全 文 ：植物病理学报
ＡＣＴＡ ＰＨＹＴＯＰＡＴＨＯＬＯＧＩＣＡ ＳＩＮＩＣＡ ４３(４): ３８３￣３９２(２０１３)
收稿日期: ２０１２￣０２￣０５ꎻ 修回日期: ２０１３￣０３￣１０
基金项目: 国家科技支撑计划课题(２０１０ＢＡＤ０１Ｂ０４)ꎻ农业部公益性行业(农业)科研专项(２０１１０３０１６)ꎻ四川省农作物育种攻关项目
(２０１１ＹＺＧＧ￣２５)
通讯作者: 刘 勇ꎬ研究员ꎬ博士ꎬ主要从事油菜病害、生物农药和转基因安全研究ꎻ Ｅ￣ｍａｉｌ:ｌｉｕｙｏｎｇｄｒ＠１６３. ｃｏｍ
第一作者: 余垚颖ꎬ女ꎬ四川攀枝花人ꎬ硕士研究生ꎬ从事油菜菌核病研究ꎻ Ｅ￣ｍａｉｌ:ｋｅｌｌｙｙｙｚｓｊ＠ｙａｈｏｏ. ｃｏｍ. ｃｎꎮ
利用 ＳＲＡＰ分析油菜品种对核盘菌遗传分化的影响
余垚颖１ꎬ３ꎬ 刘 勇１ꎬ２∗ꎬ 张 蕾１ꎬ２ꎬ 黄小琴１ꎬ２ꎬ 刘红雨１ꎬ２ꎬ 周西全１ꎬ２ꎬ 陈 蓉１ꎬ３
( １四川省农业科学院植物保护研究所ꎬ 成都 ６１００６６ꎻ ２ 农业部西南作物有害生物综合治理重点实验室ꎬ 成都 ６１００６６ꎻ
３ 四川农业大学ꎬ 雅安 ６２５０１４)
摘要:本文采用茎秆牙签接种法将单一核盘菌菌株接种至不同油菜品种茎秆ꎬ再从 ４６个油菜品种茎秆内收集接种后形成的菌
核进行分离纯化和培养ꎬ并采用 ＳＲＡＰ技术对 ４６ 株核盘菌菌株进行了遗传分化分析ꎮ 从 １２ 对检测引物中共获得 ３５７ 个位
点ꎬ其中多态性位点 ２７３个ꎬ占 ７６. ４７％ ꎻＵＰＧＭＡ聚类分析显示ꎬ在相似系数为 ０. ７７时ꎬ４６株核盘菌菌株能够分为 ７ 组ꎮ 当以
寄主的抗(耐)病程度、寄主品种类型和品种选育地来源为标准将菌株分为不同群体时ꎬＡＭＯＶＡ(ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｖａｒｉ￣
ａｎｃｅ)结果表明核盘菌菌株在各群体内变异率分别为 ９８. ５０％ 、１０５. １６％和 ９５. ３６％ ꎬ均达到极显著水平(Ｐ <０. ００１)ꎬ而寄主品
种选育地群体间的遗传变异达到极显著ꎬ变异率为 ４. ６４％ ꎮ 结果表明:核盘菌菌株接种不同油菜品种后ꎬ菌株间存在明显的
遗传分化ꎬ这种分化与油菜品种的选育地来源有密切关系ꎮ
关键词:核盘菌ꎻ 油菜ꎻ ＳＲＡＰ标记ꎻ 遗传分化
Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ａｄａｐｔａｔｉｏｎ ｔｏ ｒａｐｅｓｅｅｄ ｖａｒｉｅｔｉｅｓ ｏｎ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ ｓｃｌｅ￣
ｒｏｔｉｏｒｕｍ ａｓｓｅｓｓｅｄ ｗｉｔｈ ＳＲＡＰ ｍａｒｋｅｒｓ ＹＵ Ｙａｏ￣ｙｉｎｇ１ꎬ３ꎬ ＬＩＵ Ｙｏｎｇ１ꎬ２ꎬ ＺＨＡＮＧ Ｌｅｉ１ꎬ２ꎬ ＨＵＡＮＧ
Ｘｉａｏ￣ｑｉｎ１ꎬ２ꎬ ＬＩＵ Ｈｏｎｇ￣ｙｕ１ꎬ２ꎬ ＺＨＯＵ Ｘｉ￣ｑｕａｎ１ꎬ２ꎬ ＣＨＥＮ Ｒｏｎｇ１ꎬ３ (１ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎꎬ Ｓｉｃｈｕａｎ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ
Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓꎬ Ｃｈｅｎｇｄｕ ６１００６６ꎬ Ｃｈｉｎａꎻ２ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ Ｐｅｓｔ Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｏｎ Ｃｒｏｐｓ ｉｎ Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔꎬ Ｍｉｎｉｓｔｒｙ
ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅꎬ Ｃｈｅｎｇｄｕ ６１００６６ꎬ Ｃｈｉｎａꎻ３ Ｓｉｃｈｕａｎ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬ Ｙａａｎ ６２５０１４ꎬ Ｃｈｉｎａ)
Ａｂｓｔｒａｃｔ: Ｆｏｕｒｔｙ ｓｉｘ ｒａｐｅｓｅｅｄ ｖａｒｉｅｔｉｅｓ ｗｅｒｅ ｉｎｏｃｕｌａｔｅｄ ｗｉｔｈ ａ ｓａｍｅ ｓｔｒａｉｎ ｏｆ Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ
ｔｏｏｔｈｐｉｃｋ ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ. Ｓｃｌｅｒｏｔｉａ ｗｅｒｅ ｃｏｎｓｅｑｕｅｎｔｌｙ ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｉｎｏｃｕｌａｔｅｄ ａｎｄ ｄｉｓｅａｓｅｄ ｓｔｅｍｓ ｏｆ ４６
ｖａｒｉｅｔｉｅｓ ｏｆ ｒａｐｅｓｅｅｄ ａｎｄ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｌｙ ｉｓｏｌａｔｅｄ. ＳＲＡＰ (ｓｅｑｕｅｎｃｅ￣ｒｅｌａｔｅｄ ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ) ｍａｒｋｅｒｓ ｗｅｒｅ
ｕｓｅｄ ｔｏ ａｎａｌｙｚｅ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ４６ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｏｆ Ｓ. ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ ｒｅｉｓｏｌａｔｅｄ. Ａ ｔｏｔａｌ ｏｆ ３５７ ＤＮＡ ｆｒａｇ￣
ｍｅｎｔｓ ｗｅｒｅ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ｗｉｔｈ ｔｗｅｌｖｅ ｐａｉｒ ｏｆ ＳＲＡＰ ｐｒｉｍｅｒ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ ａｍｏｎｇ ｗｈｉｃｈ ２７３ ＤＮＡ ｆｒａｇｍｅｎｔｓ ｗｅｒｅ
ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ｌｏｃｉ (７６. ４７％ ) . ＵＰＭＧＡ ｒｅｓｕｌｔｓ (ｕｎｗｅｉｇｈｔｅｄ ｐａｉｒ ｇｒｏｕｐ ｍｅｔｈｏｄ ｗｉｔｈ ａｒｉｔｈｍｅｔｉｃ ｍｅａｎ) ｉｎｄｉｃａｔｅｄ
ｔｈａｔ ｔｈｅ ｄｅｎｄｒｏｇｒａｍ ｃｏｎｓｉｓｔｅｄ ｏｆ ｓｅｖｅｎ ｇｒｏｕｐｓ ａｔ ｔｈｅ ｇｅｎｅｔｉｃ ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｏｆ ０. ７７. ＡＭＯＶＡ (ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ
ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｖａｒｉａｎｃｅ) ａｎａｌｙｓｉｓ ｒｅｖｅａｌｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ ｏｆ ｖａｒｉａｔｉｏｎ ａｍｏｎｇ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ ｄｉｆｆｅｒｅｄ ｂｙ ｈｏｓｔ ｒｅｓｉｓ￣
ｔａｎｔ ｌｅｖｅｌ (９８. ５％ ꎬＰ < ０. ００１)ꎬ ｃｕｌｔｉｖａｒ ｔｙｐｅ (１０５. １６％ ꎬＰ < ０. ００１) ａｎｄ ｂｙ ｂｒｅｅｄｉｎｇ ｇｒｏｕｎｄ (９５. ３６％ ꎬＰ <
０ ００１)ꎬ ｂｕｔ ｔｈｅ ｖａｒｉａｔｉｏｎ ａｍｏｎｇ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｂｒｅｅｄｉｎｇ ｇｒｏｕｎｄ ｐｌａｎｔｓ ｗａｓ ｅｘｔｒｅｍｅｌｙ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ
(４ ６４％ ꎬＰ <０. ００１) . Ｏｎｅ ｏｆ ｔｈｅ ｍｏｓｔ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｒｅｓｕｌｔｓ ｉｎ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ ｗａｓ ｔｈａｔ Ｓ. ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｄｉｆ￣
ｆｅｒｅｎｔ ｖａｒｉｅｔｉｅｓ ｏｆ ｏｉｌｓｅｅｄ ｒａｐｅ ｉｎｏｃｕｌａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｓｔｒａｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ ａｎｄ ｔｈｅ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉ￣
ａｔｉｏｎ ａｐｐｅａｒｅｄ ｃｌｏｓｅｌｙ ｒｅｌａｔｅｄ ｔｏ ｔｈｅ ｒａｐｅｓｅｅｄ ｂｒｅｅｄｉｎｇ ｇｒｏｕｎｄ.
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ: Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍꎻ ｏｉｌｓｅｅｄ ｒａｐｅꎻ ＳＲＡＰ ｍａｒｋｅｒｓꎻ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ
中图分类号: Ｓ４３５. ６５ 文献标识码: Ａ 文章编号: ０４１２￣０９１４(２０１３)０４￣０３８３￣１０
植物病理学报 ４３ 卷
核盘菌 ( Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ ( Ｌｉｂ. ) Ｄｅ
Ｂａｒｙ)是一种非专一性的植物病原真菌ꎬ可侵染
４００ 种以上的植物[１]ꎬ引起植株幼苗猝倒病和植物
茎基部、果实及贮藏器官的腐烂ꎬ是我国油菜及其
他多种经济作物的重要植物病原菌[２]ꎮ
长期以来ꎬ国内外学者先后对核盘菌病原菌的
寄主适应性、致病性和地理分化等进行了探索和研
究ꎬ试图明确核盘菌的遗传演化规律ꎬ大多数人认
为核盘菌存在遗传多样性ꎮ Ｓｕｎ[３]、Ｈｓｉａｎｇ 等[４]和
Ｓｅｘｔｏｎ等[５]认为核盘菌的遗传分化与菌株的地理
来源关系密切ꎻＬｉｕ等[６]认为核盘菌遗传背景与寄
主关系明显ꎻＳｕｎ[３]和 Ｃｈｅｎ 等[７]则认为不同菌核
病菌群体遗传演化与寄主关系不大ꎮ 由此可见ꎬ不
同寄主来源与核盘菌遗传分化的关系尚不明确ꎮ
相关序列扩增多态性 ＳＲＡＰ( ｓｅｑｕｅｎｃｅ￣ｒｅｌａｔｅｄ
ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ)是 ２００１ 年美国加州大学
的 Ｌｉ等[８]提出的一种新型分子标记技术ꎬ目前已
成功应用于核盘菌的遗传多样性分析[９]ꎬ如 Ｌｉ
等[１０]用 ＳＲＡＰ对 ９６ 个不同地域的向日葵核盘菌
菌株的遗传多样性和群体结构差异进行了分析研
究ꎮ 为了进一步明确核盘菌遗传分化与油菜的关
系ꎬ本研究采用 ＳＲＡＰ技术对一个核盘菌菌株接种
不同油菜品种所获得 ４６ 个衍生核盘菌进行了遗传
分化分析ꎬ试图评估油菜品种对核盘菌遗传分化的
影响ꎮ
１ 材料与方法
１. １ 核盘菌菌株材料
２００９ 年从四川新都发病油菜茎杆分离纯化获
得核盘菌纯培养物ꎬ次年采用茎杆牙签菌丝体接种
法[１１]在油菜初花期将同一(同一营养亲和型)核盘
菌菌丝接种到不同油菜品种茎杆内部ꎬ待油菜成熟
期收集油菜接种牙签部位茎杆内形成的新鲜菌核ꎬ
经室内分离、纯化后获得 ４６ 株油菜核盘菌菌株
(表 １)ꎬ４℃低温保存备用ꎮ
１. ２ 核盘菌菌丝收集与 ＤＮＡ提取
菌株活化后ꎬ挑取菌丝块接种到铺有无菌玻璃
纸的 ＰＤＡ平板上ꎬ于 ２０℃的恒温条件下黑暗培养
２ ｄ后收集菌丝于 － ２０℃保存备用ꎮ 培养菌丝采
用 ＣＴＡＢ[１２]法进行核盘菌 ＤＮＡ提取ꎮ
１. ３ ＳＲＡＰ引物
引物采用 ２００１ 年 Ｌｉ等[８]设计的引物ꎬ由上海
生工合成ꎬ详细的碱基序列见表 ２ꎮ
１. ４ ＳＲＡＰ￣ＰＣＲ及电泳检测
ＰＣＲ反应体系:总反应体积 ２０ μＬꎬ１ × Ｂｕｆｆｅｒꎬ
２ ｍＭ ＭｇＣｌ２ꎬ２００ μＭ ｄＮＴＰｓꎬＴａｑ 酶 １ Ｕ(购自大
连宝生公司)ꎬ模板 ＤＮＡ １００ ｎｇꎬ正向和反向引物
各 ５０ ｎｇꎬｄｄＨ２Ｏ补至 ２０ μＬꎮ
ＳＲＡＰ￣ＰＣＲ反应程序:９５℃预变性 １ ｍｉｎꎻ９４℃
１ ｍｉｎꎬ３５℃ １ ｍｉｎꎬ７２℃ １ ｍｉｎꎬ５ 个循环ꎻ９４℃ １
ｍｉｎꎬ５０℃ １ ｍｉｎꎬ７２℃ １ ｍｉｎꎬ３５ 个循环ꎻ７２℃延伸
１０ ｍｉｎꎬ４℃保存ꎮ
ＰＣＲ产物检测:ＰＣＲ扩增产物用 ６％变性聚丙
烯酰胺凝胶电泳分离ꎬ电泳缓冲液为 １ × ＴＢＥꎮ 电
泳时ꎬ恒定功率为 ６５ Ｗꎬ预电泳 ３０ ｍｉｎꎬ电泳
２. ５ ｈꎮ 电泳后采用银染法进行染色[１３]ꎮ
１. ５ 数据统计与分析
采用人工读带法ꎬ有带记为 １ꎬ无带记为 ０ꎬ排
除模糊不清和无法准确标识的条带ꎮ
１. ５. １ 聚类分析 利用 ＮＴＳＹＳ软件按 Ｎｅｉ＆Ｌｉ相
似系数法(又称 Ｄｉｃｅ 法)计算样品间的相似系数
ＧＳｉｊꎬ得到相似系数矩阵ꎬ根据遗传相似系数矩阵ꎬ
按 ＵＰＧＭＡ 法进行 ＳＡＨＮ 聚类分析ꎬ再用 Ｔｒｅｅ
Ｐｌｏｔ绘出聚类分析树状图[１４ꎬ１５]ꎮ
１. ５. ２ 多样性分析 利用 ＰＯＰＧＥＮＥ 软件进行统
计分析ꎬ计算 Ｓｈａｎｎｏｎ 信息指数(Ｓｈａｎｎｏｎ’ ｓ ｉｎｄｅｘ
ｏｆ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙꎬⅠ)ꎬ基因分化系数( ｔｈｅ ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｆｏｒ
ｇｅｎｅ ｄｉｖｅｒｇｅｎｅꎬＧｓｔ)和基因流(ｇｅｎｅｆｌｏｗꎬＮｍ)等[１６]ꎮ
１. ５. ３ 分子方差分析 应用 ＷＩＮＡＭＯＶＡ １. ５５
程序进行分子变异分析(ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｖａｒｉ￣
ａｎｃｅꎬ ＡＭＯＶＡ) [１７]ꎮ
２ 结果与分析
２. １ 引物筛选和 ＳＲＡＰ分析
根据培养特性ꎬ随机选取 ２ 株正常的核盘菌菌
株对合成的 ３０ 对 ＳＲＡＰ引物进行筛选(图 １)ꎮ 筛
选出 １２ 对扩增条带丰富、均匀、多态性好的引物ꎮ
１２ 对引物在 ４６ 个核盘菌菌株中都具有良好的多
态性ꎬ多态位点数目从 １８ ~ ３９ 个不等ꎬ总计 ３５７
个ꎬ平均每对引物２９. ７５个ꎬ多态位点比例平均为
４８３
４ 期 余垚颖ꎬ等:利用 ＳＲＡＰ分析油菜品种对核盘菌遗传分化的影响
Ｔａｂｌｅ １ Ｔｈｅ ｒａｐｅｓｅｅｄ ｖａｒｉｅｔｉｅｓ ａｎｄ ｓｔｒａｉｎｓ ｏｆ Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ ｕｓｅｄ ｉｎ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ
Ｓｔｒａｉｎ ｎｕｍｂｅｒ Ｒａｐｅ ｖａｒｉｅｔｙ Ｂｒｅｅｄｉｎｇ ｇｒｏｕｎｄ Ｈｏｓｔ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｌｅｖｅｌ Ｃｕｌｔｉｖａｒ ｔｙｐｅ
２＃ Ｄｅｙｏｕｚａｏ １ Ｓｉｃｈｕａｎ Ｈｉｇｈ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ Ｌ
６＃ Ｋｅｙｕａｎｙｏｕ ９ Ｓｉｃｈｕａｎ Ｍｅｄｉｕｍ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅ Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ Ｌ
１４＃ Ｋｅｙｕａｎｙｏｕ ２ Ｓｉｃｈｕａｎ Ｌｏｗ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ Ｌ
２０＃ Ｄｅｙｏｕ ８ Ｓｉｃｈｕａｎ Ｌｏｗ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ Ｌ
２３＃ Ｍｅｉｙｏｕｗａｎｇ Ｓｉｃｈｕａｎ Ｌｏｗ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ Ｌ
２４＃ Ｄｅｙｏｕ ９ Ｓｉｃｈｕａｎ Ｍｅｄｉｕｍ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅ Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ Ｌ
３０＃ Ｚｈｏｎｇｎｏｎｇｙｏｕ ９ Ｇｕｉｚｈｏｕ Ｌｏｗ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ Ｌ
３３＃ Ｈｕａｗａｎｙｏｕ ４ Ｈｕｂｅｉ Ｌｏｗ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ Ｌ
３５＃ Ｃｈｕａｎｙｏｕ２１ Ｓｉｃｈｕａｎ Ｒｅｓｉｓｔａｎｔ Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ Ｌ
３６＃ Ｍｉａｎｙｏｕ１８ Ｓｉｃｈｕａｎ Ｌｏｗ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ Ｌ
３９＃ Ｍｉａｎｙｏｕｗａｎｇ Ｓｉｃｈｕａｎ Ｌｏｗ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ Ｌ
４５＃ Ｌｉａｇｙｏｕ ８ Ｓｉｃｈｕａｎ Ｌｏｗ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ Ｌ
４７＃ Ｙｏｕｙａｎ ７ Ｓｉｃｈｕａｎ Ｍｅｄｉｕｍ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅ Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ Ｌ
５０＃ Ｚｈｏｎｇｙｏｕｚａ １１ Ｈｕｂｅｉ Ｌｏｗ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ Ｌ
５２＃ Ｑｉａｎｙｏｕ １１ Ｇｕｉｚｈｏｕ Ｍｅｄｉｕｍ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅ Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ Ｌ
５５＃ Ｎａｎｙｏｕ ６ Ｓｉｃｈｕａｎ Ｈｉｇｈ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ Ｌ
６１＃ Ｃｈａｎｇｙｏｕ ２ Ｓｉｃｈｕａｎ Ｍｅｄｉｕｍ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅ Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ Ｌ
６２＃ Ｓｈｕｚａ ９ Ｓｉｃｈｕａｎ Ｈｉｇｈ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ Ｌ
６４＃ Ｑｉａｎｈｕａｎｇｙｏｕ ２１ Ｓｉｃｈｕａｎ Ｍｅｄｉｕｍ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅ Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ Ｌ
６７＃ Ｄｅｙｏｕ ５ Ｓｉｃｈｕａｎ Ｍｅｄｉｕｍ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅ Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ Ｌ
７４＃ Ｄｅｙｏｕ １５ Ｓｉｃｈｕａｎ Ｈｉｇｈ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ Ｌ
７９＃ Ｊｉｎｙｏｕ ６ Ｓｉｃｈｕａｎ Ｈｉｇｈ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ Ｌ
８１＃ Ｊｉｎｙｏｕ ８５８ Ｓｉｃｈｕａｎ Ｈｉｇｈ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ Ｌ
８５＃ Ｘｉｎｗａｎｚａｙｏｕ ２ Ｓｉｃｈｕａｎ Ｌｏｗ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ Ｌ
８８＃ Ｄｅｙｏｕｚａ １０ Ｓｉｃｈｕａｎ Ｌｏｗ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ Ｌ
９０＃ Ｃｈｕａｎｙｏｕ ２０ Ｓｉｃｈｕａｎ Ｍｅｄｉｕｍ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅ Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ Ｌ
９１＃ Ｍｉａｎｙｏｕ １５ Ｓｉｃｈｕａｎ Ｈｉｇｈ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ Ｌ
９４＃ Ｔｅｚａｏｗａｎｇ Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ Ｈｉｇｈ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ Ｌ
９６＃ Ｚｅｙｅ Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ Ｈｉｇｈ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ Ｌ
９８＃ Ｂａｉｈｕａｂａｎ Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ Ｈｉｇｈ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ Ｌ
１００＃ Ｇａｏｄｅｎｇｙｏｕｃａｉ Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ Ｈｉｇｈ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ Ｌ
１０１＃ Ｇｕｉｚａ ４ Ｇｕｉｚｈｏｕ Ｈｉｇｈ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ Ｌ
１０３＃ Ｈｕａｙｏｕｚａ １３ Ｈｕｂｅｉ Ｍｅｄｉｕｍ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅ Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ Ｌ
１０５＃ Ｃｈｕａｎｙｏｕ３３ Ｓｉｃｈｕａｎ Ｍｅｄｉｕｍ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅ Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ Ｌ
１０７＃ Ｙｏｕｙａｎ ９ Ｇｕｉｚｈｏｕ Ｈｉｇｈ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ Ｌ
１０８＃ Ｚｈｏｎｇｙｏｕｚａ ２ Ｈｕｂｅｉ Ｈｉｇｈ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ Ｌ
１０９＃ Ｚｈｏｎｇｙｏｕ ８２１ Ｈｕｂｅｉ Ｍｅｄｉｕｍ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅ Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ Ｌ
１１２＃ Ｄｅｚａ ８００ Ｓｉｃｈｕａｎ Ｍｅｄｉｕｍ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅ Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ Ｌ
１１４＃ Ｚｈｏｎｇｙｏｕ ６３０３ Ｇｕｉｚｈｏｕ Ｌｏｗ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ Ｌ
１１５＃ Ｂａｏｙｏｕ ５１７ Ｇｕｉｚｈｏｕ Ｈｉｇｈ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ Ｌ
１１６＃ Ｙｕｙｏｕ ２２ Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ Ｈｉｇｈ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ Ｌ
１２０＃ Ｃｈｕａｎｄａ ３１９ Ｓｉｃｈｕａｎ Ｌｏｗ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ Ｌ
１２７＃ Ｇｕｉｙｏｕ ７ Ｇｕｉｚｈｏｕ Ｌｏｗ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ Ｌ
１０６＃ Ｍａｗｅｉｙｏｕｃａｉ Ｓｉｃｈｕａｎ Ｈｉｇｈ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ Ｂｒａｓｓｉｃａ ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ Ｌ
６８＃ Ｌｅｙｏｕ ４ Ｓｉｃｈｕａｎ Ｈｉｇｈ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ Ｂｒａｓｓｉｃａ ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ Ｌ
９９＃ Ｚｅｙｅｊｉｅ Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ Ｌｏｗ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ Ｂｒａｓｓｉｃａ ｊｕｎｃｅａ Ｌ
Ｎｏｔｅ: Ｈｏｓｔ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｌｅｖｅｌ ｉｓ ｄｅｒｉｖｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔ ｏｆ ｒａｐｅ ｆｉｅｌｄ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｂｙ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ ｐｌａｎｔ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎꎬ Ｓｉｃｈｕａｎ Ａｃａｄｅ￣
ｍｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｉｎ ２０１０.
５８３
植物病理学报 ４３ 卷
Ｔａｂｌｅ ２ ＳＲＡＰ ｐｒｉｍｅｒｓ ｕｓｅｄ ｉｎ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ
Ｃｏｄｅ Ｒｅｖｅｒｓｅ ｐｒｉｍｅｒ Ｃｏｄｅ Ｆｏｒｗａｒｄ ｐｒｉｍｅｒ
ｅｍ１ ５′￣ＧＡＣＴＧＣＧＴＡＣＧＡＡＴＴＡＡＴ￣３′ ｍｅ１ ５′￣ＴＧＡＧＴＣＣＡＡＡＣＣＧＧＡＴＡ￣３′
ｅｍ２ ５′￣ＧＡＣＴＧＣＧＴＡＣＧＡＡＴＴＴＧＣ￣３′ ｍｅ２ ５′￣ＴＧＡＧＴＣＣＡＡＡＣＣＧＧＡＧＣ￣３′
ｅｍ３ ５′￣ＧＡＣＴＧＣＧＴＡＣＧＡＡＴＴＧＡＣ￣３′ ｍｅ３ ５′￣ＴＧＡＧＴＣＣＡＡＡＣＣＧＧＡＡＴ￣３′
ｅｍ４ ５′￣ＧＡＣＴＧＣＧＴＡＣＧＡＡＴＴＴＧＡ￣３′ ｍｅ４ ５′￣ＴＧＡＧＴＣＣＡＡＡＣＣＧＧＡＣＣ￣３′
ｅｍ５ ５′￣ＧＡＣＴＧＣＧＴＡＣＧＡＡＴＴＡＡＣ￣３′ ｍｅ５ ５′￣ＴＧＡＧＴＣＣＡＡＡＣＣＧＧＡＡＧ￣３′
ｅｍ６ ５′￣ＧＡＣＴＧＣＧＴＡＣＧＡＡＴＴＧＣＡ￣３′
Ｔａｂｌｅ ３ Ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ｔｏｔａｌ ａｎｄ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ｆｒａｇｍｅｎｔｓ ｐｅｒ ＳＲＡＰ ｐｒｉｍｅｒ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ
Ｐｒｉｍｅｒ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ Ｔｏｔａｌ ｆｒａｇｍｅｎｔｓ Ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ｐｏｌｙ￣ｍｏｒｐｈｉｃ ｌｏｃｉ Ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ ｏｆ ｐｏｌｙ￣ｍｏｒｐｈｉｃ ｌｏｃｉ / ％
ｅｍ１￣ｍｅ４ １８ １５ ８３. ３３
ｅｍ２￣ｍｅ５ ３３ ２６ ７８. ７９
ｅｍ３￣ｍｅ３ ２４ １７ ７０. ８３
ｅｍ３￣ｍｅ５ ３７ ３１ ８３. ７８
ｅｍ４￣ｍｅ３ ２３ １６ ６９. ５７
ｅｍ４￣ｍｅ５ ３４ ２３ ６７. ６５
ｅｍ５￣ｍｅ１ ３９ ３２ ８２. ０５
ｅｍ５￣ｍｅ３ ２８ ２１ ７５. ００
ｅｍ５￣ｍｅ５ ３２ ２８ ８７. ５０
ｅｍ６￣ｍｅ１ ３０ ２３ ７６. ６７
ｅｍ６￣ｍｅ２ ２８ １６ ５７. １４
ｅｍ６￣ｍｅ５ ３１ ２５ ８０. ６５
Ｔｏｔａｌ ３５７ ２７３ ７６. ４７
Ｍｅａｎ ２９. ７５ ２２. ７５ ７６. ４７
Ｆｉｇ. １ Ｐｒｉｍｅｒ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ
Ｌａｎｅ Ａ ｔｏ Ｋ ｓｈｏｗｓ ｅｍ３￣ｍｅ２ꎬ ｅｍ３￣ｍｅ３ꎬ ｅｍ３￣ｍｅ５ꎬ ｅｍ４￣ｍｅ３ꎬ ｅｍ４￣ｍｅ５ꎬ ＤＬ ２０００ Ｍａｒｋｅｒꎬ
ｅｍ４￣ｍｅ１ꎬ ｅｍ４￣ｍｅ２ꎬ ｅｍ５￣ｍｅ１ꎬ ｅｍ５￣ｍｅ３ꎬ ｅｍ５￣ｍｅ２ ａｎｄ ｅｍ５￣ｍｅ５ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ.
６８３
４ 期 余垚颖ꎬ等:利用 ＳＲＡＰ分析油菜品种对核盘菌遗传分化的影响
７６. ４７％ (表 ３)ꎬ部分引物扩增条带原图信息
(图 ２)ꎮ
２. ２ 遗传聚类分析
用 ＮＴＳＹＳ软件ꎬ按照 ＵＰＧＭＡ法对 ４６ 个核盘
菌菌株进行聚类分析并构建聚类树状图(图 ３)ꎮ
从图 ３ 可以看出ꎬ在相似性系数为 ０. ７７ 时ꎬ供试菌
株可分为 ７ 类(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、ＩＶ、Ｖ、Ⅵ、Ⅶ)ꎮ 其中第
Ⅰ类仅有 １０１＃号菌株ꎻ第Ⅱ类包含 ６４＃和 ６７＃号 ２
个菌株ꎻ第Ⅲ类有 ４ 个菌株ꎬ分别是 ８１＃、８５＃、８８＃、
９０＃ꎻ５２＃、５５＃、６１＃、６２＃、６８＃、７４＃、７９＃共 ７ 个菌株属于
第 Ｖ类ꎻ第Ⅵ类包括 ３５＃、４５＃、４７＃、５０＃ꎬ第Ⅶ类 １０
个菌株ꎬ分别是 ２＃、６＃、１４＃、２０＃、２３＃、２４＃、３０＃、３３＃、
３６＃、３９＃ꎻ其余 １８ 个菌株属于第Ⅳ类ꎮ
根据寄主的抗(耐)病程度、寄主品种类型和
寄主选育地来源为标准进一步对 ４６ 个核盘菌菌株
进行区组划分ꎬ可分别划分为 ２ 个寄主选育地(川
育和省外选育)群体ꎻ４ 个抗感程度(高感、中感、低
感、抗(耐)病)群体ꎻ３ 个类型(甘蓝型、白菜型、芥
菜型)群体ꎮ 聚类图(图 ３)显示:从寄主类型来看ꎬ
不同寄主类型的菌株聚在一起ꎬ如 ９８＃与 ９９＃菌株
其寄主类型分别为甘蓝型和白菜型ꎬ说明寄主类型
对核盘菌菌株的遗传分化影响不明显ꎻ从寄主菌核
病抗感程度来看ꎬ寄主抗感程度随着其菌株聚类未
呈明显的分组趋势ꎬ说明寄主菌核病抗感程度对核
盘菌菌株的遗传分化影响不明显ꎻ但从寄主选育地
来看ꎬ寄主选育地随着菌株聚类而呈现明显的分组
趋势ꎬ说明寄主选育地来源影响核盘菌菌株的遗传
分化ꎮ
用 Ｃｏｐｈｅｎｅｔｉｃ ｖａｌｕｅｓ将聚类结果转换为协表
征矩阵ꎬ用 ＭＸＣＯＭＰ 程序对聚类结果与相似系
数进行Ｍａｎｔｅｌ检验ꎬｒ ＝ ０. ７５０ ５ꎬ达到了显著的水
平ꎬ说明聚类结果与遗传相似系数密切相关ꎬ表
明采用 ＳＲＡＰ分子标记对 ４６ 个核盘菌菌株进行
聚类分析结果可靠ꎬ４６ 个菌株存在真实的遗传
差异ꎮ
２. ３ 遗传多样性与分子变异分析
４６ 个核盘菌菌株按上述方法分为 ３ 组ꎬ统计
每组每群体菌株的份数ꎬ根据其 ＳＲＡＰ指纹数据计
算 Ｓｈａｎｎｏｎ指数表明:对于不同寄主选育地来源的
菌株ꎬ川育品种的遗传多样性高于省外选育品种ꎻ
对于不同寄主抗(耐)病程度来源的菌株ꎬ中感群
体的遗传多样性最高ꎬ抗(耐)病群体最低ꎻ对于不
同寄主类型的菌株而言ꎬ甘蓝型 >白菜型 >芥菜型
(表 ４)ꎮ
对 ３ 组中不同群体进行 ＡＭＯＶＡ 分析的结果
(表 ５)显示ꎬ核盘菌菌株群体内遗传变异比例均大
于群体间ꎬ并且所有群体内变异都达到极显著水平
(Ｐ <０. ００１)ꎬ说明核盘菌菌株的遗传变异主要来
源于群体内ꎻ在寄主抗感程度、寄主类型两个组中
菌株群体间的变异分别为 １. ８５％和 － ５. １６％ ꎬ且
变异不显著ꎬＰ 值分别为 ０. １２６ ９ 和 ０. ８４６ ２ꎬ说明
寄主的抗(耐)病程度、寄主品种类型对核盘菌菌
株遗传分化影响不明显ꎻ在寄主选育地来源组中菌
株群体间的变异为 ４. ６４％ ꎬ９５. ３６％的变异发生在
群体内ꎬ群体间和群体内的变异均达到极显著水平
(Ｐ <０. ００１)ꎬ说明寄主选育地对核盘菌菌株遗传
分化有显著影响ꎻ同样ꎬ依据 ＰＯＰＧＥＮＥ 软件对 ４６
个核盘菌菌株按照寄主选育地分组进行分析的结
果(表 ６)表明ꎬ基因分化系数(Ｇｓｔ)为 ０. ０４８ꎬ表明
其群体间的遗传变异达 ４. ８％ ꎬ此结果与 ＡＭＯＶＡ
分析的结果基本一致ꎮ
３ 讨论
病原菌变异的方式包括个体间进化(系统发
育)以及时空差异造成的变异ꎬ核盘菌属于非专
一性病原菌ꎬ不存在小种分化ꎬ但致病力存在明
显的差异ꎬ使得防治核盘菌相当困难ꎮ 近年来ꎬ
利用 ＳＲＡＰ标记对核盘菌遗传多样性[７ꎬ１０]研究结
果表明ꎬＳＲＡＰ 标记技术不仅可用于地区间核盘
菌遗传多样性分析ꎬ也可用于寄主、生态区等遗
传背景差异造成的核盘菌遗传多样性分析ꎬ应用
前景广阔ꎮ 本文利用 ＳＲＡＰ分子标记对同一核盘
菌菌株接种不同油菜品种茎杆后形成的 ４６ 株核
盘菌菌株进行了遗传多样性分析ꎬ结果显示:１２
对 ＳＲＡＰ 引物扩增出 ２７３ 个多态性位点ꎬ表明
ＳＲＡＰ标记技术是研究核盘菌菌株遗传多样性以
及遗传演化分析的一种有效方法ꎮ
７８３
植物病理学报 ４３ 卷８８３
４ 期 余垚颖ꎬ等:利用 ＳＲＡＰ分析油菜品种对核盘菌遗传分化的影响 ９８３
植物病理学报 ４３ 卷
Ｔａｂｌｅ ４ Ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｉｎｄｉｃｅｓ ｏｆ Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ
Ｇｒｏｕｐ Ｓａｍｐｌｅ ｓｉｚｅ Ｓｈａｎｎｏｎ
Ｂｒｅｅｄｉｎｇ ｇｒｏｕｎｄ Ｉｎ Ｓｉｃｈｕａｎ ２８ ０. ２３６
Ｏｕｔ ｏｆ Ｓｉｃｈｕａｎ １８ ０. ２１３
Ｈｏｓｔ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｌｅｖｅｌ Ｔｏｌｅｒａｎｔ １ ０. ０００
Ｌｏｗ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ １５ ０. ２１７
Ｍｅｄｉｕｍ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅ １２ ０. ２３９
Ｈｉｇｈ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ １８ ０. ２２０
Ｃｕｌｔｉｖａｒ ｔｙｐｅ Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ Ｌ. ４３ ０. ２３９
Ｂｒａｓｓｉｃａ ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ Ｌ. ２ ０. １２０
Ｂｒａｓｓｉｃａ ｊｕｎｃｅａ Ｌ １ ０. ０００
Ｔｏｔａｌ ｍｅａｎ ４６ ０. ２３８
ＳＤ ０. １９３
ＳＤ: Ｓｔａｎｄａｒｄ ｄｅｖｉａｔｉｏｎ.
Ｔａｂｌｅ ５ ＡＭＯＶＡ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｇｅｎｅｔｉｃ ｖａｒｉａｔｉｏｎ ｉｎ Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ
Ｓｏｕｒｃｅ ｏｆ ｖａｒｉａｔｉｏｎ ｄｆ
Ｍｅａｎ
ｓｑｕａｒｅ
Ｖａｒｉａｎｃｅ
ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ
Ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ ｏｆ
ｖａｒｉａｔｉｏｎ / ％
Ｐ
Ｆｏｕｒ ｈｏｓｔ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｌｅｖｅｌｓ Ａｍｏｎｇ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ ３ ５１. １６７ ０. ８０６５ １. ８５ ０. １２６９
Ｗｉｔｈｉｎ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ４２ ４２. ８５７ ４２. ８５７ ９８. １５ <０. ００１
Ｔｈｒｅｅ ｔｙｐｅｓ Ａｍｏｎｇ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ ２ ３８. ７６１ －２. ２０９ －５. １６ ０. ８４６２
Ｗｉｔｈｉｎ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ４３ ４５. ０５４ ４５. ０５４ １０５. １６ <０. ００１
Ｔｗｏ ｂｒｅｅｄｉｎｇ ｇｒｏｕｎｄｓ Ａｍｏｎｇ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ １ ８７. ６３７ ２. ０６４ ４. ６４ <０. ００１
Ｗｉｔｈｉｎ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ４４ ４２. ４０５ ４２. ４０５ ９５. ３６ <０. ００１
Ｔａｂｌｅ ６ Ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｉｎ Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ
ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ ｆｒｏｍ ｖａｒｉｏｕｓ ｂｒｅｅｄｉｎｇ ｇｒｏｕｎｄｓ
Ｇｒｏｕｐ Ｓａｍｐｌｅ ｓｉｚｅ Ｈｔ Ｈｓ Ｇｓｔ Ｎｍ
Ｃｈｉｎａ ４６ ０. ２３６ ０. ２２５ ０. ０４８ １０. ０３１
ＳＤ ０. ０３７ ０. ０３３
Ｈｔ: Ｇｅｎｅ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ ｓｐｅｃｉｅｓꎻ Ｈｓ: Ｇｅｎｅ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｗｉｔｈ ａ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎꎻ Ｇｓｔ: Ｇｅｎｅ ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｏｆ ｇｅｎｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎꎻ Ｎｍ:
Ｇｅｎｅ ｆｌｏｗꎻ ＳＤ: Ｓｔａｎｄａｒｄ ｄｅｖｉａｔｉｏｎ.
聚类分析结果显示ꎬ在相似性系数为 ０. ７７ 时ꎬ
４６ 株供试菌株可分为 ７ 类ꎬ证明同一核盘菌菌株
接种不同油菜品种后形成的 ４６ 株核盘菌菌系存在
遗传分化ꎮ 目前ꎬ国内外许多学者对核盘菌菌株的
遗传多样性进行了大量研究ꎬ如Ｗａｎｇ[１８]利用 ＳＳＲ
分子标记技术对 １１２ 株向日葵菌核病病原菌的遗
传多样性分析后证明地理位置的不同是导致不同
核盘菌群体存在差异的重要原因ꎻＳｅｘｔｏｎ 等[４]对
澳大利亚油菜菌核病病原菌群体遗传多样性分析
后也表明其遗传分化与地理来源有密切关系ꎻ
Ｃｈｅｎ等[７]利用 ＳＲＡＰ 对 ７６ 个核盘菌菌株进行遗
传多样性分析后也表明核盘菌的遗传分化和遗传
多样性与地理隔离密切相关ꎮ 本文按核盘菌菌株
的寄主抗(耐)病程度、寄主品种类型和品种选育
地分组ꎬ进行遗传多样性分析后的 ＡＭＯＶＡ 结果
显示:只有按寄主选育地分组的核盘菌菌株群体内
和群体间的变异率达到了极显著水平ꎬ分别为
９５ ３６％和 ４. ６４％ ꎮ 其余两组ꎬ群体内变异率未达
０９３
４ 期 余垚颖ꎬ等:利用 ＳＲＡＰ分析油菜品种对核盘菌遗传分化的影响
到显著水平ꎮ 说明菌株来源寄主的抗(耐)病程
度、寄主品种类型对核盘菌菌株遗传分化影响不明
显ꎬ只有寄主选育地对核盘菌菌株遗传分化的影响
达到显著水平ꎬ表明核盘菌菌株的遗传分化和遗传
多样性与寄主的地理来源密切相关ꎮ 本文采用菌
丝亲和性试验验证了分离菌株与接种菌株的同源
特性ꎬ同时采用菌株生物学特性观察方法证实了菌
株在菌丝生长速度、菌核的重量、数量和基质颜色
等特征上存在差异(试验结果将另行发表)ꎬ表明
本文采用同一(同一营养亲和型)核盘菌菌株菌丝
接种到油菜茎杆内部ꎬ再收集菌丝生长后对形成的
菌核进行核盘菌遗传变化分析的结果与前人研究
一致ꎬ首次证实了寄主生长环境对同一核盘菌菌系
遗传分化存在影响ꎮ 在寄主品种类型(白菜型、甘
蓝型、芥菜型)分组中ꎬ由于芥菜型和白菜型油菜
品种较少ꎬ在一定程度上可能会掩盖因不同油菜品
种类型来源菌株数差异太大而影响结果的精确性ꎬ
以后将会专门收集芥菜型和白菜型油菜品种进行
进一步研究ꎮ
本文采用火柴棍菌丝接种法将同一个核盘菌
菌株菌丝接种到油菜茎杆内部后再收集菌丝生长
后形成的菌核进行核盘菌遗传变化分析的方法ꎬ首
次研究了不同寄主油菜品种对同一核盘菌菌系遗
传分化的影响ꎬ研究结果在一定程度上揭示了核盘
菌遗传分化速度较快和菌核病防治相对困难的主
要原因ꎬ给菌核病防控带来一定启示:在进行油菜
菌核病防控时ꎬ应对核盘菌引发的不同寄主菌核病
进行全面防控以降低核盘菌分化速度ꎻ在油菜新品
种选育方面ꎬ要充分考虑由于地域差异可能会导致
核盘菌存在优势菌群差异ꎬ在选育新品种时应针对
当地的优势菌群进行抗性品种选育ꎮ
参考文献
[１] Ｂｏｌａｎｄ Ｇ Ｊꎬ Ｈａｌｌ Ｒ. Ｉｎｄｅｘ ｏｆ ｈｏｓｔ ｐｌａｎｔｓ ｏｆ Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ
ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ [ Ｊ] . Ｃａｎａｄｉａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｐａｔｈｏｌｏ￣
ｇｙꎬ １９９４ꎬ １６: ９３ －１０８.
[２] Ｌｉ Ｌ Ｌ. Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｔｈｅ ｗｏｒｌｄ ｒａｐｅ ｄｉｓｅａｓｅ
( ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ) [ Ｊ] . Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｏｉｌ Ｃｒｏｐ Ｓｃｉ￣
ｅｎｃｅｓ (中国油料)ꎬ １９９４ꎬ１６ꎬ ７９ －８１.
[３] Ｓｕｎ Ｊ Ｍ. Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙꎬ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ
ａｎｄ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ
(Ｌｉｂ. ) ｄｅ ｂａｒｙ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｆｒｏｍ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｏｒｉｇｉｎｓ ( ｉｎ
Ｃｈｉｎｅｓｅ) [Ｄ] . Ｂｅｉｊｉｎｇ: Ｃｈｉｎａ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ
(北京: 中国农业大学)ꎬ ２００５.
[４] Ｈｓｉａｎｇ Ｔꎬ Ｍａｈｕｋｕ Ｇ Ｓ. Ｇｅｎｅｔｉｃ ｖａｒｉａｔｉｏｎ ｗｉｔｈｉｎ ａｎｄ
ｂｅｔｗｅｅｎ ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｏｎｔａｒｉｏ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ
ｈｏｍｏｅｏｃａｒｐａ [Ｊ] . Ｐｌａｎｔ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙꎬ １９９９ꎬ ４８: ８３ －
９４.
[５] Ｓｅｘｔｏｎ Ｃ Ａꎬ Ｈｏｗｌｅｔｔ Ｊ Ｂ. Ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ ｍａｒｋｅｒｓ ｒｅ￣
ｖｅａｌ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ａｍｏｎｇ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｓｃｌｅ￣
ｒｏｔｉｎｉａ ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ ｆｒｏｍ Ａｕｓｔｒａｌｉａｎ ｃａｎｏｌａ ｆｉｅｌｄｓ [Ｊ] .
Ｃｕｒｒｅｎｔ ｇｅｎｅｔｉｃｓꎬ ２００４ꎬ ４６: ３５７ －３６５.
[６] Ｌｉｕ Ｘ Ｈꎬ Ｚｈｏｕ Ｈꎬ Ｊｉ Ｈ Ｌꎬ ｅｔ ａｌ. Ｐｒｉｍａｒｙ ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｎ
ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎａｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ｏｆ Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ ｏｎ
ｖｅｇｅｔａｂｌｅｓ ｉｎ Ｓｉｃｈｕａｎ ｐｒｏｖｉｎｃｅ ( ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ) [ Ｊ] .
Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔ Ｃｈｉｎａ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ (西南
农业学报)ꎬ ２００４ꎬ １７(５): ６１８ －６２２.
[７] Ｃｈｅｎ Ｂ Ｙꎬ Ｈｕ Ｑꎬ Ｌｉ Ｇ Ｑꎬ ｅｔ ａｌ. Ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｉｎ
Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ ａｓｓｅｓｓｅｄ ｗｉｔｈ ＳＲＡＰ ｍａｒｋｅｒｓ
( ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ) [ Ｊ] . Ｂｉｏｄｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｓｃｉｅｎｃｅ (生物多样
性)ꎬ ２０１０ꎬ １８(５): ５０９ －５１５.
[８] Ｌｉ Ｇꎬ Ｑｕｉｒｏｓ Ｃ Ｆ. Ｓｅｑｕｅｎｃｅ￣ｒｅｌａｔｅｄ ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ｐｏｌｙ￣
ｍｏｒｐｈｉｓｍ (ＳＲＡＰ)ꎬ ａ ｎｅｗ ｍａｒｋｅｒ ｓｙｓｔｅｍ ｂａｓｅｄ ｏｎ ａ
ｓｉｍｐｌｅ ＰＣＲ ｒｅａｃｔｉｏｎ: ｉｔｓ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｔｏ ｍａｐｐｉｎｇ ａｎｄ
ｇｅｎｅ ｔａｇｇｉｎｇ ｉｎ Ｂｒａｓｓｉｃａ [Ｊ] . Ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｅｄ
Ｇｅｎｅｔｉｃｓꎬ ２００１ꎬ １０３: ４５５ －４６１.
[９] Ｌｉ Ｙꎬ Ｚｈａｎｇ Ｃ Ｑ. Ａ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍａｒｋｅｒ￣ＳＲＡＰ ｔｅｃｈ￣
ｎｉｑｕｅ ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓ ( ｉｎ
Ｃｈｉｎｅｓｅ) [ Ｊ] . Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ
(中国农学通报)ꎬ ２００５ꎬ ２１(５): １０８ －１１２
[１０] Ｌｉ Ｚ Ｑ. Ｓｕｎｆｌｏｗｅｒ Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ ( Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ ｓｃｌｅｒｏｔｉｏ￣
ｒｕｍ) Ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ａｎｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｐａｔｈｏｇｅｎ￣
ｉｃ ( ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ) [Ｄ] . Ｉｎｎｅｒ Ｍｏｎｇｏｌｉａ: Ｉｎｎｅｒ Ｍｏｎｇｏ￣
ｌｉａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ (内蒙古大学)ꎬ２００８.
[１１] Ｌｉｕ Ｙꎬ Ｂｒｕｎ Ｈꎬ Ｔｒｉｂｏｄｅｔ Ｍ. Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ
ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｏ Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ ｉｎ ｒａｐｅｓｅｅｄ ｉｎ ｔｈｅ
ｆｉｅｌｄ ( ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ) [ Ｊ] . Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔ Ｃｈｉｎａ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ
Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ (西南农业学报)ꎬ １９９３ꎬ ６(Ｓ):
４２ －４６.
[１２] Ｚｈｏｕ Ｌ Ｈ. Ａ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｇｅｎｏｍｅ ＤＮＡ
ｆｒｏｍ ｆｉｌａｍｅｎｔｏｕｓ ｆｕｎｇｉ ｗｉｔｈ ａｂｕｎｄａｎｔ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｏｓｅ
( ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ) [Ｊ] . Ｈｕｂｅｉ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ (湖北
１９３
植物病理学报 ４３ 卷
农业科学)ꎬ ２００８ꎬ ４７(４): ３７９ －３８１.
[１３] Ｓｏｎｇ Ｘ Ｊꎬ Ｚｈａｎｇ Ｗꎬ Ｘｉｅ Ｐ Ｄ ｅｔ ａｌ. Ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ ｏｆ
ＰＡＧＥ ｓｉｌｖｅｒ ｓｔａｉｎｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄ ｕｓｅｄ ｉｎ ｓｏｙｂｅａｎ ＳＳＲ
ｍａｒｋｅｒ ( ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ) [ Ｊ] . Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｎｈｕｉ Ａｇｒｉｃｕｌ￣
ｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ (安微农业科学)ꎬ ２００６ꎬ ３４ (１６):
３９９２２ －３９９２３.
[１４] Ｎｅｉ Ｍꎬ Ｌｉ Ｗ Ｈ. Ｍａｔｈｅｍａｔｉｃａｌ ｍｏｄｅｌ ｆｏｒ ｓｔｕｄｙｉｎｇ ｇｅ￣
ｎｅｔｉｃ ｖａｒｉａｔｉｏｎ ｉｎ ｔｅｒｍｓ ｏｆ ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ ｅｎｄｏｎｕｃｌｅａｓｅｓ
[ Ｊ] . Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉ￣
ｅｎｃｅｓꎬ ＵＳＡꎬ １９７９ꎬ ７６ꎬ ５６９ －５７３.
[１５] Ｒｏｌｈｆ Ｆ Ｊ. ＮＴＳＹＳｐｃ ｖｅｒｓｉｏｎ ２. １. Ｎｕｍｅｒｉｃａｌ ｔａｘｏｎｏ￣
ｍｙ ａｎｄ ｍｕｌｔｉｖａｒｉａｔｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｓｙｓｔｅｍ. Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ:
１９９７.
[１６] Ｙｅｈ Ｆ Ｃꎬ Ｙａｎｇ Ｒ Ｃꎬ Ｂｏｙｌｅ Ｔꎬ ｅｔ ａｌ. ＰＯＰＧＥＮＥꎬ ｔｈｅ
ｕｓｅｒ ｆｒｉｅｎｄｌｙ ｓｈａｒｅｗａｒｅ ｆｏｒ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｇｅｎｅｔｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ
[Ｍ] . Ｃａｎａｄａ: Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ
Ｃｅｎｔｒｅꎬ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ａｌｂｅｒｔａ Ｅｄｍｏｎｔｏｎꎬ １９９７.
[１７] Ｅｘｃｏｆｆｉｅｒ Ｌꎬ Ｓｍｏｕｓｅ Ｐ Ｅꎬ Ｑｕａｔｔｒｏ Ｊ Ｍ. Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ
ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｖａｒｉａｎｃｅ ｉｎｆｅｒｒｅｄ ｆｒｏｍ ｍｅｔｒｉｃ ｄｉｓｔａｎｃｅｓ ａ￣
ｍｏｎｇ ＤＮＡ ｈａｐｌｏｔｙｐｅｓ: ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｔｏ ｈｕｍａｎ ｍｉｔｏ￣
ｃｈｏｎｄｒｉａｌ ＤＮＡ ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ ｄａｔａ [ Ｊ] . Ｇｅｎｅｔｉｃｓꎬ １９９２ꎬ
１３１ꎬ １７９ －１９１.
[１８] Ｗａｎｇ Ｙ Ｊ. Ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ａｎｄ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ ｖａｒｉａ￣
ｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ ｉｎ ｓｕｎｆｌｏｗｅｒ ( ｉｎ
Ｃｈｉｎｅｓｅ) [Ｄ] . Ｉｎｎｅｒ Ｍｏｎｇｏｌｉａ: Ｉｎｎｅｒ Ｍｏｎｇｏｌｉａ Ａｇｒｉ￣
ｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ (内蒙古农业大学) ꎬ ２０１１.
责任编辑:李晖
欢迎订阅«植物病理学报»
«植物病理学报»是中国植物病理学会主办的全国性学术刊物ꎬ“中国科技核心期刊”ꎮ 主要刊登
植物病理学各分支未经发表的专题评述、研究论文和研究简报等ꎬ以反映中国植物病理学的研究水平
和发展方向ꎬ推动学术交流ꎬ促进研究成果的推广和应用ꎮ
本刊现已被英国农业与生物技术文摘(ＣＡＢ)、联合国粮农组织 ＡＧＲＩＳ 等收录ꎮ 据«中国科技期
刊引证报告»(２０１２ 年版)统计结果ꎬ«植物病理学报»影响因子 ０. ８３６ꎮ 荣获首届«中国学术期刊检索
与评价数据规范»(ＣＡＪ￣ＣＤ)执行优秀期刊奖和 ２０１２ 中国国际影响力优秀学术期刊奖ꎮ
本刊为双月刊ꎬ每期定价 ３０ 元ꎬ全年 ６ 期共 １８０ 元ꎮ
邮发代号: ８２￣２１４ꎮ 欢迎投稿ꎬ欢迎订阅ꎮ
编辑部地址: 北京市海淀区圆明园西路 ２ 号 中国农业大学植保楼 ４０６ 室
邮编: １００１９３
电话: (０１０) ６２７３ ２３６４
Ｅ￣ｍａｉｌ:ｚｗｂｌｘｂ＠ ｃａｕ. ｅｄｕ. ｃｎꎮ
２９３