全 文 :植物病理学报
ACTA PHYTOPATHOLOGICA SINICA 42(4): 387-395(2012)
收稿日期: 2011-10-10; 修回日期: 2012-04-26
基金项目: 中国烟草总公司科技项目(110200902065); 山东省“泰山学者”建设工程专项资助
通讯作者: 赵洪海, 副教授, 主要从事植物线虫学研究; E-mail: hhzhao@qau. edu. cn
第一作者: 程子超(1987 - ), 男, 山东青岛人, 硕士, 主要从事植物线虫学研究; E-mail: theczc321@sina. com。
山东省寄生烟草的孢囊线虫种类鉴定及
种内群体间 rDNA-ITS-RFLP分析
程子超1, 赵洪海1*, 李建立1, 张成省2, 王凤龙2
( 1青岛农业大学农学与植物保护学院,山东省植物病虫害综合防控重点实验室, 青岛 266109;
2中国农业科学院烟草研究所, 青岛 266101)
摘要:在山东省 5 个植烟县 /市采集烟草线虫土壤样本 24 份,其中 10 份土样中分离到孢囊线虫的孢囊,对之进行系统的形
态学观测。 孢囊阴门锥突出,双半膜孔,下桥和泡囊发达,阴门裂长(44. 1 ± 3. 5) μm,阴门窗长(50. 4 ± 4. 8) μm、宽(36. 6
± 4. 1) μm,下桥长(83. 8 ± 4. 7) μm、宽(11. 0 ± 0. 9) μm。 利用大豆孢囊线虫特异性引物对分离到的孢囊线虫群体进行
了分子鉴定。 形态学和分子鉴定结果表明,山东省寄生烟草的孢囊线虫为大豆孢囊线虫 Heterodera glycines Ichinohe,1952。
对这 10 个孢囊线虫群体 rDNA-ITS区进行了 PCR扩增产物用 7 种限制性内切酶进行酶切和测序比对。 发现,所有孢囊线
虫群体均能扩增出一条大约 1 000 bp大小的片段;用 Alu Ⅰ、Bsh 1236 Ⅰ、Hae Ⅲ、Hha Ⅰ 、Mva Ⅰ 、Rsa Ⅰ酶切后,产生的
酶切表型均相同;用 Ava I酶切后,产生了 2 种酶切表型。 所测孢囊线虫群体与 GenBank 收录的大豆孢囊线虫序列相似度
高达 99%以上。
关键词:山东省; 烟草; 大豆孢囊线虫; 形态学特征; rDNA-ITS-RFLP
Identification of tobacco-parasitizing cyst nematode and intrapopulation rDNA-ITS-
RFLP analysis in Shandong Province CHENG Zi-chao1, ZHAO Hong-hai1, LI Jian-li1, ZHANG
Cheng-sheng2, WANG Feng-long2 ( 1 College of Agronomy and Plant Protection, Qingdao Agricultural University, Key
Lab of Integrated Crop Pest Management of Shandong Province, Qingdao 266109, China; 2 Tobacco Research Institute of Chi-
nese Academy of Agricultural Sciences, Qingdao 266101, China )
Abstract: Twenty-four soil samples were collected from rhizosphere of tobacco in five tobacco producing
counties in Shandong Province and the cyst nematodes were extracted in ten soil samples. The morphological
characters of cyst were basically uniform and similar to those of soybean cyst nematode in the protruded vulval
cone, ambifenestrate, well-developed underbridge and bullae. The vulval silt was (44. 1 ±3. 5) μm long, the
fenestra was (50. 4 ±4. 8) μm long and (36. 6 ± 4. 1) μm wide. The underbridge was (83. 8 ± 4. 7) μm
long and (11. 0 ±0. 9) μm wide. Molecular identification was afterwards carried out through duplex PCR with
species specific primers. The results of morphological and molecular biological studies both indicated that the
tobacco-parasitizing cyst nematode was Heterodera glycines Ichinohe, 1952. The rDNA-ITS regions of ten
cyst nematode populations were amplified and the same length fragments about 1 000 bp were obtained. The
fragments were digested with seven restriction endonucleases (Alu Ⅰ, Ava Ⅰ, Bsh 1236 Ⅰ, Hae Ⅲ, Hha
Ⅰ, Mva Ⅰ and Rsa Ⅰ) . The RFLP patterns were completely consistent among the cyst nematode populations
after the digestions by Alu Ⅰ, Bsh 1236 Ⅰ, Hae Ⅲ, Hha Ⅰ, Mva Ⅰ and Rsa Ⅰ. But two different RFLP
patterns were obtained after the digestions by Ava Ⅰ. The base sequences of cyst nematode populations on
植物病理学报 42 卷
tobacco were extraordinarily similar to GenBank recorded ones of H. glycines Ichinohe, 1952 and the similari-
ty exceeded 99% .
Key words: Shandong province; tobacco; H. glycines; morphology; rDNA- ITS-RFLP
中图分类号: S432. 45 文献标识码: A 文章编号: 0412-0914(2012)04-0387-09
烟草孢囊线虫病是全球烟草产区的重要病害
之一。 美国弗尼吉亚州、康涅狄克州和马萨诸塞州
等地区普遍发生,为害严重[1,2]。 孢囊线虫不仅阻
碍烟草的生长发育,造成产量损失,降低烟叶品质,
而且间接导致枯萎病发病率和发病程度的增
加[3]。 据报道[4 ~ 6],烟草孢囊线虫病是由烟草球孢
囊线虫 ( Globodera tabacum 复合种,包括 Glo-
bodera tabacum tabacum、 Globodera tabacum vir-
giniae 和 Globodera tabacum solanacearum 3 个亚
种)引起,属于垫刃目(Tylenchida),垫刃亚目(Ty-
lenchina),垫刃总科 ( Tylenchidae),异皮科 (He-
teroderidea),异皮亚科(Heteroderinae),球孢囊属
(Globodera)。
Lownsbery(1951)在美国康涅狄克州首先发
现寄生包叶烟( shade tobacco, Nicotiana tabacum
L. )的孢囊线虫,Lownsbery(1954)将这种孢囊线
虫命名为 Heterodera tabacum。 Miller(1959)在美
国弗尼吉亚州首先发现寄生北美刺龙葵(Solanum
carolinense L. )的孢囊线虫,Miller 和 Gray(1968)
将其命名为 Heterodera virginiae。 Osborne(1961)
在弗尼吉亚州首先发现寄生烤烟的孢囊线虫,
Miller和 Gray(1972)将其命名为 Heterodera so-
lanacearum。 Behrens(1975)将以上 3 种烟草孢囊
线虫连同马铃薯孢囊线虫等,一并归入球孢囊属
(Globodera)。 Stone(1983)认为烟草孢囊线虫其
实是一个复合种,H. tabacum、H. virginiae 和 H.
solanacearum 应该被看作是 3 个亚种,故更名为
Globodera tabacum tabacum、 Globodera tabacum
virginiae 和 Globodera tabacum solanacearum[7]。
更改后的名称一直沿用至今。
Zhang[8](1986)在我国山东省临朐县上林乡
黄山店、河庄和七贤乡梨花埠等地的烟田病态烟草
根部发现孢囊线虫的乳白色及蜡黄色雌虫,经实验
室观察,均系含卵的成熟个体。 进一步将烟草病株
根部抖落的土壤进行分离、镜检,发现大量褐色含
卵孢囊。 这是我国对孢囊线虫引起烟草孢囊线虫
病的首次报道,但病原具体是哪个种并未明确。
Liu等[9](1992)在河南省襄城县报道发现烟草孢
囊线虫,经鉴定,为烟草孢囊线虫 ( Heterodera
tabacum),根据上述烟草孢囊线虫的发现和命名
史, 这 个 种 就 是 Globodera tabacum tabacum
Lownsbery and Lownsbery,1954。 Li 等[10] (2000)
在山东省潍坊市报道了烟草孢囊线虫病的发生规
律和综合防治措施,病原鉴定为烟草球形孢囊线虫
(Globodera tabacum)。 Zhang等[11](2007)报道烟
草孢囊线虫防治研究的概况,但未提及我国烟草孢
囊线虫是哪个种。
以上国内报道虽对这种线虫的某些虫态做过
简单描述,但都缺乏系统翔实的形态学观测和描
述,而且所确定的线虫种类也混乱不一。 寄生在烟
草上的孢囊线虫是球孢囊属(Globodera)或是孢囊
属(Heterodera)还是两者都存在,目前尚无定论。
本文对山东省不同地区烟草孢囊线虫群体进行了
系统的形态观测和分子鉴定,对核糖体 DNA 内转
录间隔区( ITS)进行了酶切分析和序列比对,以明
确其分类地位。
1 材料与方法
1. 1 线虫标本的采集
选择烟草种植面积较大的地块,采用对角线五
点取样法。 选定植株后,先用铁锹铲去比较干燥的
3 ~ 5 cm表层土,再挖取根围土及少量根系作为一
个小样,每个小样取 0. 5 kg,然后将 5 个小样混合
成 1 个 2. 5 kg的混合样。
按照上述采集方法,于 2010 年 9 月上旬在山
东省的日照五莲市、莒县,潍坊诸城市、临朐县和临
沂市沂水县采集线虫土壤样本 24 份,其中五莲 8
份,莒县 4 份,诸城 5 份,临朐 2 份,沂水 5 份。
1. 2 线虫的分离、杀死和固定
1. 2. 1 孢囊的分离 将采集的根际土倒入盆中。
注水后,充分搅拌,将上层漂浮物和悬浮液倒入
20 ~ 80目的套筛,重复此步骤,直至将盆中土样全
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4 期 程子超,等:山东省寄生烟草的孢囊线虫种类鉴定及种内群体间 rDNA-ITS-RFLP分析
部冲入套筛。 用细水流淋洗 80 目筛上的残余物至
烧杯中,用滤纸过滤、晾干后在解剖镜下观察,挑取
饱满的孢囊备用。
1. 2. 2 卵和 2 龄幼虫的分离 将分离出的饱满孢
囊压碎,释放出卵和 2 龄幼虫,分别收集在标本瓶
中。
1. 2. 3 线虫的杀死和固定 将分离到的 2 龄幼虫
在清水中饥饿 2 ~ 3 d 后,置于 65℃温水中温和热
处理 10 min。 冷却后,加入相同体积的 2 倍 TAF
固定液(三乙醇胺 4% +福尔马林 14% +蒸馏水
82% ),充分混匀。 1 周后更换一次固定液,标本可
长期保存。
1. 3 孢囊线虫阴门锥的制备
孢囊用水浸泡 24 h,转移到水滴中,在解剖镜
下用锋利的解剖刀切下孢囊后部的阴门锥部分。
用竹针清除阴门锥内侧附着物,转移到 40% H2O2
中处理数分钟。 将阴门锥依次移至 70% 、95% 、
100%酒精液滴中脱水,把脱水后的阴门锥转移至
凹玻片凹穴中的丁香油内透明。 然后在凹穴内加
一滴中性树胶,稍涂平,将处理好的阴门锥埋于薄
层中性树胶内。 待中性树胶凝固后,再在阴门锥附
近加入适量的中性树胶,并加盖玻片[12]。
1. 4 孢囊线虫 DNA的提取
在解剖镜下挑取 1 个饱满的孢囊,放入 eppen-
dorf 管中,加 14 μL ddH20,置于 -80℃冰箱中冷冻
20 min。 用 75%酒精消毒的塑料研磨棒在 eppen-
dorf管中转动至冰融化,充分研磨使孢囊破碎。 加
入 3 μL 10 × PCR buffer 和 3 μL 蛋白酶 K 溶液
(600 μg / mL),然后在 - 20℃下冷冻至少 2 h。 将
eppendorf管取出,65℃温育 1 h,95℃10 min。 最后
12 000 r / min 离心 1 min,取上清 DNA 悬浮液于
-20℃保存[13]。
1. 5 双倍 PCR扩增
采用 Subbotin 等[14]的方法,取灭菌的 eppen-
dorf管,依次加入 10 × PCR buffer(Mg2 + )2. 0 μL,
dNTPs 1. 6 μL, D3A ( 5′-GACCCGTCTTGAAA-
CACGGA-3′)0. 2 μL,D3B(5′-TCGGAAGGAAC-
CAGCTACTA-3′)0. 2 μL,GlyF1(5′-TTACGGAC-
CGTAACTCAA-3′)0. 2 μL, rDNA2 (5′-TTTCAC-
TCGCCGTTACTAAGG-3′)0. 2 μL,最后加 ddH2O
补足 20 μL。
扩增条件为:94℃预变性 4 min;94℃变性 30
s,55℃退火 30 s,72℃延伸 1 min 30 s,35 个循环;
72℃延伸 10 min,于 4℃保存。 PCR 扩增后,取 5
μL扩增产物加 1μL 6 × Loading buffer 在 1. 0%琼
脂糖凝胶上电泳,用 0. 5 × TAE 缓冲液在 100V 下
电泳 40 min,紫外灯下观察并照相。
1. 6 rDNA-ITS-RFLP
取灭菌的 eppendorf 管,依次加入 10 × PCR
buffer(Mg2 + ) 5. 0 μL, dNTPs 4 μL,AB28 (5′-
ATATGCTTAAGTTCAGCGGGT-3′) 0. 3 μL,
TW81 ( 5′-GTTTCCGTAGGTGAACCTGC-3′) 0. 3
μL,TaqDNA多聚酶(5 U / μL)0. 4 μL,模板 DNA
3. 0 μL,最后加 ddH2O补足 50 μL。
扩增条件为:94℃预变性 5 min;94℃变性 45
s,55℃退火 1 min,72℃延伸 2 min,35 个循环;
72℃延伸 10 min,于 4℃保存。 PCR 扩增后,取 5
μL扩增产物加 1μL 6 × Loading buffer 在 1. 0%琼
脂糖凝胶上电泳,用 0. 5 × TAE缓冲液在 100 V下
电泳 40 min,紫外灯下观察并照相[15]。
取 7 uL纯化后的 PCR产物,分别用 7 种限制
性内切酶 (Alu Ⅰ、Ava Ⅰ、Bsh 1236 Ⅰ、Hae Ⅲ、
Hha Ⅰ、Mva Ⅰ、Rsa Ⅰ)进行酶切,37℃恒温水浴
14 h后,将全部酶切产物于 1. 5%琼脂糖凝胶上电
泳,紫外灯下观察并照相。
1. 7 序列分析
将获得的 rDNA-ITS 区 PCR 扩增产物交由深
圳华大基因公司进行序列测定,结果用 DNAstar
megalign软件分析后再与 GenBank 中收录的序列
进行 BLAST比对。
2 结果分析
2. 1 田间症状
孢囊线虫雌虫头部嵌在根组织内吸收营养,虫
体后部撑破根表暴露在外。 在根上可见白色或淡
黄色如小米粒大小的肉质颗粒,即孢囊线虫的雌成
虫(图 1)。
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植物病理学报 42 卷
Fig. 1 Female cyst nematode on tobacco root surface
Red arrow: Female on root surface; Bottom left corner: The enlarged view of female.
2. 2 土壤样本分离结果
在五莲市取样 8 份,其中 1 份分离到孢囊;莒
县取样 4 份,其中 2 份分离到孢囊;诸城取样 5 份,
其中 4 份分离到孢囊;临朐取样 2 份,全部分离到
孢囊;沂水取样 5 份,其中 1 份分离到孢囊;共计
10 份土样(表 1)。
2. 3 形态学观测结果
2. 3. 1 测量数据 孢囊(Cyst,n = 50):长(L) =
672. 0 ±72. 4(461. 4 - 807. 2)μm,宽(W) = 499. 2
±68. 3(366. 8 -640. 6)μm;阴门裂长 =44. 1 ± 3. 5
(36. 6 -49. 8)μm;阴门窗长 = 50. 4 ± 4. 8(41. 6 -
65. 5)μm、宽 =36. 6 ± 4. 1(33. 0 - 35. 7)μm;下桥
长 =83. 8 ±4. 7(72. 8 - 91. 3)μm、宽 = 11. 0 ± 0. 9
(9. 5 -13. 5)μm。
2 龄幼虫(J2,n = 50):体长(L) = 436. 6 ± 25. 1
(377.5 -500.3) μm、体宽(W) = 19. 6 ± 0. 9(17. 8 -
22.7)μm;口针长(ST) =23. 8 ±1. 4(19. 2 -26. 2)μm;
Table 1 Ten populations of cyst nematode on tobacco for experiments
Code Origin of sample
ZC1 Houwangyuan village of Shiqiao Town, Zhucheng County, China
ZC2 Bandaojing village of Shiqiao Town, Zhucheng County, China
ZC3 Block 1, Xinxing farm of Xinxing Town, Zhucheng County, China
ZC4 Block 2, Xinxing farm of Xinxing Town, Zhucheng County, China
JX1 Dahedong village of Zhaoxian Town, Juxian County, China
JX2 Maobu village of Qishan Town, Juxian County, China
LQ1 Yanziwu village of Yeyuan Town, Linqu County, China
LQ2 Qinkou village of Yeyuan Town, Linqu County, China
YS1 Hongshiguan village of Xujiahu Town, Yishui County, China
WL1 Fazhuang village of Yuli Town, Wulian County, China
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4 期 程子超,等:山东省寄生烟草的孢囊线虫种类鉴定及种内群体间 rDNA-ITS-RFLP分析
背食道腺开口到口针基球的距离(DGO) = 4. 6 ±
0. 4(4. 0 -5. 5) μm;肛门处体宽(ABW) = 12. 7 ±
0. 8(10. 9 - 14. 3) μm;尾长(TAIL) = 48. 3 ± 4. 2
(39. 9 -57. 9)μm;尾部透明区长(Tail hyaline por-
tion) =25. 4 ±2. 7(20. 3 -31. 9)μm。
卵(Egg ,n =50):长(L) =105. 0 ±7. 7(85. 65
-120. 58) μm,宽(W) =44. 0 ±4. 1(36. 3 -55. 5)
μm。
2. 3. 2 形态描述 孢囊:深褐色,呈柠檬形。 阴门
锥突出明显,膜孔类型为双半膜孔,近似半圆形。
下桥发达,在下桥附近有许多长条形泡囊(图 2-A
~ C )。
2 龄幼虫:蠕虫形,口针发达,口针基球强大。
尾尖圆锥形,尾端钝圆,有较长的透明区,约为尾长
的 1 / 2(图 2-D)。
将本次从烟草上分离的孢囊线虫群体与 Rob-
bins(1992)和刘维志(1994)的测量数据及形态描
述进行系统的比较,发现其主要形态特征完全一
致,测量数据基本相符[16],故认为该线虫为大豆孢
囊线虫(Heterodera glycines Ichinohe,1952)。
2. 4 双倍 PCR扩增结果
所有寄生在烟草上的孢囊线虫均能扩增出 2
条明显的 DNA 片段 (345 bp 和 181 bp)。 根据
Peng等[17](2001)的报道,所有孢囊线虫都能扩增
出 345 bp 的片段,但只有大豆孢囊线虫才能扩增
出 181 bp的片段。 故认为该线虫为大豆孢囊线虫
(H. glycines Ichinohe,1952)(图 3)。
2. 5 rDNA-ITS-RFLP 分析
2. 5. 1 PCR 扩增结果 对所有烟草上的孢囊线
虫群体 rDNA内转录间隔区( ITS)进行 PCR扩增,
均扩增出一条约 1 000 bp 大小的 DNA 片段(图
4)。
2. 5. 2 ITS区序列 BLAST分析结果 将测得的 10
个序列与 GenBank 中收录的大豆孢囊线虫 ITS 序
列(HM560786、HM560785、EF611124、AY590280)进
行 BLAST 分析。 结果显示,ZC1( JQ340480)、ZC2
(JQ340481)、ZC3(JQ340482)和 WL1(JQ340487)与
收录的序列相似度达到 100% 。 ZC4( JQ340483)、
JX1(JQ340488)、JX2(JQ340489)、LQ1(JQ340484)、
Fig. 2 Morphology of cyst nematode on tobacco
A: Cyst; B: Ambifenestrate and vulval silt; C: Underbridge and bullae; D: Second-stage larva.
193
植物病理学报 42 卷
Fig. 3 Duplex PCR products of rDNA-ITS of cyst nematodes
Lane M: 1 000 bp DNA marker; Lane 1-10: ZC1,ZC2,ZC3,ZC4,JX1,
JX2,LQ1,LQ2,YS1,WL1; Lane 11,12: H. glycines on soybean.
Fig. 4 PCR products of rDNA-ITS of cyst nematodes
Lane M: 2 000 bp DNA marker;Lane 1-10:WL1,ZC1,YS1,ZC2,JX1,LQ1,ZC3,LQ2,ZC4,JX2.
LQ2(JQ340485)和 YS1( JQ340486)的线虫群体与
收录的序列相似度达到 99%以上。
2. 5. 3 RFLP结果分析(图 5) 所有 10 个孢囊线
虫群体经 Alu Ⅰ、Bsh 1236 Ⅰ、Hae Ⅲ、Hha Ⅰ 、
Mva Ⅰ 、Rsa Ⅰ酶切后,产生的酶切表型均相同。
用限制性内切酶 Alu Ⅰ酶切所有孢囊线虫群
体的 PCR扩增产物,均产生 4 条大小不同的 RFLP
片段; 经 Bsh 1236 Ⅰ酶切后, 产生 3 条不同的片
段; 经 Hae Ⅲ酶切后,产生 3 条不同的片段;经
Hha Ⅰ酶切后,产生 3 条不同的片段;经 Mva Ⅰ酶
切后,产生 3 条不同的片段;经 Rsa Ⅰ酶切后,产生
2 条不同的片段。
经 Ava Ⅰ酶切后,产生了 2 种酶切表型。 诸城
和临朐的 6 个线虫群体产生了 3 条 RFLP片段,但
是莒县、五莲和沂水的 4 个群体产生了 2 条 RFLP
片段。
3 结论与讨论
通过系统形态观察和特异性联合引物 PCR 鉴
定,确认山东省寄生在烟草上的孢囊线虫为大豆孢
囊线虫(H. glycines Ichinohe,1952)。 烟草是大豆
孢囊线虫的新寄主。
通过对烟草上孢囊线虫的 ITS 区 PCR-RFLP
分析发现:经 Ava Ⅰ酶切 PCR 扩增产物后产生了
2 种表型,显示寄生在烟草上的大豆孢囊线虫群体
的 rDNA-ITS区也存在异质性[18,19];经 Alu Ⅰ、Bsh
1236 Ⅰ、Hae Ⅲ、Mva Ⅰ 、Rsa Ⅰ酶切后,寄生烟草
的大豆孢囊线虫群体产生的表型与寄生大豆的大
豆孢囊线虫的结果一致[19 ~ 22],表明 rDNA-ITS 区
在不同寄主群体间的相对稳定性;用 Hha Ⅰ酶切
所有孢囊线虫群体得到的酶切表型均相同,故认为
Hha Ⅰ也可作为鉴别大豆孢囊线虫种的可靠和稳
定的限制性内切酶。
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4 期 程子超,等:山东省寄生烟草的孢囊线虫种类鉴定及种内群体间 rDNA-ITS-RFLP分析
Fig. 5 Fragments of amplified product of rDNA-ITS digested by 7 restriction endonucleases
A-J:Ten populations of cyst nematode for the experiment(JX1,ZC1,ZC2,JX2,ZC3,ZC4,LQ1,LQ2,YS1,WL1);
Lane M:100 bp DNA marker;Lane 1: Unrestricted PCR product;Lane 2-8:Fragments of amplified product digested by
Alu Ⅰ,Ava Ⅰ,Bsh 1236 Ⅰ,Hae Ⅲ,Hha Ⅰ,Mva Ⅰ and Rsa Ⅰ.
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植物病理学报 42 卷
大豆孢囊线虫合适的寄主主要是豆科植物,如
大豆(Glycine max)、赤豆(Vigna angularis)、菜豆
(Phaseolus vulgaris)、绿豆(P. aureus)、豌豆(Pi-
sum sativum)等 [23]。 然而大豆孢囊线虫也可侵入
非豆科植物。 Southey (1978) 报道大豆孢囊线虫
可危害唇形科的黄岑 ( Scutellaria baicalensis);
Chen等[24](1981)报道大豆孢囊线虫为害玄参科
的地黄(Rehmannia glutinosa); Zhang[25](1995)报
道多年生乔本植物泡桐(Paulownia)也是大豆孢囊
线虫的寄主。 近年来,山东省烟田面积调整变化较
大,本研究发现的大豆孢囊线虫,很可能是由于多
年连作的大豆田改种烟草,导致线虫乘机侵染茄科
的烟草(Nicotiana tabacum)。
目前除山东省和河南省襄城县外,其他省(自
治区)未见烟草孢囊线虫病的报道。 本研究确认
山东省寄生烟草的孢囊线虫为大豆孢囊线虫(H.
glycines Ichinohe,1952),而河南省烟草上的孢囊
线虫是大豆孢囊线虫还是其他种类,有待进一步明
确。 此外,大豆孢囊线虫生理分化现象明显,而不
同地理来源的群体在寄主范围上也存在差异[24]。
因此,有必要对山东省寄生烟草的大豆孢囊线虫进
行生理小种鉴定,并系统研究其在烟草上的侵染循
环规律,对不同烟草品种的致病性和群体年度间的
消长规律。
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