全 文 ：书西北植物学报!
"#$
!
%$
"
##
#$
!#&$!#("
!"#$%&#%&()$*+,""-.)/#0-/
!!
文章编号$
#""")*"!$
"
!"#$
#
#)!#&$)"+
!!!!!!!!!!!!!!!
!"#
$
#",-+"+
%
.
,/001,#""")*"!$,!"#$,##,!#&$
收稿日期$
!"#$)"&)#"
&修改稿收到日期$
!"#$)"()%"
基金项目$中央高校基本科研业务费专项资金"
23!"#%"%""(
#&陕西省自然科学基金"
!"#*45%#"$
!
"#*45%##!
#&陕西师范大学大学生创
新训练项目"
!"#$#"-#&"#$
#
作者简介$化文平"
#(&"
#!男!博士!主要从事药用植物生物技术研究
6)78/9
$
:;8<=1
>
/1
?!
#!+,@A7
"
通信作者$李翠芹!博士!副教授!主要从事药用植物次生代谢研究
6)78/9
$
9/@;/
B
/1#+
!
011;,=C;,@1
丹参抗性基因
01,2!$
的
克隆及诱导表达分析
化文平#!!刘文超#!贾林泉#!王?之#!李翠芹#"
"
#
药用资源与天然药物化学教育部重点实验室!西北濒危药材资源开发国家工程实验室!陕西师范大学 生命科学学院!西安
-#""+!
&
!
陕西学前师范学院 生物科学与技术系!西安
-#"#""
#
摘
!
要$该研究采用
DEF
方法从丹参中克隆出一条乙烯应答因子结合蛋白"
6FG
#转录因子编码基因!命名为
!"#$%#
!
2=1H81I
登录号为
3J%$($(&
经分析发现该基因全长
+*&K
>
!不包含内含子!编码
!"+
个氨基酸残基
编码蛋白
L7MFN#
含有典型的
ND!
结合结构域表达分析结果表明!
"#$%#
主要在丹参根中表达!且该基因
的表达明显受到茉莉酸甲酯"
O=4N
#(脱落酸"
NHN
#(乙烯"
6J
#(机械创伤和病原菌等逆境信号的诱导!但低温和
脱水情况下
!"#$%#
表达下调研究表明!
L7MFN#
参与丹参生物胁迫反应!可整合
4N
(
NHN
(
6J
和病原菌等
胁迫信号途径
关键词$丹参&乙烯应答因子结合蛋白"
6FG
#&基因克隆&表达模式&胁迫
中图分类号$
5-&$
&
5-&+
文献标志码$
N
%&"#
(
)!*!+,-!./
0
1-22#""301,2!$
4--31"50$*3-$1-*#-&((4-5$
PQN R=1
>
/1
?
#
!
!
STQ R=1@:8A
#
!
4TNS/1
B
;81
#
!
RNU2V:=W:/
#
!
STE;/
B
/1
#
"
"
#3=
X
S8KAY8ZAY
X
A[Z:=O/1/0ZY
X
A[6C;@8Z/A1[AYO=C/@/189F=0A;Y@=081CU8Z;Y89D:8Y78@=;Z/@89E:=7/0ZY
X
!
U8Z/A18961
?
/)
1==Y/1
?
S8KAY8ZAY
X
[AYF=0A;Y@=\=]=9A
>
7=1ZA[61C81
?
=Y=CEY;C=\Y;
?
0/1UAYZ:<=0ZA[E:/18
!
L:881^/UAY789Q1/]=Y0/Z
X
!
_/
)
81-#""+!
!
E:/18
&
!\=
>
8YZ7=1ZA[S/[=L@/=1@=081CJ=@:1A9A
?X
!
L:881^/_;=
B
/81UAY789Q1/]=Y0/Z
X
!
_/
)
81-#"#""
!
E:/18
#
67281),8
$
T1Z:/00Z;C
X
!
A1=
?
=1==1@AC/1
?
=Z:
X
9=1=Y=0
>
A10/]=[8@ZAYK/1C/1
?>
YAZ=/1
"
6FG
#
<80@9A1=C
[YA7!&()&")*)+,,-).& K
X
FJ)DEF
!
<:/@: <80187=C80!"#$%#
"
2=1H81I8@@=00/A11;7K=Y
$
3J%$($(&
#
,!"#$%#\UN0=
B
;=1@=@A10/0Z0A[+*&K
>
!
81C=1@AC/1
?
!"+87/1A8@/CY=0/)
C;=0,H/A/1[AY78Z/@08189
X
0/00:A<=CZ:8ZL7MFN#@A1Z8/1Z
X>
/@89ND!K/1C/1
?
CA78/1A[6FG[87/9
X
,
J:=Y=89)Z/7=
B
;81Z/Z8Z/]=DEF8189
X
0/0Y=]=89=CZ:8Z!"#$%#<8078/19
X
=^
>
Y=00=C/1Z:=YAAZ0
!
[;YZ:=Y)
7AY=/Z@81K=/1C;@=CK
X
7=Z:
X
9
.
807A18Z=
"
O=4N
#!
8K0@/0/@8@/C
"
NHN
#!
=Z:
X
9=1=
"
6J
#!
>
:
X
0/@89C/1
?
81C
>
8Z:A
?
=10,R:/9=Z:==^
>
Y=00/A19=]=9A[!"#$%#<80CA<1)Y=
?
;98Z=C;1C=Y9A>
=Y8Z;Y=AY
C=:
X
CY8Z/A1ZY=8Z7=1Z,J:=0=Y=0;9Z0/1C/@8Z=CZ:8Z!"#$%#<80/1]A9]=C/1
>
981Z0ZY=00Y=0
>
A10=0
!
81C
/1Z=
?
Y8Z=C4N
!
6J
!
NHN81C
>
8Z:A
?
=10/
?
1890/1!/")*)+,,-).&,
9-
:
;"1!2
$
!&()&")*)+,,-).&
&
=Z:
X
9=1=Y=0
>
A10/]=[8@ZAYK/1C/1
?>
YAZ=/1
"
6FG
#&
?
=1=@9A1=
&
=^
>
Y=00/A1
>
8ZZ=Y1
&
0ZY=00
!!
ND!
%
6FG
类转录因子是植物所特有的一大类 转录因子蛋白!在植物中有着庞大的家族组成!如在
拟南芥中有
#*$
个成员!在水稻中有
#+-
个成员*#+
6FG
乙烯应答因子结合蛋白"
=Z:
X
9=1=Y=0
>
A10/]=
[8@ZAYK/1C/1
?>
YAZ=/1
!
6FG
#属于
ND!
%
6FG
类转
录因子超家族中的
6FG
家族!该超家族成员至少含
有一个大约
+"
个氨基酸长度的
ND!
结构域!该结
构域用于识别结合
\UN
序列上保守的
2EE)KA^
"
N2EE2EE
!
=Z:
X
9=1=)Y=0
>
A10/]==9=7=1Z
!
6F6
#
*
!)%
+或
者
\F6
序列"
JNEE2NENJ
#
*
)$
+

6FG
家族蛋白成
员主要参与调控植物激素乙烯"
6J
#和脱落酸
"
NHN
#等!病原菌和胁迫"低温(干旱及高盐#等的
应答反应如大豆
0"1$2"$-
受盐(干旱(
6J
(水
杨酸"
LN
#(茉莉酸"
4N
#(
NHN
和烟草花叶病毒"
ZA)
K8@@A7A08/@]/Y;0
!
JO`
#等的诱导表达!在烟草中
过量表达该基因可以增强植物对盐和病原菌的抗
性*++转基因烟草中过量表达
0"1$2%
可以提高
植物对高盐和干旱的抗性在水稻和番茄中过表达
番茄
31$2!
%
451$2!
可提高植物耐寒能力*-+番
茄
61$2%
的过表达可提高水稻抗旱性*&+在苜蓿
中过表达大豆
0"7$18#
可提高苜蓿的耐盐性*(+
中药丹参为唇形科鼠尾草属植物丹参"
!&()&
")*)+,,-).&H;1
?
=
#的干燥根及根茎!在临床上被
广泛应用于心脑血管疾病的治疗*#")##+对其主要药
用成分合成途径相关基因的研究是人们关注的热
点!但是对植物抗性相关的重要调控基因研究较少
在丹参转录组高通量测序*#!+的基础上筛选出一条
与长春花
9,#$9%%
高度相似的
6FG
编码基因序
列"
EA1Z/
?
!%!&
#
9,#$9%%
是长春花中长春碱合
成的重要调控基因!同时也是植物抗性的重要调控
基因*#%+!因此在丹参中!
6FG
极有可能参与植物抗
性的调控对丹参
1$2
基因的研究有助于阐明丹
参的抗胁迫反应机制本研究从植物丹参中克隆了
一条
1$2
基因!分析其分子特征及其在丹参不同
组织及激素和胁迫诱导下的表达!为丹参
6FG
功能
研究及其在丹参抗胁迫中的作用提供参考
#
!
材料和方法
$,$
!
试验材料
供试病原菌立枯丝核菌"
$-).+:*+;)&<+&;)
#和
甘蓝黑腐病假黄孢单菌"
=&;*-+"+;&<:&"
>
5<*,)<
>
],:&"
>
5<*,)<
#为本实验室保存立枯丝核菌于
D\N
固体培养基活化后!转入无琼脂的马铃薯葡萄
糖液体培养基中培养
%C
!菌液用双层无菌纱布过
滤!并用无菌水调制成透光率为
#"a
的菌悬液备
用甘蓝黑腐病黄单胞菌预处理方法见文献*
#*
+
商洛紫花丹参"
!&()&")*)+,,-).&H;1
?
=
#种
子于含蛭石的营养钵中!置人工气候培养箱中培养
培养条件$温度"
!$b!
#
c
!湿度
*&a
!光照强度
#$"
"
7A9
,
7
!
,
0
#
!光周期为光照
#+:
%黑暗
&
:
生长
#
月龄丹参幼苗用于乙烯利"
!""77A9
%
S
#(
NHN
"
#""
"
7A9
%
S
#(脱水"幼苗置于干燥的滤纸
上#(伤害"用
+77
打孔器于丹参叶片每株打孔
%
个#(立枯丝核菌侵染"用菌悬液喷施丹参!每株喷施
约
$7S
#(低温"
*c
#等胁迫处理&
O=4N
及假黄孢
单菌处理参见文献*
#*
+处理后不同时间取样!以
未作处理的丹参幼苗为对照种子萌发生长至花期
分别取根(茎(叶和花不同器官材料材料收集后!
立即液氮速冻!并于
&"c
冻存备用
$<=
!
丹参
,>?6
第一链合成
以丹参叶片为材料!参照博日植物
\UN
提取
试剂盒说明书提取丹参基因组
\UN
采用
MO6)
2N
公司
D981ZFUN3/Z
进行上述各种丹参材料总
FUN
的提取!获得的总
FUN
经检测合格后以其为
模板!采用
DY/7=L@Y/
>
Z
#
FJY=8
?
=1Z3/Z
"
J8I8Y8
#
试剂盒反转合成
@\UN
第一链反转所得
@\UN
溶液稀释
#"
倍!
!"c
保存以用于基因克隆或定
量
DEF
分析
$<@
!
01,2!$
基因克隆及序列分析
依据丹参转录组序列
EA1Z/
?
!%!&
!采用
DY/7=Y
DY=7/=Y$,"
软件设计引物
L7MFN#G
和
L7M)
FN#F
"表
#
#!分别以丹参
@\UN
和总
\UN
为模板
进行
DEF
扩增反应程序$
(*c
预变性
$7/1
!
(*
c
变性
%"0
!
$*c
退火
%"0
!
-!c
延伸
%7/1
!扩增
%"
个循环&
-!c
延伸
&7/1

DEF
扩增产物经
#a
琼脂糖凝胶电泳检测后!经回收后与
>
O\#()J
载
体"
J8I8Y8
#连接!转入
\P$
$
!随机挑选所得阳性克
隆经菌落
DEF
检测后送南京金斯瑞生物有限公司
进行测序验证基因序列开放阅读框的查找(同源
性分析(多序列比对等分析参照文献*
#*
+进行
表
$
!
分析所用引物
J8K9=#
!
DY/7=Y0;0=C[AYDEF8189
X
0/0
用途
D;Y
>
A0=
引物名称
DY/7=Y187=
引物序列
L=
B
;=1@=
"
$d
#
%d
#
全长基因克隆
GAY
?
=1=@9A1/1
?
L7MFN#G 2EJEEEEJJENNE2N2NNE2NJ
L7MFN#F E2EEJ2E2NE2N2JJENEEJ
B
FJ)DEF
B
MFN#)G NNNJ22JE2EJ2NJJ2EJ22JN
B
MFN#)F E2JJEJEENJEEJE2EEJNNNJ
B
N@Z/1)G N22NNEENEE2NJEEN2NEN
B
N@Z/1)F 22J2EEEJ2N22JEEJ2JJ
+&#!
西
!
北
!
植
!
物
!
学
!
报
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
%$
卷
$!
01,2!$
表达分析
以
LeHF
?
Y==1
%
"
J8I8Y8
#为荧光染料!采用
H/A)F8C
检测
!"#$%#
在丹参不同器官以及胁迫
处理下的表达以丹参持家基因
!
?&:*);
"
2=1H81I
登录号
\5!*%-"!
#作内参!所用引物见表
#

DEF
反应程序为
($c
预变性
%7/1
&
($c
变性
#"0
!
+"
c
退火
%"0
!
*"
个循环每个样品
%
次技术重复及
!
次生物重复采用
9*
相对定量法*#$+对数据进行
分析!单因素方差分析用
LDLL#+,"
中
NUM` N
!
用
J;I=
X
Z=0Z
分析各样品间基因表达的差异"
@
$
","$
#
!
!
结果与分析
=<$
!
丹参
01,2!$
基因克隆
在本实验室丹参转录组数据库基础上!从
@\UN
和
\UN
水平均克隆得到
#
条大小约为
-""K
>
左右
的基因片段"图
#
#经测序验证!克隆序列与原
6LJ
序列"
EA1Z/
?
!%!&
#完全一致!序列长
+*&K
>
!包含
+!#
K
>
开放读码框!不包含内含子序列将该序列命名
为
!"#$%#
!
2=1H81I
登录号为
3J%$($(&

图
#
!
丹参
!"#$%#
基因
DEF
扩增结果
G/
?
,#
!
DEF87
>
9/[/@8Z/A1
>
YAC;@Z0A[
!"#$%#[YA7!/")*)+,,-).&
O,\S!"""
&
#,@\UN
&
!,\UN
图
!
!
L7MFN#
与其他植物
6FG
氨基酸序列比对
E86FG,
咖啡树&
L7MFN#,
丹参&
S
.
6FG#,
百脉根&
L96F6HD,
番茄&
6FG#,
拟南芥&
NC6FG#",
猕猴桃&
DZ6FG%%,
毛果杨&
OCND\!(,
苹果&线和框分别表示
ND!
%
6FG
结构域和保守元件
G/
?
,!
!
N9/
?
17=1ZA[87/1A8@/C0=
B
;=1@=0A[L7MFN#81C6FG0[YA7AZ:=Y
>
981Z0
>
=@/=0
E86FG,9+
AA
5&&,&B):&
&
L7MFN#,!&()&")*)+,,-).&
&
S
.
6FG#,4+*C<
D
&
>
+;):C<
&
L96F6HD,!+&;C"
E
:+
>
5,<):C"
&
6FG#,%,&B)F+
>
<)<*-&)&;&
&
NC6FG#",%:*);)F)&F5):)+<&
&
DZ6FG%%,@+
>
CC<*,):-+:&,
>
&
&
OCND\!(,G&C&
J:=9/1=81CKA^=0/1C/@8Z=ND!
%
6FGCA78/181C@A10=Y]=C7AZ/[0
!
Y=0
>
=@Z/]=9
X
-&#!
##
期
!!!!!!!!!!!
化文平!等$丹参抗性基因
!"#$%#
的克隆及诱导表达分析
=<=
!
丹参
B5CD6$
生物信息学分析
序列比对分析结果"图
!
#显示!丹参
!"#$%#
推导 氨 基 酸 序 列 "
L7MFN#
#与 拟 南 芥
6FG#
"
NJ%2!%!*"
#(苹果"
G&C!
N\6*##!!,
#
#(百脉根"
4+*C<
D
&
>
+;):C<
!
HN2$""$%,#
#(毛果杨
"
@+
>
CC<*,):-+:&,
>
&
!
_D
-
""!%#$-"-
#(番茄"
!+&;C"

E
:+
>
5,<):C"
!
NNU--"+-,#
#和咖啡树"
9+
AA
5&&,&B)?
:&
!
N\e%&-(%,#
#等序列的一致性达
+"a
(
$$a
(
$-a
(
$$a
(
$*a
和
$#a

L7MFN#
在
-$
&
#%"
位
氨基酸间具有典型的
ND!
保守功能域!还含有
EOT_)#
(
EOT_)%
和
EOT_)*
等
%
个保守元件"图
!
#
L7MFN#
与拟南芥
6FG#
"
NJ%2!%!*"
#具有
很高的一致性!保守元件与
ND!
%
6FG
结构域的分
布也基本一致 *#++
经
DYAZD8Y87
程序预测!
L7MFN#
蛋白分子量
为
#$,""I!等电点为
$,&(
利用
L/
?
189D*,#
L=Y]=Y
和
DLMFJ
程序对丹参乙烯响应因子进行亚
定位分析!均显示
L7MFN#
无信号肽!可能与小麦
R#-
"
6FG
类转录因子#一样通过自身富含赖氨酸
和精氨酸的核定位信号区"
USL
#进入核内行使功
能!参与了
2EE)KA^
调控的生物胁迫信号传导
途径*#-+
=<@
!
丹参
01,2!$
表达分析
=<@<$
!
01,2!$
在丹参不同器官中的表达
!
以丹
参
!
?&:*);
基因为内参!采用实时荧光定量
DEF
技
术考察
!
年龄丹参苗中
!"#$%#
基因在丹参不同
器官中的表达情况结果显示"图
%
#!
!"#$%#
在
丹参的根(茎(叶和花中的表达存在很大差异!主要
在根中表达!叶中表达量最低
=<@<=
!
01,2!$
在不同胁迫条件下的表达
!
为探
讨
!"#$%#
在丹参胁迫反应中的作用!分别用
#""
"
7A9
%
SNHN
(
$77A9
%
SO=4N
(
!""77A9
%
S
乙烯
利(
*c
低温(伤害(脱水(立枯丝核菌和假黄孢单菌
处理丹参实生苗!采用实时荧光定量
DEF
检测
!"#$%#
基因的表达
图
%
!
!"#$%#
基因在丹参不同器官中的表达
不同的小写字母表示不同器官间存在显著差异"
@
$
","$
#
G/
?
,%
!
6^
>
Y=00/A1A[!"#$%#
?
=1=/1
C/[[=Y=1ZAY
?
810/1!/")*)+,,-).&
\/[[=Y=1Z9A<=Y)@80=9=ZZ=Y00:A<0/
?
1/[/@81Z
C/[[=Y=1@=87A1
?
C/[[=Y=1ZAY
?
810
"
@
$
","$
#
图
*
!
不同处理下
!"#$%#
基因的表达模式分析
N,O=4N
和
NHN
&
H,
立枯丝核菌和假黄孢单菌&
E,
脱水&
\,
乙烯&
6,
低温&
G,
机械伤害&
不同小写字母表示同一胁迫处理不同时间点间存在显著差异"
@
$
","$
#
G/
?
,*
!
6^
>
Y=00/A1
>
YA[/9=0A[!"#$%#
?
=1=;1C=YC/[[=Y=1ZZY=8Z7=1Z0
N,O=4N81CNHN
&
H,$-).+:*+;)&<+&;)81C=&;*-+"+;&<:&"
>
5<*,)<
>
],:&"
>
5<*,)<
&
E,\=:
X
CY8Z/A1
&
\,6Z:
X
9=1=
&
6,SA<=YZ=7
>
=Y8Z;Y=
&
G,D:
X
0/@89?
&
\/[[=Y=1Z1AY7899=ZZ=Y00:A<0/
?
1/[/@81ZC/[[=Y=1@=
K=Z<==1087
>
9=0@A9=@Z=C8ZC/[[=Y=1ZZ/7=;1C=YZ:=087=ZY=8Z7=1Z
"
@
$
","$
#
&&#!
西
!
北
!
植
!
物
!
学
!
报
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
%$
卷
!!
结果表明!
!"#$%#
在
O=4N
处理
*:
后!表
达量显著性上调!
&:
后表达量降低"图
*
!
N
#&
NHN
处理后!
!"#$%#
基因表达量在处理后
*:
出现显
著性提高!在处理后
!*:
达到最大"图
*
!
N
#&在立
枯丝核菌"图
*
!
H
#和假黄孢单菌"图
*
!
H
#感染处理
后!
"#$%#
的表达量都在处理后
*&:
出现显著
上调&乙烯利处理
%:
后!
"#$%#
呈现最高响应!
随后在
+:
表达量有所降低!但仍显著高于正常水
平"图
*
!
#&低温"图
*
!
6
#和脱水"图
*
!
E
#
!
种非生
物胁迫处理下!基因表达量出现下调现象!且在相应
的检测期内均低于对照水平&机械伤害
+
&
&:
后!
!"#$%#
基因表达出现显著上升!此后回复正常水
平"图
*
!
G
#
%
!
讨
!
论
丹参是中国大宗中药材之一!需求量大但种
植过程中!各种病虫害十分普遍!可造成
#$a
&
*$a
的损失!是影响丹参质量和产量的重要因素之
一*#*+研究丹参抗性基因功能将为丹参抗性育种
奠定基础
ND!
%
6FG
类转录因子以含有识别
\UN
的
ND!
结合结构域为特征!是植物特有的一
类转录因子
L8I;78
等*#&+按照含有
ND!
结构域
数目将
ND!
%
6FG
类转录因子超家族分为
ND!
(
6FG
和
FN`
等
%
个家族!其中
6FG
家族仅含有
#
个
ND!
特征结构域
U8I81A
等*#(+依据结构特征进
一步将拟南芥的
#!!
条
6FG
序列分为
#!
个不同的
组其中!
T_
组成员"如
6FG#
(
NZ6FG#
和
MFN$(
等#在植物抗生物和非生物胁迫中发挥着重要作用!
尤其在抗病原菌方面*!")!!+如干涉
#$%$(
的拟南芥
株系对灰霉病的抗性减弱!过表达
#$%$(
可增强植
株对灰霉病的抗性*!#+过表达拟南芥
6FG#
不仅可
增强拟南芥植株抗盐和抗旱性能!同时也可以增
强植物对灰霉病"
8+*,
E
*)<:);5,5&
#和短小芽孢杆菌
"
@5:*+<
>
-&5,5&:C:C"5,);&
#等 病 原 菌 的 抗
性*!"+本研究克隆得到的
!"#$%#
编码蛋白具有
一个典型的
ND!
保守功能域!与拟南芥中的
6FG#
一致性最高!且其它保守元件分布也完全相同*#-+
按照
U8I81A
等*#-+对拟南芥中
6FG
转录因子的分
类方法!
L7MFN#
与拟南芥
6FG#
同属于第

组成
员"
H%
#说明本研究克隆得到的
L7MFN#
属于
6FG
基因家族成员!可能与拟南芥
6FG#
一样在丹
参胁迫反应中发挥着重要作用
研究表明!
6FG
家族
T_
组成员的编码基因的
表达受茉莉酸"
4N
#(乙烯"
6J
#和水杨酸等抗性相
关激素的诱导*#-+!通过整合不同胁迫信号途径调控
下游抗性基因*!%+如
1$2#
的表达受高盐(干旱(
高温(
4N
和
6J
等因素的诱导!但受
NHN
的抑
制*!"+&拟南芥
#$%$(
和水稻
#<1$2#
的表达都受
到
4N
和
6J
的诱导*!#!*+该研究同样表明!
"#?
$%#
的表达不仅受到
6J
(
O=4N
的诱导!还可以响
应物理伤害和病原菌侵染同属于
6FG
家族

组
的成员的
#<1$2#
和
1$2#
对
NHN
的响应也不尽
相同
1$2#
的 表 达 受
NHN
的 抑 制*!!+!而
#<1$2#
的表达则受
NHN
的诱导本研究表明!
!"#$%#
的表达同样受到
NHN
的诱导进一步说
明
6FG
家族

组的不同成员在整合不同的信号途
径上有所差别!其在不同植物胁迫信号途径中发挥
的作用也可能有所差别
6FG
蛋白还普遍参与植物抗旱(抗冷等胁迫反
应如烟草中过量表达
0"1$2%
可以提高烟草对
高盐和干旱的抗性&在水稻(番茄(烟草和苜蓿中过
量表达
6FG
基因均可以提高植物的抗旱性*-)(+番
茄
61$2%
受低温诱导!在烟草中过表达
61$2%
可
增强烟草抗旱(抗盐和抗冻能力*!$+拟南芥
6FG#
(
MFN$(
和
NZ6FG#
的过表达都可增强植物的抗旱
能力但本研究的结果表明!在脱水或低温情况下!
!"#$%#
基因的表达量出现了显著性下调可能
是由于拟南芥
1$2#
的表达受到高温的诱导*!"+!在
低温条件下该类基因表达受到抑制干旱胁迫下
!"#$%#
基因的表达量出现了显著性下调!可能是
因为
!"#$%#
的启动子区域无相应的调控元件!
L7MFN#
不参与植物的抗旱反应
综上所述!
L7MFN#
属于
6FG
家族第

组成
员成员!其编码基因受到
6J
(
O=4N
(
NHN
(物理伤
害和病原菌浸染等外界环境条件的诱导!在低温或
脱水处理中表达受抑制说明
L7MFN#
可能普遍
参与植物的抗性反应!但其具体调控的靶基因是否
与其同源基因"
1$2#
等#雷同尚待进一步研究
参考文献!
*
#
+
!
OTVMT4
!
LPTUMVN3T3
!
eNON2QEPT)LPTUMVN3T3,ND!
%
6FG[87/9
X
ZY810@Y/
>
Z/A1[8@ZAY0/1
>
981Z8K/AZ/@0ZY=00Y=0
>
A10=0
*
4
+
,
8)+:-)"/8)+
>
-
E
!
"#!
!
$E$F
"
!
#$
&+(+,
(&#!
##
期
!!!!!!!!!!!
化文平!等$丹参抗性基因
!"#$%#
的克隆及诱导表达分析
*!
+
!
PNM!
MPO6)JN3N2TO
!
LNFNTN,Q1/
B
;=7AC=A[2EEKA^ Y=@A
?
1/Z/A1K
X
Z:=\UN)K/1C/1
?
CA78/1A[=Z:
X
9=1=)Y=0
>
A10/]==9=)
7=1Z)K/1C/1
?
[8@ZAY
"
6FGCA78/1
#
/1
>
981Z
*
4
+
,6/8)+/9-5"/
!
#((&
!
=G@
"
*#
#$
!+&$-!+&+#,
*
%
+
!
MPO6)JN3N2TO
!
LPTULPTP,6Z:
X
9=1=)/1C;@/K9=\UNK/1C/1
?>
YAZ=/10Z:8Z/1Z=Y8@ZX
9=1=)Y=0
>
A10/]==9=7=1Z
*
4
+
,@&;*
95
!
#(($
!
G
"
!
#$
#-%#&!,
*+
!
4TNU2E
!
TQH
!
LTU2P4,F=
B
;/Y=7=1ZA[8EE2NE@/0)8@Z/1
?
=9=7=1Z[AY@A9C/1C;@Z/A1A[Z:=HU##$
?
=1=[YA7>
C<
*
4
+
,@&;*G+/8)+,
!
#((+
!
@H
"
%
#$
+-(+&*,
*
$
+
!
LJME3TU26F64
!
2TSOMQFL4
!
JPMONLPMR OG,%,&B)F+
>
<)<*-&)&;&EHG#=1@AC=081ND!CA78/1)@A1Z8/1/1
?
ZY810@Y/
>
Z/A189
8@Z/]8ZAYZ:8ZK/1C0ZAZ:=E)Y=
>
=8Z
%
\F6
!
8@/0)8@Z/1
?
\UNY=
?
;98ZAY
X
=9=7=1ZZ:8Z0Z/7;98Z=0ZY810@Y/
>
Z/A1/1Y=0
>
A10=ZA9A>
=Y8)
Z;Y=81C<8Z=YC=[/@/Z
*
4
+
,@H%!
!
#((-
!
FA
"
%
#$
#"%$#"*",
*
+
+
!
VPNU22
!
EP6UO
!
EP6U_
!
5*&,D:
X
9A
?
=1
X
!
?
=1=0ZY;@Z;Y=0
!
81C=^
>
Y=00/A1
>
8ZZ=Y10A[Z:=1$2
?
=1=[87/9
X
/10A
X
K=81
"
0
E
:);5
"&IS,
#*
4
+
,6/1I
>
/8+*/
!
""&
!
IF
"
#$
#$
*"($*#"-,
*
-
+
!
VPNU2V
!
PQNU2F,61:81@=CZA9=Y81@=ZA[Y==W/1
?
/1ZAK8@@A81CZA78ZAA]=Y=^
>
Y=00/1
?
ZY810@Y/
>
Z/A1[8@ZAYJ6FG!
%
S=6FG!/07AC)
;98Z=CK
X
=Z:
X
9=1=K/A0
X
1Z:=0/0
*
4
+
,@&;*G+/8)+/
!
"#"
!
G@
"
%
#$
!*#!*(,
*
&
+
!
VPNU2P
!
STQ R
!
RNUS
!
5*&,G;1@Z/A1898189
X
0=0A[=Z:
X
9=1=Y=0
>
A10=[8@ZAY46FG%>
YA]/1
?
ZA9=Y81@=ZACYA;
?
:Z
81CA07AZ/@0ZY=00/1ZY810
?
=1/@Y/@=
*
4
+
,3,&;<
J
5;):$5!
"#"
!
$F
"
$
#$
&"(&#&,
*
(
+
!
4TUJ
!
EPNU25
!
STR
!
5*&,LZY=00)/1C;@/K9==^
>
Y=00/A1A[0"7$18#@A1[=YY=C089ZZA9=Y81@=/1ZY810
?
=1/@89[89[8
*
4
+
,@&;*953)<#,
J
/
!
"#"
!
$HH
"
!
#$
!#(!!-,
*
#"
+
!
STUJP
!
PLT6PES,D:8Y78@A9A
?
/@89=[[=@Z0A[!&()&")*)+,,-).&
"
\810:=1
#
A1@=Y=KY89/1[8Y@Z/A1
*
4
+
/9-);/G5F/
!
"#"
!
$
$
!!,
*
##
+
!
STe2
!
LMU2S
!
STQO
!
5*&,NC]81@=7=1Z/18189
X
0/0A[!&()&5")*)+,,-).&5F8C/^ =ZF:/WA78
"
\810:=1
#*
4
+
,6/9-,+"&*+
J
,%/
!
!""(
!
$=$J
"
##
#$
#(*##($%,
*
#!
+
!
PQNRD
!
VPNU2e
!
LMU24
!
5*&,75;+(+ZY810@Y/
>
ZA7=0=
B
;=1@/1
?
/1!&()&")*)+,,-).&ZA/C=1Z/[
X?
=1=0/1]A9]=C/1Z:=K/A0
X
1)
Z:=0/0A[8@Z/]=/1
?
Y=C/=1Z0
*
4
+
/05;+"):<
!
"##
!
FE
"
*
#$
!-!!-(,
*
#%
+
!
N`U\6FGTJLS
!
O6O6STU34,MFEN%
!
8
.
807A18Z=)Y=0
>
A10/]=ZY810@Y/
>
Z/A189Y=
?
;98ZAYA[
>
981Z
>
Y/78Y
X
81C0=@A1C8Y
X
7=Z8KA9/07
*
4
+
,!:)5;:5
!
"""
!
=EF
"
$*--
#$
!($!(-,
*
#*
+
!
3MU2R R
"孔维维#!
PQN RD
"化文平#!
RNU2VPVP
"王?之#
,E9A1=81C=^
>
Y=00/A1;1C=Y0ZY=00A[!"@K#81C!"@K![YA7
!&()&")*)+,,-).&
*
4
+
,%:*&8+*/8+,5&/?#::)F5;*/!);/
"西北植物学报#!
"#$
!
@I
"
!
#$
!!-!%!
"
/1E:/1=0=
#
,
*
#$
+
!
N`U\6LMOD6S64
!
\6DF6J6F3
!
DNJJeUG
!
5*&,N@@;Y8Z=1AY789/W8Z/A1A[Y=89)Z/7=
B
;81Z/Z8Z/]=FJ)DEFC8Z8K
X?
=A7=ZY/@
8]=Y8
?
/1
?
A[7;9Z/
>
9=/1Z=Y189@A1ZYA9
?
=1=0
*
4
+
,05;+"58)+/
!
""!
!
@
"
-
#$
F6L6NFEP""%*,
*
#+
+
!
H6FFMENS)SMHMO
!
OMSTUNN,6Z:
X
9=1=Y=0
>
A10=[8@ZAY#7=C/8Z=0%,&B)F+
>
<)?
;02C<&,)C"+I
E
>
+,C"
*
4
+
,G+/@&;*G):,/K;*/
!
""*
!
$G
"
-
#$
-+%--",
*
#-
+
!
VPNMe_
!
_QVL
!
EP6UO
!
5*&,N189
X
0/0A[0
>
=@/[/@K/1C/1
?
81C0;K@=9;98Y9A@89/W8Z/A1A[<:=8Z
*
4
+
,%
J
,):C*C,&!:)5;:5<);9-)?
;&
!
""&
!
A$
"
+
#$
#$-$#$&!,
*
#&
+
!
LN3QONe
!
STQ5
!
\QHMQV6J42
!
5*&,\UN)K/1C/1
?
0
>
=@/[/@/Z
X
A[Z:=6FG
%
ND!CA78/1A[%,&B)F+
>
<)<\F6H0
!
ZY810@Y/
>
Z/A1[8@)
ZAY0/1]A9]=C/1C=:
X
CY8Z/A1)81C@A9C)/1C;@/K9=
?
=1==^
>
Y=00/A1
*
4
+
,8)+:-5"/8)+
>
-
E
!
""!
!
=FH
"
%
#$
((&#""(,
*
#(
+
!
UN3NUMJ
!
LQVQ3T3
!
GQ4TOQFNJ
!
5*&,2=1A7=)X
0/0A[Z:=1$2
?
=1=[87/9
X
/1%,&B)F+
>
<)<81CY/@=
*
4
+
,@&;*@-
E
<)?
+/
!
""+
!
$AH
"
!
#$
*##*%!,
*
!"
+
!
EP6U2OE
!
STNMDO
!
3QMR R
!
5*&,J:=%,&B)F+
>
<)<6JPeS6U6F6LDMUL6GNEJMF#Y=
?
;98Z=08K/AZ/@0ZY=00)Y=0
>
A10/]=
?
=1==^
>
Y=00/A1K
X
K/1C/1
?
ZAC/[[=Y=1Z:)<)8@Z/1
?
=9=7=1Z0/1Y=0
>
A10=ZAC/[[=Y=1Z0ZY=000/
?
1890
*
4
+
,@&;*@-
E
<)+,
!
"#%
!
$J=
"
%
#$
#$++
#$&!,
*
!#
+
!
DFgO
!
NJNSSNP O
!
EPNODTMUN
!
5*&,J:=ND!
%
6FGCA78/1ZY810@Y/
>
Z/A1[8@ZAYMFN$(/1Z=
?
Y8Z=0
.
807A1/@8@/C81C=Z:
X
9=1=
0/
?
1890/1
>
981ZC=[=10=
*
4
+
,@&;*@-
E
<)+/
!
""&
!
$AG
"
%
#$
#%*-#%$-,
*
!!
+
!
SMF6UVMM
!
DT5Q6FNLF
!
LhUEP6V)L6FFNUM44
!
5*&,6JPeS6U6F6LDMUL6GNEJMF#/1Z=
?
Y8Z=00/
?
1890[YA7=Z:
X
9=1=
81C
.
807A18Z=
>
8Z:<8
X
0/1
>
981ZC=[=10=
*
4
+
,@&;*95
!
""%
!
$I
"
#
#$
#+$#-&,
*
!%
+
!
JPTFQ2UNUNLNOHNUJPNO3
!
\QFNTFN4L
!
LNFN` NUNUL
!
5*&,FA9=A[=Z:
X
9=1=Y=0
>
A10=ZY810@Y/
>
Z/A1[8@ZAY
"
6FG
#
81C
/Z0Y=
?
;98Z/A1/1Y=0
>
A10=ZA0ZY=00=1@A;1Z=Y=CK
X>
981Z0
*
4
+
,@&;*G+/8)+/$5
>
/
!
"#$
!
@@
"
%
#$
%*-%$-,
*
!*
+
!
PQe
!
VPNMS
!
EPMU23
!
5*&,M]=Y=^
>
Y=00/A1A[#<1$2#
!
81A]=9Y/@=1$2
?
=1=
!
;
>
)Y=
?
;98Z=0=Z:
X
9=1=)Y=0
>
A10/]=
?
=1=0=^
>
Y=00/A1
K=0/C=08[[=@Z0
?
YA>
7=1Z/1%,&B)F+
>
<)<
*
4
+
,6/@&;*@-
E
<)+,
!
""&
!
$JI
"
#+
#$
#-#-#-!$,
*
!$
+
!
RNU2P
!
PQNU2V
!
EP6U5
!
5*&,6@ZA
>
/@A]=Y=^
>
Y=00/A1A[ZA78ZA61$2%/1ZAK8@@A8@Z/]8Z=0CA<10ZY=87
?
=1==^
>
Y=00/A181C
=1:81@=0089ZZA9=Y81@=
*
4
+
,@&;*G+/8)+/
!
""*
!
II
"
!
#$
#&%#(!,
!编辑"宋亚珍#
!!
"(#!
西
!
北
!
植
!
物
!
学
!
报
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
%$
卷