全 文 ：植物病理学报
ＡＣＴＡ ＰＨＹＴＯＰＡＴＨＯＬＯＧＩＣＡ ＳＩＮＩＣＡ ４４(２): １７３￣１７９(２０１４)
收稿日期: ２０１３￣０５￣０９ꎻ 修回日期: ２０１３￣０９￣２８
基金项目: 科技部“国家重点基础研究发展计划”资助项目(２０１２ＣＢ７２２２００)
通讯作者: 何朝族ꎬ教授ꎬ博士生导师ꎬ主要研究方向是植物—病原微生物分子互作、植物病原微生物基因组学、水稻分子生物学ꎻＴｅｌ:０８９８￣
６６１６０７２８ꎬＥ￣ｍａｉｌ: ｃｚｈｅ＠ｈａｉｎｕ.ｅｄｕ.ｃｎ
第一作者: 李伟兰ꎬ女ꎬ湖南郴州人ꎬ在读硕士研究生ꎬ主要从事野油菜黄单胞菌Ⅲ型分泌效应子的研究ꎻＥ￣ｍａｉｌ: ｇｒｅｅｎａｐｐｌｅｌｗｌ＠ａｌｉｙｕｎ.ｃｏｍꎮ
一个推测的野油菜黄单胞菌Ⅲ型分泌效应子基因
ＸｏｐＸｃｃＰ对寄主植物的致病性分析
李伟兰ꎬ 戎 伟ꎬ 何朝族∗
(海南省热带生物资源可持续利用重点实验室ꎬ海南大学ꎬ海口 ５７０２２８)
摘要:野油菜黄单胞菌野油菜致病变种(Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ ｐｖ. ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓꎬ Ｘｃｃ)是一种在全球范围内引起十字花科植
物黑腐病的重要病原细菌ꎮ Ｘｃｃ中效应蛋白与植物互作机理的研究还不够全面ꎬ在已经测序的菌株 Ｘｃｃ ８００４ 中ꎬＸｃ＿２９９４
基因预测编码一个 ＩＩＩ型分泌效应蛋白 ＸｏｐＸｃｃＰꎬ其生物学功能尚不清楚ꎮ 为了探索 ＸｏｐＸｃｃＰ的生物学功能ꎬ我们构建了
Ｘｃｃ ８００４菌株的 ＸｏｐＸｃｃＰ基因缺失突变体ꎬ结果发现 ＸｏｐＸｃｃＰ基因缺失后ꎬ病原菌在多个甘蓝、花椰菜以及模式植物拟南
芥(Ｃｏｌ－０)上的致病性显著下降ꎬ甚至几乎不致病ꎮ 同时ꎬ采用农杆菌侵染拟南芥花序的转化方法ꎬ获得了转 ＸｏｐＸｃｃＰ 基
因拟南芥纯系ꎬ经过诱导效应蛋白 ＸｏｐＸｃｃＰ在拟南芥中表达ꎬ发现转基因拟南芥出现类似病斑的细胞死亡ꎮ 本研究结果初
步证明ꎬＸｏｐＸｃｃＰ是一种毒性蛋白ꎬ是 Ｘｃｃ ８００４对多数十字花科植物致病所必须的ꎮ
关键词:黄单胞菌ꎻ 效应蛋白ꎻ ＩＩＩ型分泌系统ꎻ 先天免疫
ＸｏｐＸｃｃＰꎬ ａ ｐｕｔａｔｉｖｅ ｔｙｐｅ ＩＩＩ ｅｆｆｅｃｔｏｒ ｇｅｎｅ ｏｆ Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ ｐｖ. ｃａｍｐｅｓ￣
ｔｒｉｓꎬ ｉｓ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ ｏｎ ｈｏｓｔ ｐｌａｎｔｓ ＬＩ Ｗｅｉ￣ｌａｎꎬ ＲＯＮＧ Ｗｅｉꎬ ＨＥ Ｃｈａｏ￣ｚｕ
(Ｈａｉｎａｎ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｆｏｒ Ｓｕｓｔａｉｎａｂｌｅ Ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｒｏｐｉｃａｌ Ｂｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅꎬ Ｈａｉｎａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬ Ｈａｉｋｏｕ ５７０２２８)
Ａｂｓｔｒａｃｔ: Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ ｐｖ. ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ (Ｘｃｃ) ｉｓ ｔｈｅ ｃａｕｓａｌ ａｇｅｎｔ ｏｆ ｂｌａｃｋ ｒｏｔ ｄｉｓｅａｓｅ ｉｎ ｃｒｕｃｉｆｅｒｏｕｓ
ｐｌａｎｔｓ. Ｆｅｗ ｅｆｆｅｃｔｏｒｓ ｏｆ Ｘｃｃ ｈａｖｅ ｂｅｅｎ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄ ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ ａｎｄ ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｌｙ. Ｉｎ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙꎬ ａ ｐｕｔａｔｉｖｅ
ｅｆｆｅｃｔｏｒ ｃｏｄｉｎｇ ｇｅｎｅ Ｘｃ＿２９９４ ｉｎ Ｘｃｃ ８００４ ｗａｓ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄ. Ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｘｏｐ
ＸｃｃＰꎬ ａ ＸｏｐＸｃｃＰ ｄｅｌｅｔｉｏｎ ｍｕｔａｎｔ ｗａｓ ｇｅｎｅｒａｔｅｄ ｂｙ ｇｅｎｅ ｋｎｏｃｋｏｕｔ. Ｔｈｅ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ ｏｆ △ＸｏｐＸｃｃＰ ｗａｓ ｔｅｓｔｅｄ
ｏｎ ｃａｂｂａｇｅꎬ ｃａｕｌｉｆｌｏｗｅｒ ａｎｄ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ (Ｃｏｌ－０) . Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ ｏｆ △ＸｏｐＸｃｃＰ ｗａｓ
ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｄｅｃｌｉｎｅｄ. Ｔｏ ｔｅｓｔ ｔｈｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ＸｏｐＸｃｃＰ ｉｎ ｖｉｖｏꎬ ａｎ ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ ｐｒｏｍｏｔｅｒ ｄｒｉｖｅｎ ＸｏｐＸｃｃＰ ｗａｓ
ｔｒａｎｓｆｅｒｒｅｄ ｉｎｔｏ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ. Ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ ｔｅｓｔ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ａｐｐｅａｒｅｄ ｌｅｓｉｏｎ ｍｉｍｉｃ ｃｅｌｌ
ｄｅａｔｈ ａｆｔｅｒ ｔｈｅ ｉｎｄｕｃｅｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＸｏｐＸｃｃＰ. Ｔｈｅｓｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｕｇｇｅｓｔ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｏｒ ＸｏｐＸｃｃＰ ｉｓ ａ ｖｉｒｕｌｅｎｔ
ｆａｃｔｏｒ ｏｎ ｈｏｓｔ ｐｌａｎｔｓ ａｎｄ ｉｓ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ ｐａｔｈｇｅｎｉｃｉｔｙ ｏｎ ｃｒｕｃｉｆｅｒｏｕｓ ｐｌａｎｔｓ.
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ: Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓꎻ ｅｆｆｅｃｔｏｒ ｐｒｏｔｅｉｎꎻ Ｔｙｐｅ ＩＩＩ ｓｅｃｒｅｔｉｏｎꎻ ｉｎｎａｔｅ ｉｍｍｕｎｉｔｙ
中图分类号: Ｓ４３２.４２ 文献标识码: Ａ 文章编号: ０４１２￣０９１４(２０１４)０２￣０１７３￣０７
野油菜黄单胞菌野油菜致病变种(Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ
ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ ｐｖ. ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓꎬ Ｘｃｃ)是一种能在全球范
围内引起所有十字花科植物黑腐病的重要病原细
菌[ １ ]ꎮ 野油菜黄单胞菌最早是 １８９５年从芜菁甘蓝
(Ｂｒａｓｓｉｃａ ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ)的病叶中分离获得ꎬ并确认为
芜菁甘蓝黑腐病的致病菌ꎮ Ｘｃｃ 能在世界范围内尤
其是热带和亚热带地区侵染包括甘蓝、白菜、花椰
菜、萝卜、芥菜等多种重要作物和模式植物拟南芥在
植物病理学报 ４４卷
内的所有十字花科植物ꎬ引起黑腐病ꎬ每年造成巨大
的经济损失ꎮ 在自然条件下ꎬ该病菌主要从寄主植物
叶缘的水孔侵染ꎬ也可以从伤口、根部侵染ꎮ 病原菌
从水孔侵入寄主后ꎬ沿着叶子中的导管繁殖、扩展ꎬ使
叶肉组织枯黄ꎬ叶脉变黑、变褐ꎬ最后在叶子中沿着叶
脉形成典型的黑腐病症状—“Ｖ” 字型病斑[１]ꎮ
在病原菌与寄主的互作过程中ꎬ细菌的蛋白分
泌系统起着非常重要的作用ꎮ 其中 ＩＩＩ型分泌系统
( ｔｙｐｅ ＩＩＩ ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍꎬ ＴＴＳＳ)是病原细菌致病
所依赖的最重要的分泌系统ꎮ ＩＩＩ 型分泌系统在植
物和动物病原菌中高度保守ꎬ而且对 Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ
的致病性非常重要[２ꎬ３]ꎬＩＩＩ 型分泌系统主要由 ｈｒｐ
(ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｒｅａｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ)基因编
码的蛋白所构成ꎮ 该类基因最早在大豆斑点病菌
( Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ. ｐｈａｓｅｏｌｉｃｏｌａ ) 中 发
现[ ４ ]ꎮ 电镜观察结果显示ꎬＩＩＩ 型分泌系统的分泌
装置是一个类似针管状超分子结构ꎬ包括两个明显
的结构ꎬ即突出于菌体细胞表面的针状结构和锚锭
于内外膜结构上的圆柱形基部ꎬ该基部类似于鞭毛
的基体[５]ꎮ 植物病原细菌正是通过这样的装置将
效应蛋白直接穿过细胞壁分泌到植物细胞内ꎮ 假
单胞菌 Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ 和野油菜黄单胞菌 Ｘａｎ￣
ｔｈｏｍｏｎａｓ是研究植物病原细菌 ＩＩＩ 型分泌系统分
泌效应蛋白的主要模式细菌[６ꎬ７]ꎮ 虽然单个 Ｘａｎ￣
ｔｈｏｍｏｎａｓ菌株分泌一系列的 １５ 个或更多的 ＩＩＩ 型
效应蛋白ꎬ但是只有一些效应子是重要的毒力因
子ꎬ删除它们会导致毒力戏剧性的散失[８]ꎮ 相反ꎬ
突变有些效应子基因编码区ꎬ如 Ｘ. ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ ｐｖ.
ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ的 ＡｖｒＸｃｃＣ和 ＸｏｐＸｃｃＮ 只会微弱地影
响细菌生长[９ꎬ１０]ꎮ 还有一些效应子具有 ＴＡＬ 效应
子活性ꎬ如 Ｘ. ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ ｐｖ. ｖｅｓｉｃａｔｏｒｉａ 的 ＡｖｒＢｓ３
起着转录因子的作用ꎬ直接诱导植物基因的表
达[１１ꎬ１２]ꎮ
本研究以野油菜黄单胞菌 Ｘｃｃ ８００４ 菌株 ＩＩＩ
型分泌效应子 ＸｏｐＸｃｃＰ 为研究对象ꎬ通过对其与
十字花科植物甘蓝、花椰菜、及拟南芥的作用研究ꎬ
阐明效应子 ＸｏｐＸｃｃＰ对病原菌致病性的影响ꎮ 主
要分为两方面:确定效应蛋白的缺失对 Ｘｃｃ 致病
性的影响ꎻ通过转 ＸｏｐＸｃｃＰ基因的拟南芥ꎬ进行初
步生理生化研究ꎬ确认其生物学功能ꎮ
１ 材料与方法
１.１ 菌株和质粒
本研究所用菌株和质粒见表 １ꎬ所用引物见表 ２ꎮ
１.２ 植物材料
拟南芥野生型(Ｃｏｌ－０)来自本实验室ꎻ甘蓝品
种(京丰 １ 号、中甘 １１、中甘 １５、中甘 １６、中甘 １７、
中甘 １９、中甘 ２１、晚丰)和花椰菜(中青 ９ 号)购自
中国农业科学院ꎮ
Ｔａｂｌｅ １ Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ ｐｖ. ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ ｓｔｒａｉｎｓ ａｎｄ ｐｌａｓｍｉｄｓ ｕｓｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｓｔｕｄｙ
Ｓｔｒａｉｎ ｏｒ ｐｌａｓｍｉｄ Ｒｅｌｅｖａｎｔ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ＃ Ｓｏｕｒｃｅ
Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ ｐｖ.
ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ Ｘｃｃ ８００４
Ｗｉｌｄ－ｔｙｐｅꎬ Ｒｉｆｒ Ｔｈｉｓ ｌａｂ
Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ＤＨ５α
Ｆ–ꎬｅｎｄＡ１ꎬ ｈｓｄＲ１７( ｒｋ－ｍｋ－)ꎬ ｓｕｐＥ４４ꎬ ｔｈｉ－１ꎬ ｒｅｃＡ１
ｇｙｒＡꎬ ｒｅｌＡ１ꎬ ｆ８０ｄ ｌａｃＺＤＭ１５ꎬ Δ( ｌａｃＺＹＡ－ａｒｇＦ)Ｕ１６９
Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ
ＧＶ３１０１ Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍꎬ Ｇｍｒ Ｔｈｉｓ ｌａｂ
△ＸｏｐＸｃｃＰ ＸｏｐＸｃｃＰ ｋｎｏｃｋｏｕｔ ｍｕｔａｎｔꎬ Ｒｉｆｒ Ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ
ＸＰＢＵ △ＸｏｐＸｃｃＰ ｍｕｔａｎｔ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ＸｏｐＸｃｃＰꎬ Ｒｉｆ ｒ Ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ
Ｔ－ＥＡＳＹ ＰＣＲ ｃｌｏｎｉｎｇ ｖｅｃｔｏｒꎬ Ａｍｐｒ Ｐｒｏｍｅｇａ
ｐＫ１８Ｍｏｂ ＳｅｃＢ Ｓｕｉｃｉｄｅ ｐｌａｓｍｉｄ ｉｎ Ｘ. ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ ｐｖ. ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓꎬ Ｋｍｒ Ｔｈｉｓ ｌａｂ
ＰＨＭ１ Ｂｒｏａｄ－ｈｏｓｔ－ｒａｎｇｅ ｃｏｓ ｐａｒＡ ＩｎｃＷ ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅ ｏｆ ｐＲＩ４０ Ｓｐｒ Ｔｈｉｓ ｌａｂ
ｐＥＲ－８－Ｆｌａｇ
Ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｖｅｃｔｏｒ ｕｎｄｅｒ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ
ｏｆ ｔｈｅ ｏｅｓｔｒｏｇｅｎ－ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ ｐｒｏｍｏｔｅｒꎬ Ｓｐｒ
Ｔｈｉｓ ｌａｂ
ｐＲＫ２０１３ ＣｏｌＥ１ ｒｅｐｌｉｃｏｎ ＴｒａＲＫ＋Ｍｏｂ＋ꎻ Ｋｍｒ Ｔｈｉｓ ｌａｂ
＃ Ａｂｂｒｅｖｉａｔｉｏｎｓ: Ｒｉｆ＝Ｒｉｆａｍｐｉｃｉｎꎬ Ｋｍ＝Ｋａｎａｍｙｃｉｎꎬ Ａｍｐ＝Ａｍｐｉｃｉｌｌｉｎꎬ Ｓｐ＝Ｓｐｅｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎꎬ Ｇｍ＝Ｇｅｎｔａｍｙｃｉｎ.
４７１
２期 李伟兰ꎬ等:一个推测的野油菜黄单胞菌Ⅲ型分泌效应子基因 ＸｏｐＸｃｃＰ对寄主植物的致病性分析
１.３ 基因缺失突变体的构建
以 Ｘｃｃ ８００４ 基因组 ＤＮＡ 为模板ꎬ扩增
ＸｏｐＸｃｃＰ基因两翼各 ３００ ｂｐ 的序列ꎬ通过 ＥｃｏＲＩ、
ＳｐｅＩ和 ＨｉｎｄＩＩＩ酶切位点把两个片段连接在一起构
建到自杀载体 ｐＫ１８ｍｏｂ上ꎬ命名为 ｐＫ１８ｍｏｂＸＰꎮ
活化细菌 Ｘｃｃ ８００４、ｐＲＫ２０１３和 ｐＫ１８ｍｏｂＸＰꎬ
三种菌液以 １ ∶ １ ∶ １ 的体积混匀ꎬ离心收集菌体ꎬ
ｄｄＨ２Ｏ洗涤一次ꎬ用 １５０ μＬ 的 ＮＹＧ(细菌培养用
蛋白胨 ５ ｇＬ－１ꎬ细菌培养用酵母膏 ３ ｇＬ－１ꎬ甘
油 ２０ ｇＬ－１ꎬｐＨ７.０)液体充分悬起菌体ꎬ转移致平
铺于 ＮＹＧ平板上的 ０.４５ μｍ 微孔滤膜上ꎬ２８℃培
养 ２４ ~ ３０ ｈꎬ将滤膜上生长的菌体全部转移到
ＮＹＧ液体中ꎬ按不同的稀释梯度涂布于含有利福
平和卡那霉素的 ＮＹＧ 平板上ꎮ 挑阳性单菌落于
ＮＹＧ液体中进行培养ꎬ取少许菌液涂板于含 １５％
蔗糖的 ＮＹＧ 平板上ꎬ进行突变体筛选ꎬ所得突变
体命名为△ＸｏｐＸｃｃＰꎮ
１.４ △ＸｏｐＸｃｃＰ基因互补菌株的构建
以 Ｘｃｃ ８００４ 基因组 ＤＮＡ 为模板ꎬ扩增
ＸｏｐＸｃｃＰ基因ꎬ通过 ＨｉｎｄＩＩＩ 和 ＥｃｏＲＩ 酶切位点将
ＸｏｐＸｃｃＰ 基因连 接到载体 ｐＨＭ１ 上ꎬ 命 名 为
ｐＨＭ１ＸＰꎬ再运用三亲结合的方法ꎬ在辅助质粒
ｐＲＫ２０１３ 的帮助下将 ｐＨＭ１ＸＰ 导入突变体
△ＸｏｐＸｃｃＰ中ꎬ命名为 ＸＰＢＵꎮ
１.５ 拟南芥转化实验
将 ＸｏｐＸｃｃＰ 基因通过 ＸｈｏＩ 和 Ｃｓｐ４５Ｉ 酶切位
点建入雌激素诱导型启动子调控的转基因载体
ｐＥＲ８－ＦＬＡＧ 中ꎬ产生 ｐＥＲ８ / ＸＰꎮ 将 ｐＥＲ８ / ＸＰ 质
粒转入农杆菌 ＧＶ３１０１中ꎬ产生 ＧＶ / ＸＰꎮ
接种 ＧＶ / ＸＰ 单克隆于 ５ ｍＬ ＬＢ 液体培养基
中、Ｇｍ抗性ꎬ２８℃培养过夜ꎮ 第二天按照 １:１００
转接到 ５００ ｍＬ液体培养基中ꎬ培养 １６ ｈꎮ 收集菌
体ꎬ在 ５％蔗糖溶液中加入 ０.０１％ Ｓｉｌｗｅｔ Ｌ－７７ 混
匀ꎬ用此溶液重悬细菌ꎮ 取生长大约 ６ ~ ８ 周ꎬ长势
良好的植物ꎬ剪去果夹ꎬ将花序浸没在菌液中 ３
ｍｉｎꎮ 完成后将植物平放于盆中ꎬ并加盖保湿ꎬ移
到光线较弱处ꎮ 第二天揭去盖子ꎬ将苗竖起并转移
到正常条件下继续培养ꎬ生长一周后重复以上步
骤ꎬ使用农杆菌再次侵染植物ꎮ 分批次收取以上转
化植物的种子ꎬ干燥后进行转基因种子的筛选和鉴
定ꎮ
１.６ 甘蓝和花椰菜剪切接种
活化 Ｘｃｃ ８００４ 菌株ꎬ接种于液体培养基中ꎬ
２８℃培养过夜ꎮ ４ ０００ ｒｐｍꎬ５ ｍｉｎ 收集菌体ꎬ再用
灭菌的去离子水悬起菌体洗涤 ３次ꎬ调整菌体浓度
为 １０８ ｃｆｕｍＬ－１ꎮ 取四周大完全伸展开的叶片ꎬ
用剪刀蘸取菌液ꎬ将叶片上部剪去ꎬ再用剪刀蘸上
菌液平涂于伤口ꎬ使细菌通过伤口侵染ꎬ并加透明
塑料膜使植物保湿 ２ ｄꎮ ５ ｄ 后观察表型变化ꎬ９ ｄ
后拍照片记录ꎮ
１.７ 注射和针刺接种拟南芥
活化菌株ꎬ接种于 ＮＹＧ 液体培养基中ꎬ２８℃
培养过夜ꎬ收集菌体ꎬ再用灭菌的去离子水悬起菌
体洗涤 ３次ꎮ 注射接种:调整菌体浓度为 １０６ ｃｆｕ
ｍＬ－１ ꎬ选择５~６周大生长良好的拟南芥植株ꎬ用去
Ｔａｂｌｅ ２ Ｐｒｉｍｅｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｕｓｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｓｔｕｄｙ
Ｐｒｉｍｅｒ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ ｐｒｉｍｅｒｓ (５′￣３′) Ｆｕｎｃｔｉｏｎ
ＸｏｐＸｃｃＰ￣ＥｃｏＲＩ￣ＦＦ ｇａａｔｔｃａｇｃｇｃａｃｔｃａｔａｃｔｃａｔｔ ＸｏｐＸｃｃＰ ｇｅｎｅ ｋｎｏｃｋｏｕｔ
ＸｏｐＸｃｃＰ￣ＳｐｅＩ￣ＦＲ ａｃｔａｇｔｇａｔｔｔｃｔｔｃｃｔｔｔｔｃｔｔｃｔ ＸｏｐＸｃｃＰ ｇｅｎｅ ｋｎｏｃｋｏｕｔ
ＸｏｐＸｃｃＰ￣ＳｐｅＩ￣ＬＦ ａｃｔａｇｔｇａｔｔｇａｔｃｃａｇｔｔｔｇａｇｔ ＸｏｐＸｃｃＰ ｇｅｎｅ ｋｎｏｃｋｏｕｔ
ＸｏｐＸｃｃＰ￣ＨｉｎｄＩＩＩ￣ＬＲ ａａｇｃｔｔａｇｃａｇａｔｇａａｔｃｃｇｃａａｃａ ＸｏｐＸｃｃＰ ｇｅｎｅ ｋｎｏｃｋｏｕｔ
ＸｏｐＸｃｃＰ￣ＸｈｏＩ￣Ｆ ａａａｃｔｃｇａｇａｔｇｃａｔｃｇｔｇｔｃｇａａａｔｇ ｐＥＲ８ / ＸＰ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ
ＸｏｐＸｃｃＰ￣Ｃｓｐ４５Ｉ￣Ｒ ａａａｔｔｃｇａａｃｇｇｇａｇｇｃｔｇａａｃａｇｇｃ ｐＥＲ８ / ＸＰ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ
ＸＰｂｕ￣ＨｉｎｄＩＩＩ￣Ｆ ｃｃｃａａｇｃｔｔａｔｇｃａｔｃｇｔｇｔｃｇａａａｔｇ ｐＨＭ１ＸＰ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ
ＸＰｂｕ￣ＥｃｏＲＩ￣Ｒ ｃａｇｇａａｔｔｃｔｔａｃｇｇｇａｇｇｃｔｇａｔａｃａ ｐＨＭ１ＸＰ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ
５７１
植物病理学报 ４４卷
针头的 １ ｍＬ 注射器从叶片背面将菌注满整个叶
片ꎬ接种完毕用吸水纸擦干叶片表面残余菌液ꎮ 针
刺接种:调整菌体浓度为 ２ｘ１０８ ｃｆｕｍＬ－１ꎬ选择 ５
~６周大生长良好的拟南芥植株ꎬ用灭菌牙签尖端
蘸取菌液在主叶脉靠顶端的位置刺 ３个孔ꎮ
每株植物取 ３片叶子ꎬ每 ２片叶子做为一个样
品ꎬ每种材料至少需要 ６个重复样品ꎮ 接种后立即
用直径 ０. ７４ ｃｍ 的打孔器获取样品放于装有
１００ μＬ灭菌水的离心管中ꎬ电转磨碎样品后再加
９００ μＬ 水稀释后取 ２０ μＬ 菌液涂布平板ꎬ计数做
第 ０ ｄꎮ 第 ３ ｄ再取叶片、磨样、稀释、涂布平板ꎬ统
计细菌生长差异ꎮ
２ 结果与分析
２.１ ＸｏｐＸｃｃＰ基因的缺失对致病性的影响
野油菜黄单胞菌是导致十字花科植物黑腐病
的致病菌ꎬ我们选择了甘蓝(８个不同品种)和花椰
菜进行剪切接种试验ꎮ 结果显示ꎬＸｃｃ ８００４在寄主
植物甘蓝(京丰 １号、中甘 １１、中甘 １５、中甘 １６、中
甘 １７、中甘 １９、中甘 ２１、晚丰)和花椰菜(中青 ９
号)上形成典型的“Ｖ”型病斑ꎬ而突变体△Ｘｏｐ￣
ＸｃｃＰ在寄主上的致病性显著下降ꎮ 在品种中甘
１５、中甘 １９ 和中青 ９ 号上接种突变体△ＸｏｐＸｃｃＰ
后产生的病斑显著减小ꎬ而在京丰 １号、晚丰、中甘
１６、中甘 １１、中甘 １７、中甘 ２１ 上接种突变体
△ＸｏｐＸｃｃＰ基本不发病(图 １)ꎮ 这说明 ＸｏｐＸｃｃＰ
是一种毒性蛋白ꎬ它在 Ｘｃｃ ８００４ 侵染植物时发挥
着重要作用ꎮ 虽然突变体△ＸｏｐＸｃｃＰ 对所有参试
十字花科蔬菜品种的致病性明显下降ꎬ但不同品种
间下降的程度有所不同ꎬ推测不同寄主间可能对效
应蛋白 ＸｏｐＸｃｃＰ的应答存在差异ꎮ
拟南芥是一种十字花科植物ꎬ植株形态个体
小、生长周期快、种子多、形态特征简单、生命力强、
基因组小ꎬ它的大多数基因与其他复杂的植物基因
具有很高的同源性ꎮ 另外ꎬ这种植物的全部基因组
测序已经完成ꎬ是一种典型的模式植物ꎬ是研究植
Ｆｉｇ. １ Ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ ｔｅｓｔ ｏｆ △ＸｏｐＸｃｃＰ ｏｎ ｃｒｕｃｉｆｅｒｏｕｓ ｐｌａｎｔｓ
Ｘｃｃ ８００４ ａｎｄ △ＸｏｐＸｃｃＰ ｗｅｒｅ ｉｎｏｃｕｌａｔｅｄ ｏｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｕｌｔｉｖａｒｓ ｏｆ ｃｒｕｃｉｆｅｒｏｕｓ ｐｌａｎｔｓ. Ｔｈｅ ｗｉｌｄ￣ｔｙｐｅ ｓｔｒａｉｎ Ｘｃｃ ８００４
ｗａｓ ｕｓｅｄ ａｓ ａ ｃｏｎｔｒｏｌ. Ｄｉｓｅａｓｅ ｓｙｍｐｔｏｍｓ ｏｎ △ＸｏｐＸｃｃＰ ｉｎｏｃｕｌａｔｅｄ ｌｅａｖｅｓ ｏｆ ｃｒｕｃｉｆｅｒｏｕｓ ｐｌａｎｔｓ (Ｊｉｎｇｆｅｎｇ １ꎻ Ｚｈｏｎｇｇａｎ １６ꎻ Ｗａｎｆｅｎｇꎻ
Ｚｈｏｎｇｇａｎ １１ꎻ Ｚｈｏｎｇｇａｎ １７ꎻ Ｚｈｏｎｇｇａｎ １５ꎻ Ｚｈｏｎｇｇａｎ ２１ꎻ Ｚｈｏｎｇｇａｎ １９ꎻ Ｚｈｏｎｇｑｉｎｇ ９) ｒｅｄｕｃｅｄ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ
ｉｎ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｗｉｔｈ ｔｈｏｓｅ ｉｎｏｃｕｌａｔｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｗｉｌｄ－ｔｙｐｅ ｓｔｒａｉｎ ８００４. Ｐｈｏｔｏｇｒａｐｈｓ ｗｅｒｅ ｔａｋｅｎ ｏｎ ｄａｙ ９ ｐｏｓｔ－ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ.
６７１
２期 李伟兰ꎬ等:一个推测的野油菜黄单胞菌Ⅲ型分泌效应子基因 ＸｏｐＸｃｃＰ对寄主植物的致病性分析
物－病原微生物相互作用的理想对象ꎮ 我们采用
注射和针刺两种方式接种拟南芥野生型 Ｃｏｌ－０ꎬ取
第 ０ ｄ(即接种后立即取样)和第 ３ ｄ做细菌生长试
验ꎮ 图 ２显示ꎬ注射接种野生型 Ｃｏｌ－０ꎬ第 ３ ｄ 时ꎬ
Ｘｃｃ ８００４和△ＸｏｐＸｃｃＰ 细菌生长无明显差异ꎮ 针
刺接种野生型 Ｃｏｌ－０ꎬ第 ３ ｄ时ꎬＸｃｃ ８００４是△Ｘｏｐ￣
ＸｃｃＰ的 ２ 倍多ꎬＸｃｃ ８００４ 和△ＸｏｐＸｃｃＰ 细菌生长
差异显著ꎬ而互补菌株 ＸＰＢＵ 是 Ｘｃｃ ８００４ 的 ７３％
左右ꎬ表型部分恢复ꎮ 这进一步说明了ꎬＸｏｐＸｃｃＰ
是一种毒性蛋白ꎬ而且它的毒性功能在植物中主要
作用于维管束组织(由针刺接种体现)ꎬ而不是叶
肉细胞(由注射接种体现)ꎮ
２.２ ＸｏｐＸｃｃＰ 基因的表达致使转基因拟南芥严
重发病
为了进一步研究 ＸｏｐＸｃｃＰ对拟南芥致病性上的
功能ꎬ我们把含雌激素诱导启动子和 ＦＬＡＧ 标记的
ＸｏｐＸｃｃＰ基因转入拟南芥中ꎬ经过转基因种子的筛选
和Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ鉴定(结果略)获得转基因拟南芥纯
系ꎮ 我们用 ０.０１ ｍｏｌＬ－１的雌激素注射拟南芥叶片ꎬ
诱导基因的表达ꎬ结果含 ＸｏｐＸｃｃＰ基因的拟南芥明显
出现类似发病的症状ꎬ而野生型 Ｃｏｌ－０却未出现类似
症状(图 ３)ꎮ 这说明 ＸｏｐＸｃｃＰ可以触发或诱导拟南
芥细胞内某些生理反应ꎬ导致其细胞死亡ꎮ 该症状与
寄主植物对病原微生物的超敏反应 ＨＲ类似ꎮ 虽然
尚不清楚 ＸｏｐＸｃｃＰ 在寄主植物细胞内生理生化机
制ꎬ也不清楚 ＸｏｐＸｃｃＰ 作用于寄主植物的先天免疫
途径的具体位置ꎬ但可以肯定 ＸｏｐＸｃｃＰ 是一个毒性
因子(ｖｉｒｕｌｅｎｔ ｆａｃｔｏｒ)ꎮ
Ｆｉｇ. ２ Ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ Ｘｃｃ ｓｔｒａｉｎｓ ｉｎ ｌｅａｖｅｓ ｏｆ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ
Ａ: Ｆｉｖｅ￣ｗｅｅｋ￣ｏｌｄ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ (Ｃｏｌ－０) ｐｌａｎｔｓ ｗｅｒｅ ｉｎfiｌｔｒａｔｅｄ ｂｙ Ｘｃｃ ８００４ ａｎｄ ΔＸｏｐＸｃｃＰ ａｔ １０６ ｃｆｕｍＬ－１ . Ｂａｃｔｅｒｉａｌ
ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｗａｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ａｔ ｔｈｅ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｉｍｅｓ (ｍｅａｎ＋ｓ.ｄ.ꎻ ｎ>６)ꎻ Ｂ: Ｆｉｖｅ￣ｗｅｅｋ￣ｏｌｄ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ (Ｃｏｌ￣０) ｐｌａｎｔｓ ｗｅｒｅ
ｉｎｏｃｕｌａｔｅｄ ｗｉｔｈ Ｘｃｃ ８００４ꎬ △ＸｏｐＸｃｃＰ ａｎｄ ＸＰＢＵ ａｔ ２ｘ１０８ ｃｆｕｍＬ－１ ｕｓｉｎｇ ｔｏｏｔｈｐｉｃｋｓ. Ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｗａｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ
ａｔ ｔｈｅ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｉｍｅｓ(ｍｅａｎ＋ｓ.ｄ.ꎻ ｎ>６ꎻ ∗∗ Ｐ<０.０１ꎬＳｔｕｄｅｎｔｓ ｔ￣ｔｅｓｔ) . Ｅａｃｈ ｄａｔａ ｐｏｉｎｔ ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｓ ６ ｒｅｐｌｉｃａｔｅｓ. Ｔｈｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ
ｗｅｒｅ ｒｅｐｅａｔｅｄ ３ ｔｉｍｅｓ ｗｉｔｈ ｓｉｍｉｌａｒ ｒｅｓｕｌｔｓ.
Ｆｉｇ. ３ Ｄｉｓｅａｓｅ￣ｌｉｋｅ ｓｙｍｐｔｏｍｓ ｏｆ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ
Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ (５￣６ ｗｅｅｋｓ) ｗｅｒｅ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｓｔｒｏｇｅｎ. Ａ: ＸｏｐＸｃｃＰ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｐｌａｎｔꎻ
Ｂ: Ｗｉｄｅ ｔｙｐｅ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ (Ｃｏｌ￣０) .Ｔｈｅ ｌｅａｖｅｓ ｉｎｆｉｌｔｒａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｅｓｔｒａｄｉｏｌ ｗｅｒｅ ｍａｒｋｅｄ ｗｉｔｈ ｂｌａｃｋ ｌｉｎｅ.
７７１
植物病理学报 ４４卷
３ 讨论
作为一种能在全球范围内危害所有十字花科
植物的重要病害ꎬ黑腐病受到了众多植物病理学家
的重视ꎮ 目前对该病原菌的研究工作多注重于 ＩＩＩ
型分泌效应蛋白与植物互作的机理研究ꎮ 本研究
利用三亲结合的方法将 Ｘｃｃ ８００４ 中的 ＩＩＩ 型效应
子基因 ＸｏｐＸｃｃＰ 敲除ꎬ接种试验显示ꎬＸｏｐＸｃｃＰ 基
因缺失后ꎬ△ＸｏｐＸｃｃＰ 的致病性显著下降(图 １)ꎬ
雌激素诱导 ＸｏｐＸｃｃＰ 转基因拟南芥出现类似病斑
症状(图 ３)ꎬ证实了 ＸｏｐＸｃｃＰ 是一个毒性蛋白ꎮ
ＸｏｐＸｃｃＰ对大多数十字花科植物具有毒性功能ꎬ
它对参试的寄主植物不具有专一性ꎬ但其生物学功
能尚不清楚ꎮ
近年来ꎬ通过运用现在分子生物学技术和结构
生物学的方法ꎬ已有部分效应蛋白与植物互作的机
理研究得比较清楚ꎬ比如假单胞菌的 ＡｖｒＲｐｍ１、
ＡｖｒＰｔｏＢ、ＡｖｒＰｔｏ、ＡｖｒＲｐｔ２ 以及 ＡｖｒＢ 等ꎮ 相关研
究表明许多假单胞菌效应蛋白是通过抑制植物的
防御机制生成毒力的[１３]ꎮ 目前大部分效应蛋白的
研究还不透切ꎬ有的还处于表型分析阶段ꎮ 在黄单
胞菌中ꎬ只有一些转录因子类(ＴＡＬ)的效应蛋白
功能研究得相对清楚ꎬ例如:ＡｖｒＢｓ３ꎬ它可以定位
到细胞核ꎬ并结合到靶标启动子ꎬ进而诱导植物基
因的表达ꎮ ＡｖｒＡＣꎬ是一个尿苷 ５’ －单磷酸转移
酶ꎬ以磷酸化修饰的方式来抑制植物免疫信号转
导ꎬ通过对底物 ＢＩＫ１ 和 ＲＩＰＫ 功能至关重要的激
活环区保守的丝氨酸和苏氨酸进行尿苷单磷酸修
饰来掩盖这两个位点ꎬ阻止它们的磷酸化ꎬ并抑制
这两个受体激酶活性进而抑制由它们所介导的植
物免疫信号转导[１４]ꎮ 而 ＸｏｐＸｃｃＰ 没有明显的结
构域ꎬ单从序列分析没有获得特别的信息ꎬ对于这
样一个功能未知的、信息量少的蛋白ꎬ后期研究工
作具有较大挑战性ꎮ
总之ꎬＸｏｐＸｃｃＰ 显著影响 Ｘｃｃ 的致病性ꎬ诱导
ＸｏｐＸｃｃＰ在拟南芥中表达致使拟南芥显著发病ꎬ
ＸｏｐＸｃｃＰ是一种毒性蛋白ꎬ有必要对其进行深入的研
究ꎬ完善病原菌致病与植物免疫应答方面的知识ꎮ
参考文献
[１] Ｗｉｌｌｉａｍｓꎬ Ｐ Ｈ. Ｂｌａｃｋ Ｒ. Ａ ｃｏｎｔｉｎｕｉｎｇ ｔｈｒｅａｔ ｔｏ ｗｏｒｌｄ
ｃｒｕｃｉｆｅｒｓ [Ｊ] . Ｐｌａｎｔ Ｄｉｓｅａｓｅꎬ １９８０ꎬ ６４(８): ７３６－７４２.
[２] Ｂüｔｔｎｅｒ Ｄꎬ Ｎｏｅｌ Ｌꎬ Ｔｈｉｅｍｅ Ｆꎬ ｅｔ ａｌ. Ｇｅｎｏｍｉｃ ａｐｐｒｏａ￣
ｃｈｅｓ ｉｎ Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ ｐｖ. ｖｅｓｉｃａｔｏｒｉａ ａｌｌｏｗ
fiｓｈｉｎｇ ｆｏｒ ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ ｇｅｎｅｓ[ Ｊ] . Ｊ. Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ.ꎬ ２００３ꎬ
１０６(２－３): ２０３－２１４.
[３] Ｔａｍｐａｋａｋｉ Ａ Ｐꎬ Ｆａｄｏｕｌｏｇｌｏｕ Ｖ Ｅꎬ Ｇａｚｉ Ａ Ｄꎬ ｅｔ ａｌ.
Ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ ｆｅａｔｕｒｅｓ ｏｆ ｔｙｐｅ ＩＩＩ ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ [ Ｊ ] . Ｃｅｌｌ
Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ.ꎬ ２００４ꎬ ６(９): ８０５－８１６.
[４] Ｌｉｎｄｇｒｅｎ Ｐ Ｂꎬ Ｐｅｅｔ Ｒ Ｃꎬ Ｐａｎｏｐｏｕｌｏｓ Ｎ Ｊꎬ ｅｔ ａｌ. Ｇｅｎｅ
ｃｌｕｓｔｅｒ ｏｆ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ. " ｐｈａｓｅｏｌｉｃｏｌａ "
ｃｏｎｔｒｏｌｓ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ ｏｆ ｂｅａｎ ｐｌａｎｔｓ ａｎｄ ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｉ￣
ｔｙ ｏｆ ｎｏｎｈｏｓｔ ｐｌａｎｔｓ[ Ｊ] . Ｊ. Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ.ꎬ １９８６ꎬ １６８(２):
５１２－５２２.
[５] Ｂｒｏｗｎ Ｉ Ｒꎬ Ｍａｎｓｆｉｅｌｄ Ｊ Ｗꎬ Ｔａｉｒａ Ｓꎬ ｅｔ ａｌ. Ｉｍｍｕｎｏｃｙ￣
ｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ＨｒｐＡ ａｎｄ ＨｒｐＺ ｓｕｐｐｏｒｔｓ ａ
ｒｏｌｅ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｈｒｐ ｐｉｌｕｓ ｉｎ ｔｈｅ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｏｆ ｅｆｆｅｃｔｏｒ ｐｒｏｔｅｉｎｓ
ｆｒｏｍ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ. ｔｏｍａｔｏ ａｃｒｏｓｓ ｔｈｅ ｈｏｓｔ
ｐｌａｎｔ ｃｅｌｌ ｗａｌｌ[ Ｊ] . Ｍｏｌ. Ｐｌａｎｔ Ｍｉｃｒｏｂｅ Ｉｎ.ꎬ ２００１ꎬ １４
(３): ３９４－４０４
[６] Ｂｌｏｃｋ Ａꎬ Ａｌｆａｎｏ Ｊ Ｒ. Ｐｌａｎｔ ｔａｒｇｅｔｓ ｆｏｒ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ
ｓｙｒｉｎｇａｅ ｔｙｐｅ ＩＩＩ ｅｆｆｅｃｔｏｒｓ: ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ ｔａｒｇｅｔｓ ｏｒ ｇｕａｒｄｅｄ
ｄｅｃｏｙｓ? [Ｊ] . Ｃｕｒｒ. Ｏｐｉｎ. Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ.ꎬ ２０１１ꎬ １４(１):
３９－４６.
[７] Ｗｈｉｔｅ Ｆ Ｆꎬ Ｐｏｔｎｉｓ Ｎꎬ Ｊｏｎｅｓ Ｊ Ｂꎬ ｅｔ ａｌ. Ｔｈｅ ｔｙｐｅ ＩＩＩ
ｅｆｆｅｃｔｏｒｓ ｏｆ Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ [ Ｊ ] . Ｍｏｌ. Ｐｌａｎｔ Ｐａｔｈｏｌ.ꎬ
２００９ꎬ １０(６): ７４９－７６６.
[８] Ｔｈｉｅｍｅ Ｆꎬ Ｋｏｅｂｎｉｋ Ｒꎬ Ｂｅｋｅｌ Ｔꎬ ｅｔ ａｌ. Ｉｎｓｉｇｈｔｓ ｉｎｔｏ
ｇｅｎｏｍｅ ｐｌａｓｔｉｃｉｔｙ ａｎｄ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ｐｌａｎｔ ｐａｔｈｏ￣
ｇｅｎｉｃ ｂａｃｔｅｒｉｕｍ Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ ｐｖ. ｖｅｓｉｃａｔｏ￣
ｒｉａ ｒｅｖｅａｌｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｃｏｍｐｌｅｔｅ ｇｅｎｏｍｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ [ Ｊ] .
Ｊ. Ｂａｃｔｅｒｉａｌ.ꎬ ２００５ꎬ １８７(２１): ７２５４－７２６６.
[９] Ｊｉａｎｇ Ｂ Ｌꎬ Ｈｅ Ｙ Ｑꎬ Ｃｅｎ Ｗ Ｊꎬ ｅｔ ａｌ. Ｔｈｅ ｔｙｐｅ ＩＩＩ
ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ ｅｆｆｅｃｔｏｒ ＸｏｐＸｃｃＮ ｏｆ Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ
ｐｖ. ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ ｉｓ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ ｆｕｌｌ ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ[ Ｊ] . Ｒｅｓ.
Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ.ꎬ ２００８ꎬ １５９(３): ２１６－２２０.
[１０] Ｗａｎｇ Ｌꎬ Ｔａｎｇ Ｘꎬ Ｈｅ Ｃ. Ｔｈｅ ｂｉｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｅｆｆｅｃｔｏｒ
ＡｖｒＸｃｃＣ ｏｆ Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ ｐｖ. ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ
ｒｅｑｕｉｒｅｓ ｐｌａｓｍａ ｍｅｍｂｒａｎｅ－ａｎｃｈｏｒｉｎｇ ｆｏｒ ｈｏｓｔ ｒｅｃｏｇｎｉ￣
ｔｉｏｎ[Ｊ] . Ｍｏｌ. Ｐｌａｎｔ Ｐａｔｈｏｌ.ꎬ ２００７ꎬ ８(４): ４９１－５０１.
[１１] Ｋａｙ Ｓꎬ Ｈａｈｎ Ｓꎬ Ｍａｒｏｉｓ Ｅꎬ ｅｔ ａｌ. Ａ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｅｆｆｅｃｔ
ａｃｔｓ ａｓ ａ ｐｌａｎｔ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ａｎｄ ｉｎｄｕｃｅｓ ａ ｃｅｌｌ
ｓｉｚｅ ｒｅｇｕｌａｔｏｒ[ Ｊ] . Ｓｃｉｅｎｃｅꎬ ２００７ꎬ ３１８(５８５０): ６４８－
６５１.
８７１
２期 李伟兰ꎬ等:一个推测的野油菜黄单胞菌Ⅲ型分泌效应子基因 ＸｏｐＸｃｃＰ对寄主植物的致病性分析
[１２] Ｒｏｍｅｒ Ｐꎬ Ｈａｈｎ Ｓꎬ Ｊｏｒｄａｎ Ｔꎬ ｅｔ ａｌ. Ｐｌａｎｔ －ｐａｔｈｏｇｅｎ
ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｂｙ ｐｒｏｍｏｔｅｒ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ
ｐｅｐｐｅｒ Ｂｓ３ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｇｅｎｅ [ Ｊ] . Ｓｃｉｅｎｃｅꎬ ２００７ꎬ ３１８
(５８５０): ６４５－６４８.
[１３] Ｇöｈｒｅ Ｖ ａｎｄ Ｒｏｂａｔｚｅｋ Ｓ. Ｂｒｅａｋｉｎｇ ｔｈｅ ｂａｒｒｉｅｒｓ: ｍｉｃｒｏ￣
ｂｉａｌ ｅｆｆｅｃｔｏｒ ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ｓｕｂｖｅｒｔ ｐｌａｎｔ ｉｍｍｕｎｉｔｙ [ Ｊ ] .
Ａｎｎｕ. Ｒｅｖ. Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌ.ꎬ ２００８ꎬ ４６(１): １８９－２１５.
[１４] Ｆｅｎｇ Ｆꎬ Ｙａｎｇ Ｆꎬ Ｗｅｉ Ｒꎬ ｅｔ ａｌ. Ａ Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ
ｕｒｉｄｉｎｅ ５′ － ｍｏｎｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｐｌａｎｔ
ｉｍｍｕｎｅ ｋｉｎａｓｅｓ[Ｊ] . Ｎａｔｕｒｅꎬ ２０１２ꎬ ４８５(７３９６): １１４－
１１８.
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