全 文 ：书西北植物学报!
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文章编号$
#""")*"!$
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#
"%)"&!!)"&
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$
#"+(&"&
%
,
+-../+#""")*"!$+!"#$+"%+"&!!
收稿日期$
!"#*)"()#*
&修改稿收到日期$
!"#*)#!)#*
基金项目$陕西省教育厅项目"
012$"0
!
"012$"3
#
作者简介$冯光惠"
#3((
#!男!硕士!副教授!主要从事植物组织培养与脱毒技术分子生物学研究(
4)56-7
$
8
9
:;-+33
!
#!&+<=5
携病毒马铃薯茎尖分化成苗与脱毒率检测
冯光惠!杜虎平!李夏隆!亢福仁
"榆林学院 生命科学学院!陕西榆林
(#3"""
#
摘
!
要$以携带病毒的 )夏波蒂*马铃薯无菌苗为材料!
%0>
%
*:
热处理
*
周!剥离带
#
个叶原基的茎尖!接种至不
同浓度激素组合的
!*
种
?@
固体培养基上!
!>
%
#&:
培养
%"A
后统计茎尖的愈伤组织诱导率和分化成苗率&
BC)DEB
检测茎尖再生苗
%
种病毒"
DFG

DFH

DIBF
#和纺锤块茎类病毒"
D@CFA
#的脱毒率(结果表明$茎尖分
化成苗最适培养基为
?@J#+"5
9
%
IKCJ"+!5
9
%
ILMMJ!+"5
9
%
INM
%
!愈伤组织诱导率为
(&+!$O
!分化成
苗率为
!&+!$O
&再生苗
%
种病毒
DFG

DFH
和
DIBF
的脱毒率分别为
&3+*O

3#+(O
和
#""O
!纺锤块茎类病毒
D@CFA
脱毒率仅为
0+%O
!二次茎尖剥离后脱毒率增加到
!"+0O
(
关键词$夏波蒂&茎尖&分化成苗&
BC)DEB
中图分类号$
P0#%+#
J
!
&
P(03
文献标志码$
M
$%&#(%)*#++%&%,(#-(#",.%%!/#,
0
-,!*%("1#+#2-(#",
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0
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9
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U
-/
9
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9
!
2MLNQ;WX/
"
E=7X
9
X=8I-8X@<-X/!
H;7-/S/-YXW.-Z
[
!
H;7-/
!
@:66/\-(#3"""
!
E:-/6
#
78(&-2(
$
C6]-/
9
Z:X6.X
U
Z-<.XXA7-/
9
=8
)
@:X
U
=A
[
*
U
=Z6Z= :^-<:_W-/
9
Y-W;.6.56ZXW-67.
!
%0>
%
*::X6Z
ZWX6Z5X/Z8=W* X^X].
!
.ZW-
UU
-/
9
-^Z:=/X7X68
U
W-5=WA-6=8
U
=Z6Z=5XW-.ZX5
!
-/=<;76ZXAZ=!*]-/A.=8?@
.=7-A5XA-;56AAZ=A-88XWX/Z:=W5=/X<=5_-/6Z-=/.
!
.Z6Z-.Z-<67Z:X<67;.-/A;A-88XWX/Z-6Z-=/.XXA7-/
9
W6ZX68ZXW<;7Z;W-/
9
%"A6
[
._
[
!!>
%
#&:
&
BC)DEBAXZX5XW-.ZX5WX
9
X/XW6Z-=/=8Z:WXX]-/A.=8
U
=Z6Z=Y-W;.X.
"
DFG
!
DFH
!
DIBF
#
6/A
U
=Z6Z=.
U
-/A7XZ;_XWY-W=-A
"
D@CFA
#
+C:XWX.;7Z..:=^ XAZ:6ZZ:X_X.Z5XW-.ZX5A-88XWX/Z-6Z-=/5XA-;5 6^.?@J#+"5
9
%
IKCJ"+!
5
9
%
ILMMJ!+"5
9
%
INM
%
!
Z:X<67;.-/A;!
A-88XWX/Z-6Z-=/.XXA7-/
9
W6ZX 6^.
!&+!$O
&
Z:XW6ZX=8AXZ=\-8-<6Z-=/=8WX
9
X/XW6ZXA
U
76/Z7XZ.Z:WXX
U
=Z6Z=Y-W;.DFG
!
DFH6/ADIBF X^WX
&3+*O
!
3#+(O6/A#""O
!
WX.
U
X[
+C:XY-W;.)8WXXW6ZX=8
U
=Z6Z=.
U
-/A7XZ;_XWY-W=-A 6^.0+%O6/AZ:X
.X<=/A6W
[
.:==ZZ-
U
Y-W;.)8WXXW6ZX 6^.!"+0O+
9%
:
;"&!
$
@:X
U
=A
[
&
5XW-.ZX5
&
A-88XWX/Z-6Z-=/.XXA7-/
9
&
BC)DEB
!!
脱除马铃薯病毒和纺锤块茎类病毒"以下简称
类病毒#主要采用茎尖组织培养法!并结合热处
理+#,低温疗法+!,和病毒唑法+%,等提高脱毒效果(
其中!热处理结合茎尖组织培养法是一种应用较广
的马铃薯脱毒方法!在葡萄草莓和苹果等植物上也
有报道(但是!由于不用植物或同一植物不同品种
基因型和生理特性的差异!茎尖分化成苗的难易程
度也不一样(笔者以盖琼辉等+*,
V
`
_67T
等+$,研究
的马铃薯茎尖分化成苗培养基作为参考!在同一培
养基上对)克新
#
号*)夏波蒂*)费乌瑞它*)陇薯
%号*)布尔班克*)青薯
3
号*)早大白*)冀张薯
0
号*等不同品种的茎尖培养后发现!)夏波蒂*马铃
薯的茎尖分化成苗最难!成苗率仅为
$O
"
#"O
!茎
尖培养
%"A
后仍以形成疏松的愈伤组织为主!成苗
所需时间相对其他马铃薯品种也最长(近年来!王
娟等+&,通过组织培养研究了不同茎尖大小不同浓
度和配比的细胞分裂素和生长素对脱毒效果的影
响&于仙萍等+(,研究了采用不同处理方法对
L00
和
R$($
马铃薯茎尖分化成苗率的影响&蒋瑜等+0,筛选
了
a#%)&
马铃薯茎尖脱毒的最佳培养基及影响因
素&
M7X].6/A6W
等+3,
?;Z6.-5
等+#",分别研究了马
铃薯茎尖分化成苗的培养基筛选及脱毒过程(但
是!国内外关于)夏波蒂*马铃薯离体再生成苗的文
献报道较少+##)#%,!未见)夏波蒂*马铃薯茎尖分化成
苗及病毒检测的报道(本研究针对)夏波蒂*马铃薯
茎尖分化成苗率低!以热处理结合茎尖剥离脱除病
毒和类病毒为目标!筛选茎尖分化成苗最适宜的培
养基!并通过
BC)DEB
方法检测再生苗病毒和类病
毒的脱毒率!为脱毒苗扩繁和种薯繁育奠定基础(
#
!
材料和方法
<+<
!
材
!
料
采集田间疑似带毒马铃薯植株的块茎!低温休
眠后!室温暗处催芽!消毒后接种在
?@
固体培养基
上培养!筛选成活苗扩繁!从而建立马铃薯无菌苗体
系(用
BC)DEB
方法检测并筛选分别含有
%
种病
毒 "
DFG

DFH

DIBF
#和 纺 锤 块 茎 类 病 毒
"
D@CFA
#的
!
种材料!由本实验室保存(
根据
NX/a6/]
数据库上
DFG

DFH

DIBF
的
ED
基因序列和
D@CFA
全基因组序列!利用软件
DW-5XW$
设计
*
对特异引物"表
#
#(
<+=
!
方
!
法
<+=+<
!
热处理
!
取生长至高约
#
"
!<5
的马铃薯
无菌苗!在植物培养箱内升温
#>
%
A
驯化
!"A
左
右!然后
%0>
%
*:

!!>
%
#!:
光照培养!光照强度
为
%"""7!
#0>
%
0:
暗培养!变温热处理
*
周以钝
化病毒(
<+=+=
!
培养基组成
!
以
?@
为基本培养基!添加不
同质量浓度配比的植物生长调节剂!组成
!*
种培养
基"表
!
#!蔗糖
%"
9
%
I
!卡拉胶
$
9
%
I
!
U
T$+0
(培
养基及不同植物生长调节剂所含药品!均购自北京
表
=
!
不同激素组合的培养基
C6_7X!
!
C:X<;7Z;WX5XA-6 -^Z:A-88XWX/Z
:=W5=/X<=5_-/6Z-=/.
处理
CWX6Z5X/Z
激素组合
T=W5=/X<=5_-/6Z-=/
%"
5
9
%
I
#
&)aM KC LMM VMM
NM
%
aL"# #+" "+! "+!
aL"! !+" "+! "+!
aL"% $+" "+! "+!
aL"* #+" "+! !+"
aL"$ !+" "+! !+"
aL"& $+" "+! !+"
aV"# #+" "+$ "+!
aV"! !+" "+$ "+!
aV"% $+" "+$ "+!
aV"* #+" "+$ !+"
aV"$ !+" "+$ !+"
aV"& $+" "+$ !+"
KL"# #+" "+! "+!
KL"! !+" "+! "+!
KL"% $+" "+! "+!
KL"* #+" "+! !+"
KL"$ !+" "+! !+"
KL"& $+" "+! !+"
KV"# #+" "+$ "+!
KV"! !+" "+$ "+!
KV"% $+" "+$ "+!
KV"* #+" "+$ !+"
KV"$ !+" "+$ !+"
KV"& $+" "+$ !+"
表
<
!
>?@3A>
检测所用引物
C6_7X#
!
C:X
U
W-5XW
U
6-W.8=WAXZX马铃薯病毒和类病毒
D=Z6Z=Y-W;.6/AY-W=-A
引物序列
DW-5XW.X
`
;X/"
$b
"
%b
# 序列来源
@X
`
;X/病毒
F-W;.G
"
DFG
#
DFG)Q
$
MEMNNEEMEMNNNCEMMECME
DFG)B
$
EMCECMNNECNNEMMMNCENC
ED
基因
ED
9
X/X
病毒
F-W;.H
"
DFH
#
DFH)Q
$
NEEMMECNCNMCNMMCNNNE
DFH)B
$
CNCMECNMCNEEMEENCEEM
ED
基因
ED
9
X/X
病毒
IX68W=7Y-W;.
"
DIBF
#
DIBF)Q
$
ENENECMMEMNMNCCEMNEE
DIBF)B
$
NEMMCNNNNNCEEMMECEMC
ED
基因
ED
9
X/X
纺锤块茎类病毒
@
U
-/A7XZ;_XWY-W=-A
"
D@CFA
#
D@CFA)Q
$
NMCEEEENNNNMMMEECNNMNE
D@CFA)B
$
NMCEEECNMMNENECEECEENMN
全长基因
4/Z-WX
9
X/=5X
%!&
%
期
!!!!!!!!!!!!!!
冯光惠!等$携病毒马铃薯茎尖分化成苗与脱毒率检测
康贝斯生物科技有限公司(
<+=+B
!
茎尖剥离与接种
!
剪取热处理后长势较好
的无菌苗"部分扩繁无菌苗因耐热差而长势弱或死
亡#!以注射器针代替解剖针!在
*"
倍体视显微镜下
进行茎尖剥离(因剥离茎尖越大!成活率越高!但脱
毒率低!为提高再生苗的脱毒率!试验全部剥离带
#
个叶原基的茎尖!茎尖大小约
"+#
"
"+!55
!壮苗
茎尖稍大!弱细苗茎尖稍小(培养温度为
!!>
!光
照时间为
#&:
%
A
!光照强度为
%"""7(
为降低污染率!每试管只接种
#
个茎尖!每处理
培养基接种
0"
个茎尖(
#"A
后观察并记录茎尖生
长情况!
%"A
后统计茎尖愈伤组织诱导率和分化成
苗率(
愈伤组织诱导率"
O
#
c
形成愈伤组织数%接种
茎尖个数
d#""O
分化成苗率"
O
#
c
分化成苗数%接种茎尖个数
d#""O
!
>?@3A>
检测
!
为检测马铃薯茎尖剥离再
生苗病毒和类病毒的脱除情况!随机挑选热处理前
携带
%
种病毒"
DFG

DFH

DIBF
#且茎尖剥离分化
后长势良好的再生苗
%&
株!同时挑选热处理前携带
类病毒"
D@CFA
#且茎尖剥离分化后长势良好的再
生苗
!*
株!扩繁
!
代后分别以
BC)DEB
法进行病
毒检测(
CW-e=7
法提取马铃薯再生苗叶片总
BLM
!反转
录合成
!
DEB
分别扩增不同病毒和类病毒的
目的基因片段!
DEB
产物经
#+$O
琼脂糖凝胶电泳
检测(病毒检测的
CW-e=7
试剂购自
-/Y-ZW-
9
X/
公
司!
合成试剂盒
!"
#
RLM
聚合酶
ALCD

琼脂糖等购自北京全式金生物科技有限公司(
DEB
反应体系包含模板
RLM%
#
I
!正向"
Q
#
引物
#
#
I
!反向"
B
#引物
#
#
I
!
#"dDEB_;88XW$
#
I
!
+$55=7
%
IALCD.*
#
I
!
!"
#
RLM
聚合酶
#
#
I
!加
AAT
!
f
至
$"
#
I
(
DEB
反应程序为
3*>
预变性
$5-/
&
3*>
变
性
%".
!
DFG

D@CFA$">
"
DFH

DIBF$3>
#退
火
%".
!
(!>
延伸
%".
!
%$
个循环&最后
(!>
延伸
#"5-/
(
预期
DFG

DFH

DIBF
的
ED
基因序列和
D@CFA
全基因组序列的扩增片段大小分别为
&!"

*""

%%&
和
!$#_
U
(引物由南京金斯瑞生物科技有
限公司合成!用灭菌
C4
"
U
T0+"
#稀释至浓度为
#"
#
5=7
%
I
(
!
!
结果与分析
=C<
!
E@47
与
F77
及
G77
激素组合对马铃薯茎尖
分化成苗的影响
在细胞分裂素
&)aM
和生长素
LMM
的组合中
"图
#
#!处理
aL"&
的茎尖愈伤组织诱导率最低!为
(0+($O
!分化成苗率最高!为
##+!$O
&
aL"#
茎尖
愈伤组织诱导率最高!达
3!+$O
!但分化成苗率最
低!仅
&+!$O
(当
LMM
和
NM
%
浓度一定时!
&)aM
浓度"
#+"
"
$+"5
9
%
I
#与茎尖分化成苗成正相关!
而与愈伤组织诱导成负相关&当
&)aM
和
LMM
浓度
一定时!低浓度"
+!5
9
%
I
#较高浓度"
!+"5
9
%
I
#
NM
%
能提高愈伤组织诱导率!而分化成苗率则
降低(
在
&)aM
与
VMM
组合的培养基中"图
!
#!处理
aV"&
茎尖愈伤组织诱导率最低!为
(#+!$O
!而分化
成苗率最高!为
#$O
&
aV"#
茎尖愈伤组织诱导率最
高!为
0"+"O
!而分化成苗率则较低!仅
(+$O
(从
图
#

!
中发现!在
LMM
%
VMM
和
NM
%
浓度一定时!
图
#
!
&)aM
与
LMM
激素组合对马铃薯茎尖分化成苗的影响
Q-
9
+#
!
C:X-/87;X/U
=Z6Z=5XW-.ZX5A-88XWX/Z-6Z-=/
.XXA7-/
9
_
[
&)aM6/ALMM:=W5=/X<=5_-/6Z-=/.
图
!
!
&)aM
与
VMM
激素组合对马铃薯茎尖分化成苗的影响
Q-
9
+!
!
C:X-/87;X/U
=Z6Z=5XW-.ZX5A-88XWX/Z-6Z-=/
.XXA7-/
9
_
[
&)aM6/AVMM:=W5=/X<=5_-/6Z-=/.
*!&
西
!
北
!
植
!
物
!
学
!
报
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
%$
卷
&)aM
浓度"
#+"
"
$+"5
9
%
I
#与茎尖分化成苗成正
相关!而与愈伤组织的诱导成负相关&在
&)aM
和
NM
%
浓度一定时!
VMM
"
"+$5
9
%
I
#较
LMM
"
"+!
5
9
%
I
#组合的培养基!茎尖的愈伤组织诱导率降低!
分化成苗率则提高(
=C=
!
H?
与
F77
及
G77
激素组合对马铃薯茎尖分
化成苗的影响
在
KC
与
LMM
组合的培养基中"图
%
#!茎尖愈
伤组织诱导率最高是
KL"#
处理!最低是
KL"&
!分
别为
((+$O
和
("+"O
!二者差异不明显&
KL"*
培养
基的茎尖分化成苗率最高!为
!&+!$O
!
KL"%
分化
成苗率最低!为
#!+$O
(从图
%
可以看出!当
LMM
和
NM
%
浓度一定时!
KC
浓度"
#+"
"
$+"5
9
%
I
#与
愈伤组织的诱导茎尖分化成苗均成负相关!这与图
#

!
中
&)aM
浓度"
#+"
"
$+"5
9
%
I
#的作用明显不
同(表明
KC
浓度太高会影响茎尖愈伤组织的诱导
和茎尖分化成苗(在
KC
和
LMM
浓度一定时!高浓
度"
!+"5
9
%
I
#较低浓度"
+!5
9
%
I
#
NM
%
的作用
明显!能显著提高茎尖分化成苗率(
在
KC
与
VMM
组合的培养基中"图
*
#!处理
KV"%
茎尖的愈伤组织诱导率和分化成苗率均最低!
图
%
!
KC
与
LMM
激素组合对马铃薯茎尖分化成苗的影响
Q-
9
+%
!
C:X-/87;X/U
=Z6Z=5XW-.ZX5A-88XWX/Z-6Z-=/
.XXA7-/
9
_
[
KC6/ALMM:=W5=/X<=5_-/6Z-=/.
图
*
!
KC
与
VMM
激素组合对马铃薯茎尖分化成苗的影响
Q-
9
+*
!
C:X-/87;X/U
=Z6Z=5XW-.ZX5A-88XWX/Z-6Z-=/
.XXA7-/
9
_
[
KC6/AVMM:=W5=/X<=5_-/6Z-=/.
分别为
&#+!$O

$O
&处理
KV"*
的茎尖愈伤组织诱
导率 和 分 化 成 苗 率 均 最 高!分 别 为
(&+!$O

!%+($O
(在
VMM
和
NM
%
浓度一定时!
KC
浓度
"
#+"
"
$+"5
9
%
I
#表现出与图
%
中类似的作用!即
与愈伤组织的诱导茎尖分化成苗均成负相关(高
浓度"
!+"5
9
%
I
#
NM
%
与前
%
种组合"图
#
"
%
#的作
用相同!均能促进茎尖分化成苗率!表明
NM
%
"
!+"
5
9
%
I
#是促进)夏波蒂*马铃薯茎尖分化成苗较为合
适的浓度(由图
%
和图
*
比较后发现!在
KC
和
NM
%
的浓度一定时!虽然
VMM
"
+$5
9
%
I
#较
LMM
"
+!5
9
%
I
#能抑制愈伤组织的诱导!但并没有提高
茎尖分化成苗率!反而略有下降!表明
KC
与
LMM
组合比
KC
与
VMM
组合的茎尖分化成苗效果好(
由图
#
"
%
中
&)aM
与
KC
对)夏波蒂*马铃薯茎
尖分化成苗率的比较后发现!
KC
较
&)aM
对愈伤组
织的诱导不利!但更有利于茎尖分化成苗(
KL"*
培养基的分化成苗率是
!&+!$O
"图
%
#!
KV"*
培养
基的分化成苗率是
!%+($O
"图
*
#!而
aL"*
培养基
的分化成苗率是
(+$O
"图
#
#!
aV"*
培养基的分化
成苗率是
#"O
"图
!
#!
&)aM
与
KC
的作用差异明
显(所以!在本试验
*
类组合的
!*
种培养基中!最
适合)夏波蒂*马铃薯茎尖分化成苗的培养基是处理
KL"*
!即
?@JKC#+"5
9
%
IJLMM"+!5
9
%
IJ
NM
%
!+"5
9
%
I
(
=+B
!
马铃薯茎尖分化成苗过程
在
*
类组合
!*
种培养基中!从茎尖分化成苗过
程来看!
#"A
后即能诱导形成浅绿色米粒大小的
愈伤组织!随着培养时间的延长!愈伤组织逐渐增
大!
%"
"
*"A
达到稳定状态!以后逐渐开始分化芽
和根!
$$
"
("A
时可生长为完整的马铃薯再生苗!
但不同培养基上生长的再生苗的生长势不同!其中!
KL"*
"图
$
!
6
#和
KV"*
"图
$
!
_
#培养基上生长的再
生苗叶色浓绿!根系发达!茎干生长健壮!二者均为
正常组培苗&而
aL"%
"图
$
!
<
#培养基上生长的再生
苗尽管叶色正常!但叶片肿胀下垂!形成根系也少!
aV"%
再生苗 "图
$
!
A
#没有形成根系!叶色失绿!愈
伤组织偏大!二者均为弱化组培苗(与其他马铃薯
品种相比!)夏波蒂*马铃薯开始分化成苗和形成完
整再生苗的时间均晚
#$
"
!"A
(
=CD
!
马铃薯再生苗病毒和类病毒的
>?@3A>
检测
凝胶成像检测发现!马铃薯茎尖剥离脱毒前后
BC)DEB
电泳条带差异明显"图
&
#!其中!
!

*

&

0
泳道为脱毒前的检测结果!均扩增出不同病毒和类
病毒的目的条带&
%

$

(
泳道和
3
泳道没有扩增出
$!&
%
期
!!!!!!!!!!!!!!
冯光惠!等$携病毒马铃薯茎尖分化成苗与脱毒率检测
图
$
!
不同激素组合培养基中的茎尖分化再生苗
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_+
正常组培苗&
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A+
弱化组培苗
Q-
9
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9
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!
A+gX6].XXA7-/
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图
&
!
马铃薯病毒和类病毒的
BC)DEB
检测
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&
!

*

&

0
与
%

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(

3
分别为
茎尖剥离前后
DFG

DFH

DIBF
和
D@CFA
Q-
9
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!
C:XBC)DEBAXZXU
=Z6Z=Y-W;.6/AY-W=-A
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DFH
!
DIBF
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$
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(
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3
表
B
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再生苗病毒和类病毒的检测结果
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!
C:XAXZX9
WX.;7Z=8Y-W;.X.6/A
Y-W=-A=8WX
9
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U
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项目
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检测个数
RXZX9
/;5_XW
脱毒个数
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脱毒率
F-W;.)8WXXW6ZX
%
O
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DFH %& %% 3#+(
DIBF %& %& #""
D@CFA !* ! 0+%
目的条带!表明被检测再生苗分别不含病毒
DFG

DFH

DIBF
和类病毒
D@CFA
&部分再生苗的
BC)
DEB
产物检测出目的条带!表明未脱除相应的病毒
或类病毒(
再生苗
%
种病毒
DFG

DFH
和
DIBF
的检测
结果"表
%
#发现$
%&
株全部不携带
DIBF
!
%%
株不
携带
DFH
!
$
株不携带
DFG
(
%
株携带
DFH
的再
生苗同时携带
DFG
!表明
G
病毒较难脱除!
H
病毒次
之!卷叶病毒容易脱除!且
%
种病毒
DFG

DFH
和
DIBF
的脱毒率分别为
&3+*O

3#+(O
和
#""O
(
再生苗类病毒
D@CFA
的检测结果"表
%
#发现$
茎尖剥离脱毒后!
*
株再生苗中仅有
!
株脱除了类
病毒!脱毒率仅为
0+%O
!表明热处理结合茎尖剥离
脱毒法也很难脱除
D@CFA
(对再生苗中未脱除
D@CFA
的
!!
株再生苗进行二次茎尖剥离!成苗后
经过
BC)DEB
检测!又有
%
株脱除了
D@CFA
!二次
脱毒率升高为
!"+0O
!表明通过二次茎尖剥离可以
提高
D@CFA
的脱毒率(
%
!
讨
!
论
热处理结合茎尖组织培养法是国内外普遍应用
的马铃薯脱毒技术!能有效脱除危害马铃薯生长的
常见病毒和类病毒!如
DFG

DFH

DIBF

DF@

DFM

DF?
和
D@CFA
等(但是!不同病毒脱除难
易差别较大!对一般马铃薯品种而言!通常
DF@

DFG
较难脱除!
DIBF
容易脱除!本研究的试验结
果和国外一些学者+#*)#&,研究的结论是一致的(对于
DF@

DFG
等较难脱除的病毒!主要采用是热处理
低温疗法和病毒唑法等结合茎尖组织培养法(而脱
除
D@CFA
目前仍没有理想的方法!主要以筛选田
间抗类病毒植株的块茎为主(本试验以二次茎尖剥
离法脱除类病毒!提高了类病毒的脱毒率(并在检
测无体细胞变异的情况下!尝试以多次茎尖剥离法
来提高类病毒的脱毒效果(在试验中还发现!在脱
除病毒或类病毒的过程中!提高无菌试管苗扩繁时
的环境温度到
!$
"
!(>
!有利于提高试管苗的生长
速度!快速剥取生长旺盛的茎尖分生组织!能一定程
&!&
西
!
北
!
植
!
物
!
学
!
报
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
%$
卷
度提高脱毒率(
茎尖组织培养法是剥离茎尖生长点的分生组
织!剥离茎尖大小与脱毒有直接关系!剥离茎尖大!
不易脱毒!剥离茎尖小!病毒易脱除但不易成活(本
试验为获得脱毒效果更好的再生苗!以带
#
个叶原
基的茎尖为剥离对象!同时相对降低了茎尖分化成
苗率!与国内多数学者剥离带
#
"
!
或
!
"
%
个叶原
基的试验区别较大(
不同品种的马铃薯由于基因型和生理特性的不
同!需要不同的培养基环境(不同浓度激素的筛选
及浓度配比尤为重要!按一定浓度激素配比来促进
马铃薯茎尖分生组织愈伤组织的诱导和分化成苗(
本试验中的
KC
与
&)aM
相比!能明显提高)夏波蒂*
马铃薯的茎尖分化成苗率&高浓度的
NM
%
也能提高
茎尖分化成苗率(试验同时发现!当
KC
的浓度为
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!
LMM
的浓度为
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9
%
I
与
VMM
的浓
度为
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%
I
时!茎尖分化成苗率差异不大!所
以!在
KC
和
NM
%
浓度一定时!有待进一步试验降
低
LMM
或者提高
VMM
的浓度!可能会筛选出茎尖
分化成苗率更高的培养基(
参考文献!
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