全 文 :收稿日期:!""#&" 接受日期:!""’"(%)
基金项目:国家自然科学基金()"#"%"#&,!"###"&*,!"("#""+);教育部新世纪优秀人才支持计划项目(,-./"∗")+%);江苏省青年科技创新人
才基金(01!""*(%’,01!""#(’");教育部重点实验室开放课题(.2.3"#"&)资助。
作者简介:程兆霞(%+#+—),女,河北张家口人,硕士研究生,研究方向为污染土壤修复。/45:"!(’)&+*!"’,.67895::9;9!""*!""*<%*&= >?7 !通讯作者 /45:"!(’)&+(!&’,.67895:@8?:8A;B4A@
丛枝菌根对芘污染土壤修复及植物吸收的影响
程兆霞%,凌婉婷%,!,高彦征%!,王经洁%
(%南京农业大学资源与环境科学学院,南京 !%""+(;
! 污染环境修复与生态健康教育部重点实验室,浙江大学环境与资源学院,杭州 &%""!+)
摘要:采用温室盆栽试验方法,研究了两种丛枝菌根真菌 !"##&&’(’ 和 !"# 对三叶草( -.+/#"+%&%0)’..(*’% F=)和辣椒(1(2&+,%(∗∗ F=)修复芘污染土壤的影响。供试土样中芘初始浓度为 "!#(G%’ 7@ H I@。
结果表明,接种 JKL可促进供试植物对土壤中芘的吸收,并且显著提高三叶草根的芘含量、根系富集系数、根和茎
叶的芘积累量,但对辣椒根和茎叶芘含量、根系富集系数的影响不显著,这主要与植物的菌根侵染率和“菌根依赖
度”不同有关。接种 JKL土壤中芘的削减率高于普通植物修复,但植物吸收积累对修复的贡献率小于 "G!M;因此
推测,JK作用下良好的根际环境有利于土壤微生物数量和活性的提高,进而对土壤中芘降解的促进可能是菌根
修复的主要机理。
关键词:丛枝菌根;多环芳烃;植物吸收;土壤;菌根修复
中国分类号:N%()G& 文献标识码:J 文章编号:%""’("(O(!""′)"∗%%#’"’ !"#%&’ () ∗+,′* ".%(**/012 (3 #-3& ,#&4235
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7:>?\\B9;85 \474E98U9?A
植物营养与肥料学报 !""’,%)(*):%%#’)等有机污染物大多具有“三致”效应,
易在土壤中持留,严重威胁着农产品的安全和人类
健康。据知,在我国污灌土壤中以苯并[%]芘为代表
的 !"#含量可高达 &’’’!())) *+ , -+[.]。如何修 复 !"#等有机污染土壤已成为国内外环境科学领
域研究的一个热点[./’]。
近年来,植物修复有机污染土壤很受重视,已取
得一些共识性研究结果[’/0]。与无植物对照相比,植
物修复效率高,主要是植物促进了土壤微生物等对
污染物的降解作用;根际土体的比例以及根际微生
物的数量和活性将决定植物修复的效率[1/..]。近些
年来,研究者为解决植物修复中存在的一些问题,将
菌根应用到修复之中。菌根修复技术能针对性地克
服植物修复土壤有机污染的不足,它综合利用土壤
中的微生物、植物和菌根真菌及其相互作用的根际
和菌(丝)际环境,来有效降解土壤中的有机污染
物[0]。一方面,菌根通过外延菌丝大大提高了与土
体的接触。据报道,外延菌丝与土体的接触面积可
超过 2)) 3&[(],松树幼苗接种菌根真菌后,菌丝的长
度甚至超过根长的 4)))倍。另一方面,菌根和菌丝
周围特殊的土体条件为微生物生长和繁殖提供了良
好环境。据知,树木每克外生菌根(鲜重)能分别支
持 .)1 和 .)& 的好氧细菌和酵母,菌根根际微生物
的数量要比周围土体高 .)))倍[0]。菌根条件下,扩
大的与土体的接触面积和数量众多的微生物,为菌
根修复土壤有机污染提供了良好基础。作为土壤修
复中一个新的生长点,菌根修复有望成为面源有机
污染土壤治理的一种最有前途的修复途径。近几年
来,该研究领域开始受到关注,但从国内外已有的资
料来看,菌根修复的研究多集中于外生菌根及重金
属类污染物[.&]。
相对于外生菌根,利用丛枝菌根("5)来修复土
壤有机污染的研究还很少。丛枝菌根真菌("56)能
与绝大多数植物共生,在自然界中分布广泛[.2];它
的根外菌丝能向土壤中广泛伸缩,形成根外菌丝网,
有利于吸收土壤中的矿质养分,并在根际生态系统
中起着多种作用。许多研究表明,"5 在促进植物
吸收水分、磷和其他营养元素,改善土壤质地,提高
土壤结构性等方面作用显著[.2/.0]。应用 "5修复重
金属污染土壤的研究已有报道[.&,.1];但能否利用
"5来修复土壤 !"#等有机物污染,仍需要大量试 验证实。 本文以芘为 !"# 代表物,采用温室盆栽试验
方法,研究丛枝菌根对植物吸收及修复 !"#污染 土壤的影响,试图为经济高效的 "5修复技术的确 立、保障农产品安全等提供基础依据。 ! 材料与方法 !"! 试验材料 芘购自北京化学试剂公司,纯度 7 849;二氯 甲烷、正己烷、丙酮、无水硫酸钠、层析用硅胶(&)) !2)) 目)均为分析纯;甲醇为色谱纯。主要仪器: :;/2))<=医用数控超声波清洗器、旋转浓缩蒸发 仪、台式高速冷冻离心机、超低温冰箱、高效液相色 谱仪等。 供试植物:三叶草( !"#%&#’( )’*+,""-.,’( >?)、
辣椒(/-0)#1’( -..’’( >?)。
供试丛枝菌根真菌:摩西球囊霉菌 2&%(’)
(%)),-,("56.)、幼套球囊霉菌 2&%(’) ,+’.#1-+’(
("56&),购自北京市农林科学院植物营养与资源研
究所“中国丛枝菌根真菌种质资源库(@AB)”。
供试土样:采自南京市江宁,为旱作水稻土表
层,其 C#值为 1D)&,有机质含量 &’D. + , -+,砂粒、粉
粒和粘粒含量分别为 .2D’9、1.D89和 &’D(9。土
样采集后风干,过 & 33筛,备用。
试验用沙为河砂,水洗后过 & 33筛,晾干后备
用。
!"# 试验方法
配制不同浓度芘的丙酮溶液,均匀加入一系列
上述土样中。待丙酮完全挥发后,用未污染土壤稀
释,多次搅拌,充分混匀,制得芘含量不同的污染土
样。将该土样与河砂按 2 E.充分混匀,待装盆备用。
测得最后各土样中芘的含量分别为 1D)&、&)D8.、
28D2.、0&D1’、(0D.4 3+ , -+,分别标号为 F.、F&、F2、F’、
F0,未加芘的土样设为对照,标号为 F)。
称取最后制备的土样 &0) + 于盆钵中,然后称
取菌剂 &) +均匀覆于上面,最后再覆 .)) +制备好
的土样,加水至 0)9最大持水量,静置过夜。供试
植物催芽后播于盆钵中,出苗一周左右进行间苗,留
苗 1株 ,盆,同时做不加菌对照,各处理 2 个重复。
定期浇水,土壤水分维持在最大持水量的 0)9。1)
天后采样,植物根和茎叶采集后,用蒸馏水充分淋
洗,再用滤纸吸干植物表面的水分后,放入 / &)G低
温冰箱中保存;植物采集后,将土样充分混匀,过
)D4033筛后装入密封袋,放入 / &)G低温冰箱保
存,待分析。
8(..1期 程兆霞,等:丛枝菌根对芘污染土壤修复及植物吸收的影响
!"# 样品提取及分析方法
!)侵染率测定采用曲利苯蓝染色法[!"]。
#)土壤样品中芘的提取:取 # 土壤于 #" %& 玻璃离心管中,加入 #无水硫酸钠,充分混匀;加
入 !’ %& 二氯甲烷溶液,盖紧后,超声萃取 ! ( ;
#’’’ ) * %+,下离心 !’ %+,,取 - %&上清液过 # 硅胶柱,用!!硅胶柱,用 !! %& !.!的二氯
甲烷和正己烷溶液洗脱,洗脱液收集后 /’0下浓缩
至干,用甲醇定容至 # %&,过 ’1##!%孔径滤膜后进
行 23&4分析。
/)根系富集系数(5667 86,89,7):7+6, ;:876)<,
54=<):是植物根中污染物含量(4植物)与土壤中污
染物浓度(4土壤)的比值,计算公式为:
54= > 4植物 * 4土壤
数据处理:采用 ?@89A、B3BB统计软件对试验结
果进行统计分析。
结果与分析"! %&’侵染率
在芘污染土壤中,CD=对三叶草的侵染状况良
好。除个别处理外,随土壤施芘量的增加,接种处理
的菌根侵染率并未显著降低(图 !)。E’ F 后,在无
芘污染的对照土样(B’)中,CD=!和 CD=#对三叶草
根的侵染率分别为(E#1G# H ’1!/)I和("J1J’ H
’1!#)I。污染土样(B!!B")中,两种 CD=对三叶
草的侵染率分别为 /"1#!I!E!1GKI和 "#1#’I!
"E1/!I。
与三叶草相比,CD=!和 CD=#对辣椒的侵染率
略低(图 !)。在 B/和 B"土样中,CD=!对辣椒的侵
染率分别为 /G1!#I和 #/1G’I,CD=# 的侵染率则
分别为 /#1G#I和 -/1J’I。这可能是由于三叶草
的根系比辣椒发达,且两种 CD=均与三叶草的亲合
能力强。丛枝菌根真菌和宿主植物之间存在双向选
择关系,在相同的条件下不同宿主植物对同一 CD=
的依赖性存在差异。
图 ! () * 后两种植物在不同处理下的菌根侵染率
’+,-! &./0112+345 +678/9+06 1498 07 !"#"植物生物量 当土壤中芘浓度较低时(如 B!、B#),供试植物 根和茎叶的生物量与对照植物(生长于 B’)相比没 有显著差异;但当污染强度较高时(如 B-!B"),根 和茎叶的生物量则显著低于对照(! L ’1’"),且随 着污染强度的提高,生物量趋于减小(图 #)。接种 CD=的植物长势好于未接种的植物,但除生物量有 所差异外,生长于污染土壤的植物长势良好,并未观 察到其他表观毒害或胁迫效应。 ’G!! 植 物 营 养 与 肥 料 学 报 !/卷 图 ! "#后不同处理的两种植物的生物量
%&’(! )**+, -.,/**+, 0&*1-,, *2 !"#%&#’( )’*+,""-.,’( 3( -./-0)#1’( -..’’( 3( -2+45 "#-6,
!78 9:对植物吸收芘的影响
!"#"植物的芘含量总体来看,随着土壤中芘浓度的提高,植物根系的芘含量均趋于增大。由表
可知,接种 %&’使三叶草根系的芘含量明显提高,
高污染土样更为明显。(!()土样中,未接种的根系芘含量由 *"0! ,- . /-增至
10"2,−./−,接种后,三叶草根系的芘含量分别比
对照提高 )"!$4和 $*#"+34;接种 %&’!则分别 比对照提高 $##"#$4和+"+24。
接种 %&’对辣椒的影响不显著(表 !),在 (+和
()两种高芘浓度土样中,接种 %&’的辣椒根系的芘含量分别为"!2 ,- . /-和 +"21 ,- . /-,接种 %&’!
的辣椒根系的芘含量则为 !"!# ,- . /- 和 0"#!
,- . /-。接种 %&’后,土样 ()中辣椒根系的芘含量
略有提高,但并没有表现出显著的差异。
表 ; 三叶草根和茎叶的芘含量(1’ < =’)
>-0?4 ; @*.A4.+5-+&*., *2 B654.4 &. 5**+ -.,/**+ *2 !"#%&#’( )’*+,""-.,’( 3( -2+45 "# −6,处理56789,7:9;土壤(<=>;( (! (# (+ ()
根 ?<<9;
@A *")!(*") *"+!(*"!*) *"+#(*"!+) $!"+#(!"0*) +!"#0(3")2) %&’$ *"2$(*")*) *"0+(*"+)) *"0!(*"#3) !0"3)(+"#0) 10"$2(!"*!) %&’! $")$($"!0) *"31(*"*+) $"!+(*"3#) !2"**("*1) 2*"10(!2"00)
茎叶 (B<<9;
@A *"*2(*"*2) *"*0(*"*)) — "0(*"21) *"3!(*"#2)
%&’∗"∗3(∗"∗0)∗"(∗"∗1)∗"∗1(∗"∗!)"#)(")) "#(*"+*)
%&’! — *"$$(*"$*) *"$0(*"$+) $"*2(*"00) $"2#($"+3)
注(C<97):括号内的数字为标准差,下同 D898 =: E68F/79 867 ;98:G86G G7H=89=<:I 5B7 ;8,7 E7>
0,.#,,!+;!+(1)2菌根植株干重 3非菌根植株干
重 4 566]不同。研究表明,不同属、种植物对菌根的
依赖性不同[57]。三叶草的 !+最大可达 8661;而
辣椒的 !+则较小。!+大的三叶草对菌根的依赖
性强,菌根存在时对其影响也大。因此,在丛枝菌根
修复中,选取 !+大的植物,有望达到更好的修复效
果。
不同植物根系的芘含量相差很大,供试三叶草
根系的芘含量显著高于辣椒。如 96 0 后,土样 :7
中接种 ;!<=的三叶草和辣椒根系的芘含量。分别
为 >6?@9 AB 3 CB和 9?D= AB 3 CB。高彦征等[@]研究了
植物对 E;FG的吸收作用,得出根中 E;FG含量与根
脂肪含量显著正相关,而与根含水量关系不显著。
本实验中,测定了辣椒和三叶草根的脂肪含量,分别
为 6?5771和 6?@6H1,与根的芘含量成正比。
两种植物茎叶的芘含量明显低于根系(表 5、表
=)。如 96 0 后,土样 :7 在不接种和接种 ;!<5、
;!<=时三叶草茎叶的芘含量分别为 6?H=、5?5D 和
5?>D AB 3 CB,远小于其对应根系的芘含量;辣椒茎叶
的芘含量为 6?78、6?D=和 6?6@ AB 3 CB,相应根系的芘
含量则为 8?77、8?>@和 9?D= AB 3 CB。随着土壤芘浓
度的提高,三叶草茎叶中芘含量的变化趋势不明显,
而辣椒茎叶的芘含量则略有降低。接种 ;!<对三
叶草茎叶芘含量的影响不显著;但与不接种对照相
比,接种 ;!<的辣椒茎叶的芘含量则略有减小。
表 ! 辣椒根和茎叶的芘含量("# %&’( "))’’( 89 ’3/*0 :; 6’52
处理 土样 :′∗GIJG LM =?98(6?8D) 8?77(5?77) ;!<5 5?=>(6?DH) 8?>@(5?8>) ;!<= =?=D(5?D@) 9?D=(8?66) 茎叶 :&JG LM 5?D6(5?6>) 6?78(6?65) ;!<5 6?==(6?57) 6?D=(6?=@) ;!<= 6?=6(6?5H) 6?6@(6?66) =?D?= 植物根系富集系数 接种 ;!<使得三叶草 对土壤中芘的根系富集系数增大,但对辣椒根系富 集系数的影响不显著。从表 D 可以看出,接种 ;!<5、;!<=的处理中,三叶草根系富集系数分别比 不接种对照高 7=?6=1! @7?@D1 和 7@?@>1! 5D5?@71。显然,接种 ;!<提高了三叶草对土壤中 芘的富集能力。另外,结果还表明,相同试验条件 下,接种 ;!<与否,三叶草对土壤中芘的根系富集 系数均大于辣椒;其原因可能是由于三叶草根脂肪 含量高于辣椒,对土壤芘的富集能力更强。 表 < 芘的根系富集系数 &’()* < =,,/ .,-.*-/0’/1,- 3’./,02 ,3 450*-* 植物 处理 土样 :’*G
E*).JG I%,)J N :8 :7
三叶草 LM D?96(5?8>) =?8@(5?68)
!"#%&)
’()*+ ! ,--./.*(&+0 (/%.1&2 %3 45+1+)45%&#’( )’*+,""-.,’( 78
处理 土样 !"#%&)
’()*+ 9 ,--./.*(&+0 (/%.1&2 %3 45+1+ )4 /-0)#1’( -..’’( 78 处理 土样 !"#%
&’()*+(,*% !0 !1
根中积累量 ?@’(,( )AAB+C #, ’""*%
34 56-/1(5658.) 568.:(56.18)
;<=- -6.:0(56-55) -6070(560-1)
;<=. 5611:(56/.9) -6.90(568:8)
茎叶中积累量 ?@’(,( )AAB+C #, %>""*%
34 -6-79(567:-) 56/8:(56-8/)
;<=- 56.07(565/1) 56-1:(56..7)
;<=. 56-5.(565:5) 5658/(56590)
95 D 后,接种 ;<= 土样中芘的降解率为
986:5E!7.605E,;<可提高污染土壤中芘的降解
率。以种植三叶草的 !0 和 !1 土样为例,由图 / 和
表 9可见,95 D后接种 ;<=-的处理中芘的残留浓
度为 0655 +F G HF 和 ..6:8+F G HF,降解率为 7.605E
和 9761:E;接种 ;<=. 的处理中芘的残留浓度为
1658 +F G HF 和 -16:-+F G HF,降解率为 756/9E 和
8:678E;而有植物但不接种 ;<=的对照土壤中芘
的残留浓度为 7691 +F G HF和 /06--+F G HF。显然,接
种供试 ;<=促进了土壤中芘的降解,降解率提高了
:697E!.06/0E。辣椒与三叶草具有相似的规律
性。
/环以上高分子量的 ?;I%(如芘)一般在土壤
中难于降解、易持留,可长期危害农产品安全和人类
健康。如何强化这类 ?;I%在土壤中的降解一直受
到研究者的关注。J",(’等[-8]采用三叶草和黑麦草
为宿主植物,研究了其对两种工业污染土壤的修复
作用,发现接种 ;<=后,?;I% 降解率有较大提高。
本文研究结果表明,供试 ;<=可促进土壤中 ?;I%
图 : 不同污染强度下接种与不接种 ,;<
对土壤中芘残留的影响
<="8: >33+-&2 %3 =1%-.*(&=%1 ?=&6 ,; 3.1"= %1 &6+
5+2=0.(* -%1-+1&5(&=%12 %3 45+1+=12%&’( ! )*+,-.&/,.*+ *0 1’%+, %22/3/’%,.*+ *0 14-(+( ,* "#5-(3(6.%,.*+
植物
!"#%&
./01 ./02
芘降解率(3)
4,5+#6#%)(+#%)( * (3) 芘降解率(3) 4,5+#6#%)( +#%)( *
(3)
三叶草 ’7 8297:(:9:;) :9:<;(:9:12) 8:9;<(:9:7) :9:=7(:9:;>)
!"#% #FFG-G"#%,6 #-(G, %( %C, %(%#" 6,5+#6,6IEH+,,) &()"&@
发现,./0孢子可直接从土壤中吸收 !.J&(菲),并
通过生物固定将其累积在孢子里;但 ./0对 !.J&
的直接降解很少。目前,由于体系复杂、难于操作、
且分离技术受限,./0直接降解对 ./修复土壤有
机污染的贡献仍难于定量计算。
7 结论
1)接种 ./0可促进供试植物对土壤中芘的吸
收。<: 6 后,接种 ./01( 2&%(’) (%)),-,)和 ./02
(2&%(’) ,+’.#1-+’()的三叶草根的芘含量、根系富集
系数、根和茎叶的芘积累量均显著提高;但接种这
两种 ./0对辣椒根和茎叶的芘含量、根系富集系数
的影响不显著。这主要与该两种作物的菌根侵染率
和“菌根依赖度”不同有关。
2)与植物修复相比,./ 修复芘污染土壤的效
率更高。<: 6后,接种 ./0的土样中芘的降解率达
<=9A:3!8297:3,比未接种 ./0土样中芘的降解
率提高了 A9<83!279;73。但供试试验条件下,辣
椒和三叶草吸收积累对 ./修复土壤芘污染的贡献
率小于 :923。由此推测,./作用下良好的根际和
菌际环境,提高了土壤微生物数量和活性,从而促进
土壤中芘的降解,这可能是 ./修复的主要机理。
参 考 文 献:
[1] ?)5 K *,L#( M N@ !+(-(%,6 6)&&)E#%)( (D EC,#%C+,, #6 EH+,,) &()"& OH #-#+#R)+($@ L,(" @,
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