全 文 ：书西北植物学报!
"#$
!
%$
"
##
#$
!#&&!#(%
!"#$%&#%&()$*+,""-.)/#0-/
!!
文章编号$
#""")$"!*
"
!"#$
#
#)!#&&)"+
!!!!!!!!!!!!!!!
!"#
$
#",-+"+
%
.
,/001,#""")$"!*,!"#$,##,!#&&
收稿日期$
!"#$)"+)"+
&修改稿收到日期$
!"#$)"()!&
基金项目$国家自然科学基金"
%##-#*&&
#&重庆市自然科学基金"
2032!"#!
.
4&""#"
#
作者简介$郭
!
楠"
#(&&
#!女!在读硕士研究生!主要从事生物化学与分子生物学研究
5)67/8
$
3012
9
1
!
#+%,2:6
"
通信作者$张
!
涛!博士!教授!主要从事植物遗传与细胞生物学研究
5)67/8
$
;<3!#&&
!
#!+,2:6
甘蓝型油菜
123
基因的克隆与表达分析
郭
!
楠!赵敬会!高天姝!白瑞英!黄兴琳!陆俊杏!张
!
涛"
"重庆师范大学 重庆市植物环境适应分子生物学重点实验室!生命科学学院!重庆
$"#%%#
#
摘
!
要$为研究甘蓝型油菜磷酸甘油酸激酶"
!"#
#基因表达特性!在对拟南芥
!"#
基因家族生物信息学分析的基
础上!通过电子克隆方法获得
%
个甘蓝型油菜
!"#
基因"
$%!"##
(
$%!"#!
(
$%!"#%
#分别设计特异引物!以
甘蓝型油菜雄性不育系
"(4
和保持系
"(=
的
2>?4
为模板克隆
$%!"#
基因全长序列根据获得的
2>?4
序列
设计实时荧光定量特异引物!采用实时荧光定量
@AB
技术!研究油菜雄性不育系与保持系
!"#
基因表达差异
结果显示$
%!"#
基因在甘蓝型油菜雄性不育系
"(4
和保持系
"(=
的根(茎(叶(花蕾中均有表达!属组成性表
达除茎中的
$%!"#%
外!
$%!"#
其它基因在根(茎(叶中的表达均表现为
"(4
高于
"(=
!而在花蕾中均为
"(=
高于
"(4
!
$%!"##
和
$%!"#%
在
"(=
中的表达量是
"(4
中的
!
倍以上
关键词$甘蓝型油菜&雄性不育&磷酸甘油酸激酶&基因克隆&表达
中图分类号$
C-&*
&
C-&+
文献标志码$
4
$%"&#&

(&!)*
+
,-..#"&/&(%
0
.#."11232-&-#&%($44-"$/$
5
64
DEF?71
!
GH4FI/1
9
!
D4FK/710!
=4LBJ/
M
/1
9
!
HE4?DN/1
9
8/1
!
OEIJ1P/1
9
!
GH4?DK7:
"
"
A<:1
9Q
/1
9
RS
M
O7T:U73:U
M
:VW:8S2J87U=/:8:
9M
:V@8713051X/U:16S134Y7
Z
3/:1
!
A:8S
9
S:VO/VS[2/S12S0
!
A<:1
9Q
/1
9
?:U678
E1/XSU0/3
M
!
A<:1
9Q
/1
9
$"#%%#
!
A#
/3.4,(54
$
K9
3<2>?40S
Q
JS12S0:V!"#
9
S1S0
"
$%!"##
!
$%!"#!71Y$%!"#%
#
\SUS:T)
37/1SY39
9
6S3<:YT70SY:1T/:/1V:U673/207178
M
0/0:V&()*+,
-
.*.!"#
9
S1SV76/8
M
V:U3M
:V@<:0
Z
<:
9
8
M
2SU73S]/170S
"
@DR
#
9
S1SSP
Z
US00/:12<7U723SU/03/20VU:6$(..*/(%(
-
0.,[
Z
S)
2/V/2
Z
U/6SU0\SUSYS0/
9
1SY71Y2>?4:V678S03SU/8S8/1S"(471Y67/137/1SU8/1S"(=\SUS703S6
Z
873S03:
28:1S$%!"#VJ8)8S1
9
3<0S
Q
JS12S0,BS78)3/6SV8J:US02S12S
Q
J713/373/XS0
Z
S2/V/2
Z
U/6SU0\SUSYS0/
9
1SY72)
2:UY/1
9
3:3?40S
Q
JS12S0,KQ
J713/373/XS7178
M
0/0\702:1YJ23SYT
M
J0/1
9
CJ713/373/XS@AB6S3<:Y,BS0J8300<:\SY3<7339
S1S0SP
Z
US00SYX7U/:J08
M
/1Y/VVSUS133/00JS0
!
0J2<70U::3
!
03S6
!
8S7V71YTJY:V"(471Y"(=
!
TS8:1
9
3:2:103/3J3/XS8
M
SP
Z
US00SY,5P2S
Z
3$%!"#%/1303S6
!
3Z
US00/:1:V$%!"#:39
S1S0:V"(4\SUS9
!
03S671Y8S7V
!
TJ3
3Z
US00/:1:V$%!"#
9
S1S0:V"(=\SUS9
Z
US00/:1:V$%!"##71Y
$%!"#%:V"(=\70!3/6S03<713<73:V"(4/1TJY,
6-
0
7",!.
$
(..*/(%(
-
0.
&
678S03SU/8S
&
Z
<:0
Z
<:
9
8
M
2SU73S]/170S
&
9
S1S28:1S
&
SP
Z
US00/:1
!!
细胞质雄性不育"
2
M
3:
Z
8706/2678S03SU/8/3
M
!
AW[
#是一种不能产生有活力花粉的母性遗传性
状!这种现象在高等植物中普遍存在)#*由于高等
植物细胞质遗传物质主要存在于线粒体和叶绿体
中!人们很自然地将
AW[
与线粒体和叶绿体遗传
系统联系在一起线粒体
>?4
与植物
AW[
的关
系最为密切!早在
!"
世纪
&"
年代!已发现一些植物
的
AW[
与线粒体类质粒相关)!)%*然而!油菜
AW[
类型很多!根据其细胞质来源可以分为两大类$一类
是植物自然繁殖过程中!由于突变或品种间杂交产
生的
AW[
!如波里马"
@:8/67
#胞质不育系"
@:8
#(陕
!4
胞质不育系"
0<771!4
#和甘蓝型油菜胞质不育
系"
?7
Z
#等&另一类是通过种属间远缘杂交或原生
质体融合!由核置换而引起的
AW[
!如萝卜胞质不
育系"
F
9
J
#等)$*
磷酸甘油酸激酶 "
Z
<:0
Z
<:
9
8
M
2SU73S]/170S
!
@DR
#是糖酵解的关键酶!也是每种生物得以生存
的必需酶!该酶的缺乏可引起生物体代谢等功能的
紊乱
@DR
是一个单体的(高度柔曲性的糖酵解
酶!主要由
!
个球形的结构域构成!在与底物结合的
过程中发生构相改变!从而产生催化效应糖酵解
是
@DR
的主要功能!它催化
#
!
%)
二磷酸甘油酸"
#
!
%)Y/
Z
<:0
Z
<:
9
8
M
2SU73S
#转变成
%)
磷酸甘油酸 "
%)
Z
<:0
Z
<:
9
8
M
2SU73S%)@D
#!此过程消耗
#
分子
4>@
!
产生
#
分子
4K@
!逆反应则形成
#
分子
4>@
)
*
*

本课题组以甘蓝型油菜雄性不育系
"(4
"波里
马胞质不育系!简称
@:8/67AW[
#和保持系
"(=
的
叶片和花蕾为材料进行
[>[)@4D5
!对差异条带进
行质谱分析!分析结果表明差异条带为
@DR
酶)+*
本研究在对拟南芥
!"#
基因家族进行生物信息学
分析的基础上!利用
?A=L
数据库中甘蓝型油菜
5[K
数据库信息!通过电子克隆的方法拼接获得
%
个甘蓝型油菜
!"#
基因!分别设计特异性引物!以
甘蓝型油菜雄性不育系
"(4
和保持系
"(=
的
2>)
?4
为模板!克隆得到
$%!"#
基因的全长
2>?4
序列并采用实时荧光定量
@AB
技术对不同组织
中
$%!"#
基因进行表达分析!以期能够揭示雄性
不育与
!"#
基因之间的关联!旨在为雄性不育的
分子机理研究奠定基础
#
!
材料和方法
8,8
!
材
!
料
甘蓝型油菜雄性不育系
"(4
和保持系
"(=
取
自于重庆师范大学试验田
8,9
!
方
!
法
8:9:8
!
%/123
基因的克隆
!
以拟南芥
!"#
基因
作为参照从油菜
5[K
数据库中比对出
5[K
序列!
用
O70SU
9
S1
软件对
5[K
数据进行拼接!获得甘蓝
型油菜
!"#
基因"
$%!"#
#全长分别设计
$%1
!"#
基因引物
$%!"##^
与
$%!"##B
(
$%1
!"#!^
与
$%!"#!B
(
$%!"#%^
与
$%!"#%B
"表
#
#!进行目标基因全长
2>?4
的克隆
@AB
引
物由英潍捷基有限公司合成
采用
KU/;:8
法分别抽提甘蓝型油菜雄性不育
系
"(4
和保持系
"(=
叶片的总
B?4
!并逆转录为
2>?4
作为模板进行
@AB
扩增
@AB
反应体系为
#"_@AB=JVVSU
"含
W
9
!`
#
!,"
"
O
!
Y?K@0
"
!,*
66:8
%
O
#
,"
"
O
!合成的
2>?4",*
"
O
!引物"
#"
"
6:8
%
O
#
",*
"
O
!
2(
3
酶"
*E
%
"
O
#
",#
"
O
(
YYH
!
F
补充至
!"
"
O
&
@AB
反应程序为
($a
预变性
*6/1
&
然后按照
($a
变性
%"0
!
$!
#
*-a
"
2
6
#退火
%"0
!
-!a
延伸
#6/1
进行
%"
个循环&最后
-!a
延伸
#"
6/1
&用
#b
琼脂糖凝胶电泳检测
@AB
产物!目的条
带经胶回收(纯化后连接至
@D56)K
载体上!热激
法转化大肠杆菌
>H*
$
!选取阳性克隆送往上海英
潍捷基有限公司测序测序结果利用
?A=L
网站的
=O4[K
和软件
A8J0378N#,&#
进行比对
8,9,9
!
生物信息学分析
!
将得到的
$%!"#
基因
氨基酸序列应用分析软件
@U:3@7U76
"
<33
Z
$%%
\\\,
SP
Z
70
M
,:U
9
%
3::80
%
Z
U:3
Z
7U76,<368
#预测其分子量(
表
8
!
所用引物序列
K7T8S#
!
@U/6SU0S
Q
JS12S0J0SY/13Z
SU/6S13
引物名称
@U/6SU176S
引物序列
@U/6SU0S
Q
JS12S
说明
5P
Z
87173/:1
=1@DR#^
=1@DR#B
4DAKKA4KA44D4DAD4KA4A4AAD
D4ADD4KDD4KDDD4AKDD4
$%!"##2>?4
全长扩增
46
Z
8/V/273/:1:VVJ8)8S1
9
3<2>?4:V$%!"##
=1@DR!^
=1@DR!B
KKK4AK4KDDAD4AD44D4D
44D4KKKAKA44DADKADKA
$%!"#!2>?4
全长扩增
46
Z
8/V/273/:1:VVJ8)8S1
9
3<2>?4:V$%!"#!
=1@DR%^
=1@DR%B
A4KAK4AK4KDDAD4AD44D
4WDADKADKAB4D4DAR4DD
$%!"#%2>?4
全长扩增
46
Z
8/V/273/:1:VVJ8)8S1
9
3<2>?4:V$%!"#%
=1@DR#)^
=1@DR#)B
DDAD4KKDAK44K444AKDDAD
KA4KA44D4DAD4KA4A4AAD
$%!"##
实时定量荧光
@AB
BS78)3/6S@AB:V$%!"##
=1@DR!)^
=1@DR!)B
A4AA4AAD4DA44D4DD4KD
DAKDKDDA444KAAA44D44
$%!"#!
实时定量荧光
@AB
BS78)3/6S@AB:V$%!"#!
=1@DR%)^
=1@DR%)B
D44A4DADDA4AD44KAAK
DD44AKKKD44DD44DADD4K
$%!"#%
实时定量荧光
@AB
BS78)3/6S@AB:V$%!"#%
%
)723/1^
%
)723/1B
4AD4DA4DD4D4KDD4D4AK
A4AA4AKD4DA4AD4KDKK4
实时定量荧光
@AB
内参基因
K9
S1S:VUS78)3/6S@AB
(&#!
##
期
!!!!!!!!!!!!!
郭
!
楠!等$甘蓝型油菜
!"#
基因的克隆与表达分析
表
9
!
;
个
%/123
基因氨基酸序列特征分析
K7T8S!
!
KM
0/0:V76/1:72/Y0S
Q
JS12S0:V39
S1S0/1$(..*/(%(
-
0.
基因
DS1S
A>[
长度
A>[8S1
9
3<
%
T
Z
氨基酸数目
?:,:V76/1:
72/Y0
%
77
分子量
W:8S2J87U
\S/
9
<3
%
]>
等电点
L0:S8S3U/2
Z
:/13
带负电的氨基酸数
?:,:V1S
9
73/XS8
M
2<7U
9
SY76/1:72/Y0
带正电的氨基酸数
?:,:V
Z
:0/3/XS8
M
2<7U
9
SY76/1:72/Y0
不稳定系数
L1037T/8/3
M
%
/1YSP
$%!"## %!# #"+ #",-# $,!- + #* !!,-!
$%!"#! #!"+ $"# $!,!% *,*& $* *# !$,$+
$%!"#% #!"+ $"# $!,#- *,*& $$ *" !*,*+
等电点(氨基酸数目等基本理化参数采用在线分
析软件
W5W5
"
<33
Z
$%%
6S6S,1T2U,1S3
%
6S6S$)#
%
2
9
/)T/1
%
6S6S,2
9
/
#对
$%!"#
基因的氨基酸序列进
行保守基序分析)-*使用
A8J0378N#,&#
将
$%1
!"#
基因和所编码的氨基酸与不同植物的氨基酸
序列以及对应的
A>[
进行比对使用
=/:5Y/3
软件
对
$%!"#
基因氨基酸进行多序列比对!参数为默
认值!采用邻接法"
?S/
9
9
WS3<:Y
#构建
$%!"#
基因的系统进化树)&*!借助
W5D4
软件)(*
分析结果
8:9:;
!
实时荧光定量
<$=
反应和基因表达分析
!
采用
KU/;:8
法分别抽提甘蓝型油菜雄性不育系
"(4
和保持系
"(=
根(茎(叶(花蕾总
B?4
采用微量分
光光度计和
#b
琼脂糖凝胶检测
B?4
浓度和质量
取
!
"
9
总
B?4
用于
2>?4
第一链的合成"具体方
法参见
K7R7B7
相关试剂盒说明书#
根据
$%!"#
基因测序信息设计定量
BK)@AB
引物
$%!"##)^
与
$%!"##)B
(
$%!"#!)^
与
$%!"#!)B
(
$%!"#%)^
与
$%!"#%)B
"表
#
#!采用
[c=BDUSS1L
染料法)#")#!*!分析
$%!"#
基因在甘
蓝型油菜雄性不育系
"(4
和保持系
"(=
中的表达
差异以
%
)723/1
为参照基因)#%*设计引物"表
#
#
利用
=/:)B7Y/C*
实时荧光定量
@AB
仪!采用
!

&&
AK法进行数据的相对定量分析)#$*
@AB
反应
程序为
(*a
预变性
%"0
&
(*a
变性
#"0
!
+"a
退
火
%"0
"实时荧光采集#!
$"
个循环&反应结束后再
缓慢升温至
(*a
!记录荧光信号的变化!得出扩增
产物的溶解曲线每个样品
%
个重复!取其平均值
!
!
结果与分析
9:8
!
%/123
基因的克隆与生物信息学分析
利用设计合成的
$%!"#
的
%
对特异性引物!
分别以甘蓝型油菜雄性不育系
"(4
和保持系
"(=
的
2>?4
为模板!扩增出长度分别为
",%
(
#,!
(
#,!
]T
左右的片段 !其长度与预期的基本一致测序
结果经
?A=L
比对分析表明!克隆得到的
%
个
$%1
!"#
基因序列为目的基因
得到的
$%!"#
氨基酸序列应用在线分析软件
@U:3@7U76
预测其等电点(蛋白质分子量以及氨基
酸数目等基本理化参数结果"表
!
#表明!
=1@DR
的氨基酸长度介于
#"+
#
$"#77
之间!蛋白质分子
量介于
#",-#
#
$!,!%]>
之间
$%!"#
等电点范
围为
$,!-
#
*,*&
!
=1@DR
蛋白质不稳定系数均在
%"
以下!表明它们均是稳定的
%
个
$%!"#
的氨
基酸保守基序分析结果"图
#
#显示!
$%!"#!
和
$%!"#%
均含有
6:3/V#
(
6:3/V!
和
6:3/V%
!排列顺
序依次为
6:3/V%)6:3/V#)6:3/V!
!这是植物
@DR
蛋白的特性
$%!"##
含有
6:3/V#
和
6:3/V!
!而
6:3/V%
丢失!也许它已成为假基因!失去生物功能
9:9
!
%/123
基因的系统进化分析
$%!"#
基因与拟南芥(玉米(本氏烟草(向日
葵(苜蓿(水稻和小麦的
!"#
基因的氨基酸序列均
表现出高度同源"图
!
#与其它已知的
!"#
的氨
基酸相比!
$%!"#
与白菜型油菜
!"#
关系更加密
切虽然
!"#
的氨基酸序列在整个进化中已高度
保守!但
$%!"#
氨基酸序列与其它双子叶植物
!"#
质体和细胞质亚型略有不同在双子叶植物
中!白菜型油菜(甘蓝型油菜和拟南芥
!"#
基因的
氨基酸序列的一致性非常高!而单子叶植物"如玉米
和水稻#!与双子叶植物相比
!"#
基因的氨基酸序
列的差异较大"图
%
#!碱基缺失(转换和颠换可能是
基因出现差异并导致进化的重要原因
9:;
!
%/123
基因表达分析
分别以甘蓝型油菜雄性不育系
"(4
和保持系
"(=
的根(茎(叶(花蕾的总
B?4
为模板!以
%
)723/1
为参照基因通过
Q
BK)@AB
研究
$%!"##
(
$%)
图
#
!
$%!"#
基因的氨基酸保守基序分析
/^
9
,#
!
46/1:72/Y2:10SUXSY6:3/V
7178
M
0/0:V$%!"#
9
S1S0
"(#!
西
!
北
!
植
!
物
!
学
!
报
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
%$
卷
!"#!
和
$%!"#%
在不育系
"(4
和保持系
"(=
根(茎(叶(花蕾中的表达情况!发现
$%!"#
基因在
"(=
和
"(4
不同组织中均有表达!属组成型表达!
但
$%!"#
基因主要在叶(花蕾和茎中表达!其次是
在根中
%
个
$%!"#
基因在
"(4
和
"(=
花蕾和茎
中的表达量均比较高且相对稳定!在叶中的表达量
不同基因之间差异较大!但品系间差异不大同时
本研究也比较了
$%!"#
基因在甘蓝型油菜雄性不
图
!
!
$%!"#
与其它植物
!"#
氨基酸序列多重比对结果
黑色表示氨基酸序列一致性为
#""b
&灰色表示氨基酸序列一致性为
-*b
#
((b
&
=U7,
白菜型油菜&
=1,
甘蓝型油菜&
4K,
拟南芥&
4=,
水稻&
4^ ,
玉米&
5W,
乌拉尔图小麦&
N@,
苜蓿&
4>,
向日葵&
C,
烟草&图
%
同
/^
9
,!
!
48/
9
16S13:V76/1:72/Y0S
Q
JS12S0:V$%!"#\/3<:3Z
8713!"#0S
Q
JS12S0
=872]71Y
9
U7
M
0<:\3M
:V76/1:72/Y0S
Q
JS12S0\SUS#""b71Y-*b3:((b
&
=U7,$(..*/((
-
4
&
=1,$(..*/(%(
-
0.
&
4K,&()*+,
-
.*.56(7*(%(
&
4=,8
9
:(.(5*;(
&
4^ ,<4(=(
9
.
&
5W,2*5*/0=0(50
&
N@,>4+*/(
?
,50%/(507(
&
4>,@47*(%560.(%%00.
&
C,A*/,5*(%()4%56(=*(%(
&
K9
,%
#(#!
##
期
!!!!!!!!!!!!!
郭
!
楠!等$甘蓝型油菜
!"#
基因的克隆与表达分析
图
%
!
植物
!"#
基因的系统发育比较
/^
9
,%
!
@<
M
8:
9
S1S3/22:6
Z
7U/0:1:V!"#
9
S1S0VU:6
Z
87130
图
$
!
$%!"#
基因在
"(=
和
"(4
不同组织中的表达差异
4,$%!"##
基因&
=,$%!"#!
基因&
A,$%!"#%
基因
/^
9
,$
!
5P
Z
US00/:1Y/VVSUS12S0:V$%!"#
9
S1S0
/1Y/VVSUS13:U
9
710:V"(=71Y"(4
4,$%!"##
&
=,$%!"#!
&
A,$%!"#%
育系
"(4
和保持系
"(=
不同组织中的表达差异"图
$
#除茎中的
$%!"#%
外!
$%!"#
其它基因在
根(茎(叶中的表达均表现为
"(4
高于
"(=
&而在花
蕾中均为
"(=
高于
"(4
!
$%!"##
和
$%!"#%
在
"(=
中的表达量是
"(4
中的
!
倍以上
%
!
讨
!
论
;:8
!
%/123
基因的克隆与生物信息学分析
!"#
同工酶在结构和功能上非常相似!目前!
人类
!"##
和
!"#!
同工酶已经确定!它们的特征
在于独特的组织定位和由
!
个不同的基因编码)#**
在高等植物中!两类
@DR
被定位于细胞溶质
"
2@DR
#和质体"
Z
@DR
#中!在糖酵解中!
2@DR
的主
要功能是底物水平的
4K@
产生!
Z
@DR
主要参与光
合碳还原和叶绿体糖酵解一些植物的
!"#
基因
已被确定且其序列高度同源据报道!在烟草叶片
中!
"#
基因编码的同工酶在发育时期不同组织中
差异表达!并显示
!"#
基因在光可调节的体内表
达)#+*据推测!植物
!"#
可能参与蔗糖和淀粉间
碳分配的调节等过程)#-*向日葵胚胎发育阶段的
脂质合成时期
!"#
同工酶可导致含油量增加)#&*
此外!
!"#
酶和烯醇化酶可能导致低含油量和向日
葵之间脂肪酸含量的差异)#(*
!"#
同工酶的活性
影响着细胞质和质体中脂肪酸的合成)!"*在转基
因油菜发育种子中参与脂肪酸生物合成和糖酵解的
!"#
基因的表达上调将增加含油量)!#*
目前!关于
!"#
基因在甘蓝型油菜雄性不育
系和保持系的糖酵解及脂肪酸生物合成中的作用还
没有任何报道本研究首次从甘蓝型油菜中克隆了
$%!"##
(
$%!"#!
和
$%!"#%
等
%
个基因!通过
理化性质分析发现油菜
!"#
基因家族的蛋白质等
电点基本上都在
+
左右!这和植株本身所需的
Z
H
值一致!为其进行化学反应提供了保障不同植物
!"#
氨基酸序列的多重比较表明!
!"#
基因在进
化过程中高度保守通过氨基酸保守基序分析发现
$%!"##
的
6:3/V%
缺失!表明植物
@DR
已经在经
历一个快速发散的进化也许它已成为一种假基
因!失去生物学功能)!!*当然!
$%!"##
是否为假
基因!还需进一步的研究来证实
;:9
!
%/123
基因的差异表达分析
本研究发现
$%!"#
基因在不育系
"(4
和保
持系
"(=
的根(茎(叶(花蕾中均有表达!即组成型
!(#!
西
!
北
!
植
!
物
!
学
!
报
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
%$
卷
表达但在根中的表达量特别低!在叶(花蕾和茎中
的表达量相对较高!这与蛋白质电泳结果一致)+*
$%!"##
在
"(=
和
"(4
叶中的表达量均很高!这可
能与光合碳循环在叶绿体基质中进行有关同时!
高等植物
@DR
酶被定位于细胞溶质"
2@DR
#和质
体"
Z
@DR
#中!在糖酵解中!
2@DR
的主要功能是底
物水平的
4K@
的产生!
Z
@DR
主要参与光合碳还原
和叶绿体糖酵解!这与
!"#
同工酶参与脂肪酸合
成中能源的生成和碳的还原的结论一致
除茎中的
$%!"#%
外!
$%!"#
其它基因在
根(茎(叶中的表达量均为
"(4
高于
"(=
!而在花蕾
中!均为
"(=
高于
"(4
!
$%!"##
和
$%!"#%
在
"(=
中的表达量是
"(4
中的
!
倍以上!这可能与雄
性不育系花蕾的败育有关有报道称!蕾期相关基
因的突变最有可能干扰花药和花粉的正常发育!从
而导致不育)!%*!在高等植物中!存在于质体中的
!"#
基因主要参与光合碳还原和叶绿体糖酵解!因
此推测
$%!"#
基因差异表达可能是通过影响花药
的光合作用从而影响油菜花药的发育花粉发育过
程涉及许多特异基因的表达!特定的基因只在特定
时空表达!其表达是否与花粉花药的败育(雄性不育
性的发生相关!该结果与向繤)!$*的研究结果一致!
基本揭示了花药发育过程中涉及的关键代谢过程
$%!"#
基因在保持系
"(=
花蕾中的表达量高于不
育系
"(4
!可能与甘蓝型油菜雄性不育有一定的关
系!但还需要进一步的研究证实
参考文献!
)
#
*
!
GH4?Dd
"张
!
薇#!
cE5c^
"岳渝飞#!
OLEGH=
"刘志斌#!
45(7,[3JY
M
:VY/VVSUS13/78SP
Z
US00/:1:V
9
S1S0US873SY\/3<=U700/272
M
3:)
Z
8706/2678S03SU/8S
)
I
*
,B,0%(7,
C
D*/60(%E%*;4.*5
9
"四川大学学报#!
"#"
!
>?
"
%
#$
+$$
"
/1A#
,
)
!
*
!
O5eL?D[A[
!
[R=BFd?AD
!
=B5??LAR54,W:8S2J87UT/:8:
9M
:V
Z
87136/3:2<:1YU/78
)
I
*
,F477
!
#(&(
!
@A
"
!
#$
#-#,
)
%
*
!
WLD?FEW4H
!
eLBW4?L[[
!
=BLCE5KW,W/3:2<:1YU/78>?46:Y/V/273/:10700:2/73SY\/3<2
M
3:
Z
8706/2678S03SU/8/3
M
/1U/2S
)
I
*
,
264,G&
--
7G"4%45G
!
#(&-
!
?>
"
*
#$
+++,
)
$
*
!
W4[W
"马三梅#!
d4?D c^
"王永飞#
,@U:
9
US00S0:V03JY
M
:13?48:2J0US873SY3:2
M
3:
Z
8706/2678S03SU/8/3
M
71YUS03:USU
9
S1SV:UVSU3/8/3
M
/1U7
Z
S0SSY
)
I
*
,B,0%(7,
C
!7(%5!6
9
.*,7,
?9
(%+>,74/07($*,7,
?9
"植物生理与分子生物学学报#!
""*
!
;8
"
!
#$
##(#!*
"
/1A#
,
)
*
*
!
d4K[F? HA
!
d4OR5B ?@A
!
45(7,[S
Q
JS12S71Y03UJ23JUS:V
M
S703
Z
<:0
Z
<:
9
8
M
2SU73S]/170S
)
I
*
,H=),B,0%(7
!
#(&!
!
8
"
#!
#$
#+%*#+$",
)
+
*
!
赵敬会
,
油菜雄性不育系
"(4
生理生化特征与
!"#
基因克隆)
>
*
,
重庆$重庆师范大学!
"#%,
)
-
*
!
=4LO5cKO
!
=F>5?W
!
45(7,W5W5[ELK5
$
K::80V:U6:3/VY/02:XSU
M
71Y0S7U29
)
I
*
,A0/74*/&/*+.I4.4(/6
!
""(
!
;?
"
!
#$
!"!!"&,
)
&
*
!
O4BRL?W4
!
=O4AR[HL5O>[D
!
=BFd??@
!
45(7,A8J0378d71YA8J0378NXSU0/:1!,"
)
I
*
,$*,*%
C
,=(5*/.
!
""-
!
9;
"
!#
#$
!($-!($&,
)
(
*
!
K4WEB4R
!
>E>O5cI
!
?5LW
!
45(7,W:8S2J87USX:8J3/:17U
M9
S1S3/207178
M
0/0
"
W5D4
#
0:V3\7USXSU0/:1$,"
)
I
*
,>,74/07($*,7,
?9
(%+H;,705*,%
!
""-
!
9>
"
&
#$
#*(+#*((,
)
#"
*
!
GH4FHc
"赵焕英#!
=4FI^
"包金凤#
,KZ
U/12/
Z
8S71Y7YX712S0US0S7U2<:V3Q
J713/373/XSUS78)3/6S@AB
)
I
*
,F6*%4.4B,0%(7,
C
@*.5,/64=*.5
9
(%+F
9
5,/64=*.5
9
"中国组织化学与细胞化学杂志#!
""-
!
8A
"
$
#$
(!$(-
"
/1A#
,
)
##
*
!
c4?Dc[H
"杨怡姝#!
[E?N?
"孙晓娜#!
d4?DNO
"王小利#!
45(7,5P
Z
SU/6S13783S729
:VUS78)3/6SV8J:US02S13
Q
J713/373/XS@AB
)
I
*
,I4.4(/6(%+HJ
-
7,(5*,%*%K(),(5,
9
"实验室研究与探索#!
"##
!
;B
"
-
#$
#*#(
"
/1A#
,
)
#!
*
!
GH4?DI
"张
!
軻#
,KZ
U7SX/J603JY
M
:V
Q
J713/373/XSUS78)3/6S@AB
)
I
*
,24%+.*%K*
C
4D/*4%/4.
"生命科学趋势#!
""%
!
89
"
#
#$
#!&
"
/1A#
,
)
#%
*
!
GH4FdI
"赵文静#!
NEI
"徐
!
洁#!
=4FCH
"包秋华#!
45(7,[S8S23/:1:VUSVSUS12S
9
S1S0V:UUS78)3/6S
Q
J713/373/XS@AB
)
I
*
,>*/,)*1
,7,
?9
F6*%(
"微生物学通报#!
"#"
!
;?
"
#!
#$
#&!*#&!(
"
/1A#
,
)
#$
*
!
OLe4RRI
!
[AHWLKKD5?K>,4178
M
0/0:VUS873/XS
9
S1SSP
Z
US00/:1Y737J0/1
9
US78)3/6S
Q
J713/373/XS@AB71Y3
&&
AK
6S3<:Y
)
I
*
,
>456,+.
!
""#
!
9@
"
$
#$
"!$"&,
)
#*
*
!
WAA4BB5cIB
!
KHFW4[R,HJ6713S03/0)0
Z
S2/V/2!"#
9
S1S872]0/13U:1071Y
Z
:00S00S02<7U723SU/03/20:V7
Z
U:2S00SY
9
S1S
)
I
*
GA(1
504
!
#(&-
!
%!+
$
*"#*"*,
)
#+
*
!
=BL?DOF5>H
!
B4F[R
!
>c5BK4
!
45(7,>/VVSUS13/78
9
S1SSP
Z
US00/:1:V2<8:U:
Z
870371Y2
M
3:0:8/2
Z
<:0
Z
<:
9
8
M
2SU73S]/170S/13:T72)
2:
)
I
*
,!7(%5>,74/07($*,7,
?9
!
#((+
!
;B
"
%
#$
+%-+$",
)
#-
*
!
[H4H?
!
=B4>=55BId,KZ
8703/271Y2
M
3:0:8/2/0:S1;
M
6S0:V
Z
<:0
Z
<:
9
8
M
2SU73S]/170S/17U71
9
S:V
Z
87130
Z
S)
2/S0
)
I
*
,!7(%5(
!
#(($
!
8C;
"
!
#$
!%!!%-,
)
#&
*
!
KBF?AF[F)@F?A5W4
!
RBED5B?I
!
B4KAOL^ 5^BD
!
45(7,A<7U723SU/;73/:1:V
9
8
M
2:8
M
3/2/1/3/786S37T:8/3S071YS1;
M
6S723/X/)
3/S0/1YSXS8:
Z
/1
9
0J1V8:\SU
"
@47*(%560.(%%00.O,
#
0SSY0
)
I
*
,!6
9
5,/64=*.5
9
!
""(
!
?B
"
(
#$
###-##!!,
)
#(
*
!
KBF?AF[F)@F?A5W 4
!
D4BA5[B
!
45(7,D8
M
2:8
M
3/2S1;
M
673/2723/X/3/S0/1YSXS8:
Z
/1
9
0SSY0/1X:8XSY/130371Y7UY71Y8:\:/82:13S130J1V8:\SU0
"
@47*(%560.(%%00.O,
#)
I
*
,!7(%5!6
9
.*,7,
?9
(%+$*,/64=*.5
9
!
"#"
!
>D
"
#!
#$
(+#(+*,
)
!"
*
!
4OF?[F4@
!
DF^ W^4?^>
!
FHOBFDD5I=
!
45(7,A7UT:12:1XSU0/:1SVV/2/S12
M
71Y2S13U786S37T:8/2V8JPS0/1YSXS8:
Z
/1
9
0J1V8:\)
SU
"
@47*(%560.(%%00.O,
#
S6TU
M
:0
)
I
*
G!7(%5B,0%(7
!
""-
!
@9
"
!
#$
!(+%"&,
)
!#
*
!
K4?HO
!
c4?DNH
!
GH4?D^N
!
45(7,51<712SY0SSY:/8
Z
U:YJ23/:1/1271:87T
M
2:1Y/3/:178SP
Z
US00/:1:V$(..*/(%(
-
0.O54^ c
AFKcO5>F?#71YO5A#)OLR5/1YSXS8:
Z
/1
9
0SSY0
)
I
*
,!7(%5!6
9
.*,7,
?9
!
"##
!
8@A
"
%
#$
#*--#*&&,
)
!!
*
!
KBF?AF[F)@F?A5W 4
!
BLeF4OI
!
e5?5D4[)A4O5BF? W
!
45(7,W:8S2J87U28:1/1
9
71YT/:2Z
<:0
Z
<:
9
8
M
2SU73S]/170S/0:V:U60VU:6YSXS8:
Z
/1
9
0J1V8:\SU
"
@47*(%560.(%%00.O,
#
0SSY0
)
I
*
,!6
9
5,/64=*.5
9
!
"#!
!
-(
$
!-%&,
)
!%
*
!
dEGH W
"吴智明#!
HERO
"胡开林#!
CL4F4W
"乔爱民#
,>/VVSUS13/78SP
Z
US00/:17178
M
0/0/1V8:\SUTJY0:VAW[71Y/3067/137/1SU
8/1S:VF(
-
.*/0=(%%00=O,
)
I
*
,&/5(@,5*/0750(4D*%*/(
"园艺学报#!
""(
!
;A
"
(
#$
#%###%#+
"
/1A#
,
)
!$
*
!
向
!
繤
,
白菜同核异质雄性不育系与其保持系生物学差异比较及相关差异表达基因克隆)
>
*
,
杭州$浙江大学!
""&,
%(#!
##
期
!!!!!!!!!!!!!
郭
!
楠!等$甘蓝型油菜
!"#
基因的克隆与表达分析