全 文 ：植物病理学报
ACTA PHYTOPATHOLOGICA SINICA　 42(2): 169-175(2012)
收稿日期: 2011-09-07; 修回日期: 2012-01-05
基金项目: 国家转基因生物新品种培育重大专项 (2009ZX08009-044B; 2011ZX08001-002)
通讯作者: 何晨阳, 研究员, 主要从事分子植物病理学研究; Tel: 010-62894147, E-mail: cyhe@caas. net. cn
第一作者: 李广旭(1972 - ), 男, 辽宁人, 博士研究生, 主要从事分子植物病理学研究。
OsBTF3 转基因水稻对病原菌侵染的反应和
防卫基因的表达分析
李广旭1, 2, 陈华民1, 吴茂森1, 何晨阳1*
( 1中国农业科学院植物保护研究所,植物病虫害生物学国家重点实验室, 北京 100193; 2辽宁省农业科学院果树研究所, 熊岳 115009)
摘要:为了阐明 OsBTF3 基因在水稻对白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv. oryzae, Xoo)和细菌性条斑病菌(X. oryzae pv.
oryzicola, Xoc)侵染抗 /感反应中的功能,本研究以 OsBTF3 过量表达和 RNAi转基因株系为材料,比较分析了 T1 代株系对
病菌侵染的抗感病反应,定量测定了防卫基因的表达动态。 结果表明,与野生型对照株相比,无论过量表达株系,还是
RNAi株系对 Xoo和 Xoc侵染均表现为更加感病的反应; 经 Xoo接种后,过量表达和 RNAi株系 OE37 和 RNAi株系 RI30
防卫基因的表达发生了不同程度的变化。 因此,OsBTF3 增量 /减量表达对水稻抗 /感病性具有重要的调控作用,这种作用
可能并不依赖于水杨酸(SA)和茉莉酸(JA)介导的信号途径。
关键词: 水稻; OsBTF3; 转基因; 感病性; 防卫基因表达
Responses and expression of defense genes of transgenic rice with over-expressed
or RNAi-silenced OsBTF3 gene upon bacterial infection　 LI Guang-xu1, 2, CHEN Hua-min1,
WU Mao-sen1, HE Chen-yang1 　 ( 1State Key Laboratory for Biology of Plant Diseases and Insect Pests, Institute of Plant
Protection, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100193, China; 2 Institute of Pomology, Liaoning Academy of
Agricultural Sciences, Xiongyue 115009, China)
Abstract: To reveal the functions of OsBTF3 gene in rice in response to infection by Xanthomonas oryzae pvs.
oryzae and oryzicola, the responses and expression of defense genes of transgenic rice with over-expressed or RNAi-
silenced OsBTF3 were comparably analyzed. The results showed that more susceptible phenotypes were found either
in transgenic rice with over-expressed or RNAi-silenced OsBTF3 than the control of wildtype plants. In addition,
the changes in expression of selected defense genes induced by Xoo were observed both in the transgenic rice lines
and the control plants. Therefore, over- or down-expression of OsBTF3 regulates the disease resistance / susceptibili-
ty in rice, which is independent on SA- or JA-mediated signaling pathways.
Key words: rice; OsBTF3; transgenic; disease susceptibility; defense gene expression
中图分类号: S432. 1　 　 　 　 　 文献标识码: A　 　 　 　 　 文章编号: 0412-0914(2012)02-0169-07
　 　 水稻白叶枯病是由水稻黄单胞水稻致病变种
(Xanthomonas oryzae pv. oryzae, Xoo)引起的水稻
生产上一种重要的细菌性病害[1]。 利用水稻-Xoo
这一互作系统已有大量的水稻抗病基因和感病相关
基因被发掘和利用[2 ~ 6]。 在前期研究中,本室对水
稻-Xoo亲和互作中的水稻基因表达谱进行了 cD-
NA-AFLP分析,发现水稻转录因子基因OsBTF3显
著地上调表达[7]。 BTF3(RNA polymerase B tran-
scription factor 3)最早是作为 RNA 聚合酶Ⅱ转录起
始所必需的因子而发现的,可以与 RNA聚合酶Ⅱ形
成稳定复合体[8]。 随后研究发现,BTF3可作为新生
多肽关联复合体 ( nascent-polypeptide-associated
complex,NAC)的 β 亚基(βNAC)与 αNAC 组成完
整的 NAC[9], NAC 可以与 SRP 协同作用、保证蛋
　
植物病理学报 42 卷
白向内质网正确转运[10,11]。 BTF3 的功能可能还涉
及到细胞程序性死亡、小鼠胚胎致死、与水稻细胞周
期蛋白互作、与拟南芥翻译起始因子互作、烟草叶部
生长发育[12 ~ 16]。 然而,对该基因在水稻中的生物学
功能却鲜见报道。
为了阐明 OsBTF3 基因的功能,本室克隆了该
基因,并对其分子特性进行了鉴定[17]; 分析了 Os-
BTF3 对病原菌接种和 SA 等信号分子的应答反
应[18]。 构建 OsBTF3 过表达和 RNAi载体,通过农
杆菌介导的水稻转化体系,获得了过表达和 RNAi
株系(另文发表)。 为了揭示 OsBTF3 基因在水稻
对 Xoo和细菌性条斑病菌(X. oryzae pv. oryzico-
la, Xoc)侵染抗感反应中的功能,本文报道以
OsBTF3基因过量表达株系和 RNAi 株系为试验
材料,比较分析孕穗期的 T1 代转基因株系植株
对病原细菌侵染反应及其防卫基因表达的研究
结果。
1　 材料与方法
1. 1　 供试细菌菌株、水稻材料和试剂
Xoo菌株 PXO99A、Xoc 菌株 RS63、水稻品种
日本晴 ( Oryza sativa L. cv. Nipponbare ) 及其
OsBTF3基因过量表达和 RNAi 株系均由本实验室
保存;限制性内切酶、RQ1 RNase-Free DNase 购自
Promega 公司; M-MLV Reverse Transcriptase 和
oligo(dT)购自 Invitrogen 公司; 试验用引物均由
Invitrogen公司合成; 其他试剂均为国产分析纯。
1. 2　 水稻叶片总 RNA提取和 cDNA合成
参照文献[18, 19]的方法,取不同 T1 代转基
因株系幼苗期叶片组织样品 2 g,液氮冷冻研磨成
粉末。 加入 80℃预热的 RNA 抽提缓冲液(含 100
mmol Tris-HCl;100 mmol LiCl;10 mmol EDTA;
1% SDS,pH 8. 0)与 TE 饱和酚的等体积混合液,
振荡混匀;加入 1 / 2 体积的氯仿,振荡混匀;离心取
上清,氯仿抽提至两相界面干净为止。 上清中加入
1 / 3 体积 8 mol / L LiCl,0℃沉淀过夜。 离心收集沉
淀,75%乙醇洗涤后真空干燥,溶于 TE 之中,取 1
μL 总 RNA 进行 1. 2% 琼脂糖凝胶电泳,检测
RNA的完整性。 在反转录前对总 RNA 进行
DNase 处理。 按照 M-MLV Reverse Transcriptase
( Invitrogen)试剂盒方法,进行 cDNA 合成。
1. 3　 实时定量 PCR分析
利用 Primer premier 5. 0 软件设计 OsBTF3 和
内标基因 OsActin的特异性引物。 OsBTF3 引物序
列 为 5′-TGAGCAGTTCCAGAAGCAGG-3′, 5′-
TCTTCCACCTCCGCTTCCTT-3′。 OsActin 引物序
列为 5′-CTGGTATCGTGTTGGACTCTGG-3′, 5′-
CCCGTTCAGCAGTGGTAGTG-3′。 以合成的 cD-
NA为模板,按照 IQ SYBR® Green Supermix 试剂
盒(Bio-Rad,USA)的方法,用 iCycler IQTM实时定
量 PCR 仪(Bio-Rad, USA)进行 RT-Q-PCR 的检
测。 参照文献[20]的方法,以 OsActin 基因为内标
参照,OsBTF3 相对表达量 = 2 -△△Ct,其中△△Ct
= (Cttarget - CtOsActin ) Time X - (Cttarget - CtOsActin )
Time 0,Ct为荧光阈值。
1. 4 　 OsBTF3 转基因水稻的接种处理和抗病性
鉴定
参照文献[21]的方法进行。 将病菌分别接种
到 M210 培养基中,在 28℃下振荡培养(OD600 =
1． 2),离心收集菌体,用无菌水洗涤 3 次后,制备成
菌悬液(浓度 3 × 108 CFU / mL)。 分别采用剪叶法
(Xoo)和针刺法(Xoc),对孕穗期的 T1 代 OsBTF3
过量表达株系 OE11、OE17、OE37、OE39 和 OE73
和 RNAi株系 RI17、RI18、RI19、RI30 和 RI32 进行
Xoo和 Xoc接种处理。 每个处理每个株系至少接
种 20 ~ 30 张叶片。 接种后 14 d 每处理测定 15 片
接种叶片病斑长度,进行抗感病反应的鉴定分析。
1. 5　 OsBTF3 转基因水稻防卫基因表达测定
参照文献[22]的方法,对四叶龄期过量表达
株系(OE37)和 RNAi株系(RI30)进行 PXO99A 喷
雾接种处理。 在接种后 0、12、24、48、72、120、168 h
采集样品。 参考文献[18,19]的方法,进行叶片样
品总 RNA提取和 cDNA合成。
利用 Primer premier 5 软件设计 3 个防卫基因
(脂氧合酶基因 OsLOX、丙二烯氧合酶基因
OsAOS、苯丙氨酸解氨酶基因 OsPAL)、3 个 PR 蛋
白基因(OsPR1、OsPR4、OsPBZ1)和参照基因 actin
的特异性引物 (表 1)。 以 cDNA 为模板,采用
Opti Taq DNA Polymerase (HIMERX),用上述引
物进行 PCR扩增;取 10 μL扩增产物进行 1. 5%琼
脂糖凝胶电泳检测。 利用 Quantity One 电泳图像
处理软件(Bio-Rad),采用等高线定量法、对各基
因 PCR 扩增条带进行光密度分析; 与参照基因
071
　
　 2 期 　 　 李广旭,等:OsBTF3 转基因水稻对病原菌侵染的反应和防卫基因的表达分析
OSActin进行比较,根据光密度比值,对各基因的
表达进行数据化处理,计算基因相对表达量。
2　 结果与分析
2. 1　 在 T1 代转基因株系中 OsBTF3 基因表达水
平检测
对过量表达株系和 RNAi 株系中 OsBTF3 基
因表达水平进行了实时定量 PCR 检测。 结果表
明,在 5 个过量表达株系 OE11、OE73、OE39、OE37
和 OE17 中,OsBTF3 表达水平分别为野生型对照
株的 4. 27、3. 64、3. 85、4. 56 和 1. 53 倍,平均为
3． 58 倍; 而在 5 个 RNAi 株系 RI17、RI18、RI32、
RI30 和 RI19 中 OsBTF3 表达水平分别为野生型的
0. 14、0. 27、0. 05、0. 03 和 0. 24 倍,平均为 0. 15 倍。
表明在 35S强启动子驱动下,OsBTF3 在过量表达
转基因株系中的超量表达,而 RNAi 显著降低了
OsBTF3 在转基因株系中的表达水平。
2. 2　 OsBTF3 转基因株系对 Xoo 侵染的抗感病
反应
用 PXO99A 菌株对 5 个过量表达株系 OE11、
OE17、OE37、OE39、OE73 和 5 个 RNAi株系 RI17、
RI18、RI19、RI30、RI32 进行了剪叶接种处理,发现
所有接种植株均表现典型的水稻白枯病症; 无论
OsBTF3 基因过表达株系平均病斑长度 ( 74. 3
mm),还是 RNAi株系的(76. 1 mm)均明显长于野
生型对照株(52. 0 mm) (图 1)。 表明它们对 Xoo
Table 1　 Primers for expression analysis of defense-related genes
Gene name Accession number Primer sequence Length / bp
OsLOX NM_001068735 5′-GTCAGGGAATTTCCGCTAAAGA-3′5′-AGTGCGTGCGAAGCCAGT-3′ 433
OsAOS NM_001055971 5′-GGGGAGATGCTGTTCGGCTAC-35′-CGATTGACGGCGGAGGTT-3′ 320
OsPAL NM_001073432 5′-CCAGGATGACAGCAGAGGC-3′5′-GCAGTGGGTTGATGTGCTTGT-3′ 564
OsPR1a AJ278436 5′-GTTATCCTGCTGCTTGCTGGTG-3′5′-CTGTTGCTGCCGTGGTCGTA-3′ 321
OsPR4 AY050642 5′-GGGACCTGAACAAAGTGAG-3′5′-GTGACCCATCTGGTAGCC-3′ 275
OsPBZ1 D38170 5′-GTGGGAAGCACATACAAGACC-3′5′-AGGGTGAGCGACGAGGTAG-3′ 279
OsActin X15865 5′-TCCATCTTGGCATCTCTCAG-3′5′-GTACCCGCATCAGGCATCTG-3′ 440
Fig. 1　 Disease lesion length of transgenic lines inoculated by Xoo
The disease lesion length was measured at 14 days after inoculation with Xoo strain PXO99A (3 × 108 CFU / mL) . WT:
Wildtype; OE: Transgenic plant with over-expression of OsBTF3 gene; RI: Transgenic plant with RNAi-silenced OsBTF3 gene;
The numbers following OE or RI represent the different transgenic lines. Eerror bars represent the mean values of at least
15 rice leaves from different plants. Significant differences are indicated by different letters (P <0. 05) .
171
　
植物病理学报 42 卷
侵染均表现为更加感病的反应。
2. 3　 OsBTF3 转基因株系对 Xoc 侵染的抗感病
反应
用 RS63 菌株对过量表达株系 OE17、OE37、
OE39 和 RNAi株系 RI19、 RI30、RI32 进行了针刺
接种处理,发现所有接种植株均出现典型的水稻细
菌性条斑病症; 无论 OsBTF3 基因过量表达株系
平均病斑长度(8. 3 mm),还是 RNAi 株系的(9. 9
mm)均比野生型对照株(4. 9 mm)更长(图 2)。 表
明它们对 Xoc侵染均表现为更加感病的反应。
Fig. 2 　 Disease lesion length of transgenic
lines inoculated by Xoc
The disease lesion length was measured at 14 days after
inoculation with Xoc strain RS63 (3 × 108 CFU / mL) . WT:
Wildtype; OE: Transgenic plant with over-expression of
OsBTF3 gene; RI: Transgenic plant with RNAi-silenced of
OsBTF3 gene; The numbers following OE or RI represent the
different transgenic lines. Eerror bars represent the mean
values of at least 15 rice leaves from different plants. Signifi-
cant differences are indicated by different letters (P <0. 05) .
2. 4　 OsBTF3 转基因株系 JA / SA 信号途径关键
酶基因的表达
对经 PXO99A 接种处理的过量表达株系 OE37
和 RNAi 株系 RI30 的茉莉酸途径关键酶基因 Os-
LOX、OsAOS和水杨酸途径关键酶基因 OsPAL 转
录进行了测定分析。 发现 Xoo 均能诱导过量表达
株系和 RNAi 株系以及对照株中 OsLOX、OsAOS
和 OsPAL 基因的表达,但表达模式和强度有不同
程度的差异(图 3)。 RNAi株系诱导表达的强度明
显高于过表达株系和野生型对照,后两者基本相
近。 表明 Xoo 接种处理均可能不同程度地诱导
WT、过量表达和 RNAi 株系中茉莉酸和水杨酸信
号途径。
2. 5　 OsBTF3 转基因株系 PR蛋白基因的表达
对经 PXO99A 接种处理的过量表达株系 OE37
和 RNAi株系 RI30 的 3 个 PR 基因 OsPR1、OsPR4
和 OsPBZ1 转录测定分析,发现 3 个 PR 基因的表
达在所有测试植株中均可被检测出, 且表现出基
本相似的表达模式。 OsPR1 在 WT 中的表达水平
和峰值相对较高,OE37 和 RI30 基本相同;OsPR4
和 OsPBZ1 在WT、OE37 和 RI30 中表达强度较为
接近,变化相对较小(图 4)。 表明 OsBTF3 表达水
平的改变对 PR基因表达模式并无明显的影响。
3　 讨论
本研究首次报道了无论 OsBTF3 过量表达株
系,还是 RNAi 株系在孕穗期对 Xoo 和 Xoc 的侵
染比野生型对照株更为感病的研究结果。 在幼苗
期和分蘖期的接种鉴定也得到了同样结果(未发
表资料)。 尽管目前尚不清楚其原因,推测由于
OsBTF3 作为一个转录因子或新生多肽关联复合
体重要组分,在水稻植株对生物胁迫(如病原细菌
侵染)应答反应中可能起很重要的作用; OsBTF3
基因表达水平必须受到极其严谨的调控, 过高或
过低都会影响水稻植株的抗 /感病表型。 本研究揭
示了 OsBTF3 基因在水稻体内的表达量高低显著
地影响了水稻与病原细菌的互作关系,即在人工增
量或减量表达的条件下,均可增加水稻的对所测 2
种主要病原细菌侵染的感病性。 因此,可以认为
OsBTF3 对水稻抗 /感病性具有重要的调控作用。
水杨酸(SA)和茉莉酸( JA)信号途径是植物
诱导抗病性的重要机制[23,24]。 苯丙氨酸解氨酶
(PAL)是调节 SA 及其防御物质酚类化合物合成
的关键酶[25]。 而 JA 信号途径是亚麻酸通过脂氧
合酶(LOX)和丙二烯氧合酶(AOS)等系列酶促反
应,最终生成 JA及其衍生物茉莉酸甲酯[26]。 本研
究检测了过量表达株系或 RNAi 株系信号代谢途
径中关键酶基因的表达,发现尽管在表达模式和强
度上存在一定程度的差异,但 Xoo 接种处理均可
诱导WT 、过量表达和RNAi株系中酶基因的表
271
　
　 2 期 　 　 李广旭,等:OsBTF3 转基因水稻对病原菌侵染的反应和防卫基因的表达分析
Fig. 3　 Gene expression of key enzymes in SA or JA signal metabolism
pathways induced by Xoo(PXO99A)
Gene transcripts were measured through semi-quantity PCR and expression levels were quantitatively analyzed
by using Quantity One software (Bio-Rad) . WT: Wild-type control plants;
OE37: A transgenic line with over-expression of OsBTF3 gene;
RI30: A transgenic line with RNAi-silenced OsBTF3 gene.
达。 表明 OsBTF3 对水稻抗 /感病性的调控作用可
能并不与这些 SA 和 JA 信号代谢酶类表达直接相
关。
PR1 和 PR4 基因分别是 SA和 JA信号途径的
PR蛋白标记基因[24];PBZ1 是一种重要的 PR蛋白
基因 PR10 的同源物,参与抵抗多种病原物的侵
染[27]。 本研究发现在野生型对照株、过量表达和
RNAi株系中 OsPR1、OsPR4 和 OsPBZ1 基因转录
表达模式和强度无显著的变化。 这一结果与上述
SA / JA信号代谢途径关键酶基因的表达结果相吻
合。 同样证明了 OsBTF3 过量或和减量表达并未
直接影响到 SA或 JA介导的信号途径的改变。
本研究发现 OsBTF3 基因过量或减量表达均
可增加水稻的感病性,但并不直接影响 SA 或 JA
介导的信号途径。 因此,有必要进一步深入研究
OsBTF3 的感病作用机理及其可能的信号途径。
371
　
植物病理学报 42 卷
Fig. 4　 Expression of pathogenesis-related protein genes induced by Xoo(PXO99A)
Gene transcripts were measured through semi-quantity PCR and expression levels were quantitatively
analyzed by using Quantity One software (Bio-Rad) . WT: Wild-type control plants;
OE37: A transgenic line with over-expression of OsBTF3 gene;
RI30: A transgenic line with RNAi-silenced OsBTF3 gene.
参考文献
[1] 　 Shen Y, Ronald P. Molecular determinants of disease
and resistance in interactions of Xanthomonas oryzae
pv. oryzae and rice [ J] . Microbes and Infections,
2002, 4: 1361 -1367.
[2] 　 Wang G L, Song W Y, Ruan D L, et al. The cloned
gene, Xa21, confers resistance to multiple Xan-
thomonas oryzae pv. oryzae isolates in transgenic
plants [ J ] . Molecular Plant-Microbe Interactions,
1996, 9: 850 -855.
[3] 　 Zhai W X, Wang W M, Zhou Y L, et al. Breeding
bacterial blight resistant hybrid rice with the cloned
bacterial blight resistance gene Xa21 [ J] . Molecular
Breeding, 2001, 8: 285 -293.
[4] 　 Zhang S P, Song W Y, Chen L L, et al. Transgenic
elite Indica rice varieties, resistant to Xanthomonas
oryzae pv. oryzae [J] . Molecular Breeding, 1998, 4:
551 -558.
[5] 　 Fitzgerald H A, Canlas P E, Chern M S, et al. Alter-
ation of TGA factor activity in rice results in enhanced
tolerance to Xanthomonas oryzae pv. oryzae [ J ] .
471
　
　 2 期 　 　 李广旭,等:OsBTF3 转基因水稻对病原菌侵染的反应和防卫基因的表达分析
Plant Journal, 2005, 43:335 -347.
[6] 　 Yang B, Sugio A, White F. Os8N3 is a host disease-
susceptibility gene for bacterial blight of rice [ J] .
Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2006, 103: 10503 -
10508
[7] 　 Wu M S, Tian F, Qi F J, et al. cDNA-AFLP analysis
of gene expression response to Xanthomonas oryzae
pv. oryzae and identification of genes expressed diffe-
rentially during this compatible interaction in rice sus-
pension cultured cells ( in Chinese) [ J] . Scientia Ag-
ricultura Sinica (中国农业科学), 2007, 40: 277 -
282.
[8] 　 Zheng X M, Moncollin V, Egly J M, et al. A general
transcription factor forms a stable complex with RNA
polymerase B ( II) [J] . Cell, 1987, 50: 361 -368.
[9] 　 Wiedmann B, Sakai H, Davis T A, et al. A protein
complex required for signal-sequence-specific sorting
and translocation [J] . Nature, 1994, 370:434 -440.
[10] Lauring B, Kreibich G, Weidmann M. The intrinsic
ability of ribosomes to bind to endoplasmic reticulum
membranes is regulated by signal recognition particle
and nascent polypeptide-associated complex [ J ] .
Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1995, 92: 9435 -
9439.
[11] Möller I, Beatrix B, Kreibich G, et al. Unregulated
exposure of the ribosomal M-site caused by NAC de-
pletion results in delivery of non-secretory polypeptides
to the Sec61 complex [ J] . FEBS Letter, 1998, 441:
1 -5.
[12] Bloss T A, Witze E S, Rothman J H. Suppression of
CED-3-independent apoptosis by mitochondrial beta-
NAC in Caenorhabditis elegans [ J] . Nature, 2003,
424: 1066 -1071.
[13] Deng J M, Behringer R R. An insertional mutation in
the BTF3 transcription factor gene leads to an early
postimplantation lethality in mice [J] . Transgenic Re-
search, 1995, 4: 264 -269.
[14] Cooper B, Hutchison D, Park S, et al. Identification
of rice (Oryza sativa) proteins linked to the cyclin-me-
diated regulation of the cell cycle [J] . Plant Molecular
Biology, 2003, 53: 273 -279.
[15] Freire M A. Translation initiation factor ( iso) 4E in-
teracts with BTF3, the β subunit of the nascent poly-
peptide-associated complex [ J] . Gene, 2005, 345:
271 -277.
[16] Yang K S, Kim H S, Jin U H, et al. Silencing of
NbBTF3 results in developmental defects and disturbed
gene expression in chloroplasts and mitochondria of
higher plants [J] . Planta, 2007, 225: 1459 -1469.
[17] Li G X, Wu M S, Wu J, et al. Molecular characte-
rization and expression of OsBTF3, a rice gene up-reg-
ulated by Xanthomonas oryzae pv. oryzae ( in Chi-
nese) [ J] . Scientia Agricultura Sinica (中国农业科
学), 2009, 42(7): 2608 -2614.
[18] Li G X, Wu M S, He C Y. Gene expression response
of transcription factor OsBTF3 in rice to bacterial and
fungal infection and signal molecule treatment revealed
by quantitative real-time PCR analysis ( in Chinese)
[J] . Acta Phytopathologica Sinica (植物病理学报),
2009, 39 (3): 272 -277.
[19] Sambrook J, Fritsch E F, Maniatis T. Molecular clo-
ning: a laboratory manual, (2nd ed. ) [M] . Cold
Spring Harbor, New York: Cold Spring Harbor Labo-
ratory Press, 1989.
[20] Livak K J, Schmittgen T D. Analysis of relative gene
expression data using real-time quantitative PCR and
the 2 -△△Ct method [ J] . Methods, 2001, 25: 402 -
408.
[21] Fang Z D. Methods in Plant Pathology ( in Chinese)
[M] . Beijing: China Agriculture Press (北京:中国农
业出版社), 1998.
[22] Nino-Liu D O, Darnielle L, Bogdanove A J. A simple
method of mass inoculation of rice effective for both
pathovars of Xanthomonas oryzae, and the construction
of comparable sets of host cDNA libraries spanning
early stages of bacterial leaf blight and bacterial leaf
streak [ J] . Journal of Phytopathology, 2005, 153:
500 -504.
[23] Dempsey D, Shah J, Klessing D F. Salicylic acid and
disease resistance in plants [ J] . Critical Reviews in
Plant Science, 1999, 18(6): 547 -575.
[24] Reymond P, Farmer E E. Jasmonate and salicylate as
global signals for defense gene expression [J] . Current
Opinion in Plant Biology, 1998, 1(5): 404 -411.
[25] Dixon R A, Achine L, Kota P, et al. The phenylpr-
panoid pathway and plant defence-a genomic perspec-
tive [J] . Molecular Plant Pathology, 2002, 3: 371 -
390.
[26] Creelman R A, Mullet J E. Biosynthesis and action of
jasmonates in plants [ J] . Annual Review of Plant
Physiology, 1997, 48: 355 -382.
[27] Sticher L, Mauch-Mani, Métraux J P. Systemic
acauired resistance [ J] . Annual Review of Phytopa-
thology, 1997, 35: 235 -270.
责任编辑:于金枝
571