全 文 ：植物病理学报
ACTA PHYTOPATHOLOGICA SINICA 42(5): 525-527(2012)
收稿日期: 2012-01-04; 修回日期: 2012-05-09
基金项目: 国家支撑计划课题(2012BAD15B04-1)
通讯作者: 高必达,教授,植物病理学博士导师,主要从事分子植物病理学研究; E-mail:bdgao@yahoo. com. cn。
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췍研究简报
湖南省食用百合生长期鳞茎腐烂病的病原鉴定
朱海燕1, 夏 花1, 高必达1,2,3*
( 1湖南农业大学生物安全科学技术学院, 长沙 410128; 2植物疾病控制与利用湖南省高校重点实验室, 长沙 410128;
3植物病虫害生物与防控湖南省重点实验室, 长沙 410128)
Pathogen identification of edible lily(Lilium brownie var. viridulum) bulb rot during
growth season in Hunan ZHU Hai-yan1, XIA Hua1, GAO Bi-da1,2,3 ( 1College of Bio-Safety Science &
Technology, Hunan Agricultural University, Changsha 410128, China; 2Hunan University Key Laboratory for Control and Utili-
zation of Plant Diseases, Changsha 410128, China; 3Hunan Provincial Key Laboratory for Biology and Control of Plant Diseases
and Insect Pests, Changsha 410128, China)
Abstract: Bulb rot disease is one of the most important restrictive factors on edible lily (Lilium brownie var.
viridulum cv. Longya) production in Longhui County, Hunan. To investigate the causal agent, the rotted
bulbs were collected from Longhui and kept in moist condition. Generally 3-septate falciform macroconidia
and one-celled, ovoid or oval microconidia, typical of Fusarium oxysporum, were observed from the mold on
the rot tissues under microscope. After a needle-pricking inoculation with isolate HNLH07 on healthy lily
scales, rot symptom was reproduced. However, HNLH07 was failed to infect bulbs of gladiolus or tulip in a
same inoculation test. PCR amplification was carried out by using universal rDNA-ITS primers. Sequence of
PCR product showed 99% identity with those of F. oxysporum by BLAST analysis at NCBI. Phylogenetic
analysis showed that HNLH07 was clustered to F. oxysporum with a high bootstrap value of 99% . It comes to
a conclusion that the pathogen causing bulb rot of cv. Longya in Longhui County should be F. oxysporum f.
sp. lilii.
Key words: Lilium brownie var. viridulum; bulb rot; Fusarium oxysporum f. sp. lilii; identification
文章编号: 0412-0914(2012)05-0525-03
龙牙百合为湖南省邵阳市的特色经济作物之
一,随着栽培面积不断扩大,其病害发生日趋严重,
尤其在田间生长后期鳞茎易出现褐变、腐烂、植株
枯死等症状,严重影响百合生长,已成为遏制龙牙
百合生产的重要因素之一。
对湖南省百合生长期鳞茎腐烂病的病原至今
未见报道。 受隆回县科技局委托,我们对该县鳞茎
腐烂病病原进行了形态学和分子生物学鉴定。 研
究结果为该病害的防治奠定了基础。
1 材料与方法
1. 1 症状观察和镜检
肉眼观察发病龙牙百合鳞茎的典型症状并用
刀片刮取带霉层组织镜检。
1. 2 病菌分离与纯化
采用常规分离法,从发病鳞片的病健交界处组
织进行分离,纯化后于 4℃冰箱保存。
植物病理学报 42 卷
1. 3 致病性测定
健康百合鳞片或郁金香和唐菖蒲的种球用
70%酒精表面消毒后,再用无菌水冲洗 3 遍,然后
用灭菌解剖针在鳞片或种球上滴有菌液处刺孔接
种,设清水对照,重复 3 次。 接种的鳞片置于 25℃
培养箱中保湿,每天观察并记录发病情况至第 9
天,并对接种发病的鳞茎再次进行分离和鉴定。
1. 4 r-DNA-ITS的 PCR扩增与序列分析
1. 4. 1 r-DNA-ITS 的 PCR 扩增 按常规方法提
取真菌 DNA,采用 r-DNA通用引物 ITS-4 和 ITS-5
按常规方法进行 PCR 扩增。 PCR 产物用 1%的琼
脂糖凝胶电泳,凝胶成像仪观察拍照。 PCR 产物
送上海生工生物工程有限公司测序。
1. 4. 2 序列分析 PCR 产物的序列经 BLAST 从
GenBank数据库找相近序列,然后用 MEGA4. 0 软
件建立系统进化树。
2 结果与分析
2. 1 症状及镜检
隆回龙牙百合根部和鳞片腐烂但未见基盘腐
烂,同一鳞片上既有初期也有后期症状,病部有橘
红色霉层。 显微镜下大型分生孢子新月形,一般 3
隔,大小约 27. 5 ~ 60 μm ×3. 75 ~ 7. 5 μm;小型分
生孢子单胞卵圆形,大小约 7. 5 ~ 20 μm × 5 ~ 10
μm。 厚垣孢子近球形,直径在 9. 3 ~ 11. 4 μm。
2. 2 病原菌分离和致病性测定
分离纯化后,得到 8 株真菌和 6 株细菌,分别
编号为 HNLH01-HNLH14。 将其分别接种于健康
百合鳞茎后,只有 HNLH07 和 HNLH08 能使鳞茎
症状再现,而其他菌株接种皆不能引起腐烂症状。
证实 HNLH07 和 HNLH08 为隆回百合腐烂的致病
菌。 这 2 个菌株在 PDA培养基上生长 6 d,平板上
即长满了洁白、绒状而丰厚的菌落。
在用百合科另 2 种植物郁金香和唐菖蒲作对
照的接种试验中,HNLH07 无论接种鳞茎正面或反
面,首先在接种面产生褐色病斑,病斑中央腐烂,并
向四周扩大,腐烂组织不断增加,最终腐烂症状穿
透至另一面。 接种 6 d 后接种处理发病率达到
100% ,其发病症状与自然情况下的发病情况一致,
对照均不发病。 对接种后的病斑再次进行病菌分
离,得到与 HNLH07 形态一致的菌株。 郁金香和
唐菖蒲的种球接种后 9 d基本不发病。
2. 3 rDNA-ITS序列分析
测序结果表明 2 个致病菌株的 PCR 产物序列
相同,序列提交至 GenBank,得到登录号(accession
No. JQ316463)。 BLAST 结果显示搜到前 550 个
序列全是尖孢镰孢菌(F. oxysporum)的。 系统进
化分析表明,HNLH07 与 F. oxysporum ( accession
No. GU445374 ) 和 F. oxysporum f. sp. lilii FF-2
(accession No. Y684919)同种的置信度为 99% 。
3 结论与讨论
由镰孢菌引起百合病害的病原国内报道主要
有尖孢镰孢菌(F. oxysporum)、串珠镰孢菌(F. mo-
niliforme)、茄腐皮镰孢菌(F. solani)3 种[1 ~ 3],国
外有尖孢镰孢菌(F. oxysporum)和层出镰孢菌(F.
proliferatum) [4]。 其中尖孢镰孢菌中只严重侵染
百合的为百合专化型(F. oxysporum f. sp. lilii),对
百合和唐菖蒲都致病的为唐菖蒲专化型(F. oxys-
porum f. sp. gladioli) [5]。
本研究从龙牙百合病鳞茎标本上分离到的真
菌只有一种是致病菌,其中 HNLH07 菌株 rDNA-
ITS的 BLAST 结果表明与尖孢镰孢菌 rDNA-ITS
的序列同源性最高,达 99% ,仅有 2 个碱基的差
异。 系统进化分析也支持这一结果,因此 HNLH07
应为尖孢镰孢菌,考虑其对百合严重致病,而对郁
金香和唐菖蒲的种球基本上不致病,故 HNLH07
应为尖孢镰孢菌百合专化型 (Fusarium oxysporum
f. sp. lilii)。
本文首次报道尖孢镰孢菌百合专化型(F. ox-
ysporum f. sp. lilii)引起湖南龙牙百合生长期鳞茎
腐烂病。
参考文献
[1] Yang X M, Wang J H, Wang L H, et al. Identifica-
tion and ITS sequence analysis of pathogen of lily wilt
( in Chinese ) [ J ] . Southwest China Journal of
625
5 期 朱海燕,等:湖南省食用百合生长期鳞茎腐烂病的病原鉴定
Agricultural Sciences(西南农业学报),2010, 23(6):
1913 -1916.
[2] Liang Q L, Xu B L, Liu Y M. Identification of root
rot pathogen of ornamental lily and screening of its fun-
gicides( in Chinese) [J] . Journal of Gansu Agricultu-
ral University(甘肃农业大学学报), 2004, 1: 25 -
28.
[3] Li C, Li J J. Identification of the causal agent of Lily
wilt( in Chinese) [ J] . Acta Phytopathologica Sinica
(植物病理学报), 1996, 26(2): 192 -193.
[4] Prados-Ligero A M, Basallote-Ureba M J, Melero-Va-
ra J M. First report of Fusarium oxysporum f. sp. lilii
and F. proliferatum affecting Lilium crops in Spain
[J] . Tropical Plant Pathology, 2008, 33(3): 235 -
236.
[5] Baayen R P, Forch M G, Waalwijk C, et al. Patho-
genic, genetic and molecular characterization of Fusa-
rium oxysporum f. sp. lilii [ J] . European Journal of
Plant Pathology, 1998, 104: 887 -894.
责任编辑:
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李晖
《耕耘-章琦稻病抗性研究选集》简介
章琦研究员是我国著名植物病理学家,从 20 世纪 70 年代初,开始从事水稻病害综合防治和抗病
育种;80 年代以来,随着国内外水稻抗病性研究的发展,从寄主和病原菌两个层面开展交叉、并行研
究,形成了一套水稻抗病性遗传改良应用基础研究系统。
章琦研究员追求真知,独辟蹊径、勤于思考、著述颇丰。 计有 61 篇论文选入本书,见证了作者近
半个世纪以来在科研工作中承前启后、勤奋耕耘的历程。 它涵盖了水稻抗病育种、抗性遗传研究、抗
病新基因的鉴定与应用、白叶枯病致病性分化及群体遗传结构等内容,并从其专著《水稻白叶枯病抗
性的遗传及改良》中,选择了本人撰写的部分论文。 这是一部综合植物病理、遗传、分子生物技术等
学科,论述了水稻对主要病害的抗性及其遗传改良的理论结合实践的著作;也包括了经作者整理、分
析、概括,将国内外学者一个多世纪来,对水稻白叶枯病抗性遗传改良的理解与阐述。 《选集》还对研
究立项、选材和方法、分析与展望等方面加以详尽表述。 多数论文兼具中英文摘要和图表。 是一部农
业科学研究院校从事作物抗病性遗传研究师生及相关专业学者的良师益友。 全书图文并茂,也附加
作者研究和学术活动经历照片,反映了作者刻苦专研、永不言弃、开拓研究的耕耘人生,或许对青年学
子奋发图强有所启迪。
该书为平装 16 开本,105 万字,单价 110. 00 元。 中国农业出版社 2010 年 7 月出版。 ISBN978-7-
109-14524-5。 需要者可向中国农业出版社订购。 地址:北京市朝阳区麦子店街 18 号 楼,邮政编码:
100125。 邮购电话 010-59194918,010-59194918。
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