全 文 ：书西北植物学报!
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文章编号$
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-
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收稿日期$
!"#$*"$*#$
&修改稿收到日期$
!"#$*",*#&
基金项目$国家自然科学基金"
%##(",!
#
作者简介$杨慧萍"
#11")
#!女!在读研究生!主要从事园林植物分子育种的研究
2*34.5
$
6
7
8
#11"""
!
#,%+9:3
"
通信作者$刘雅莉!硕士!教授!硕士生导师!主要从事园林植物遗传育种的研究
2*34.5
$
5
6
5,##
!
#!,+9:3
葡萄风信子
1$230
基因克隆与表达分析
杨慧萍!刘雅莉"!娄
!
倩!李志根
"西北农林科技大学 旱区作物逆境生物学国家重点实验室!农业部西北地区园艺作物生物学与种质创制重点实验室!陕西杨陵
(#!#""
#
摘
!
要$该研究利用
;<=
技术从葡萄风信子(亚美尼亚)中克隆了
#
个黄酮醇合成酶"
>?@
#基因!命名为
!"#$%

!"#$%
的
9ABC
全长为
#"(,D
8
!开放阅读框为
111D
8
!编码
%%!
个氨基酸!推测的蛋白质分子量
%&+#EA
!理论
等电点为
+"1
同源比对和系统进化分析表明!
!"#$%
基因编码的氨基酸具有黄酮醇合成酶典型的
!*FAA
超家
族保守结构域!与拟南芥和高粱
#$%
一致性分别为
,"G
和
&%G
半定量
;<=
和荧光实时定量
;<=
表达分析表
明!
!"#$%
在花器官中高表达!在根*茎*叶中微量表达!在完全未着色的花蕾期开始表达并于花完全开放未着色
时期到达峰值!之后随花发育表达量逐渐降低原核表达检测到
#
条大约
%&EA
的外源蛋白!与预测的蛋白分子
量相符该研究结果为进一步探讨葡萄风信子
!"#$%
基因对黄酮类物质合成的调控作用奠定了基础
关键词$葡萄风信子&黄酮醇合成酶&克隆&荧光实时定量&原核表达
中图分类号$
H(&
&
H(&,
文献标志码$
C
$%"&(#"))!*+,-(.,#/(#")"01&2")"&
3
4
)(+%.5.).0,"6145"$(-$(6)/-$"46
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6
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M6
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8
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M
Q:U>:TQ/RT
6
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I40
M
5.0
M
!
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<7.04
#
78%(,-(
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M
Q0Q!"#$%Q09:W.0
M
R7QU54Y:0:5/
6
0R74/Q
"
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#
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6
0R7Q/./Z4/
95:0QWUT:3!&(")*")+,-*"(&++\7QUL55Q0
M
R79ABC:U!"#$%Z4/#"(,D
8
!
40WR7Q:
8
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M
UT43Q5Q0
M
R7Z4/111D
8
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Z7.97Q09:W.0
M
4
8
T:RQ.0
8
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68
Q
8
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8
TQW.9RQW3:5Q9L*
54TZQ.
M
7R:U%&+#EA40W
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N:U+"1+\7Q
8
LR4R.YQ!"#$%W./
8
54
6
QW.WQ0R.R.Q/R:R7Q#$%:U.)"/*01
2
3
*45"6*"-"40W%1)
7
5&+/*(161):U,"G40W&%G
!
TQ/
8
Q9R.YQ5
6
!
40W9:0R4.0QW/QYQT45R
68
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Q3Q0R/U:L0W.0R7Q!*:[:
M
5LR4T4RQ*40W>Q
"
"
#
*WQ
8
Q0WQ0RW.:[
6M
Q04/Q/
"
!*FAA
#
+HL40R.R4R.YQTQ45*R.3Q
;<=4045
6
]QWR7QQ[
8
TQ//.:0
8
T:U.5Q/:U!"#$%.0W.UUQTQ0RR.//LQ/+\7QTQ/L5R/WQ3:0/RT4RQWR74R!"#$%
Z4/9:0/R.RLR.YQ5
6
Q[
8
TQ//QW.0T::R/
!
/RQ3/40W5Q4YQ/
!
Z.R7
8
4TR.9L54T5
6
7.
M
7Q[
8
TQ//.:0.0U5:ZQT/+\7Q
9ABC:U!"#$%Z4/R7Q0/LD95:0QW.0R:
8
2\*%!440W.0RT:WL9QW.0R:V?!#
"
A2%
#!
40WR7QTQ9:3D.040R
8
54/3.WZ4//L99Q//UL5
6
Q[
8
TQ//QW.0R7Q9:0W.R.:0:U"+#33:5
+
?
)#
N;\J4R!^U:T!"7+\7Q3:5Q9L*
54TZQ.
M
7RZ4/U:L0WR:DQ4D:LR%&EAD
6
97Q9E.0
M
Z.R7@A@*;CJ2
!
0Q4T5
6
Q
_
L45R:R7Q
8
TQW.94RQW+
9.
4
:",!%
$
!&(")*")+,-*"(&+
&
U54Y:0:5/
6
0R74/Q
&
95:0Q
&
TQ45R.3Q;<=
&
8
T:E4T
6
:R.9Q[
8
TQ//.:0
!!
黄酮类物质属于多酚类次生代谢物!具有典型 的
<,*<%*<,
骨架特征,#-根据中心
<
环的修饰不
同可以分为黄烷醇*二氢黄酮醇*黄酮*黄酮醇*黄
烷*花青素*原花青素以及异黄酮等主要大类已鉴
定和报道的黄酮类化合物总数达
&"""
多种!而其
中黄酮醇数量达到
!"""
种,!-!在植物体内含量非
常丰富!并且具有很重要的生理功能!参与到植物体
内多种基础代谢运行!例如植物激素的运输*花色修
饰*保护植物免受紫外辐射*抵御微生物和害虫入侵
以及昆虫与微生物之间的信号传导等研究表明黄
酮醇还具有消炎*抗血管生成*抗氧化*保护心脏*预
防肿瘤生成等药理学功能,!-
黄酮醇化合物是在黄酮醇合成酶"
U54Y:0:5
/
6
0R74/Q
!
>?@
#催化下!由二氢黄酮醇转变而来!其
活性受二氧戊二酸盐和二价铁离子的限制黄酮醇
合成酶作为类黄酮合成途径和儿茶素合成途径的桥
梁!在植物中高度保守,%-!催化黄酮结构中的
<%
位
羟基化!从而形成各种不同的黄酮醇类物质黄酮
醇
%
种主要的结构形式为杨梅素*槲皮素和山奈酚!
分别由
#$%
催化二氢杨梅素*二氢槲皮素和二氢山
奈酚转化得来二氢黄酮醇作为类黄酮合成途径的
一个节点!由二氢黄酮醇
$*
还原酶"
W.7
6
WT:U54Y:0:5
$*TQWL9R4/Q
!
A>=
#催化产生有色的花青素!
>?@
催
化产生无色的黄酮醇,$-由于
>?@
和
A>=
竞争共
同的底物二氢黄酮醇,-!因此
>?@
和黄酮醇的上调
可能引起花青素积累下降已有研究发现紫外线
V
诱导大豆中黄酮醇积累,-&对苦荞麦进行
B4<5
胁
迫处理发现
#$%
表达上调并且黄酮醇积累增加,(-
此外
#$%
能改变大豆花色!单一碱基的缺失使花色
从粉色变为洋红色,&-&
B.Q5/Q0
,
1
-利用基因沉默技术
抑制
#$%
基因!使花卉颜色由紫色变为红色!并能
稳定遗传
葡萄风信子是风信子科葡萄风信子属春季球根
花卉!以明亮的蓝色著称!具有很重要的美观*生态
与科研价值目前关于葡萄风信子的研究主要集中
于种球繁殖,#"*##-!组织培养,#!-!色素成分分析,#%-方
面!但是关于葡萄风信子属植物有关黄酮类代谢途
径的基因研究还未见报道!一定程度上限制了对葡
萄风信子属植物更加广泛深入的研究
本实验室前期结合转录谱和代谢组学技术从葡
萄风信子花组织数据库中筛选到了一条
#$%
候选
基因序列本研究利用
;<=
技术克隆到了这条葡
萄风信子
#$%
基因!半定量
;<=
和荧光实时定量
;<=
分检测其在葡萄风信子(亚美尼亚)根*茎*叶
和不同发育时期花器官中的表达情况!并对其进行
了原核表达!为进一步研究该基因功能及利用基因
工程手段调控葡萄风信子黄酮类物质合成奠定了一
定的基础
#
!
材料和方法
;+;
!
植物材料
试验于
!"#%
年在西北农林科技大学旱区作物
逆境生物学国家重点实验室进行葡萄风信子
"
!&(")*")+,-*"(&+
#(亚美尼亚)种植于西北农
林科技大学试验田根据开花时间!将花发育过程
分为

个阶段!时期
#
"
@
#
#!完全未着色的花蕾&时
期
!
"
@
!
#!开始着色的花蕾&时期
%
"
@
%
#!完全着色未
开放的花蕾&时期
$
"
@
$
#!完全开放的花&时期

"
@

#!衰败的花分别采集植株的根*茎*叶和不同
发育时期的花!于液氮中速冻后置于
)&"^
冰箱中
备用
;+<
!
方
!
法
;=<=;
!
总
>?7
提取与
-@?7
第一条链的合成
!
参
照北京百泰克生物技术有限公司的多糖多酚植物总
=BC
快速提取试剂盒说明书"
V.:\QSQ
#分别提取
不同组织根*茎*叶及花中的总
=BC
!琼脂糖凝胶电
泳检测所提取
=BC
的完整性!并用
B40:AT:
8
微
量紫外分光光度计"
B40:WT:
8
\Q970:5:
M
.Q/N09
!
AQ54Z4TQ
!
O@C
#检测样品纯度和浓度
使用
;T.3Q@9T.
8
R=\TQ4
M
Q0RS.R
"
\4S4=4
公
司#以提取的
=BC
为模板!
F5.
M
:
"
W#为引物!按照
9ABC
第一链合成试剂盒说明书反转录合成
9ABC
第一链
;=<=<
!
葡萄风信子
230
基因全长克隆
!
利用葡萄
风信子转录组测序获得的
#$%
基因序列设计特异
引物扩增全长!上游引物为
!"#$%*#
"
`*JCCJCJCJCJJJ#!下游引物为
!"#$%*!
"
`*# 引 物
设计用
;T.3QT+"
软件进行!并委托北京奥科鼎盛
生物科技有限公司合成以反转录的(亚美尼亚)花
瓣
9ABC
为模板进行
;<=
全长扩增扩增条件为
1$^
预变性
3.0
&
1$^
变性
%"/
!
(^
退火
%"/
!
(!^
延伸
1"/
!
%"
个循环&
(!^
延伸
#"3.0
电泳
检测后回收与预期片段大小一致的条带!连接到克
隆载体
8
XA#1*\aQ9R:T
"
\4S4=4
公司#后转化感
受态细胞
89(16*\:
8
#"
"天根生化科技有限公司#!
经蓝白斑筛选阳性克隆后送交北京奥科生物科技有
限公司进行测序
;=<=A
!
葡萄风信子
1$230
基因生物信息学分析
!
将获得的
!"#$%
基因序列在
B的
F=>U.0WQT
预
&"#
西
!
北
!
植
!
物
!
学
!
报
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
%$
卷
测开放读码框!并进行
V?C@搜索!对葡萄风信子
!"#$%
基因序列及其编码的蛋白进行生物信息学
分析&利用
:;.!.;
软件对
!"#$%
基因全长
9ABC
序列进行分析!获得该序列的氨基酸序列*分
子量和等电点等!并且根据获得的氨基酸序列进行
同源比对分析&用
XQ
M
4+"
软件构建系统发育树
;=<=B
!
葡萄风信子
1$230
基因的时空表达模式
分析
!
根据
!"#$%
基因序列设计实时定量引物!
上游引物为
!"#$%*%
"
`*\JJJCC\C#!下游引物为
!"#$%*$
"
`*J<\<#!内
参基因为
"(4*-
由于
#$%
在植物体内经常以家族
形式存在,#$-!所以为了保证定量结果的准确性!在
#$%
保守域之外设计了另外
#
对定量引物!
!"#$%*
"
`*C\#和
!"#$%*,
"
`*\JJCJC<<J\\*%`
#分别取葡萄风信子(亚美尼亚)根*茎*
叶以及不同发育时期花蕾的总
=BC
各
#
#
?
!反转
录合成
9ABC
!参照
@IV=;TQ3.[2[<"
=
\X
"
"
;QTUQ9R=Q45\.3Q
#"
\4S4=4
公司#实时荧光定量
操作说明书进行操作!于
NHXL5R.9:5:T=Q45*\.3Q
;<=AQRQ9R.:0@
6
/RQ3
实时定量
;<=
仪上检测花
蕾不同发育时期与不同部位
!"#$%
的相对表达
量!每个样品设
%
个重复
=\*;<=
扩增体系为
#"
#
?@IV=;TQ3.[2b<"
=
\X
"
"
!c
#!上*下游引物
各
"+&
#
?
!
9ABC#
#
?
!无菌水
&+$
#
?

=\*;<=
扩增程序为
1^
变性
3.0
&
1^
变性
%"/
!
^
退火
%"/
!
(!^
延伸
%"/
!
$"
个循环
2[9Q5!""(
和
FT.
M
.0&+"
对数据进行计算和处理!采用
!
)
$$
法,#-分析该基因的相对表达情况
;+<+C
!
原核表达载体构建
!
根据获得的
!"#$%
基因全长序列设计原核表达引物!上游引物为
!"#$%*(
"
`*JJC\<J!下划线为
>"+K
%
酶切位点#!下游引物
为
!"#$%*&
"
`*CCJ<\\\\C!下划线为
?*-W
&
酶切位
点#!由北京奥科生物科技有限公司合成以获得的
葡萄风信子
!"#$%
全长
9ABC
为模板进行
;<=
扩展
;<=
反应程序为
1$^
变性
3.0
&
1$^
变
性
%"/
!
(^
退火
1"/
!
(!^
延伸
#"3.0
电泳检
测后回收与预期片段大小一致的条带!连接到克隆
载体
8
XA#1*\aQ9R:T
后转化感受态细胞
\:
8
#"
!
经蓝白斑筛选阳性克隆后送交北京奥科生物科技有
限公司测序
对测序正确的阳性克隆提取质粒!用
>"+K
%
和
?*-W
&
"
\4S4=4
公司#进行双酶切检测回收!将
收回的片段与经过同样酶切处理的原核表达载体
8
2\*%!4
"北京奥科生物科技有限公司#连接连接
产物转化大肠杆菌
\:
8
#"
!以含氨苄青霉素"
#""
#
M
+
3?
)#
#的液体培养基筛选重组载体挑取阳性克
隆单斑!扩繁后提取质粒并用
>"+K
%
和
?*-W
&
进行酶切鉴定!将得到的阳性克隆命名为
8
2\*
!"#$%

;=<=D
!
1$230
在大肠杆菌
EF<;
"
@GA
#中表达
!
将重组载体
8
2\*!"#$%
转化感受态细胞大肠杆
菌
V?!#
"
A2%
#并过夜培养!挑取单克隆进行菌落
;<=
鉴定挑取经鉴定的阳性克隆单菌落至
!3?
液体培养基
?V
"含氨苄青霉素
#""
#
M
+
3?
)#
#中
%(^
过夜培养!
#d"
比例稀释过夜菌!
%(^
培养
至
FA
,""
接近
"+,
部分作为未诱导的对照组!余下
加入
N;\J
诱导剂至最终物质的量浓度为
"+#
33:5
+
?
)#
!在
!^
条件下震荡培养
!"7
诱导外
源基因表达分别收集不同处理的菌体!加入
!""
#
?#G@A@
重悬!混匀!
#""^
加热
#"3.0
!放置至
室温!
#!"""
M
离心
%3.0
!取上清作为样品进行
@A@*;CJ2
分析
!
!
结果与分析
<=;
!
葡萄风信子
1$230
基因全长
-@?7
克隆
根据转录组测序所得到的基因序列设计引物
!"#$%3#
*
!"#$%*!
!以(亚美尼亚)葡萄风信子花
瓣
9ABC
为模板进行
;<=
扩增后得到
#
条长为
#"(,D
8
的
9ABC
片段"图
#
#测序结果表明其开
放阅读框长
111D
8
!编码
%%!
个氨基酸!命名为
!"#$%

图
#
!
葡萄风信子
!"#$%
基因全长扩增结果
X+\T40/!S;5L/ABC34TEQT
!
#+;<=
扩展产物
>.
M
+#
!
;<=
8
T:WL9R:U!"#$%UT:3!9")+,-*"(&+
X+\T40/!S;5L/ABC34TEQT
&
#+;<=
8
T:WL9R
1"#
&
期
!!!!!!!!!!!!!
杨慧萍!等$葡萄风信子
!"#$%
基因克隆与表达分析
<=<
!
葡萄风信子
1$230
基因序列的分析
使用
ABCXCB
软件对
!"#$%
基因序列进行
分析!结果显示
!"#$%
理论分子量为
%&+#EA
!
理论等电点为
+"&

\XKXX
预测该蛋白不具跨
膜区!属于胞内蛋白
;T:R@945Q
分析结果显示!
X4>?@
疏水性氨基酸含量高于亲水性氨基酸含量!
属于疏水性蛋白
@.
M
045;$+#
分析显示该序列无
信号肽!是非分泌蛋白利用
;@F="
;TQW.9R.:0
对
!"#$%
进行亚细胞定位预测!发现在整个细胞
内都有定位信号但主要集中在细胞质内用
BQR*
;7:/!+"
预测
!"#$%
磷酸化位点!
!"#$%
有
,
个
@QT
磷酸化位点!
$
个
\7T
磷酸化位点!
,
个
6
T
磷
酸化位点
;TQW.9R;T:RQ.0
预测
X4>?@
的二级结
构!结果显示该蛋白包含了
%%+(%G
的

螺旋*
$+!!G
的
(
折叠*
$+(&G
的无规则卷曲和
#,+!(G
的延伸链!其
9ABC
序列和推导的氨基酸序列如图
!
所示
使用
ABCXCB
软件对葡萄风信子
>?@
和其
他物种已知的
>?@
氨基酸序列进行比对分析!结果
显示"图
%
#
X4>?@
具有典型的
!*:[:
M
5LR4T4RQ*40W
>Q
"
"
#
*WQ
8
Q0WQ0RW.:[
6M
Q04/Q/
"
!*FAA
#双加氧酶
超家族保守域*亚铁离子结合基序"
R7QK./*bC/
8
*
b44*K./3:R.U
$
K./!"$
!
C/
8
!",
!
K./!,
#和二氧戊
图
!
!
!"#$%
基因的核苷酸序列及推导的氨基酸序列
>.
M
+!
!
BL95Q:R.WQ/Q
_
LQ09Q40WWQWL9QW
43.0:49.W/Q
_
LQ09Q:U!"#$%
图
%
!
葡萄风信子
X4>?@
与其他植物
>?@
同源性比对
划线部分为
!*FAA
超家族保守域&黑色箭头为二价铁离子结合残基&星号为二氧戊二酸盐结合域
>.
M
+%
!
C5.
M
03Q0R:UX4>?@Z.R7:R7QT>?@/
CW:34.09:0/QTYQW.0!*FAA./L0WQT5.0QW
!
40W.0UQTTQWTQ/.WLQ/U:T9::TW.04R.:0:UUQTT:L/.T:0
"
K./!"$
!
C/
8
!",40WK./!,
#
40W!*:[:
M
5LR4T4RQD.0W.0
M
"
CT
M
!($40W@QT!(,
#
4TQ.0W.94RQWZ.R7D549E4TT:Z7Q4W/40W4/RQT./E/
!
TQ/
8
Q9R.YQ5
6
"##
西
!
北
!
植
!
物
!
学
!
报
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
%$
卷
图
$
!
几种植物
>?@
氨基酸序列的系统发育树
标尺代表遗传距离&数值代表从
#"""
次重复计算得到的
D::R/RT4
8
百分比值
>.
M
+$
!
;7
6
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M
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图

!
!"#$%
在(亚美尼亚)葡萄风信子
不同组织部位的表达
>.
M
+
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#以及
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超家族保守氨基酸"
J5
6
甘氨
酸!
K./
组氨酸!
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脯氨酸和
J5
6
甘氨酸#
将葡萄风信子
X4>?@
与
B检索到的其他物
种
>?@
蛋白进行聚类分析并构建系统发育树!结果
表明"图
$
#!葡萄风信子
X4>?@
蛋白与植物籼稻
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*
&%G
和
(,G
!但与拟南芥
"
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*45"6*"-"B;""#"((,,$+#
#的一致性较低!
仅为
,"G

<=A
!
葡萄风信子
1$230
基因时空表达模式分析
对葡萄风信子进行半定量
=\*;<=
方法分析
!"#$%
在不同组织的表达情况!结果如图

所示!
!"#$%
基因在根*茎*叶*花中均有表达!但是表达
程度不同在花中表达强度最高!其次是叶!根和鳞
茎中表达量最低
为了进一步研究
!"#$%
在不同组织器官以及
不同花发育时期中的时空表达!进行了荧光实时定
量分析结果显示"图
,
#!
!"#$%
基因在花中优势
表达!在营养组织如根*茎*叶中微量表达!与半定量
图
,
!
!"#$%
在(亚美尼亚)葡萄风信子
不同部位的表达分析
@
#
)
@

+
花发育阶段$
@
#
+
花蕾未着色&
@
!
+
花蕾开始着色&
@
%
+
花蕾完全着色但花未开放&
@
$
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花完全开放&
@

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结果一致在花发育过程中!
!"#$%
从未着色
"
@
#
#的花蕾时期开始表达!在完全着色的花"
@
%
#中
达到峰值!之后随着花继续发育表达量逐渐降低
值得注意的是!分别在
!"#$%
保守域之内和保守
域之外设计的
!
对引物!发现
!
次
=\*;<=
结果相
似由此可见
!"#$%
在(亚美尼亚)葡萄风信子中
的表达具有花组织特异性并受生长发育调控
<=B
!
1$230
在大肠杆菌
EF<;
!
@GA
"中的诱导表达
用
>"+K
%
和
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&
对重组质粒
8
2\*!"#$%
进行双酶切鉴定!同时进行
;<=
鉴定!结果证明已
经成功地构建了
8
2\*!"#$%
原核表达载体表
###
&
期
!!!!!!!!!!!!!
杨慧萍!等$葡萄风信子
!"#$%
基因克隆与表达分析
图
(
!
重组质粒
8
2\*!"#$%
表达蛋白的
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电泳
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蛋白标准分子量&
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未加
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的对照组&
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加
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+
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)#
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达载体
8
2\*!"#$%
转化宿主菌并使用浓度为
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33:5
+
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)#的
N;\J
在
!^
条件下培养
!"7
诱导
外源蛋白表达!
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电泳结果显示"图
(
#产
生了分子量约为
%&EA
特异性条带!与预测的理论
值一致!且未加
N;\J
的对照组不表达该蛋白
%
!
讨
!
论
黄酮醇合成酶基因
#$%
在植物黄酮醇合成中
具有重要的作用!属于依赖
!*
酮戊二酸盐的双加氧
酶家族!这个家族还包括黄酮类化合物生物合成途
径中的黄酮合成酶
%
*黄烷酮
%*
羟化酶以及花色素
合成酶等,#,-
#$%
的活性最初是在欧芹细胞中检
测到的,#(-!目前已经在多种植物中分离得到了
#$%
基因!
#$%
的
9ABC
序列首先在矮牵牛中克隆
到,#&-!随后在拟南芥,#1-*草莓,!"-和金银花,!#-等物
种中分离到了
#$%
基因本实验首次从葡萄风信
子属植物中获得
#$%
基因!推测的
X4>?@
蛋白与
其他植物的
>?@
高度一致!具有黄酮醇合成酶典型
的保守氨基酸
K*b*A
和与二氧戊二酸盐结合的残
基
=*b*@
但是构建系统进化树结果显示!葡萄风
信子
>?@
最先与单子叶的二穗短柄草*高粱*玉米
等聚为一类!最后与拟南芥*番茄*烟草等双子叶植
物聚为一类这表明单子叶植物和双子叶植物
>?@
蛋白聚为两大类!其中葡萄风信子
>?@
与单子
叶植物亲缘关系更近一些!而且单*双子叶之间存在
明显的区别!因此推测
#$%
基因很可能发生在单子
叶与双子叶植物的进化之后
!"#$%
在花器官中的表达量明显高于其他器
官的表达量!在花蕾未着色期
@
#
开始表达!花完全
着色期
@
%
表达量达到最大值!随着花发育表达量逐
渐降低!但也高于其他器官的表达量这些研究表
明
!"#$%
在葡萄风信子中的表达具有花特异性
已有研究证明
#$%
参与到植物花色的修饰!以及与
植物的雄性可育性有非常紧密的关系!这些因素也
有可能是导致
!"#$%
基因在花器官内的高表达
在叶片中也检测到了
!"#$%
表达!这可能是因为
地上器官具有合成类黄酮以抵御太阳辐射功能
根*茎中
!"#$%
的表达可能是由于地下器官产生
黄酮醇以抵御微生物侵害以及营养胁迫
对于观赏植物而言!花色是花卉产品的重要影
响因素基因工程技术突破传统育种方式为培育花
色新品种方面提供了新的途径!并成功获得了具有
新型花色的转基因品种,!!*!%-研究表明在紫色洋桔
梗中表达反义
#$%
基因使其花色变红,1-&在烟草中
过量表达山茶花
#$%
基因使粉色的花蕾变成白
色,!$-另外在矮牵牛*康乃馨和紫罗兰的无色花
中!
#$%
活性很高!但当花青素开始生成的时候!
#$%
的活性就开始迅速降低这说明两个使用同
一底物的酶的空间竞争抑制调控也可被用来进行不
同目的产物的生物合成,-目前为止关于葡萄风信
子
!"#$%
基因在葡萄风信子蓝色花色的形成过程
中具有何种功能!该基因的表达在调控植物花色方
面具有何种效应还不清楚!本研究克隆了
!"#$%
基因并成功构建了原核表达载体!为深入研究该基
因功能奠定了基础
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基因克隆与表达分析