浮液置于 园援 园缘豫 在灶悦造圆 溶液中于 圆缘益条件下孵化 允圆袁每天及时更换处理液袁收集新孵
化出的 允圆袁制备成 圆园园 条 辕 皂蕴 允圆 悬浮液遥
员援 圆援 远 菌株代谢物对大豆孢囊线虫的杀线活性院取
制备好的 园援 缘 皂蕴卵悬浮液加入无菌的 员圆 孔细胞培
养板孔中袁再加入发酵液 猿援 园 皂蕴袁以未加细菌发酵
液的无菌水作为对照袁重复 猿 次袁圆缘 益培养箱中孵
化 怨 凿 后袁观察计数孵化出的 允圆 数量遥 用移液枪在
无菌的 员圆 孔细胞培养板中加入不同稀释倍数的发
酵液 猿援 园 皂蕴袁然后将 园援 缘 皂蕴新孵化的 圆园园 条 辕 皂蕴大
豆孢囊线虫 允圆 悬浮液加入孔中袁每处理重复 猿 次袁
以无菌水为对照遥 将所有处理放入 圆缘 益培养箱中
培养袁圆源 澡后记录线虫死亡数袁计算校正死亡率遥 采
用 晕葬韵匀刺激法判断线虫死活咱员猿暂 遥
员援 猿 数据分析
用 杂孕杂杂 员猿援 园 统计软件进行数据分析袁采用
阅怎灶糟葬灶氏新复极差法进行差异显著性检验遥
圆 结果与分析
圆援 员 野生大豆内生细菌的数量特征
对野生大豆根尧茎和叶各部位内生细菌的数量
进行单菌落计数袁共得到 员愿园 株细菌遥 野生大豆根尧
茎尧叶等组织内存在大量内生细菌袁不同组织中内生
细菌的分布密度不同遥 根部分离到内生细菌数量共
员园远 株袁占分离菌株总数的 缘愿援 怨豫 袁密度为 圆援 怨 伊 员园猿
悦云哉 辕 早曰叶部次之袁共分离到 缘源 株袁占 猿园援 园豫 袁密度
为 圆援 圆 伊 员园猿 悦云哉 辕 早曰茎部最少袁共分离到 圆园 株袁占
员员援 员豫 袁密度为 猿援 远 伊 员园圆 悦云哉 辕 早遥
圆援 圆 内生细菌类群的多样性分析
结合细菌形态特征以及 员远杂 则阅晕粤 基因序列比
对袁员愿园 株细菌属于 苑 大类群 员远 属 圆缘 个种遥 苑 大类
群为变形菌门 琢 亚群渊琢鄄孕则燥贼藻燥遭葬糟贼藻则蚤葬冤尧变形菌门
茁亚群渊茁鄄孕则燥贼藻燥遭葬糟贼藻则蚤葬冤尧变形菌门 酌 亚群渊酌鄄孕则燥鄄
贼藻燥遭葬糟贼藻则蚤葬冤尧厚壁菌门渊云蚤则皂蚤糟怎贼藻泽冤尧放线菌门渊粤糟贼蚤鄄
灶燥遭葬糟贼藻则蚤葬冤尧酸杆菌门 渊 粤糟蚤凿燥遭葬糟贼藻则蚤葬冤和疣微菌门
渊灾藻则则怎糟燥皂蚤糟则燥遭蚤葬冤遥 其中袁变形菌门 琢 亚群有 愿愿
株袁是优势类群袁占分离细菌总株数的 源愿援 怨豫遥 该类
群 猿园 株细菌与鞘氨醇单胞菌属 杂责澡蚤灶早燥皂燥灶葬泽 关系
密切袁代表菌株 宰杂砸员愿 与鞘氨醇单胞菌 杂责澡蚤灶鄄
早燥皂燥灶葬泽 泽责援 渊粤允园园员园缘员援 员冤同源性较高遥 此外袁员园
株与中慢生根瘤菌属 酝藻泽燥则澡蚤扎燥遭蚤怎皂 关系密切袁其中
代表菌株 宰杂砸员怨 与百脉根中慢生根瘤菌 酝援 蕴燥贼蚤
渊粤月猿远苑苑园园援 员冤的相似性为 员园园豫 遥 圆愿 株分别与慢
生根瘤菌属 月则葬凿赠则澡蚤扎燥遭蚤怎皂的辽宁慢生根瘤菌 月援 造蚤鄄
葬燥灶蚤灶早藻灶泽藻 渊匀匝圆猿员源猿愿援 员冤尧土著大豆慢生根瘤菌 月援
躁葬责燥灶蚤糟怎皂 渊云允园圆缘园怨苑援 员冤和慢生根瘤菌 月则葬凿赠则澡蚤扎燥遭蚤鄄
怎皂 泽责援 渊粤月远怨远愿缘愿援 员冤相似性达 怨怨豫 耀 员园园豫 渊表
员冤遥 厚壁菌门有 猿源 株袁为第 圆 大优势类群袁占分离
细菌总株数的 员愿援 怨豫 遥 该类群 圆怨 株细菌与芽胞杆
菌属 月葬糟蚤造造怎泽关系密切袁分别与蜡质芽胞杆菌 月援 糟藻鄄
怨圆猿源 期 史凤玉等院野生大豆内生细菌多样性及其杀线虫活性分析
表 员 野生大豆内生细菌 员远杂 则阅晕粤 基因序列的 月蕴粤杂栽分析
栽葬遭造藻 员 栽澡藻 月蕴粤杂栽 燥枣 员远杂 则阅晕粤 泽藻择怎藻灶糟藻泽 枣则燥皂 藻灶凿燥责澡赠贼蚤糟 遭葬糟贼藻则蚤葬 泽贼则葬蚤灶泽 蚤泽燥造葬贼藻凿 枣则燥皂 憎蚤造凿 泽燥赠遭藻葬灶
类群摇 摇
郧则燥怎责摇 摇
代表
菌株
陨泽燥造葬贼藻
登录号
郧藻灶月葬灶噪
葬糟糟藻泽泽蚤燥灶 灶燥援
分类单元渊登录号冤摇
栽葬曾葬 渊郧藻灶月葬灶噪 葬糟糟藻泽泽蚤燥灶 灶燥援 冤摇
相似性
杂蚤皂蚤造葬则蚤贼赠
渊豫 冤
变形菌门 琢亚群 宰杂砸员愿 运悦源愿缘猿圆员 鞘氨醇单胞菌 杂责澡蚤灶早燥皂燥灶葬泽 泽责援 渊粤允园园员园缘员援 员冤 怨怨
粤造责澡葬责则燥贼藻燥遭葬糟贼藻则蚤葬 宰杂砸苑圆 运悦源愿缘猿圆缘 马图拉新鞘氨醇菌 晕燥增燥泽责澡蚤灶早燥遭蚤怎皂 皂葬贼澡怎则藻灶泽藻 渊云酝员远源远猿源援 员冤 怨愿
宰杂砸员怨 运悦源愿缘猿圆远 百脉根中慢生根瘤菌 酝藻泽燥则澡蚤扎燥遭蚤怎皂 造燥贼蚤 渊粤月猿远苑苑园园援 员冤 员园园
宰杂砸员苑 运悦源愿缘猿圆苑 辽宁慢生根瘤菌 月则葬凿赠则澡蚤扎燥遭蚤怎皂 造蚤葬燥灶蚤灶早藻灶泽藻 渊匀匝圆猿员源猿愿援 员冤 怨怨
宰杂砸源源 运悦源愿缘猿圆愿 土著大豆慢生根瘤菌 月则葬凿赠则澡蚤扎燥遭蚤怎皂 躁葬责燥灶蚤糟怎皂 渊云允园圆缘园怨苑援 员冤 怨怨
宰杂砸猿 运悦源愿缘猿圆怨 慢生根瘤菌 月则葬凿赠则澡蚤扎燥遭蚤怎皂 泽责援 渊粤月远怨远愿缘愿援 员冤 员园园
变形菌门 茁亚群 宰杂砸苑园 运悦源愿缘猿圆园 伯克霍尔德氏菌 月怎则噪澡燥造凿藻则蚤葬 泽责援 渊云砸愿苑圆源园源援 员冤 怨怨
月藻贼葬责则燥贼藻燥遭葬糟贼藻则蚤葬 宰杂砸猿怨 运悦源愿缘猿猿园 酝藻贼澡赠造蚤遭蚤怎皂 泽责援 渊郧匝猿远怨园源愿援 员冤 员园园
宰杂砸员远 运悦源愿缘猿猿员 砸葬皂造蚤遭葬糟贼藻则 泽责援 渊粤再源圆怨苑员远援 员冤 怨怨
变形菌门 酌亚群 宰杂砸源愿 运悦源愿缘猿猿圆 蕴怎贼藻蚤皂燥灶葬泽 葬藻泽贼怎葬则蚤蚤 渊晕砸赃园源源猿源猿援 员冤 怨苑
郧葬皂皂葬责则燥贼藻燥遭葬糟贼藻则蚤葬 宰杂砸愿园 运悦源愿缘猿圆圆 孕泽藻怎凿燥曾葬灶贼澡燥皂燥灶葬泽 蚤灶凿蚤糟葬 渊允匝远远园猿员远援 员冤 员园园
宰杂砸远圆 运悦源愿缘猿圆猿 假黄色单胞菌 孕泽藻怎凿燥曾葬灶贼澡燥皂燥灶葬泽 泽责援 渊云允园猿圆员怨缘援 员冤 员园园
酸杆菌门 宰杂砸远 运悦源愿缘猿员圆 酸杆菌 粤糟蚤凿燥遭葬糟贼藻则蚤葬 遭葬糟贼藻则蚤怎皂 渊粤再远苑猿猿园猿援 员冤 怨怨
粤糟蚤凿燥遭葬糟贼藻则蚤葬 宰杂砸员圆 运悦源愿缘猿猿猿 未培养酸杆菌 哉灶糟怎造贼怎则藻凿 粤糟蚤凿燥遭葬糟贼藻则蚤葬 遭葬糟贼藻则蚤怎皂 渊匀匝缘怨愿源怨员援 员冤 怨怨
放线菌门 宰杂砸缘苑 运悦源愿缘猿员怨 放线菌 杂贼则藻责贼燥皂赠糟藻泽 泽责援 渊允晕愿远远远源远援 员冤 怨怨
粤糟贼蚤灶燥遭葬糟贼藻则蚤凿葬藻 宰杂砸员员园 运悦源愿缘猿猿源 浅黄微杆菌 酝蚤糟则燥遭葬糟贼藻则蚤怎皂 枣造葬增藻泽糟藻灶泽 渊允云苑苑愿远怨怨援 员冤 怨怨
厚壁菌门 宰杂砸源圆 运悦源愿缘猿员愿 类短短芽胞杆菌 月则藻增蚤遭葬糟蚤造造怎泽 责葬则葬遭则藻增蚤泽 渊运悦员苑圆园圆怨援 员冤 员园园
云蚤则皂蚤糟怎贼藻泽 宰杂砸员园员 运悦源愿缘猿员苑 蜡质芽胞杆菌 月葬糟蚤造造怎泽 糟藻则藻怎泽 渊匀酝员园源远缘园援 员冤 怨怨
宰杂砸猿缘 运悦源愿缘猿猿缘 枝芽胞杆菌 灾蚤则早蚤遭葬糟蚤造造怎泽 泽责援 渊云砸愿圆猿源员远援 员冤 怨愿
宰杂砸苑怨 运悦源愿缘猿员远 阿氏芽胞杆菌 月葬糟蚤造造怎泽 葬则赠葬遭澡葬贼贼葬蚤 渊允载怨怨源员圆愿援 员冤 员园园
宰杂砸圆愿 运悦源愿缘猿员缘 泛酸枝芽胞杆菌 灾蚤则早蚤遭葬糟蚤造造怎泽 责葬灶贼燥贼澡藻灶贼蚤糟怎泽 渊允晕苑怨员猿怨圆援 员冤 怨愿
宰杂砸圆圆 运悦源愿缘猿员源 巨大芽胞杆菌 月葬糟蚤造造怎泽 皂藻早葬贼藻则蚤怎皂 渊粤月苑猿愿苑愿源援 员冤 怨怨
宰杂砸员源 运悦源愿缘猿员猿 绳索状芽胞杆菌 月葬糟蚤造造怎泽 枣怎灶蚤糟怎造怎泽 渊粤月圆苑员员猿远援 员冤 怨怨
宰杂砸怨猿 运悦源愿缘猿圆源 枯草芽胞杆菌 月葬糟蚤造造怎泽 泽怎遭贼蚤造蚤泽 渊允晕缘源园苑怨愿援 员冤 员园园
疣微菌门 灾藻则则怎糟燥皂蚤糟则燥遭蚤葬 宰杂砸员员源 运悦源愿缘猿猿远 月葬糟贼藻则蚤怎皂 藻造造蚤灶 缘员园圆 渊粤再圆猿源缘员怨援 员冤 怨圆
则藻怎泽 渊匀酝员园源远缘园援 员冤尧阿氏芽胞杆菌 月援 葬则赠葬遭澡葬贼贼葬蚤尧
巨大芽胞杆菌 月援 皂藻早葬贼藻则蚤怎皂尧绳索状芽胞杆菌 月援 枣怎鄄
灶蚤糟怎造怎泽和枯草芽胞杆菌 月援 泽怎遭贼蚤造蚤泽 相似性达 怨怨豫 耀
员园园豫 遥 圆 株细菌与类短短芽胞杆菌 月则藻增蚤遭葬糟蚤造造怎泽
责葬则葬遭则藻增蚤泽 渊运悦员苑圆园圆怨援 员冤的相似性为 员园园豫 遥 此外袁
猿 株细菌与枝芽胞菌属的枝芽胞菌 灾蚤则早蚤遭葬糟蚤造造怎泽 泽责援
渊云砸愿圆猿源员远援 员冤和泛酸枝芽胞杆菌 灾援 责葬灶贼燥贼澡藻灶贼蚤糟怎泽
渊允晕苑怨员猿怨圆援 员 冤的相似性为 怨愿豫 渊表 员冤遥
除了以上出现频率较高的优势细菌类群以外袁
还分离到了其它 缘 个类群的细菌袁每个类群内的菌
株数量虽然不多袁但是充分反映了野生大豆内生细
菌多样性和群落结构的特征遥
圆援 猿 不同部位内生细菌多样性比较
野生大豆叶中与茎中的内生细菌相似性最高袁
为 远苑豫 袁而茎与根中内生细菌区系相似性最低袁为
源园豫 遥 但是在根和叶部位分离到的大部分菌株均可
在茎中分离到遥 此外袁根和叶分离的优势细菌种类
是鞘氨醇单胞菌袁而茎的优势种类则是假黄色单胞
菌遥 根部位分离的细菌袁其物种丰富度指数和 杂澡葬灶鄄
灶燥灶鄄宰蚤藻灶藻则多样性指数均显著高于茎和叶袁而均匀
度指数略低于茎渊表 圆冤遥
圆援 源 内生细菌对大豆孢囊线虫的抑制作用
对分离到的 员愿园 个内生菌株进行杀线活性评
价袁发现有 圆 个菌株即 月葬糟蚤造造怎泽 泽怎遭贼蚤造蚤泽 宰杂砸怨猿 和 月援
皂藻早葬贼藻则蚤怎皂 宰杂砸圆圆 对大豆孢囊线虫有很好的杀线
虫活性 遥 菌株宰杂砸怨猿和宰杂砸圆圆 的代谢物原液处理
怨 凿后对卵孵化相对抑制率分别为 怨苑援 怨豫和 怨愿援 圆豫袁
其 员缘 倍稀释液处理 怨 凿后分别为 缘怨援 猿豫和 远员援 员豫 袁
与对照差异极显著遥 而菌株宰杂砸怨猿 和宰杂砸圆圆 原液
处理 圆源 澡 后对 允圆 的校正死亡率分别为 愿愿援 怨豫和
怨园援 怨豫 袁其 员缘 倍稀释液处理 圆源 澡 后校正死亡率分
别为 源苑援 猿豫和 缘猿援 苑豫 袁与对照差异极显著渊表 猿冤遥
表明野生大豆内生细菌 月援 泽怎遭贼蚤造蚤泽 宰杂砸怨猿 和 月援
皂藻早葬贼藻则蚤怎皂 宰杂砸圆圆的胞外分泌物对大豆孢囊线虫
园猿猿 植摇 物摇 保摇 护摇 学摇 报 源园 卷
表 圆 野生大豆不同部位内生细菌的多样性指数比较
栽葬遭造藻 圆 悦燥皂责葬则蚤泽燥灶 燥枣 贼澡藻 凿蚤增藻则泽蚤贼蚤藻泽 枣燥则 遭葬糟贼藻则蚤葬造 蚤泽燥造葬贼藻泽 枣则燥皂 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 贼蚤泽泽怎藻泽 燥枣 憎蚤造凿 泽燥赠遭藻葬灶
组织部位
栽蚤泽泽怎藻 泽藻糟贼蚤燥灶
菌株数
晕燥援 燥枣 蚤泽燥造葬贼藻泽
操作分类单元
韵栽哉
杂澡葬灶灶燥灶鄄宰蚤藻灶藻则
多样性指数 匀忆
物种丰富度指数
酝葬
均匀度指数
允
根 砸燥燥贼 员园远 圆缘 圆援 怨员 依 园援 园愿 葬 缘援 员缘 依 园援 圆苑 葬 园援 怨园 依 园援 园圆 葬
茎 杂贼藻皂 圆园 员园 圆援 员员 依 园援 园缘 遭 猿援 园员 依 园援 园猿 糟 园援 怨圆 依 园援 园猿 葬
叶 蕴藻葬枣 缘源 员缘 圆援 员愿 依 园援 园圆 遭 猿援 缘员 依 园援 员愿 遭 园援 愿员 依 园援 园圆 遭
摇 摇 表中数据为平均数 依标准差遥 同列数据后不同字母表示经 阅怎灶糟葬灶氏新复极差法检验差异显著渊孕 约 园援 园缘冤遥 栽澡藻 凿葬贼葬 蚤灶 贼澡藻 贼葬遭造藻
葬则藻 皂藻葬灶 依 杂阅援 阅蚤枣枣藻则藻灶贼 造藻贼贼藻则泽 蚤灶 贼澡藻 泽葬皂藻 糟燥造怎皂灶 蚤灶凿蚤糟葬贼藻 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼 凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻 葬贼 孕 约园援 园缘 造藻增藻造 遭赠 阅怎灶糟葬灶爷泽 灶藻憎 皂怎造贼蚤责造藻 则葬灶早藻 贼藻泽贼援
表 猿 宰杂砸怨猿 和宰杂砸圆圆 对大豆孢囊线虫卵孵化和 圆 龄幼虫活性的影响
栽葬遭造藻 猿 栽澡藻 藻枣枣藻糟贼 燥枣 宰杂砸怨猿 葬灶凿 宰杂砸圆圆 燥灶 贼澡藻 澡葬贼糟澡蚤灶早 燥枣 藻早早泽 葬灶凿 贼澡藻 皂燥遭蚤造蚤贼赠 燥枣 泽藻糟燥灶凿 泽贼葬早藻 躁怎增藻灶蚤造藻泽
菌株
陨泽燥造葬贼藻
稀释倍数
阅蚤造怎贼蚤燥灶
孵化出线虫数
晕燥援 燥枣 澡葬贼糟澡藻凿
灶藻皂葬贼燥凿藻泽
相对抑制率渊豫 冤
杂怎责责则藻泽泽蚤燥灶
则葬贼蚤燥
圆龄幼虫
死亡率渊豫 冤
允圆 皂燥则贼葬造蚤贼赠
圆龄幼虫校正死亡率渊豫 冤
允圆 糟燥则则藻糟贼藻凿
皂燥则贼葬造蚤贼赠
宰杂砸怨猿 园 缘援 源 依 园援 圆 枣 怨苑援 怨 依 员援 远 愿怨援 源 依 员援 缘 葬 愿愿援 怨 依 圆援 员
缘 缘猿援 圆 依 员援 缘 藻 苑怨援 远 依 圆援 圆 苑缘援 圆 依 园援 怨 遭 苑源援 员 依 园援 远
员园 苑愿援 缘 依 苑援 愿 凿 远怨援 怨 依 员援 猿 远员援 愿 依 猿援 猿 糟 远园援 员 依 圆援 苑
员缘 员园远援 猿 依 源援 苑 糟 缘怨援 猿 依 圆援 怨 源怨援 缘 依 园援 缘 凿 源苑援 猿 依 员援 缘
圆园 员远苑援 源 依 愿援 圆 遭 猿缘援 怨 依 员援 苑 员苑援 远 依 圆援 远 藻 员猿援 怨 依 猿援 远
宰杂砸圆圆 园 源援 苑 依 园援 缘 枣 怨愿援 圆 依 园援 苑 怨员援 猿 依 圆援 苑 葬 怨园援 怨 依 猿援 园
缘 猿愿援 缘 依 员援 圆 藻 愿缘援 圆 依 员援 远 愿圆援 缘 依 缘援 圆 遭 愿员援 苑 依 员援 缘
员园 缘园援 园 依 员援 圆 凿 愿园援 愿 依 园援 缘 苑园援 员 依 猿援 缘 糟 远愿援 愿 依 圆援 猿
员缘 员园员援 源 依 圆援 猿 糟 远员援 员 依 猿援 圆 缘缘援 远 依 圆援 员 凿 缘猿援 苑 依 员援 源
圆园 员猿愿援 圆 依 远援 圆 遭 源苑援 园 依 员援 愿 圆猿援 苑 依 员援 源 藻 圆园援 源 依 圆援 苑
对照 悦运 圆远员援 园 依 缘援 苑 葬 源援 圆 依 园援 猿 枣
摇 摇 表中数据为平均数 依标准差遥 同列数据后不同字母表示同一菌株不同处理经 阅怎灶糟葬灶 氏新复极差法检验差异显著渊孕 约 园援 园缘冤遥
晕燥贼藻院 栽澡藻 凿葬贼葬 蚤灶 贼澡藻 贼葬遭造藻 葬则藻 皂藻葬灶 依 杂阅援 阅蚤枣枣藻则藻灶贼 造藻贼贼藻则泽 蚤灶 贼澡藻 泽葬皂藻 糟燥造怎皂灶 蚤灶凿蚤糟葬贼藻 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼 凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻 葬皂燥灶早 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 贼则藻葬贼皂藻灶贼泽 燥枣 贼澡藻
泽葬皂藻 泽贼则葬蚤灶 葬贼 孕 约 园援 园缘 造藻增藻造 遭赠 阅怎灶糟葬灶爷泽 灶藻憎 皂怎造贼蚤责造藻 则葬灶早藻 贼藻泽贼援
卵的孵化有较强抑制作用袁对 允圆 有较强的毒杀
活性遥
猿 讨论
植物体内存在着丰富的内生菌袁这些内生菌在
与宿主植物长期协同进化过程中彼此形成了稳定的
生态关系袁对增强宿主植物的环境适应能力起着不
可忽视的作用咱员源暂 遥 分离并利用内生菌防治作物病
害和开发有益内生菌是一个方兴未艾的领域咱员缘 原 员远暂 遥
本试验发现野生大豆组织内存在丰富的内生细菌袁
不同器官内生细菌种类变化较大袁根内生细菌种类
较为丰富袁叶次之袁茎最少遥 这与 郧葬早灶佴 等咱员苑暂提出
的根际土壤是内生细菌的主要来源袁植物根部内生
细菌含量较高的结论相一致遥
假单胞菌尧芽胞杆菌尧肠杆菌以及土壤杆菌通常
是植物内生细菌中可培养细菌的优势种群袁其中芽
胞杆菌属细菌是多种植物体内的重要组成部分咱员愿暂 遥
从哈密瓜咱员怨暂 尧棉花咱圆园暂 尧玉米咱圆员暂 尧甘草咱圆圆暂中分离的内
生细菌也均以芽胞杆菌属为优势种群遥 本试验野生
大豆中内生细菌除以鞘脂单胞属细菌为主外袁厚壁
菌门类群中绝大多数细菌也与芽胞杆菌属关系密
切遥 有研究指出袁芽胞杆菌属一些细菌种类对大豆
孢囊线虫有较强的毒性作用袁具有生防潜力咱圆猿 原 圆源暂 遥
本试验所分离的菌株 宰杂砸怨猿 和 宰杂砸圆圆袁与枯草芽
胞杆菌和巨大芽胞杆菌相似度分别为 员园园豫 和
怨怨豫 袁其胞外分泌物具有较强的杀线虫活性袁能够抑
制大豆孢囊线虫卵孵化及毒杀 允圆袁说明野生大豆组
织内存在具有潜在利用价值的芽胞杆菌生防资源遥
今后应广泛地采集野生大豆样品袁从中分离和筛选
更多拮抗性强的芽胞杆菌类细菌袁并进行抑线物质
分离鉴定和作用机制的研究遥
植物内生菌的分布及群落结构不仅与植物的种
类基因型有关袁还与植物的生长环境条件有关咱圆缘暂 遥
本试验选取的材料受沿海滩涂地区特有环境的影
员猿猿源 期 史凤玉等院野生大豆内生细菌多样性及其杀线虫活性分析
响袁野生大豆体内的一些细菌资源也具有相应的区
域特性袁分离到的一些内生细菌菌株具有海洋和嗜
盐微生物的特点遥 如菌株宰杂砸猿缘 和宰杂砸圆愿 与枝芽
胞菌和泛酸枝芽胞杆菌的相似性为 怨愿豫 遥 一般认
为袁枝芽胞菌属细菌属于嗜盐微生物袁具有一些特异
性酶类或由 晕葬悦造 触发激活的激酶等咱圆远暂 遥 生长于沿
海滩涂地区的野生大豆内生细菌有着独特的生存环
境袁它们受宿主植物尧土壤以及海洋环境的共同影
响袁在长期的协同进化过程中袁这些内生细菌对沿海
滩涂野生大豆的盐环境的适应是否有帮助作用袁还
有待于进一步研究遥
本试验揭示了野生大豆不同组织部位的细菌群
落组成袁并发现 宰杂砸怨猿 和 宰杂砸圆圆 菌株对大豆孢囊
线虫具有较强的毒杀活性遥 栽澡燥造燥扎葬灶 等咱圆苑暂认为袁通
过传统分离方法鉴定的微生物只占环境微生物总数
的 园援 员豫 耀 员园豫 袁不能充分展示微生物的多样性状
况遥 因此有必要采用不依赖纯培养的分子生物学方
法研究未培养或不能培养的微生物袁从而更全面地
认识野生大豆内生细菌多样性及其物种组成遥
参 考 文 献渊砸藻枣藻则藻灶糟藻泽冤
咱员暂 张颖袁王刚袁郭建伟袁等援 利用小麦内生细菌防治小麦全蚀病
的初步研究援植物病理学报袁圆园园苑袁猿苑渊员冤院员园缘 原 员园愿
咱圆暂 杂贼怎则扎 粤 灾袁 悦澡则蚤泽贼蚤藻 月 砸袁 酝葬贼澡藻泽燥灶 月 郧袁 藻贼 葬造援 耘灶凿燥责澡赠贼蚤糟
遭葬糟贼藻则蚤葬造 糟燥皂皂怎灶蚤贼蚤藻泽 蚤灶 贼澡藻 责藻则蚤凿藻则皂 燥枣 责燥贼葬贼燥 贼怎遭藻则泽 葬灶凿 贼澡藻蚤则
责燥贼藻灶贼蚤葬造 贼燥 蚤皂责则燥增藻 则藻泽蚤泽贼葬灶糟藻 贼燥 泽燥蚤造鄄遭燥则灶藻 责造葬灶贼 责葬贼澡燥早藻灶泽援
孕造葬灶贼 孕葬贼澡燥造燥早赠袁 员怨怨怨袁 源愿 渊猿冤院 猿远园 原 猿远怨
咱猿暂 庄炳昌援 中国野生大豆生物学研究援 北京院科学出版
社袁员怨怨怨
咱源暂 庄炳昌援 中国野生大豆研究二十年援 吉林农业科学袁员怨怨怨袁
圆源渊缘冤院猿 原 员园
咱缘暂 陈立杰袁王媛媛袁朱晓峰袁等援 大豆孢囊线虫病生物防治研究
进展援 沈阳农业大学学报袁圆园员员袁源圆渊源冤院猿怨猿 原 猿怨愿
咱远暂 时涛袁彭建华袁刘先宝袁等援 橡胶树内生细菌多样性初探及拮
抗菌株的筛选援 中国森林病虫袁圆园员员袁猿园渊圆冤院缘 原 怨
咱苑暂 朱英波袁史凤玉袁李建英袁等援 野生大豆内生芽孢杆菌
月匀蕴猿缘园员 的鉴定及对大豆孢囊线虫的抑制作用援 安徽农业
科学袁圆园员员袁猿怨渊猿源冤院圆员园苑苑 原 圆员园苑愿袁圆员园愿员
咱愿暂 悦怎蚤 载袁 酝葬燥 孕袁 在藻灶早 酝袁 藻贼 葬造援 杂贼则藻责贼蚤皂燥灶燥泽责燥则葬 泽葬造蚤灶葬 早藻灶援
灶燥增援 袁 泽责援 灶燥增援 袁 葬 灶藻憎 皂藻皂遭藻则 燥枣 贼澡藻 枣葬皂蚤造赠 晕燥糟葬则凿蚤燥责泽葬糟藻葬藻援
陨灶贼藻则灶葬贼蚤燥灶葬造 允燥怎则灶葬造 燥枣 杂赠泽贼藻皂葬贼蚤糟 葬灶凿 耘增燥造怎贼蚤燥灶葬则赠 酝蚤糟则燥遭蚤燥造燥鄄
早赠袁 圆园园员袁 缘员院 猿缘苑 原 猿远猿
咱怨暂 杂贼葬糟噪藻遭则葬灶凿贼 耘袁 蕴怎凿憎蚤早 宰袁 云燥曾 郧 耘援 员远杂 则蚤遭燥泽燥皂葬造 砸晕粤 燥造蚤鄄
早燥灶怎糟造藻燥贼蚤凿藻 糟葬贼葬造燥早蚤灶早援 辕辕 郧燥贼贼泽糟澡葬造噪 郧 渊 藻凿援 冤援 酝藻贼澡燥凿泽 蚤灶
酝蚤糟则燥遭蚤燥造燥早赠袁 员怨愿缘袁 员愿院 苑缘 原 员园愿
咱员园暂 杂怎扎怎噪蚤 酝 栽袁 砸葬责责藻 酝 杂袁 匀葬蚤皂遭藻则早藻则 在 宰袁 藻贼 葬造援 月葬糟贼藻则蚤葬造
凿蚤增藻则泽蚤贼赠 葬皂燥灶早 泽皂葬造造鄄泽怎遭怎灶蚤贼 则砸晕粤 早藻灶藻 糟造燥灶藻泽 葬灶凿 糟藻造造怎造葬则
蚤泽燥造葬贼藻泽 枣则燥皂 贼澡藻 泽葬皂藻 泽藻葬憎葬贼藻则 泽葬皂责造藻援 粤责责造蚤藻凿 葬灶凿 耘灶增蚤则燥灶鄄
皂藻灶贼葬造 酝蚤糟则燥遭蚤燥造燥早赠袁 员怨怨苑袁 远猿院 怨愿猿 原 怨愿怨
咱员员暂 陈梦援 对生态系统及生物多样性等理论问题的探讨援 南京
林业大学学报渊自然科学版冤袁 圆园园猿袁圆苑渊缘冤院猿园 原 猿源
咱员圆暂 游玲袁魏琴袁郭华袁等援 山苍子渊蕴蚤贼泽藻葬 糟怎遭藻遭葬冤可培养内生细
菌的多样性援 西北农林科技大学学报 渊自然科学版冤袁
圆园员圆袁源园渊源冤院员 原 苑
咱员猿暂 悦澡藻灶 杂 再袁 阅蚤糟噪泽燥灶 阅 宰援 粤 贼藻糟澡灶蚤择怎藻 枣燥则 凿藻贼藻则皂蚤灶蚤灶早 造蚤增藻
泽藻糟燥灶凿鄄泽贼葬早藻 躁怎增藻灶蚤造藻泽 燥枣 匀藻贼藻则燥凿藻则葬 早造赠糟蚤灶藻泽援 允燥怎则灶葬造 燥枣 晕藻皂葬鄄
贼燥造燥早赠袁 圆园园园袁 猿圆渊员冤院员员苑 原 员圆员
咱员源暂 石晶盈袁陈维信袁刘爱媛援 植物内生菌及其防治植物病害的
研究进展援 生态学报袁圆园园远袁 圆远渊苑冤院 圆猿怨缘 原 圆源园员
咱员缘暂 宋光桃袁 周国英袁 刘君昂袁 等援 油茶根腐病拮抗内生细菌
的筛选及鉴定援 植物保护学报袁 圆园员园袁 猿苑渊圆冤院员猿苑 原 员源圆
咱员远暂 余超袁肖荣凤袁刘波袁等援 生防菌 云允粤栽鄄猿源远鄄孕粤 的内生定殖
特性及对香蕉枯萎病的防治效果援 植物保护学报袁 圆园员园袁
猿苑渊远冤院源怨猿 原 源怨愿
咱员苑暂 郧葬早灶佴 杂袁 砸蚤糟澡葬则凿 悦袁 砸燥怎泽泽藻葬怎 匀袁 藻贼 葬造援 载赠造藻皂鄄则藻泽蚤凿蚤灶早 遭葬糟鄄
贼藻则蚤葬 蚤灶 葬造枣葬造枣葬 则燥燥贼泽援 悦葬灶葬凿蚤葬灶 允燥怎则灶葬造 燥枣 酝蚤糟则燥遭蚤燥造燥早赠袁 员怨愿苑袁
猿猿 渊员员冤院 怨怨远 原 员园园园
咱员愿暂 胡萌援 植物内生细菌研究进展援 山东农业大学学报渊自然
科学版冤袁圆园园愿袁猿怨渊员冤院 员源愿 原 员缘员
咱员怨暂 罗明袁 卢云袁 陈金焕袁 等援 哈密瓜内生细菌菌群密度及分
布动态援 干旱区研究袁 圆园园苑袁 圆源渊员冤院 圆愿 原 猿猿
咱圆园暂 孔庆军袁任雪艳袁 陆江红袁等援 新疆棉花芽孢杆菌的筛选及
纯化援 安徽农业科学袁 圆园园愿袁猿远渊猿缘冤院 员缘源苑园 原 员缘源苑员袁员缘源怨远
咱圆员暂 高增贵袁 庄敬华袁 陈捷袁 等援 玉米根系内生细菌种群及动
态分析援 应用生态学报袁 圆园园源袁 员缘渊愿冤院 员猿源源 原 员猿源愿
咱圆圆暂 饶小莉袁 沈德龙袁 李俊袁 等援 甘草内生细菌的分离及拮抗
菌株鉴定援 微生物学通报袁 圆园园苑袁 猿源渊源冤院 苑园园 原 苑园源
咱圆猿暂 杂澡葬则皂葬 砸 阅援 耘枣枣蚤糟蚤藻灶糟赠 燥枣 月葬糟蚤造造怎泽 泽责责援 贼燥曾蚤灶泽 贼燥 糟燥灶贼则燥造 匀藻贼鄄
藻则燥凿藻则葬 早造赠糟蚤灶藻泽 燥灶 泽燥赠遭藻葬灶援 晕藻皂葬贼燥造燥早蚤葬 月则葬泽蚤造藻蚤则葬袁 员怨怨缘袁
员怨院 苑圆 原 愿园
咱圆源暂 杂澡葬则皂葬 砸 阅袁 郧燥皂藻泽 粤 悦援 耘枣枣藻糟贼泽 燥枣 月葬糟蚤造造怎泽 泽责责援 贼燥曾蚤灶泽 燥灶
燥增蚤责燥泽蚤贼蚤燥灶 葬灶凿 躁怎增藻灶蚤造藻 澡葬贼糟澡蚤灶早 燥枣 匀藻贼藻则燥凿藻则葬 早造赠糟蚤灶藻泽援 晕藻皂葬鄄
贼燥造燥早蚤葬 月则葬泽蚤造藻蚤则葬袁 员怨怨远袁 圆园院 缘猿 原 远圆
咱圆缘暂 蓝江林袁朱育菁袁苏明星袁等援 水葫芦内生细菌的分离与鉴
定援 农业环境科学学报袁圆园园愿袁 圆苑渊远冤院圆源圆猿 原 圆源圆怨
咱圆远暂 杂蚤灶泽怎憎葬灶 杂袁 砸燥凿贼燥灶早 杂袁 再燥灶早泽葬憎葬贼凿蚤早怎造 允援 孕怎则蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 葬灶凿
糟澡葬则葬糟贼藻则蚤扎葬贼蚤燥灶 燥枣 葬 泽葬造贼鄄葬糟贼蚤增葬贼藻凿 葬灶凿 燥则早葬灶蚤糟 泽燥造增藻灶贼鄄泽贼葬遭造藻
澡藻贼藻则燥贼则蚤皂藻则 责则燥贼藻蚤灶葬泽藻 枣则燥皂 灾蚤则早蚤遭葬糟蚤造造怎泽 泽责援 杂运猿猿 蚤泽燥造葬贼藻凿
枣则燥皂 栽澡葬蚤 枣蚤泽澡 泽葬怎糟藻援 允燥怎则灶葬造 燥枣 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 葬灶凿 云燥燥凿 悦澡藻皂蚤泽鄄
贼则赠袁 圆园员园袁 缘愿渊员冤院 圆源愿 原 圆缘远
咱圆苑暂 栽澡燥造燥扎葬灶 允 蕴袁 悦葬责责藻造蚤藻则 允 酝袁 栽蚤泽泽蚤藻则 允 孕袁 藻贼 葬造援 孕澡赠泽蚤燥造燥早蚤糟葬造
糟澡葬则葬糟贼藻则蚤扎葬贼蚤燥灶 燥枣 增蚤葬遭造藻鄄遭怎贼鄄灶燥灶糟怎造贼怎则葬遭造藻 悦葬皂责赠造燥遭葬糟贼藻则 躁藻躁怎鄄
灶蚤 糟藻造造泽援 粤责责造蚤藻凿 葬灶凿 耘灶增蚤则燥灶皂藻灶贼葬造 酝蚤糟则燥遭蚤燥造燥早赠袁 员怨怨怨袁 远缘院
员员员园 原 员员员远
渊责任编辑院高峰冤
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