全 文 ：植物病理学报 ＡＣＴＡ ＰＨＹＴＯＰＡＴＨＯＬＯＧＩＣＡ ＳＩＮＩＣＡ ４４(３): ２２５￣２３１(２０１４)
收稿日期: ２０１３￣１０￣２５ꎻ 修回日期: ２０１４￣０２￣２５
基金项目: 国家支撑计划课题(２０１２ＢＡＤ１５Ｂ０４￣１)ꎻ湖南省高校创新平台开放项目(１１Ｋ０３３)
通讯作者: 高必达ꎬ教授ꎬ博士生导师ꎬ主要从事分子植物病理学研究ꎻＥｍａｉｌ:ｂｄｇａｏ＠ａｌｉｙｕｎ.ｃｏｍ
第一作者: 黄微ꎬ女ꎬ湖南人ꎬ主要从事植物病原物分子鉴定研究ꎻＥｍａｉｌ:２８１９７７９０１＠ｑｑ.ｃｏｍꎮ
水稻新病害叶鞘黑斑病的病原鉴定
黄 微１ꎬ 夏 花１ꎬ 高必达１ꎬ２ꎬ３∗
( １湖南农业大学植物保护学院ꎬ长沙 ４１０１２８ꎻ ２植物疾病控制与利用 湖南省高校重点实验室ꎬ长沙 ４１０１２８ꎬ
３植物病虫害生物学与防控 湖南省重点实验室ꎬ长沙 ４１０１２８)
摘要:２０１１年 ７月ꎬ在湖南省花垣县水稻上发现一种新的病害ꎬ症状表现为叶鞘上出现长椭圆形黑斑ꎬ病健交界模糊ꎮ 分离
到的 ４隔孢弯孢霉(ＨＮＨＹ００１)经离体和活体人工接种均可产生黑斑ꎻ另一种黑孢霉菌株(ＨＮＨＹ００２)不引致叶鞘黑斑ꎮ
从湖南省栽培水稻 １５０份种子样本中共分离到弯孢霉菌株 ２７个ꎬ其中 ４个菌株具有 ４ 隔孢子ꎮ 这 ４ 个菌株中 １ 个菌株不
产生子座ꎬ其余 ３个均产生分枝子座ꎮ 经人工接种除不产生子座的外ꎬ其余 ３个菌株均能产生典型的叶鞘黑斑ꎮ ＨＮＨＹ００１
的 ｒＤＮＡ－ＩＴＳ序列(ＧｅｎＢａｎｋ 登录号 ＪＱ３６０９６３)经 ＢＬＡＳＴ 搜索ꎬ与之最接近的几个序列为膝曲旋孢腔菌(Ｃｏｃｈｌｉｏｂｏｌｕｓ
ｇｅｎｉｃｕｌａｔｕｓ)及其有丝分裂产孢种—４隔孢弯孢霉ꎮ 鉴于单独以及与其它 ４隔孢弯孢霉菌株进行对峙培养均未产生有性阶
段ꎬ建议根据此菌无性阶段特征即分生孢子较直、４横隔、子座分枝等特征ꎬ鉴定为膝曲旋孢腔菌有丝分裂产孢种之一的假
弯孢(Ｃ.ｆａｌｌａｘ)ꎮ 水稻叶鞘黑斑病系国内外首次报道ꎮ
关键词:水稻ꎻ 叶鞘黑斑病ꎻ 膝曲旋孢腔菌ꎻ 假弯孢ꎻ 病原鉴定
Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｃａｕｓａｌ ａｇｅｎｔ ｏｆ ａ ｎｅｗ ｒｉｃｅ ｄｉｓｅａｓｅ ｓｈｅａｔｈ ｂｌａｃｋ ｓｐｏｔ ＨＵＡＮＧ
Ｗｅｉ１ꎬ ＸＩＡ Ｈｕａ１ꎬ ＧＡＯ Ｂｉ￣ｄａ１ꎬ２ꎬ３ ( １ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎꎬ Ｈｕｎａｎ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬ Ｃｈａｎｇｓｈａ ４１０１２８ꎬ
Ｃｈｉｎａꎻ ２Ｈｕｎａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｆｏｒ Ｃｏｎｔｒｏｌ ａｎｄ Ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｄｉｓｅａｓｅｓꎬ Ｃｈａｎｇｓｈａ ４１０１２８ꎬ Ｃｈｉｎａꎻ ３Ｈｕｎａｎ
Ｐｒｏｖｉｎｃｉａｌ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｆｏｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｄｉｓｅａｓｅｓ ａｎｄ Ｉｎｓｅｃｔ Ｐｅｓｔｓꎬ Ｃｈａｎｇｓｈａ ４１０１２８ꎬ Ｃｈｉｎａ)
Ａｂｓｔｒａｃｔ: Ａ ｎｅｗ ｓｈｅａｔｈ ｄｉｓｅａｓｅ ｏｆ ｒｉｃｅ ｗａｓ ｆｏｕｎｄ ｉｎ Ｈｕａｙｕａｎ ｃｏｕｎｔｙ ｏｆ Ｈｕｎａｎ ｐｒｏｖｉｎｃｅ ｉｎ Ｊｕｌｙ ２０１１. Ｏｎｅ
ｉｓｏｌａｔｅ (ｎａｍｅｄ ａｓ ＨＮＨＹ００１) ｗｉｔｈ ４￣ｓｅｐｔａｔｅ ｃｏｎｉｄｉａ ｗａｓ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ａｓ Ｃｕｒｖｕｌａｒｉａꎬ ｗｈｉｃｈ ｃａｕｓｅｄ ｂｌａｃｋ ｓｐｏｔｓ ｏｎ
ｒｉｃｅ ｓｈｅａｔｈｓ ｂｙ ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ ｂｏｔｈ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｎｄ ｉｎ ｖｉｖｏ. Ｔｈｅ ｏｔｈｅｒ ｏｎｅ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ａｓ Ｎｉｇｒｏｓｐｏｒａ ｓｐ. (ｎａｍｅｄ
ａｓ ＨＮＨＹ００２) ｄｉｄ ｎｏｔ ｉｎｄｕｃｅ ａｎｙ ｌｅｓｉｏｎ. Ｉｎ ｓｅｅｄ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎꎬ ２７ Ｃｕｒｖｕｌａｒｉａ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｗｅｒｅ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ １５０
ｒｉｃｅ ｓｅｅｄ ｓｅｔｓ ｉｎ Ｈｕｎａｎ ｐｒｏｖｉｎｃｅ. Ａｍｏｎｇ ｔｈｏｓｅꎬ ｆｏｕｒ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｗｅｒｅ ｆｏｕｎｄ ｔｏ ｃｏｎｔａｉｎ ４￣ｓｅｐｔａｔｅ ｃｏｎｉｄｉａꎬ ｏｎｅ ｏｆ
ｗｈｉｃｈ ｃｏｕｌｄ ｎｏｔ ｐｒｏｄｕｃｅ ｂｒａｎｃｈｙ ｓｔｒｏｍａ ａｎｄ ｃａｕｓｅ ｄｉｓｅａｓｅ ｉｎ ａｎ ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ ｔｅｓｔ. Ｈｏｗｅｖｅｒꎬ ｔｈｅ ｒｅｓｔ ３
ｉｓｏｌａｔｅｓ ｃａｕｓｅｄ ｔｈｅ ｔｙｐｉｃａｌ ｓｈｅａｔｈ ｂｌａｃｋ ｓｐｏｔ ｓｙｍｐｔｏｍｓ. Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ＢＬＡＳＴ ａｎａｌｙｓｉｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ
ｒＤＮＡ￣ＩＴＳ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ( ＪＱ３６０９６３) ｏｆ ＨＮＨＹ００１ ｍｏｓｔｌｙ ｒｅｓｅｍｂｌｅｄ ｔｏ ｔｈａｔ ｏｆ Ｃｏｃｈｌｉｏｂｏｌｕｓ ｇｅｎｉｃｕｌａｔｕｓ ａｎｄ ｉｔｓ
ｍｉｔｏｓｐｏｒａｔｉｃ ４￣ｓｅｐｔａｔｅ ｃｏｎｉｄｉａｌ Ｃｕｒｖｕｌａｒｉａ ｓｐｐ.. Ｃｏｎｓｉｄｅｒｉｎｇ ｔｈｅ ｆａｃｔ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｓｅｘｕａｌ ｓｔａｇｅ ｏｆ ＨＮＨＹ００１ ｄｕｒｉｎｇ
ｃｏｎｆｒｏｎｔａｔｉｏｎ ｃｕｌｔｕｒｅｓ ｗｉｔｈ ｏｔｈｅｒ ４￣ｓｅｐｔａｔｅ ｃｏｎｉｄｉａｌ Ｃｕｒｖｕｌａｒｉａ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｗｅｒｅ ｎｏｔ ｏｂｓｅｒｖｅｄꎬ ｗｅ ｔｈｅｒｅｆｏｒｅ ｒｅｇａｒｄｅｄ
ｔｈｅ ｉｓｏｌａｔｅ ＨＮＨＹ００１ ａｓ Ｃｕｒｖｕｌａｒｉａ ｆａｌｌａｘꎬ ｏｎｅ ｏｆ Ｃ. ｇｅｎｉｃｕｌａｔｕｓ ｍｉｔｏｓｐｏｒａｔｉｃ Ｃｕｒｖｕｌａｒｉａ ｓｐｐ. ｂａｓｅｄ ｏｎ ｔｈｅ
ａｓｅｘｕａｌ ｓｔａｇｅ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓꎬ ｉ. ｅ.ꎬ ｓｌｉｇｈｔｌｙ ｓｔｒａｉｇｈｔ ４￣ｓｅｐｔａｔｅ ｃｏｎｉｄｉｕｍ ａｎｄ ｂｒａｎｃｈｙ ｓｔｒｏｍａｔａ. Ｔｈｉｓ ｉｓ ｔｈｅ ｆｉｒｓｔ
ｒｅｐｏｒｔ ｏｆ ｒｉｃｅ ｓｈｅａｔｈ ｂｌａｃｋ ｓｐｏｔ ｄｉｓｅａｓｅ ｉｎ ｔｈｅ ｗｏｒｌｄ.
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ: ｒｉｃｅꎻ ｂｌａｃｋ ｓｐｏｔ ｏｆ ｓｈｅａｔｈꎻ Ｃｏｃｈｌｉｏｂｏｌｕｓ ｇｅｎｉｃｕｌａｔｕｓꎻ Ｃｕｒｖｕｌａｒｉａ ｆａｌｌａｘꎻ ｐａｔｈｏｇｅｎ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ
中图分类号: Ｓ４３５.１１１.４ 文献标识码: Ａ 文章编号: ０４１２￣０９１４(２０１４)０３￣０２２５￣０７
植物病理学报 ４４卷
２０１１年 ７~８月ꎬ湖南省花垣县 ８个乡镇约１ ０００
ｈｍ２稻田Ｙ两优 ７号和Ｙ两优 ３０２等Ｙ两优系列分
蘖期到成株期的杂交稻上ꎬ发生了一种新的黄叶症
状ꎬ黄叶的叶鞘上均有黑色病斑ꎬ病健交界模糊ꎮ 病
株茎未见感染ꎬ有别于菌核病ꎻ叶不平展ꎬ有别于黄
矮病ꎻ无高位分蘖ꎬ有别于黄萎病ꎬ应属于以前未曾
报道过的病症ꎮ 为查明病因ꎬ开展了此研究ꎮ
１ 材料与方法
１.１ 症状观察和叶鞘病斑分离
病株采自湖南省花垣县道二乡ꎬ处于孕穗期ꎬ
栽种于盆栽中ꎬ进一步观察症状的发展ꎮ
采用常规组织分离法从叶鞘病斑边缘分离病
菌ꎬ单孢纯化后用于后续试验ꎮ
１.２ 种子中弯孢霉的分离
水稻种子共计 １５０份ꎬ由湖南省农产品质量检
测中心ꎬ湖南省常德市植保站和湖南省新化县植保
站提供ꎮ 每个品种 １ ０００ 粒种子保湿于一个保鲜
盒中ꎬ２８℃培养 ３ ｄ后镜检ꎮ
１.３ 镜检
于不同培养时间取保湿培养后长出的霉和培
养物ꎬ在显微镜下观察病菌形态、测量其大小并拍
照ꎮ 最后一次镜检为培养后 １年ꎮ
１.４ 接种和再分离
在离体接种试验中ꎬ裁取 １６根长约 ８ ｃｍ的孕
穗期健康水稻叶鞘ꎬ经常规表面消毒和无菌水清洗
后ꎬ分 ４ 组摆放在 ４ 个保湿盆中ꎮ 分离菌在 ＰＤＡ
平板上培养 ５ ｄ后于菌落外圏裁取 ６ ｍｍ直径的菌
饼用于接种ꎮ 分 ４个处理:处理 １是叶鞘外表用针
刺伤后将菌块放于伤口处ꎻ处理 ２ 不针剌ꎬ余同处
理 １ꎻ处理 ３ 是将菌块塞于叶鞘内侧ꎻ第 ４ 组为用
无菌水对照ꎮ 接种后在 ２８℃保湿培养ꎬ２ ｄ 后取下
菌块ꎬ观察发病情况ꎮ
在活体接种试验中ꎬ采用喷雾接种和刺伤接种
２种方法ꎬ后者是用昆虫解剖针刺伤叶鞘ꎬ将菌饼置
于伤口表面ꎬ用湿棉花覆盖ꎬ一周后观察发病情况ꎮ
接种的组织表现明显症状后ꎬ发病组织进行再
分离ꎮ
１.５ ｒＤＮＡ￣ＩＴＳ 的 ＰＣＲ扩增与序列分析
用 ＣＴＡＢ 法提取 ６ 日龄培养物的 ＤＮＡꎬ用
ＩＴＳ 通用引物 ＩＴＳ４ 和 ＩＴＳ５ 进行 ＰＣＲ 扩增[１]ꎮ
ＰＣＲ产物委托上海生工生物工程有限公司测序ꎮ
测得的序列递交 ＧｅｎＢａｎｋꎬ取得登录号ꎬ并经
ＢＬＡＳＴ从 ＮＣＢＩ 数据库找到相近序列ꎬ然后用
ＭＥＧＡ４.０软件建立系统发育树ꎮ
２ 结果与分析
２.１ 症状特征
田间病株叶片枯黄ꎬ叶鞘上有长椭圆形黑斑ꎬ
边缘模糊ꎬ大小约为 １０ ｍｍ×５ ｍｍ(图 １Ａ)ꎮ 盆栽
病株在摘取带有病斑的叶鞘后ꎬ又在别的叶鞘上陆
续产生同类型黑斑(图 １Ｂ)ꎮ 跟踪调查的结果证
明稻茎不发病ꎮ
Ｆｉｇ. １ Ｓｙｍｐｔｏｍｓ ｏｆ ｓｈｅａｔｈ ｂｌａｃｋ ｓｐｏｔ ｏｆ ｒｉｃｅ
Ａ: Ｎａｔｕｒａｌ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎꎻ Ｂ: Ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ.
６２２
３期 黄 微ꎬ等:水稻新病害叶鞘黑斑病的病原鉴定
２.２ 分离、镜检和培养性状
组织分离平板上长出 ２种菌落ꎬ其中一种经镜
检初步鉴定为弯孢霉(Ｃｕｒｖｕｌａｒｉａ ｓｐ.)ꎬ有褐色的
成熟菌丝及透明的幼嫰菌丝ꎬ分生孢子直或稍弯ꎬ
具有 ４个横隔膜ꎬ中部 ３胞暗色ꎬ两端细胞无色ꎬ平
均大小为 ３０.４ μｍ×ｌ２.５ μｍ(图 ２)ꎻ另一种初步鉴
定为黑孢霉(Ｎｉｇｒｏｓｐｏｒａ ｓｐ.)ꎬ成熟的分生孢子黑
色ꎬ单胞ꎬ球形ꎮ 将这 ２ 个分离菌株分别命名为
ＨＮＹＨ００１和 ＨＮＹＨ００２ꎮ
从湖南省栽培水稻 １５０ 份种子样本中分离到
弯孢霉菌株 ２７ 个ꎬ其中 ４ 个菌株 (ＨＮＨＹ００３ ~
ＨＮＨＹ００６)具有 ４隔孢子ꎮ
菌株 ＨＮＨＹ００１在 ＰＤＡ培养基上培养 ５ ｄ后ꎬ
菌落呈天鹅绒状ꎬ墨绿色ꎬ其间散生成簇的ꎬ珊瑚状
子座(图 ３Ａ)ꎬ照片放大后可见子座分枝(图 ３Ｂ)ꎮ
在光学显微镜下观察ꎬ子座顶端有呈辐射状排
列的丝状分生孢子梗(图４Ａ) ꎬ有的孢子梗上可
见聚生未成熟的分生孢子(图 ４Ｂ)ꎮ 不过ꎬ在培养
时间长达 １年的培养平板上仍未镜检到子囊阶段ꎬ
ＨＮＨＹ００１分别与其它几个菌株对峙培养也均未
出现有性阶段ꎮ
Ｆｉｇ. ２ Ｃｏｎｉｄｉｏｓｐｏｒｅｓ ｏｆ ｓｔｒａｉｎ ＨＮＹＨ００１ (４００×)
Ｆｉｇ. ３ Ｖｅｌｖｅｔ ｃｏｌｏｎｙ ａｎｄ ｂｒａｎｃｈｙ ｓｔｒｏｍａ ｏｆ ｓｔｒａｉｎ ＨＮＨＹ００１ ｉｎｃｕｂａｔｅｄ ｏｎ ＰＤＡ ｐｌａｔｅ (４００×)
Ｆｉｇ. ４ Ｂｒａｎｃｈｙ ｓｔｒｏｍａ ｏｆ ｓｔｒａｉｎ ＨＮＨＹ００１ ｕｎｄｅｒ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ (４００×)
７２２
植物病理学报 ４４卷
２.３ 接种和分离
在离体接种试验中ꎬ弯孢霉菌株 ＨＮＹＨ００１ 接
种 ２ ｄ后ꎬ１、２、３组均可见病斑ꎬ第 ４组无病斑ꎮ 第
１组最为严重ꎬ第 ２组次之ꎬ第 ３ 组较轻ꎬ随后几天
病斑逐渐扩大且颜色加深ꎬ接种 ５ ｄ 后ꎬ病斑直径
为 １５ ｍｍꎬ边缘有黄色晕圈ꎬ其发病症状与自然情
况下基本一致(图 ５)ꎮ 对接种后产生的病斑再次
进行分离ꎬ得到与原分离菌株一致的病原菌ꎮ 对照
组则无病斑ꎮ 而黑孢霉菌株 ＨＮＹＨ００２ 接种的水
稻叶鞘则不发病ꎮ 这 ２ 个菌株的菌饼各取一半混
合接种引起的发病程度不高于 ＨＮＨＹ００１ 单独引
起的程度ꎮ
活体接种 ＨＮＹＨ００１ 后 ７ ｄꎬ叶鞘针刺处有黑
色病斑出现(图 ６)ꎮ 而茎部无此病斑ꎮ
Ｆｉｇ. ５ Ｓｙｍｐｔｏｍｓ ｏｆ ｒｉｃｅ ｓｈｅａｔｈ ｂｌａｃｋ ｓｐｏｔ ｏｎ ｓｈｅａｔｈｓ ２ ｄａｙｓ ａｆｔｅｒ ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ ｉｎ ｖｉｔｒｏ
Ｆｉｇ. ６ Ｓｙｍｐｔｏｍｓ ｏｆ ｒｉｃｅ ｓｈｅａｔｈ ｂｌａｃｋ ｓｐｏｔ ｏｎ ｓｈｅａｔｈｓ ７ ｄａｙｓ ａｆｔｅｒ ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ ｉｎ ｖｉｖｏ
８２２
３期 黄 微ꎬ等:水稻新病害叶鞘黑斑病的病原鉴定
水稻种子分离菌株 ＨＮＨＹ００３ ~ ＨＮＨＹ００６ 接
种后ꎬ不产生子座的菌株 ＨＮＨＹ００３ 未引起发病ꎬ
能产生分支子座的 ３ 个菌株 ＨＮＨＹ００４ ~ ＨＮＨＹ
００６均能产生典型的叶鞘黑斑ꎮ 取病斑再次进行
组织分离ꎬ得到与原分离菌株一致的病原菌ꎮ
２.４ ｒＤＮＡ￣ＩＴＳ序列分析
对菌株 ＨＮＨＹ００１进行 ＰＣＲ扩增ꎬ获得了 １条
６００ ｂｐ左右的清晰条带ꎬ经测序后将得到的 ｒＤＮＡ－
ＩＴＳ序列提交至 ＧｅｎＢａｎｋꎬ得到登录号 ＪＱ３６０９６３ꎮ
ＨＮＨＹ００１ 的 ｒＤＮＡ￣ＩＴＳ 序列经 ＢＬＡＳＴ 搜索ꎬ
与之最相近的是膝曲旋孢腔菌 Ｃｏｃｈｌｉｏｂｏｌｕｓ ｇｅｎｉｃｕ￣
ｌａｔｕｓ 及其有丝分裂产孢种之一的近缘弯孢 Ｃ. ａｆｆｉ￣
ｎｉｓꎬ同种的置信度为 ９９％ꎮ 在 ｒＤＮＡ￣ＩＴＳ 系统进化
树上ꎬＨＮＨＹ００１(ＪＱ３６０９６３)与膝曲旋孢腔菌及其有
丝分裂产孢种近缘弯孢、膝曲弯孢 Ｃ. ｇｅｎｉｃｕｌａｔａ 和
塞内加尔弯孢 Ｃ. ｓｅｎｅｇａｌｅｎｓｉｓ聚在一簇(图 ７)ꎮ
ＨＮＨＹ００２的 ｒＤＮＡ￣ＩＴＳ序列也用同样方法获
得ꎬ经 ＢＬＡＳＴ搜索之后排在前面且有完整学名的
均为稻黑孢(Ｎ. ｏｒｙｚａｅ)ꎮ
Ｆｉｇ. ７ Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ｔｒｅｅ ｏｆ ＨＮＨＹ００１ ｒＤＮＡ￣ＩＴＳ
Ｔｈｅ ＧｅｎＢａｎｋ ａｃｃｅｓｓｉｏｎ ｎｕｍｂｅｒｓ ｏｆ ｔｈｅｓｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅｄ ｒＤＮＡ￣ＩＴＳ ａｒｅ ａｓ ｆｏｌｌｏｗｓ: ＨＮＨＹ００１ (ＪＱ３６０９６３)ꎬ
ＨＮＨＹ００２(ＫＦ９４６０３９)ꎬ ＨＮＨＹ００３(ＫＦ９４６０４０)ꎬ ＨＮＨＹ００４ (ＫＦ９４６０４１)ꎬ ＨＮＨＹ００５(ＫＦ９４６０４２)ꎬ ＨＮＨＹ００６(ＫＦ９４６０４３) .
９２２
植物病理学报 ４４卷
３ 结论与讨论
本文报道了水稻上一种引起叶鞘黑斑的新病
害ꎻ并经 Ｋｏｃｈ 法则验证了分离菌株 ＨＮＹＨ００１ 为
引起叶鞘黑斑的病原菌ꎮ
在对 ＨＮＹＨ００１ 进行分子鉴定时ꎬ ｒＤＮＡ￣ＩＴＳ
的 ＢＬＡＳＴ搜索表明与之同源性最高的是膝曲旋
孢腔菌ꎬ鉴于单独培养和与其它 ４隔弯孢霉菌株的
对峙培养均未产生有性阶段ꎬ所以只能从无性阶段
特征着手进行鉴定ꎮ Ｈｏｓｏｋａｗａ 等[２]建议ꎬ膝曲旋
孢腔菌包含了有丝分裂产孢属弯孢霉属中的 ４ 个
种即近缘弯孢、膝曲弯孢、假弯孢和塞内加尔弯孢ꎮ
这 ４种弯孢都具有 ４隔分生孢子ꎬ其中膝曲弯孢和
近缘弯孢的子座不分枝[３]ꎬ而 ＨＮＹＨ００１ 的子座分
枝ꎻ塞内加尔弯孢和膝曲弯孢的分生孢子大多弯
曲ꎬ而假弯孢的分生孢子大多较直[４]ꎮ 由此可见ꎬ
ＨＮＹＨ００１与假弯孢的描述相符ꎮ 鉴于此ꎬ笔者建
议鉴定 ＨＮＹＨ００１ 为膝曲旋孢腔菌有丝分裂产孢
种假弯孢(Ｃ. ｆａｌｌａｘ)ꎮ 另外ꎬＢＬＡＳＴ 结果中假弯
孢序列未出现ꎬ其原因在于笔者递交之序列之前
ＮＣＢＩ的核苷酸数据库尚未收录假弯孢的序列ꎮ
已知弯孢霉引起多种禾本科植物叶部病害ꎬ例
如新月弯孢(Ｃ. ｌｕｎａｔａ)引起玉米弯孢叶斑病ꎬ上世
纪 ９０年代此病曾给北方玉米生产带来了严重损
失[５]ꎬ近年来有逐渐加重的趋势ꎬ成为玉米高产种
植的潜在威胁[６~９]ꎮ 弯孢霉引起草坪草病害的报
道也较多[１０~１４]ꎮ 在水稻上ꎬ从黑粒米上分离到 １３
种弯孢ꎬ选取其中 ９ 种于水稻开花期人工接种ꎬ结
果均引致变色谷粒和黑粒米[１５ꎬ１６ ]ꎮ 但国内外迄今
未报告弯孢霉在自然条件下引起水稻叶鞘病害ꎮ
为此本研究报告的是一种新的水稻病害ꎬ在此定名
为水稻叶鞘黑斑病ꎮ
本研究用人工培养时产生的成熟孢子进行喷
雾接种ꎬ未见发病症状ꎬ而需要通过针刺接种才能
发病ꎬ说明该病原菌致病力较弱ꎬ需从伤口侵入ꎮ
本研究中分离到的稻黑孢曾被报道引起水稻
叶片上的圆斑病[１７]ꎬ本次接种于叶鞘未发病可能
是由于组织特异性所致ꎬ因为此病症状出现在叶片
而不是叶鞘上ꎮ
由于该病原菌假弯孢(Ｃ. ｆａｌｌａｘ)为首次报道
引起叶鞘黑斑病ꎬ且以往对该病原菌种间其它性状
特征的报道和描述较少ꎬ为了更深入的了解该病害
与其它病原菌的进化关系以更好的阐明其发生规
律和致病机制ꎬ有待对该病原菌其它分子生物学特
征如种间遗传背景等进行研究ꎮ
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Ｃｕｒｖｕｌａｒｉａ ｌｕｎａｔａ ｔｏｘｉｎ ｏｎ ｄｅｆｅｎｓｅ ｅｎｚｙｍｅ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ
ａｎｄ ｉｔｓ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｉｎｄｕｃｅｄ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｏｆ ｃｏｒｎ ( ｉｎ
Ｃｈｉｎｅｓｅ) [Ｊ] . Ａｃｔａ Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａ Ｓｉｎｉｃａ (植物病
理学报)ꎬ ２００２ꎬ ３２(１): ４３－４８.
[９] Ｌｉ Ｘ ＹꎬＳｈｉ Ｊꎬ Ｄｏｎｇ Ｊ Ｇ. Ｔｈｅ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｎ ｂｉｏｌｏｇｉ￣
ｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ｆｏｕｒ ｋｉｎｄｓ ｏｆ Ｃｕｒｖｕｌａｒｉａ ｓｐｅｃｉｅｓ
( ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ) [ Ｊ] . Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ
ｏｆ Ｈｅｂｅｉ (河北农业大学学报) ２００２ꎬ ２５(３): ６２－６４.
[１０] Ｋａｗａｎａｂｅ Ｙ. Ｔｈｅ ｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅ ａｎｄ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ｔｕｒｆｇｒａｓｓ
ｄｉｓｅａｓｅｓ ｉｎ Ｊａｐａｎ [ Ｊ] . Ｐｅｓｔｉｃｉｄｅ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎꎬ １９９１
０３２
３期 黄 微ꎬ等:水稻新病害叶鞘黑斑病的病原鉴定
(５９): ５－９.
[１１] Ｙｉｌｄｉｚ Ｆꎬ Ｙｉｌｄｉｚ Ｍꎬ Ｄｅｌｅｎ Ｎ. Ｔｈｅ ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ ｓｔｕｄｉｅｓ
ｏｎ ｔｈｅ ｔｕｒｆｇｒａｓｓ ｄｉｓｅａｓｅｓ ｉｎ Ｔｕｒｋｅｙ [ Ｊ] . Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ
Ｔｕｒｋｉｓｈ Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙꎬ １９９０ꎬ １９(１): ２１－２９.
[１２] Ｚｈｅｎｇ Ｌꎬ Ｈｕａｎｇ Ｊ Ｂꎬ Ｘｉａｎｇ Ｐ Ｊ. Ｅｔｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ
ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ｆｕｎｇｕｓ
ｃａｕｓｉｎｇ ｌｅａｆ ｓｐｏｔ ｏｎ Ｆｅｓｔｕｃａ ａｒｕｎｄｉｎａｃｅａ ( ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ)
[Ｊ]ꎬ Ａｃｔａ Ａｇｒｅｓｔｉａ Ｓｉｎｉｃａ (草地学报)ꎬ ２００６ꎬ １４
(４): ３１５－３２７.
[１３] Ｊｉａ Ｆ Ｊꎬ Ｈｕａｎｇ Ｊ. Ｅｔｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｃｕｒｖｕｌａｒｉａ ｌｅａｆ ｓｐｏｔ ｏｎ
ｃｙｎｏｄｏｎ ｈｙｂｒｉｄ ( ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ) [Ｄ] . Ｈｕａｚｈｏｎｇ Ａｇｒｉｃｕｌ￣
ｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ (华中农业大学)ꎬ ２００７ꎬ １－５９.
[１４] Ｆａｎｇ Ｋ Ｆꎬ Ｈｕａｎｇ Ｊ Ｂ. Ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｅｔｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｃｙｎｏｄｏｎ
ｌｅａｆ ｓｐｏｔ ｉｎ ｇｏｌｆ ｃｏｕｒｓｅ ( ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ) [Ｄ] . Ｈｕａｚｈｏｎｇ
Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ (华中农业大学)ꎬ ２００６ꎬ １－
５１.
[１５] Ｃｈａｉ Ｒ Ｙꎬ Ｊｉｎ Ｍ Ｚꎬ Ｚｈａｎｇ Ｑ Ｓ. Ｔｈｅ ｉｎｈａｂｉｔｉｎｇ ｆｕｎｇｉ
ｏｆ ｄｉｓｃｏｌｏｒｅｄ ｐａｄｄｙ ｒｉｃｅ ｇｒａｉｎｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｉｅｓ
( ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ) [ Ｊ] . Ａｃｔａ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｅ Ｚｈｅｊｉａｎｇｅｎｓｉｓ
(浙江农业学报)ꎬ １９９１ꎬ ３(２): ６１－６４.
[１６] Ｊｉｎ Ｍ Ｚ. Ｔｈｅ ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｏｆ ｄｉｓｃｏｌｏｒ ｐａｄｄｙ
ｒｉｃｅ ｇｒａｉｎｓ ｃａｕｓｅｄ ｂｙ Ｃｕｒｖｕｌａｒｉａ ( ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ) [ Ｊ] .
Ａｃｔａ Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａ Ｓｉｎｉｃａ (植 物 病 理 学 报 )ꎬ
１９８９ꎬ １９(１):２１－２５.
[１７] Ｌｕｏ Ｋꎬ ｅｔ ａｌ. Ｔｈｅ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｏｆ ｒｉｃｅ ｒｏｕｎｄ ｓｐｏｔ ｄｉｓｅａｓｅ
( ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ) [Ｊ] . Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｈｕｎａｎ Ａｇｒｏｎｏｍｙ (湖南
农学院学报)ꎬ １９８７ꎬ ３(１): ５９－６８.
责任编辑:李晖
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