全 文 ：书犇犗犐：１０．１１６８６／犮狔狓犫２０１５１８８ 犺狋狋狆：／／犮狔狓犫．犾狕狌．犲犱狌．犮狀
孙亚男，李茜，李以康，林丽，杜岩功，曹广民．氮、磷养分添加对高寒草甸土壤酶活性的影响．草业学报，２０１６，２５（２）：１８２６．
ＳＵＮＹａＮａｎ，ＬＩＱｉａｎ，ＬＩＹｉＫａｎｇ，ＬＩＮＬｉ，ＤＵＹａｎＧｏｎｇ，ＣＡＯＧｕａｎｇＭｉｎ．Ｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｎｉｔｒｏｇｅｎａｎｄｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓｏｎｓｏｉｌｅｎｚｙｍｅ
ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｉｎＱｉｎｇｈａｉ－Ｔｉｂｅｔａｎａｌｐｉｎｅｍｅａｄｏｗｓ．ＡｃｔａＰｒａｔａｃｕｌｔｕｒａｅＳｉｎｉｃａ，２０１６，２５（２）：１８２６．
氮、磷养分添加对高寒草甸土壤酶活性的影响
孙亚男１，２，李茜１，李以康１，２，林丽１，杜岩功１，曹广民１
（１．中国科学院西北高原生物研究所，青海 西宁８１０００８；２．中国科学院大学，北京１０００４９）
摘要：本试验以典型的青藏高原高寒矮嵩草草甸（犓狅犫狉犲狊犻犪犺狌犿犻犾犻狊ｍｅａｄｏｗ）为研究平台，以表征土壤碳、氮、磷、硫
养分循环的６种土壤酶为研究对象，研究土壤酶以及土壤速效养分在４年氮、磷养分添加的累积效应下的变化规
律，分析和评价氮、磷养分添加对土壤养分循环方面的影响。试验结果为：氮、磷养分添加改变了土壤中速效养分
的含量；氮添加与０～１０ｃｍ土层中的碱性磷酸酶活性有正效应，磷添加抑制了０～１０ｃｍ土层中的碱性磷酸酶活
性；氮、磷养分添加均抑制了０～１０ｃｍ土层中的脲酶活性；氮添加抑制了２个土层中的纤维素酶活性；芳基硫酸酯
酶活性和蔗糖酶活性没有表现出显著差异性；１０～２０ｃｍ土层中的几丁质酶活性在氮、磷养分添加处理下均增强，
其中磷添加对几丁质酶活性的增幅最显著。结果表明：外源添加的氮在调控磷的矿化方面有促进作用，磷的添加
对氮素的释放也有一定的作用；青藏高原高寒草甸受磷限制的程度可能更大。
关键词：青藏高原高寒草甸；土壤酶活性；速效磷；碱解氮；养分循环；磷限制
犜犺犲犲犳犳犲犮狋狅犳狀犻狋狉狅犵犲狀犪狀犱狆犺狅狊狆犺狅狉狌狊犪狆狆犾犻犮犪狋犻狅狀狊狅狀狊狅犻犾犲狀狕狔犿犲犪犮狋犻狏犻狋犻犲狊犻狀犙犻狀犵
犺犪犻－犜犻犫犲狋犪狀犪犾狆犻狀犲犿犲犪犱狅狑狊
ＳＵＮＹａＮａｎ１，２，ＬＩＱｉａｎ１，ＬＩＹｉＫａｎｇ１，２，ＬＩＮＬｉ１，ＤＵＹａｎＧｏｎｇ１，ＣＡＯＧｕａｎｇＭｉｎ１
１．犖狅狉狋犺狑犲狊狋犐狀狊狋犻狋狌狋犲狅犳犘犾犪狋犲犪狌犅犻狅犾狅犵狔，犆犺犻狀犲狊犲犃犮犪犱犲犿狔狅犳犛犮犻犲狀犮犲狊，犡犻狀犻狀犵８１０００８，犆犺犻狀犪；２．犝狀犻狏犲狉狊犻狋狔狅犳犆犺犻狀犲狊犲犃犮犪犱犲
犿狔狅犳犛犮犻犲狀犮犲狊，犅犲犻犼犻狀犵１０００４９，犆犺犻狀犪
犃犫狊狋狉犪犮狋：Ｔｈｉｓｓｔｕｄｙｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｓｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｎｉｔｒｏｇｅｎａｎｄｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓｏｎｓｏｉｌｎｕｔｒｉｅｎｔｃｙｃｌｅｓ，ｆｏ
ｃｕｓｉｎｇｏｎｓｏｉｌｅｎｚｙｍｅａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｉｎｐａｒｔｉｃｕｌａｒ．Ｅｎｚｙｍｅａｃｔｉｖｉｔｉｅｓａｎｄａｖａｉｌａｂｌｅｎｕｔｒｉｅｎｔｓｈａｖｅｂｅｅｎｍｅａｓｕｒｅｄｉｎ
ｐｌｏｔｓｏｆＱｉｎｇｈａｉ－Ｔｉｂｅｔａｎａｌｐｉｎｅｍｅａｄｏｗｗｉｔｈ４ｙｅａｒｓｏｆＮａｎｄＰｆｅｒｔｉｌｉｚｅｒａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ．Ｔｈｅｓｔｕｄｙｆｏｃｕｓｅｓｏｎ
ｓｉｘｓｏｉｌｅｎｚｙｍｅａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｔｈａｔｒｅｐｒｅｓｅｎｔｓｅｖｅｒａｌｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｎｕｔｒｉｅｎｔｃｙｃｌｅｓ（Ｃ，Ｎ，Ｐ，Ｓ）．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄ
ｔｈａｔｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆａｖａｉｌａｂｌｅｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓａｎｄａｌｋａｌｉｎｅｎｉｔｒｏｇｅｎｉｎｃｒｅａｓｅｄｕｎｄｅｒｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ．Ｔｈｅ
ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｆａｌｋａｌｉｎｅｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ，ｕｒｅａｓｅ，ｃｈｉｔｉｎａｓｅａｎｄｃｅｌｕｌａｓｅｖａｒｙｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｕｎｄｅｒｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｔｒｅａｔ
ｍｅｎｔｓ，ｗｈｉｌｅｔｈｅｒｅｉｓｎｏｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｉｎｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｆａｒｙｌｓｕｌｆａｔａｓｅａｎｄｓｕｃｒａｓｅ．Ｉｎｓｏｉｌｓａｔａｄｅｐｔｈｏｆ
０－１０ｃｍ，ｎｉｔｒｏｇｅｎａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓｈａｖｅａｐｏｓｉｔｉｖｅｅｆｆｅｃｔａｎｄｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓａｎｅｇａｔｉｖｅｅｆｆｅｃｔｏｎａｌｋａｌｉｎｅ
ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙ．Ｕｒｅａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙｉｓｒｅｐｒｅｓｓｅｄｉｎ０－１０ｃｍｓｏｉｌｓｕｎｄｅｒｂｏｔｈｎｉｔｒｏｇｅｎａｎｄｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓｔｒｅａｔ
ｍｅｎｔｓ．Ｉｎｓｏｉｌｓａｔａｄｅｐｔｈｏｆ１０－２０ｃｍ，ｃｈｉｔｉｎａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙｉｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｐｒｏｍｏｔｅｄｂｙｎｉｔｒｏｇｅｎａｎｄｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓ
ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ａｎｄｅｓｐｅｃｉａｌｙｂｙｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓ．Ｃｅｌｕｌａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙａｔｂｏｔｈｓｏｉｌｄｅｐｔｈｓｉｓｒｅｐｒｅｓｓｅｄｂｙｎｉｔｒｏｇｅｎｔｒｅａｔ
ｍｅｎｔ．ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｉｎｄｉｃａｔｅｔｈａｔｎｉｔｒｏｇｅｎｓｕｐｐｌｙｅｆｆｅｃｔｓｔｈｅｍｉｎｅｒａｌｉｚａｔｉｏｎｏｆＰａｎｄｔｈａｔｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓｓｕｐｐｌｙｃａｎ
１８－２６
２０１６年２月
草 业 学 报
ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ
第２５卷 第２期
Ｖｏｌ．２５，Ｎｏ．２
收稿日期：２０１５０４１３；改回日期：２０１５０６２９
基金项目：国家９７３自然科学基金项目（２０１４ＣＢ９５４００２）和青海省科技促进新农村计划项目（２０１３Ｎ５４０）资助。
作者简介：孙亚男（１９８９），女，甘肃武威人，在读硕士。Ｅｍａｉｌ：ｌｕｃｋｙｙａｚｉ＠１６３．ｃｏｍ
通信作者Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ．Ｅｍａｉｌ：ｃａｏｇｍ＠ｎｗｉｐｂ．ａｃ．ｃｎ
ｐｒｏｍｏｔｅｔｈｅｄｅｃｒｅａｓｅｏｆＮ．Ｔｈｅｒｅｌａｔｉｖｅｄｅｇｒｅｅｏｆｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓｌｉｍｉｔａｔｉｏｎｍａｙｂｅｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｎｉｔｒｏｇｅｎｌｉｍｉｔａｔｉｏｎ
ｉｎＱｉｎｇｈａｉ－Ｔｉｂｅｔａｎａｌｐｉｎｅｍｅａｄｏｗｓ．
犓犲狔狑狅狉犱狊：Ｑｉｎｇｈａｉ－ＴｉｂｅｔａｎＡｌｐｉｎｅｍｅａｄｏｗ；ｓｏｉｌｅｎｚｙｍｅａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ；ａｖａｉｌａｂｌｅｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓ；ａｌｋａｌｉｎｅｎｉｔｒｏｇｅｎ；
ｎｕｔｒｉｅｎｔｃｙｃｌｅ；ｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓｌｉｍｉｔａｔｉｏｎ
土壤酶是积累于土壤中，在胞外发生作用的酶的总称，包括存在于活细胞内的胞内酶和存在于土壤溶液中或
者吸附在土壤颗粒表面的胞外酶。其主要来源于土壤微生物的活动、植物根系分泌物和动、植物残体分解过程中
释放的酶［１２］。土壤酶在催化对生命过程很重要的反应网、分解有机物、养分循环、有机质的形成、土壤结构的塑
造等方面有着重要的作用［３］。在区域或者微环境尺度上测得土壤酶活性可以反映土壤对环境变化的迅速响应，
也可以用于生态系统生物地球化学循环模型［４］。土壤酶被认为是由耕作、施肥等土壤管理方式导致的土壤特性
发生变化的早期很重要的指示因子［５６］，可以作为指示土壤生态胁迫以及土壤生态修复的敏感的重要指标［７］。土
壤中几乎所有的生物化学反应都是由土壤酶驱动的，碳、氮、磷、硫等养分的周转中均有各种不同功能的酶进行调
控［８９］。测定方法成熟的酶包括脱氢酶、葡萄糖苷酶、脲酶、酰胺酶、磷酸酶、芳基硫酸酯酶、纤维素酶等［１，１０］。
在不同生态系统中进行养分添加试验，以土壤酶活性为研究内容的研究，在农田生态系统较多、研究内容也
较全面。王俊华等［１１］研究在区域尺度上以不同种类的养分（氮、磷、钾、有机肥、微肥等）进行添加；Ｇｕｏ等［１２］以
无机氮（铵、硝酸盐）、有机氮（尿素、氨基酸、脂肪酸等）等不同形式的氮肥添加；万忠梅等［１３］，Ｅｄｗａｒｄｓ等［１４］，曾艳
等［１５］的研究以设置不同浓度梯度的养分添加等内容来研究土壤酶活性的变化规律。近些年来，在森林和草原生
态系统中考察养分添加对土壤酶活性的影响，研究较多的是不同水平的氮沉降［１６１７］、氮和水添加试验［１８］、模拟增
温和养分添加试验［１９］等对土壤酶活性的影响。在青藏高原上用酶化学的手段测定土壤酶活性，研究土壤养分循
环，还需要进行大量的研究工作。
青藏高原高寒草甸土壤中碳、氮、磷总量丰富，但是由于该生态系统养分的有效性受到低温的限制，其中植物
可利用的氮的释放对温度尤其敏感［２０２１］。作为生态系统普遍受限制的养分，氮、磷的有效性会限制初级生产力和
分解等生态学过程，研究二者之间的相互关系很有必要，氮磷限制在全球尺度上仍然缺乏深入的研究［２２］。土壤
酶是受许多相互作用的因子调控的，土壤酶活性直接反映着土壤中养分的供需关系［２３］，因此，土壤酶是用来考察
由环境改变导致土壤生物化学循环改变的一个很好的工具。本试验就是在氮、磷养分添加背景下，着眼于地下，
选择６种典型的土壤酶（碱性磷酸酶、脲酶、几丁质酶、芳基硫酸酯酶、纤维素酶、蔗糖酶）为研究对象，通过探讨养
分添加对土壤酶的影响，分析土壤中养分的变化规律，为青藏高原高寒草甸土壤受氮、磷限制程度的问题提供新
的证据，同时为科学合理地管理高寒草甸提供理论依据。
１ 材料与方法
１．１ 研究区概况
本试验是在青海海北高寒草地生态系统国家野外科学观测研究站（简称海北站）进行的。海北站的地理范围
是：纬度３７°２９′－３７°４５′Ｎ，经度１０１°１２′－１０１°２３′Ｅ。山地海拔约４０００ｍ，谷区海拔约２９００～３６００ｍ。海北站
的气候是由西伯利亚的东南季风和高气压带主导的，属于大陆季风气候，其冬季漫长而寒冷，夏季短暂而凉爽。
全年平均气温是－１．１１℃（１９８１－２０１３年），冬季高原地区的平均温度可以下降至－１５～－２０℃，夏季的最暖月
（７月）在山谷的平均温度是１４～２２℃，高原的平均温度是４～１０℃，其中极端高温达到２７．６℃，极端低温有
－３７．１℃。平均年降水范围在５１６．８ｍｍ（１９８１－２０１３年），其中８０％的降水是来自夏季短暂的生长季节（５－９
月）。平均年日照时间为２４６２．７ｈ，占到总的有效辐射的６０．１％。海北站区的土壤类型主要是由高寒灌丛土、高
寒草甸土、沼泽土等组成，主要特点是氮、磷、钾、有机质总量丰富，土壤发育年轻、土层薄、土表覆盖有较厚的草毡
层。海北高寒草地的土壤中氮、磷主要存在于矿化过程弱的有机质阶段，其有效成分往往很低，无法满足地上植
物的生长所需［２４］。该试验研究于２０１１年５月选择位于海北站东北处大约２ｋｍ的一片地势较平整的草场作为
９１第２５卷第２期 草业学报２０１６年
养分添加试验样地。该试验样地区的草地类型属于耐寒中生植物高寒矮生嵩草（犓狅犫狉犲狊犻犪犺狌犿犻犾犻狊）草甸。
１．２ 试验设计
该试验设计类型属于完全随机区组试验设计，共４个处理，分别为：氮添加（Ｎ）、磷添加（Ｐ）、氮和磷混合添加
（ＮＰ）、对照（ＣＫ）。４个处理随机安排在６个小区内，即每个处理６次重复，共计２４个小样方，每个样方面积是６
ｍ×６ｍ，各样方之间设置保护行。其中，Ｎ肥以尿素形式、１００ｋｇ／（ｈｍ２·年）的量进行添加；Ｐ肥以重过磷酸钙
的形式、５０ｋｇ／（ｈｍ２·年）的量进行添加；ＮＰ是以上述Ｎ肥和Ｐ肥混合添加；ＣＫ为无养分添加。施肥时间选择
在植物生长季的中期，雨天或晴天的傍晚进行。将肥料用手均匀地撒在对应的各个小区内，雨水或次日形成的露
水使得肥料迅速溶解进入土壤，为保证施肥的均匀性，每个小区撒２次肥。实验期间，养分添加日期是从２０１１－
２０１４年，每一年的６月１日、７月１日和８月１日进行。
１．３ 样品采集
土壤样品采集工作于２０１４年８月１２日进行，取０～１０ｃｍ和１０～２０ｃｍ两个层次的土壤。各养分添加处理
小区随机选择４个点取样，混合制样。将取得的土壤样品分装入已编号的自封袋中，密封好置于盛有冰块的塑料
泡沫箱中，带回实验室。土样分两种处理方式：一种是鲜土，过２ｍｍ筛，置于４℃冰箱中，人工除去石块、草根等
杂物，用于尽快测定含水量和酶活性，另一种是风干土，用来测定土壤速效磷和碱解氮含量。
１．４ 土壤酶活性的测定方法
该试验中土壤酶活性的测定原理均是向标准定量化的土壤样品中加入已知浓度的特定的基质，培养一段时
间后，测定终产物的生成量［２５］。土壤碱性磷酸酶活性的测定采用磷酸苯二钠比色法［１］，以磷酸苯二钠为基质，在
磷酸酶作用下，恒温箱中３７℃下培养２ｈ，测定生成苯酚的量；土壤脲酶的测定采用靛酚蓝比色法［１］，以尿素为基
质，恒温箱中３７℃下培养２４ｈ，测定ＮＨ４＋与次氯酸盐和苯酚反应，生成水溶性靛酚蓝的含量；土壤纤维素酶的
测定采用３，５二硝基水杨酸比色法［１］，以羧甲基纤维素溶液为基质，恒温箱中３７℃下培养７２ｈ，测定生成的还原
糖；土壤芳基硫酸酯酶的测定采用对硝基酚硫酸盐比色法［２６］，以对硝基酚硫酸钾为基质，恒温箱中３７℃下培养２
ｈ，测定水解产生的对硝基酚含量；土壤几丁质酶的测定采用对二甲氨基苯甲醛法（ＤＭＡＢ）比色法［２７２８］测定，以
几丁质为基质，恒温箱中３７℃下培养１８ｈ，测定几丁质水解产生的Ｎ乙酰葡萄糖胺的含量，用来表示几丁质酶
活性；土壤蔗糖酶的测定采用３，５二硝基水杨酸比色法［１］，以蔗糖为基质，恒温箱中３７℃下培养２４ｈ，测定还原
糖的含量。
１．５ 土壤速效养分的测定
风干土样用来测定速效磷和碱解氮的含量，速效磷的测定方法是采用０．５ｍｏｌ／ＬＮａＨＣＯ３ 浸提、钼锑抗比
色法测定［２８］；碱解氮的测定方法是用扩散皿进行碱解扩散、Ｈ２ＳＯ４ 滴定法［２９］测定其含量。
１．６ 统计分析方法
该研究中随机区组试验设计的统计分析方法视为两因素方差分析（ｔｗｏｗａｙＡＮＯＶＡ），用Ｒ３．１．３软件对
所测定的数据依次做正态性检验、方差齐性检验以及在犘≤０．０５水平下，对不同施肥处理下的各项酶活性等指
标进行均值的ＴｕｋｅｙＨＳＤ多重比较差异性分析，速效养分和土壤酶活性之间的相关关系采用的是Ｐｅａｒｓｏｎ相关
性分析。绘图工具使用的是Ｏｒｉｇｉｎ８．５。
２ 结果与分析
２．１ 氮、磷养分添加对土壤酶活性的影响
２．１．１ 土壤碱性磷酸酶活性 土壤中的磷酸酶是用来描述磷酸酯类和酸酐类水解作用的一类酶的总称，主要
表征的是土壤中磷的状况［１］。青藏高原高寒草甸的土壤呈碱性，该试验测定的是碱性磷酸酶活性。如图１所示，
外源增加Ｎ对０～１０ｃｍ土层中的碱性磷酸酶的发生有正效应。单施Ｎ肥有增强０～１０ｃｍ土层中碱性磷酸酶
活性的趋势，与ＣＫ相比，增加幅度为１３．１９％，但是差异不显著。磷的添加对０～１０ｃｍ土层中的碱性磷酸酶活
性表现出了明显的抑制作用。ＮＰ混合施用和单施Ｐ肥后，０～１０ｃｍ土层中的碱性磷酸酶活性显著降低，与ＣＫ
相比，碱性磷酸酶活性的降低幅度分别达到６．９４％和４０．００％。土壤中的碱性磷酸酶活性呈现出随土层深度增
０２ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１６） Ｖｏｌ．２５，Ｎｏ．２
加而降低的规律，０～１０ｃｍ土层的碱性磷酸酶活性均高于１０～２０ｃｍ土层中的酶活性。各个养分添加处理下的
碱性磷酸酶含量在１０～２０ｃｍ土层中没有表现出显著差异性。
２．１．２ 土壤脲酶活性 土壤中脲酶的酶促反应产生的氨是植物生长所需的重要氮源之一。脲酶的专性较强，
它可以酶促尿素水解生成氨、二氧化碳和水。因此，在尿素的水解与脲酶密切相关［１］。如图２，０～１０ｃｍ土层中
的脲酶活性在氮、磷养分添加处理下均受到抑制，其中单施Ｐ和ＮＰ混合施用的抑制作用最显著。０～１０ｃｍ土
层中，Ｎ、Ｐ、ＮＰ与ＣＫ相比，降幅分别为５７．０２％、７９．０５％和６９．７３％。土层中的脲酶活性呈现出随土层深度增
加而降低的规律。１０～２０ｃｍ土层中的脲酶活性在氮、磷养分添加处理下没有表现出显著性差异。
图１ 不同养分添加处理后碱性磷酸酶的活性
犉犻犵．１ 犜犺犲狆犺狅狊狆犺犪狋犪狊犲犪犮狋犻狏犻狋犻犲狊犻狀狊狅犻犾狊狌狀犱犲狉犖犪狀犱犘犪犱犱犻狋犻狅狀
图２ 不同养分添加处理后脲酶的活性
犉犻犵．２ 犜犺犲狌狉犲犪狊犲犪犮狋犻狏犻狋犻犲狊犻狀狊狅犻犾狊狌狀犱犲狉犖犪狀犱犘犪犱犱犻狋犻狅狀
２．１．３ 土壤纤维素酶的活性 纤维素是植物残体进入土壤的碳水化合物的重要组分之一。土壤纤维素酶是
碳素循环过程中一个很重要的酶［３０］。该试验的结果如图３，０～１０ｃｍ土层中，单施Ｎ对纤维素酶表现出了明显
的抑制作用。单施Ｎ和ＮＰ混合与ＣＫ相比，土壤纤维素酶活性的降低幅度分别为４６．５３％和２９．８５％。单施Ｐ
肥对０～１０ｃｍ土层中的纤维素酶活性有一定的积极作用，但是效果不显著。土壤中的纤维素酶活性呈现出随土
层深度增加而降低的规律，０～１０ｃｍ土层的纤维素酶活性均高于１０～２０ｃｍ土层中的酶活性。在１０～２０ｃｍ土
层中，单施Ｎ肥的累积效应使得土壤纤维素酶的活性明显降低，与ＣＫ相比，降幅达到了６４．９２％。１０～２０ｃｍ
土层中的土壤纤维素酶活性在单施Ｎ肥与ＮＰ混合添加之间差异显著，ＮＰ混合添加对纤维素酶活性有一定的
促进作用，但是差异不显著，可能是较深层土壤受氮、磷养分限制的程度较大。
２．１．４ 土壤芳基硫酸酯酶的活性 土壤中的芳基硫酸酯酶在硫的循环和周转中有着重要的作用，可以在早期
指示土壤中硫化物的缺乏［２５］。试验结果如图４所示，土壤中的芳基硫酸酯酶活性随土层深度的增加而降低。在
０～１０ｃｍ和１０～２０ｃｍ土层中，芳基硫酸酯酶活性在各个养分添加处理之间都没有表现出显著性差异（犘＞
０．０５）。氮、磷养分添加在该试验中没有影响到土壤中硫的养分状况。
图３ 不同养分添加处理后纤维素酶的活性
犉犻犵．３ 犜犺犲犮犲犾狌犾犪狊犲犪犮狋犻狏犻狋犻犲狊犻狀狊狅犻犾狊狌狀犱犲狉犖犪狀犱犘犪犱犱犻狋犻狅狀
图４ 不同养分添加处理后芳基硫酸酯酶的活性
犉犻犵．４ 犜犺犲犪狉狔犾狊狌犾犳犪狋犪狊犲犪犮狋犻狏犻狋犻犲狊犻狀狊狅犻犾狊狌狀犱犲狉犖犪狀犱犘犪犱犱犻狋犻狅狀
１２第２５卷第２期 草业学报２０１６年
２．１．５ 土壤几丁质酶的活性 几丁质酶是几丁质分解主要途径中的至关重要的一类酶。几丁质酶水解几丁
质的糖苷键，释放包括有机氮在内的更小的氮，最终被矿化为无机氮。几丁质代表了土壤中有机氮的一种重要形
式［３１］。如图５，该试验中测得的几丁质酶活性在１０～２０ｃｍ土层中均高于０～１０ｃｍ土层中的几丁质酶活性。
氮、磷养分添加不同程度地增强了几丁质酶活性，但是０～１０ｃｍ土层中几丁质酶活性在各个养分添加处理之间
没有表现出显著性差异。０～１０ｃｍ土层中，Ｎ与ＣＫ相比，几丁质酶活性增幅达到９５．７３％（犘＝０．０６９）。１０～
２０ｃｍ土层中，氮、磷养分添加均促进了几丁质酶活性，其中，Ｐ的添加与ＣＫ相比，差异极显著（犘＜０．０１），几丁
质酶的增加幅度为８４．１１％。说明磷的添加更有利于高寒草甸有机氮的释放。
２．１．６ 土壤蔗糖酶活性 土壤蔗糖酶对增加土壤中的易溶性营养物起着重要作用。蔗糖酶活性不仅能够表
征土壤的生物学活性强度，也可以作为评价土壤质量的一个很好的指标［１２］。如图６，蔗糖酶活性随土层深度的
增加而降低。０～１０ｃｍ和１０～２０ｃｍ土层中的蔗糖酶活性在各个养分添加处理之间没有表现出显著差异性。
图５ 不同养分添加处理后几丁质酶的活性
犉犻犵．５ 犜犺犲犮犺犻狋犻狀犪狊犲犪犮狋犻狏犻狋犻犲狊犻狀狊狅犻犾狊狌狀犱犲狉犖犪狀犱犘犪犱犱犻狋犻狅狀
图６ 不同养分添加处理后蔗糖酶的活性
犉犻犵．６ 犜犺犲狊狌犮狉犪狊犲犪犮狋犻狏犻狋犻犲狊犻狀狊狅犻犾狊狌狀犱犲狉犖犪狀犱犘犪犱犱犻狋犻狅狀
２．２ 氮、磷养分添加背景下土壤速效养分的变化规律
２．２．１ 土壤速效磷含量的变化规律 土壤中的速效磷是植物可以吸收利用的磷，来自有机磷的矿化和无机磷
的释放［３２］。对速效磷含量的测定结果如表１所示，０～１０ｃｍ土层中的速效磷含量均高于１０～２０ｃｍ土层中的速
效磷含量。２个土层经养分添加处理后，ＮＰ和Ｐ添加的样方内速效磷含量显著提高，ＮＰ和Ｐ之间的差异极显
著（犘＜０．０１）。说明氮、磷养分添加显著增加了高寒草甸土壤速效磷的含量，氮、磷混合添加对速效磷的促进作
用优于单独添加磷的作用。
表１ 不同养分添加处理下速效磷和碱解氮（平均值±标准误）
犜犪犫犾犲１ 犃狏犪犻犾犪犫犾犲狆犺狅狊狆犺狅狉狌狊犪狀犱犪狏犪犻犾犪犫犾犲狀犻狋狉狅犵犲狀犮狅狀狋犲狀狋狊狌狀犱犲狉犱犻犳犳犲狉犲狀狋狋狉犲犪狋犿犲狀狋狊（犿犲犪狀±犛犈）
速效养分
Ａｖａｉｌａｂｌｅｎｕｔｒｉｅｎｔ
土层深度
Ｓｏｉｌｄｅｐｔｈ（ｃｍ）
氮磷养分添加处理Ｎ，Ｐｎｕｔｒｉｅｎｔａｄｄｉｔｉｏｎｔｒｅａｔｍｅｎｔ
Ｎ Ｐ ＮＰ ＣＫ
速效磷ＡｖａｉｌａｂｌｅＰ（ｍｇ／ｋｇ） ０～１０ ６．９５±０．３０ｃ ３６．３５±２．９６ｂ ４７．５７±１．８１ａ ６．２０±０．３７ｃ
１０～２０ ３．４８±０．３８ｂ ５．８９±０．６９ａ ７．７０±０．７９ａ ３．４７±０．３８ｂ
碱解氮ＡｌｋａｌｉｎｅＮ（ｍｇ／ｋｇ） ０～１０ ６２．７０±１．７６ａ ５３．７５±１．０４ｂ ５６．１７±１．５９ｂ ５７．５８±１．２８ａｂ
１０～２０ ４３．５４±１．１１ａ ４２．６２±１．３４ａ ４１．２８±０．９２ａ ３５．９１±１．６７ｂ
注：小写字母表示处理间的差异显著性（犘＜０．０５）。
Ｎｏｔｅｓ：Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｌｏｗｅｒｃａｓｅｌｅｔｔｅｒｓｉｎｄｉｃａｔｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅａｍｏｎｇｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ（犘＜０．０５）．
２．２．２ 土壤碱解氮的变化规律 土壤中碱解氮的含量可以较好地反映近期土壤氮素的养分状况、氮素释放的
速率，碱解氮是植物可以直接利用的有效态氮［３３］。试验结果见表１所示，０～１０ｃｍ和１０～２０ｃｍ两个土层中，单
施Ｎ肥的样方内碱解氮含量最高，但是０～１０ｃｍ和１０～２０ｃｍ土层中的碱解氮含量在各个施肥处理之间的差
２２ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１６） Ｖｏｌ．２５，Ｎｏ．２
异性不同。０～１０ｃｍ土层中，单独添加Ｎ对碱解氮的促进效应最明显，单施Ｐ和ＮＰ混合添加对碱解氮含量没
有表现出促进作用。１０～２０ｃｍ土层中，氮、磷养分添加处理与ＣＫ相比，均显著提高了碱解氮的含量。
２．３ 土壤速效养分与土壤酶活性的相关关系
如表２，土壤中的速效磷含量和碱性磷酸酶活性在０～１０ｃｍ土层中呈现出一定的负相关关系（犚２＝－０．５１，
犘＜０．０５）。０～１０ｃｍ土层中的速效磷含量和脲酶活性也呈显著负相关（犚２＝－０．６１，犘＜０．０５）。在１０～２０ｃｍ
土层中，速效磷含量和芳基硫酸酯酶活性呈极显著正相关（犚２＝０．６９，犘＜０．０１）。０～１０ｃｍ和１０～２０ｃｍ土层
中的碱解氮含量和６种土壤酶之间的相关关系均不显著。从总体上看，磷的添加对土壤酶活性的影响较大。
表２ 土壤速效养分与土壤酶活性的相关关系
犜犪犫犾犲２ 犜犺犲狉犲犾犪狋犻狅狀狊犺犻狆狅犳狊狅犻犾犪狏犪犻犾犪犫犾犲狀狌狋狉犻犲狀狋狊犪狀犱狊狅犻犾犲狀狕狔犿犲犪犮狋犻狏犻狋犻犲狊
分析项目
Ｉｔｅｍｓ
土层深度
Ｓｏｉｌｄｅｐｔｈ（ｃｍ）
速效磷
ＡｖａｉｌａｂｌｅＰ
碱解氮
ＡｌｋａｌｉｎｅＮ
碱性磷酸酶
Ａｌｋａｌｉｎｅｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ
脲酶
Ｕｒｅａｓｅ
纤维素酶
Ｃｅｌｕｌａｓｅ
几丁质酶
Ｃｈｉｔｉｎａｓｅ
芳基硫酸酯酶
Ａｒｙｌｓｕｌｆａｔａｓｅ
蔗糖酶
Ｓｕｃｒａｓｅ
速效磷ＡｖａｉｌａｂｌｅＰ ０～１０ １ －０．４１ －０．５１ －０．６１ ０．２１ ０．２２ －０．３９ －０．１２
１０～２０ １ ０．２９ ０．３０ －０．４１ ０．０５ ０．２９ ０．６９ ０．４８
碱解氮ＡｌｋａｌｉｎｅＮ ０～１０ －０．４１ １ ０．３１ ０．０７ －０．２４ ０．０６ ０．２３ ０．１５
１０～２０ ０．２９ １ －０．２４ ０．０３ －０．１１ ０．０８ －０．０２ －０．０６
注：表示犘＜０．０５，表示犘＜０．０１。
Ｎｏｔｅ：ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｔｈｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅｌｅｖｅｌｏｆ犘＜０．０５，ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｔｈｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅｌｅｖｅｌｏｆ犘＜０．０１．
３ 讨论与结论
养分添加可以改变胞外酶的潜在活性，土壤酶活性的改变对于土壤有机质降解和植物残体的分解过程又是
至关重要的［３４］。但是土壤受多种生态因子的影响［２１，３５］，具有极大的复杂性和不确定性。因此，在４年氮、磷养分
添加试验的累积效应下，养分添加与土壤酶活性有着较复杂的效应。
某种特定养分的供应不仅会影响与之相关的特定的酶来矿化同种养分，而且还会矿化其他养分，即一种养分
的供应在调控另一种养分的矿化方面发挥着一定的作用。试验表明，氮肥与０～１０ｃｍ土层中的碱性磷酸酶活性
之间有着正效应，该结果同 Ｍｏｏｒｈｅａｄ和Ｓｉｎｓａｂａｕｇｈ［３６］的研究结果一致，说明氮的供应对表层土壤中碱性磷酸
酶水解磷脂、释放有机磷、无机磷的矿化等过程有积极作用。磷肥与１０～２０ｃｍ土层中的几丁质酶活性之间也是
正效应，此结果与Ｏｌａｎｄｅｒ和 Ｖｉｔｏｕｓｅｋ［３１］的研究结果类似。氮、磷混合施用促进速效磷的释放，磷的添加促进了
１０～２０ｃｍ土层中碱解氮的释放。
一些研究指出，土壤酶活性和养分有效性之间存在着负反馈作用［２９，３７３８］，土壤酶活性高低是和生物对特定养
分的需求相联系的。该试验中，０～１０ｃｍ土层中的速效磷含量和碱性磷酸酶活性之间存在显著的负相关关系；
氮、磷添加对０～１０ｃｍ土层中的脲酶有抑制作用，其中，在０～１０ｃｍ土层中，速效磷含量和脲酶活性之间存在着
极显著的负相关关系；氮、磷添加对１０～２０ｃｍ土层中的几丁质酶有促进作用（Ｐ添加的增幅最显著）。
该试验中测得的芳基硫酸酯酶活性和蔗糖酶活性没有表现出一定的变化规律，其原因较为复杂。Ｊａｓｏｎ
等［３９］的研究证明了近十年的施氮肥试验，平均有７２ｇ／（ｍ２·年）的多余的碳被输入到施氮肥的区域。该试验中
添加的氮肥是尿素，其成分中有碳的存在，引入土壤的多余的碳可能会对蔗糖酶活性和纤维素酶活性有一定的影
响。该试验中，氮添加就对２个土层中的纤维素酶活性有明显的抑制作用。胡雷等［４０］的研究指出，蔗糖酶活性
是由一系列复杂的影响因子（土壤的有机质、氮、磷含量、微生物数量及土壤呼吸强度等因素）的影响。Ｏｌａｎｄｅｒ
和Ｖｉｔｏｕｓｅｋ［３１］的研究指出，土壤酶会被土壤中的有机质和土壤黏粒固定，在固定和降解过程中十分稳定，因此某
些养分循环变化可能被掩盖了。此外，也有可能是由于高寒草甸生态系统具有自我平衡的功能，适应了外源Ｎ、
Ｐ的输入［４１４２］。
土壤速效磷的含量在磷添加后显著增加，氮磷混合施用的促进作用在０～１０ｃｍ和１０～２０ｃｍ土层中都是最
３２第２５卷第２期 草业学报２０１６年
明显的。说明氮磷混合添加后，氮对速效磷的释放发挥着积极的作用。养分添加对０～１０ｃｍ土层中的土壤碱解
氮含量的增加没有显著的促进作用，但是对１０～２０ｃｍ土层中的碱解氮含量有显著的促进作用。说明了高寒草
甸土壤同时受到氮和磷的限制，尤其是较深土层同时受氮和磷限制的程度更大。
由６种土壤酶活性和土壤碱解氮、速效磷的变化规律，做出推测，土壤中的磷有可能是比氮更重要的养分限
制因子，青藏高原高寒草甸的土壤受磷的限制程度可能更高。这一结果与杨晓霞等［４２］在氮、磷养分添加处理下
对植物群落地上、地下、总生物量的测定做出的推测结果较一致。在下一步的研究中，对氮、磷的添加剂量将设置
浓度梯度，则反映的科学问题会更加严谨，更有助于为科学合理的管理青藏高原高寒草甸提供理论依据。
犚犲犳犲狉犲狀犮犲狊：
［１］ ＧｕａｎＳＹ．ＳｏｉｌＥｎｚｙｍｏｌｏｇｙａｎｄＲｅｓｅａｒｃｈＭｅｔｈｏｄ［Ｍ］．Ｂｅｉｊｉｎｇ：ＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＰｒｅｓｓ，１９８６：２７４３２３．
［２］ ＬｉｎＸＧ．ＰｒｉｎｃｉｐｌｅａｎｄＭｅｔｈｏｄｏｆＳｏｉｌＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙＲｅｓｅａｒｃｈ［Ｍ］．Ｂｅｉｊｉｎｇ：ＨｉｇｈｅｒＥｄｕｃａｔｉｏｎＰｒｅｓｓ，２０１０：２４３２６５．
［３］ ＤｉｃｋＲＰ．Ｓｏｉｌｅｎｚｙｍｅａｃｔｉｖｉｔｉｅｓａｓｉｎｔｅｇｒａｔｉｖｅｉｎｄｉｃａｔｏｒｓｏｆｓｏｉｌｈｅａｌｔｈ．Ｉｎ：ＰａｎｋｈｕｒｓｔＣＥ，ＤｏｕｂｅＢＭ，ＧｕｐｔａＶＶＳＲ．Ｂｉｏ
ｌｏｇｉｃａｌＩｎｄｉｃａｔｏｒｓｏｆＳｏｉｌＨｅａｌｔｈ［Ｍ］．Ｗｅｌｉｎｇｆｏｒｄ：ＣＡＢＩ，１９９７：１２１１５６．
［４］ ＭｃＬａｒｅｎＡＤ．Ｓｏｉｌａｓａｓｙｓｔｅｍｏｆｈｕｍｕｓａｎｄｃｌａｙｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄｅｎｚｙｍｅｓ．ＣｈｅｍｉｃａＳｃｒｉｐｔａ，１９７５，８（３）：９７９９．
［５］ ＳｉｎｓａｂａｕｇｈＲＬ，ＡｎｔｉｂｕｓＲＫ，ＬｉｎｋｉｎｓＡＥ．Ａｎｅｎｚｙｍｉｃａｐｐｒｏａｃｈｔｏｔｈｅａｎａｌｙｓｉｓｏｆｍｉｃｒｏｂｉａｌａｃｔｉｖｉｔｙｄｕｒｉｎｇｐｌａｎｔｌｉｔｔｅｒｄｅ
ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ．ＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅＥｃｏｓｙｓｔｅｍｓａｎｄＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ，１９９１，３４（１４）：４３５４．
［６］ ＬｕＨ，ＹａｏＴ，ＬｉＪＨ，犲狋犪犾．Ｖｅｇｅｔａｔｉｏｎａｎｄｓｏｉｌｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆｄｅｇｒａｄｅｄｇｒａｓｓｌａｎｄｓ．ＡｃｔａＰｒａｔａｃｕｌｔｕｒａｅ
Ｓｉｎｉｃａ，２０１５，２４（５）：３４４３．
［７］ ＧａｒｃｉａＣ，ＨｅｒｎáｎｄｅｓＴ．Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌａｎｄｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｉｎｄｉｃａｔｏｒｓｉｎｄｅｒｅｌｉｃｔｓｏｉｌｓｓｕｂｊｅｃｔｔｏｅｒｏｓｉｏｎ．ＳｏｉｌＢｉｏｌｏｇｙａｎｄＢｉｏｃｈｅｍｉｓ
ｔｒｙ，１９９７，２９（２）：１７１１７７．
［８］ ＤｉｃｋＲＰ．Ｓｏｉｌｅｎｚｙｍｅａｃｔｉｖｉｔｙａｓａｎｉｎｄｉｃａｔｏｒｏｆｓｏｉｌｑｕａｌｉｔｙ．Ｉｎ：ＤｏｒａｎＪＷ （ｅｄｓ）．ＤｅｆｉｎｉｎｇＳｏｉｌＱｕａｌｉｔｙｆｏｒａＳｕｓｔａｉｎａｂｌｅＥｎ
ｖｉｒｏｎｍｅｎｔ［Ｍ］．Ｍａｄｉｓｏｎ：ＷＩ，１９９４：１０７１２４．
［９］ ＭｏｏｒｈｅａｄＤＬ，ＳｉｎｓａｂａｕｇｈＲＬ．Ｓｉｍｕｌａｔｅｄｐａｔｔｅｒｎｓｏｆｌｉｔｔｅｒｄｅｃａｙｐｒｅｄｉｃｔｐａｔｔｅｒｎｓｏｆｅｘｔｒａｃｅｌｕｌａｒｅｎｚｙｍｅａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ．Ａｐｐｌｉｅｄ
ＳｏｉｌＥｃｏｌｏｇｙ，２０００，１４（１）：７１７９．
［１０］ ＡｃｏｓｔａＭａｒｔｉｎｅｚＶ，ＴａｂａｔａｂａｉＭＡ．Ｅｎｚｙｍｅａｃｔｉｖｉｔｙｉｎａｌｉｍｉｎｇａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ．ＢｉｏｌｏｇｙａｎｄＦｅｒｔｉｌｉｔｙｏｆＳｏｉｌｓ，２０００，３１（１）：
８５９１．
［１１］ ＷａｎｇＪＨ，ＹｉｎＲ，ＺｈａｎｇＨＹ，犲狋犪犾．Ｃｈａｎｇｅｓｉｎｓｏｉｌｅｎｚｙｍｅａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ，ｍｉｃｒｏｂｉａｌｂｉｏｍａｓｓ，ａｎｄｓｏｉｌｎｕｔｒｉｅｎｔｓｔａｔｕｓｉｎｒｅ
ｓｐｏｎｓｅｔｏｆｅｒｔｉｌｉｚａｔｉｏｎｒｅｇｉｍｅｓｉｎａｌｏｎｇｔｅｒｍｆｉｅｌｄｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ．ＥｃｏｌｏｇｙａｎｄＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ，２００７，１６（１）：１９１１９６．
［１２］ ＧｕｏＰ，ＷａｎｇＣＹ，ＪｉａＹ，犲狋犪犾．Ｒｅｓｐｏｎｓｅｓｏｆｓｏｉｌｍｉｃｒｏｂｉａｌｂｉｏｍａｓｓａｎｄｅｎｚｙｍａｔｉｃａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｔｏｆｅｒｔｉｌｉｚａｔｉｏｎｓｏｆｍｉｘｅｄｉｎｏｒ
ｇａｎｉｃａｎｄｏｒｇａｎｉｃｎｉｔｒｏｇｅｎａｔａｓｕｂｔｒｏｐｉｃａｌｆｏｒｅｓｔｉｎＥａｓｔＣｈｉｎａ．ＰｌａｎｔａｎｄＳｏｉｌ，２０１１，３３８（１２）：３５５３６６．
［１３］ ＷａｎＺＭ，ＳｏｎｇＣＣ，ＬｉｕＤＹ．Ｔｈｅｅｎｚｙｍｅａｃｔｉｖｉｔｙｏｆ犆犪犾犪犿犪犵狉狅狊狋犻狊犪狀犵狌狊狋犻犳狅犾犻犪ｌｉｔｔｅｒｄｅｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎａｆｆｅｃｔｅｄｂｙｅｘｏｇｅｎｏｕｓ
ｎｉｔｒｏｇｅｎｉｎｐｕｔｉｎａｆｒｅｓｈｗａｔｅｒｍａｒｓｈ．ＡｃｔａＳｃｉｅｎｔｉａｅＣｉｒｃｕｍｓｔａｎｔｉａｅ，２００９，２９（９）：１８３０１８３５．
［１４］ ＥｄｗａｒｄｓＩＰ，ＺａｋＤＲ，ＫｅｌｎｅｒＨ，犲狋犪犾．ＳｉｍｕｌａｔｅｄａｔｍｏｓｐｈｅｒｉｃＮｄｅｐｏｓｉｔｉｏｎａｌｔｅｒｓｆｕｎｇａｌｃｏｍｍｕｎｉｔｙｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎａｎｄｓｕｐ
ｐｒｅｓｓｅｓｌｉｇｎｉｎｏｌｙｔｉｃｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎａｎｏｒｔｈｅｒｎｈａｒｄｗｏｏｄｆｏｒｅｓｔ．ＰｌｏｓＯｎｅ，２０１１，６（６）：ｅ２０４２１．
［１５］ ＺｅｎｇＹ，ＺｈｏｕＬＱ，ＨｕａｎｇＭＦ，犲狋犪犾．Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆｎｉｔｒｏｇｅｎｆｅｒｔｉｌｉｚａｔｉｏｎｏｎｅｎｚｙｍｅａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｉｎｓｕｒｆａｃｅｌａｙｅｒｏｆｒｅｄｓｏｉｌｕｎｄｅｒ
ｍｕｌｂｅｒｒｙｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ．ＡｃｔａＥｃｏｌｏｇｉｃａＳｉｎｉｃａ，２０１４，３４（１８）：５３０６５３１０．
［１６］ ＡｎｄｅｒｓｓｏｎＭ，ＫｊｏｌｅｒＡ，ＳｔｒｕｗｅＳ．Ｍｉｃｒｏｂｉａｌｅｎｚｙｍｅａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｉｎｌｅａｆｌｉｔｔｅｒ，ｈｕｍｕｓａｎｄｍｉｎｅｒａｌｓｏｉｌｌａｙｅｒｓｏｆＥｕｒｏｐｅａｎｆｏｒ
ｅｓｔｓ．ＳｏｉｌＢｉｏｌｏｇｙａｎｄＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００４，３６（１０）：１５２７１５３７．
［１７］ ＨｏｂｂｉｅＳＥ．ＩｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓｂｅｔｗｅｅｎｌｉｔｔｅｒｌｉｇｎｉｎａｎｄｓｏｉｌｎｉｔｒｏｇｅｎａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙｄｕｒｉｎｇｌｅａｆｌｉｔｔｅｒｄｅｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｉｎａＨａｗａｉａｎ
ｍｏｎｔａｎｅｆｏｒｅｓｔ．Ｅｃｏｓｙｓｔｅｍｓ，２０００，３（５）：４８４４９４．
［１８］ ＷａｎｇＲＺ，ＤｏｒｏｄｎｉｋｏｖＭ，ＹａｎｇＳ，犲狋犪犾．Ｒｅｓｐｏｎｓｅｏｆｅｎｚｙｍａｔｉｃａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｗｉｔｈｉｎｓｏｉｌａｇｇｒｅｇａｔｅｓｔｏ９ｙｅａｒｎｉｔｒｏｇｅｎａｎｄｗａ
ｔｅｒａｄｄｉｔｉｏｎｉｎａｓｅｍｉａｒｉｄｇｒａｓｓｌａｎｄ．ＳｏｉｌＢｉｏｌｏｇｙａｎｄＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０１５，８１（２）：３５９３６７．
［１９］ ＬｉｕＬ，ＺｈｕＸ，ＳｕｎＧ，犲狋犪犾．Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆｓｉｍｕｌａｔｅｄｗａｒｍｉｎｇａｎｄｆｅｒｔｉｌｉｚａｔｉｏｎｏｎａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｆｓｏｉｌｅｎｚｙｍｅｓｉｎａｌｐｉｎｅｍｅａｄｏｗ．
ＰｒａｔａｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅ，２０１１，２８（８）：１４０５１４１０．
［２０］ ＺｈｏｕＸＭ．ＣｈｉｎｅｓｅＫｏｂｒｅｓｉａＭｅａｄｏｗｓ［Ｍ］．Ｂｅｉｊｉｎｇ：ＳｃｉｅｎｃｅＰｒｅｓｓ，２００１．
［２１］ ＤｅｓｓｕｒｅａｕｌｔＲｏｍｐｒéＪ，ＺｅｂａｒｔｈＢＪ，ＧｅｏｒｇａｌａｓＡ，犲狋犪犾．Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅｏｆｓｏｉｌｎｉｔｒｏｇｅｎｍｉｎｅｒａｌｉｚａｔｉｏｎｒａｔｅ：Ｃｏｍ
ｐａｒｉｓｏｎｏｆｍａｔｈｅｍａｔｉｃａｌｍｏｄｅｌｓ，ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｓａｎｄｏｒｉｇｉｎｏｆｓｏｉｌｓ．Ｇｅｏｄｅｒｍａ，２０１０，１５７（３４）：９７１０８．
［２２］ ＷａｎｇＳＱ，ＹｕＧＲ．Ｅｃｏｌｏｇｉｃａｌｓｔｏｉｃｈｉｏｍｅｔｒｙｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆｅｃｏｓｙｓｔｅｍｃａｒｂｏｎ，ｎｉｔｒｏｇｅｎａｎｄｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓｅｌｅｍｅｎｔｓ．Ａｃｔａ
ＥｃｏｌｏｇｉｃａＳｉｎｉｃａ，２００８，２８（８）：３９３７３９４７．
［２３］ ＪａｍｅｓＴＷ，ＲｉｅｎＡ，ＧｅｏｒｇｅＡＫ，犲狋犪犾．Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙｕｎｄｅｒｇｌｏｂａｌｃｈａｎｇｅ：ｏｒｇａｎｉｃｎｉｔｒｏｇｅｎｔｕｒｎｏｖｅｒｉｎａｌｐｉｎｅａｎｄｓｕｂＡｒｃｔｉｃ
４２ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１６） Ｖｏｌ．２５，Ｎｏ．２
ｓｏｉｌｓ．ＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌＳｏｃｉｅｔｙＴｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ，２０１１，３９（１）：３０９３１４．
［２４］ ＺｈａｏＸＱ，ＺｈｏｕＸＭ．Ｅｃｏｌｏｇｉｃａｌｂａｓｉｓｏｆａｌｐｉｎｅｍｅａｄｏｗｅｃｏｓｙｓｔｅｍ ｍａｎａｇｅｍｅｎｔｉｎｔｈｅＴｉｂｅｔ：ｅｘｐｅｒｉｅｎｃｅｓａｎｄａｐｐｒｏａｃｈｅｓ
ｆｒｏｍＨａｉｂｅｉＡｌｐｉｎｅｍｅａｄｏｗｅｃｏｓｙｓｔｅｍｒｅｓｅａｒｃｈｓｔａｔｉｏｎ．Ａｍｂｉｏ，１９９９，２８（８）：６４２６４７．
［２５］ ＴａｂａｔａｂａｉＭＡ．Ｓｏｉｌｅｎｚｙｍｅｓ．Ｉｎ：ＭｉｃｋｅｌｓｏｎＳＨ （ｅｄ）．Ｍｅｔｈｏｄｓｏｆｓｏｉｌａｎａｌｙｓｉｓ，Ｐａｒｔ２．ＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌａｎｄＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ
Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ［Ｍ］．Ｍａｄｉｓｏｎ：ＳｏｉｌＳｃｉｅｎｃｅＳｏｃｉｅｔｙｏｆＡｍｅｒｉｃａ，ＷＩ，１９９４：７７５８３３．
［２６］ ＴａｂａｔａｂａｉＭＡ，ＢｒｅｍｎｅｒＪＭ．Ａｒｙｌｓｕｌｆａｔａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｓｏｉｌｓ．ＰｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓＳｏｉｌＳｃｉｅｎｃｅＳｏｃｉｅｔｙｏｆＡｍｅｒｉｃａ，１９７０，３４（２）：
２２５２２９．
［２７］ ＲｏｄｒｉｇｕｅｚＫａｂａｎａＲ，ＧｏｄｏｙＧ，ＭｏｒｇａｎＪｏｎｅｓＧ，犲狋犪犾．Ｔｈｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｓｏｉｌｃｈｉｔｉｎａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙ：Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｆｏｒａｓｓａｙａｎｄ
ｅｃｏｌｏｇｉｃａｌｓｔｕｄｉｅｓ．ＰｌａｎｔａｎｄＳｏｉｌ，１９８３，７５（１）：９５１０６．
［２８］ ＧｕＸＹ，ＨｕＺＪ．Ａｍｅｔｈｏｄｏｆｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｓｏｉｌｃｈｉｔｉｎａｓｅ．ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＳｏｉｌＳｃｉｅｎｃｅ，１９９４，２５（６）：２８４
２８５．
［２９］ ＢａｏＳＤ．ＳｏｉｌＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙＡｎａｌｙｓｉｓ［Ｍ］．Ｂｅｉｊｉｎｇ：ＣｈｉｎａＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅＰｒｅｓｓ，１９９８：５６８３．
［３０］ ＷｈｉｔｅＡＲ．Ｖｉｓｕａｌｉｚａｔｉｏｎｏｆｃｅｌｕｌａｓｅｓａｎｄｃｅｌｕｌｏｓｅｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ．Ｉｎ：ＢｒｏｗｎＲＭ （ｅｄ）．ＣｅｌｕｌｏｓｅａｎｄｏｔｈｅｒＮａｔｕｒａｌＰｏｌｙｍｅｒ
Ｓｙｓｔｅｍｓ：Ｂｉｏｇｅｎｅｓｉｓ，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，ａｎｄＤｅｇｒａｄａｔｉｏｎ［Ｍ］．ＮｅｗＹｏｒｋ：ＰｌｅｎｕｍＰｒｅｓｓ，１９８２：４８９５０９．
［３１］ ＯｌａｎｄｅｒＬＰ，ＶｉｔｏｕｓｅｋＰＭ．ＲｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｓｏｉｌｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅａｎｄｃｈｉｔｉｎａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙｂｙＮａｎｄＰａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ．Ｂｉｏｇｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，
２０００，４９（２）：１７５１９０．
［３２］ ＷａｎｇＣＴ，ＬｏｎｇＲＪ，ＷａｎｇＱＪ，犲狋犪犾．Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｆｏｒｇａｎｉｃｍａｔｔｅｒ，ｎｉｔｒｏｇｅｎａｎｄｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓａｌｏｎｇａｎａｌｔｉｔｕｄｅｇｒａｄｉｅｎｔ
ａｎｄｐｒｏｄｕｃｔｉｖｉｔｙｃｈａｎｇｅａｎｄｔｈｅｉｒｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓｗｉｔｈｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌｆａｃｔｏｒｓｉｎｔｈｅａｌｐｉｎｅｍｅａｄｏｗ．ＡｃｔａＰｒａｔａｃｕｌｔｕｒａｅＳｉｎｉｃａ，
２００５，１４（４）：１５２０．
［３３］ ＳｕｎＺＧ，ＬｉｕＪＳ，ＹｕＪＢ．Ｓｅａｓｏｎａｌｃｈａｎｇｅｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆａｌｋａｌｉｎｅｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓｎｉｔｒｏｇｅｎａｎｄｔｏｔａｌｎｉｔｒｏｇｅｎｉｎｔｙｐｉｃａｌｃａｌａｍａ
ｇｒｏｓｔｉｓａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａｗｅｔｌａｎｄｓｏｉｌｓｏｆＳａｎｊｉａｎｇＰｌａｉｎ．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｒｉｄＬａｎｄＲｅｓｏｕｒｃｅｓａｎｄＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ，２００８，２３（８）：１４５１４９．
［３４］ ＳｉｎｓａｂａｕｇｈＲＬ，ＣａｒｒｅｉｒｏＭＭ，ＲｅｐｅｒｔＤＡ．Ａｌｏｃａｔｉｏｎｏｆｅｘｔｒａｃｅｌｕｌａｒｅｎｚｙｍａｔｉｃａｃｔｉｖｉｔｙｉｎｒｅｌａｔｉｏｎｔｏｌｉｔｔｅｒｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ，Ｎ
ｄｅｐｏｓｉｔｉｏｎ，ａｎｄｍａｓｓｌｏｓｓ．Ｂｉｏｇｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００２，６０（１）：１２４．
［３５］ ＢｕｒｎｓＲＧ．Ｅｎｚｙｍｅａｃｔｉｖｉｔｙｉｎｓｏｉｌ：ｌｏｃａｔｉｏｎａｎｄｐｏｓｓｉｂｌｅｒｏｌｅｉｎｍｉｃｒｏｂｉａｌｅｃｏｌｏｇｙ．ＳｏｉｌＢｉｏｌｏｇｙａｎｄＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９８２，
１４（５）：４２３４２７．
［３６］ ＭｏｏｒｈｅａｄＤＬ，ＳｉｎｓａｂａｕｇｈＲＬ．Ａｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌｍｏｄｅｌｏｆｌｉｔｔｅｒｄｅｃａｙａｎｄｍｉｃｒｏｂｉａｌｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ．ＥｃｏｌｏｇｉｃａｌＭｏｎｏｇｒａｐｈｓ，２００６，
７６（２）：１５１１７４．
［３７］ ＭｃＧｉｌ ＷＢ，ＣｏｌｅＣＶ．ＣｏｍｐａｒａｔｉｖｅａｓｐｅｃｔｓｏｆｃｙｃｌｉｎｇｏｆｏｒｇａｎｉｃＣ，Ｎ，Ｓ，ａｎｄＰｔｈｒｏｕｇｈｓｏｉｌｏｒｇａｎｉｃｍａｔｔｅｒ．Ｇｅｏｄｅｒｍａ，
１９８１，２６（４）：２６７２８６．
［３８］ ＷｒｉｇｈｔＡＬ，ＲｅｄｄｙＫＲ．ＰｈｏｓｐｈｏｒｕｓｌｏａｄｉｎｇｅｆｆｅｃｔｓｏｎｅｘｔｒａｃｅｌｕｌａｒｅｎｚｙｍｅａｃｔｉｖｉｔｙｉｎＥｖｅｒｇｌａｄｅｓＷｅｔｌａｎｄｓｏｉｌｓ．ＳｏｉｌＳｃｉ
ｅｎｃｅＳｏｃｉｅｔｙｏｆＡｍｅｒｉｃａ，２００１，６５（２）：５８８５９５．
［３９］ ＪａｓｏｎＣＮ，ＡｌａｎＲＴ，ＧｅｒｄＧ，犲狋犪犾．Ｖａｒｉａｂｌｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｎｉｔｒｏｇｅｎａｄｄｉｔｉｏｎｏｎｔｈｅｓｔａｂｉｌｉｔｙａｎｄｔｕｒｎｏｖｅｒｏｆｓｏｉｌｃａｒｂｏｎ．Ｎａ
ｔｕｒｅ，２００２，４１９（１０）：９１５９１７．
［４０］ ＨｕＬ，ＷａｎｇＣＴ，ＷａｎｇＧＸ，犲狋犪犾．Ｃｈａｎｇｅｓｉｎｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｆｓｏｉｌｅｎｚｙｍｅｓａｎｄｍｉｃｒｏｂｉａｌｃｏｍｍｕｎｉｔｙｓｔｒｕｃｔｕｒｅａｔｄｉｆｆｅｒｅｎｔ
ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎｓｕｃｃｅｓｓｉｏｎａｌｓｔａｇｅｓｏｆａｌｐｉｎｅｍｅａｄｏｗｓｉｎｔｈｅｈｅａｄｗａｔｅｒｒｅｇｉｏｎｏｆＴｈｒｅｅＲｉｖｅｒｓ，Ｃｈｉｎａ．ＡｃｔａＰｒａｔａｃｕｌｔｅｒａｅＳｉｎｉｃａ，
２０１４，２３（３）：８１９．
［４１］ ＨｏｂｂｉｅＳＨ，ＶｉｔｏｕｓｅｋＰＭ．ＮｕｔｒｉｅｎｔｌｉｍｉｔａｔｉｏｎｏｆｄｅｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｉｎＨａｗａｉａｎｆｏｒｅｓｔｓ．Ｅｃｏｌｏｇｙ，２０００，８１（７）：１８６７１８７７．
［４２］ ＹａｎｇＸＸ，ＲｅｎＦ，ＺｈｏｕＨＫ，犲狋犪犾．Ｒｅｓｐｏｎｓｅｓｏｆｐｌａｎｔｃｏｍｍｕｎｉｔｙｂｉｏｍａｓｓｔｏｎｉｔｒｏｇｅｎａｎｄｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓａｄｄｉｔｉｏｎｓｉｎａｎａｌ
ｐｉｎｅｍｅａｄｏｗｏｎｔｈｅＱｉｎｇｈａｉＸｉｚａｎｇＰｌａｔｅａｕ．ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｌａｎｔＥｃｏｌｏｇｙ，２０１４，３８（２）：１５９１６６．
参考文献：
［１］ 关松荫．土壤酶及其研究法［Ｍ］．北京：农业出版社，１９８６．
［２］ 林先贵．土壤微生物研究原理与方法［Ｍ］．北京：高等教育出版社，２０１０．
［６］ 卢虎，姚拓，李建宏，等．高寒地区不同退化草地植被和土壤微生物特性及其相关性研究．草业学报，２０１５，２４（５）：３４４３．
［１１］ 王俊华，尹睿，张华勇，等．长期定位施肥对农田土壤酶活性及其相关因素的影响．生态环境，２００７，１６（１）：１９１１９６．
［１３］ 万忠梅，宋长春，刘德燕．氮输入对沼泽湿地小叶章枯落物分解过程中酶活性的影响．环境科学学报，２００９，２９（９）：１８３０
１８３５．
［１５］ 曾艳，周柳强，黄美福，等．不同施氮量对桑园红壤耕层酶活性的影响．生态学报，２０１４，３４（１８）：５３０６５３１０．
［１９］ 刘琳，朱霞，孙庚，等．模拟增温与施肥对高寒草甸土壤酶活性的影响．草业科学，２０１１，２８（８）：１４０５１４１０．
［２０］ 周兴民．中国嵩草草甸［Ｍ］．北京：科学出版社，２００１．
［２２］ 王绍强，于贵瑞．生态系统碳氮磷元素的生态化学计量学特征．生态学报，２００８，２８（８）：３９３７３９４７．
［２８］ 顾向阳，胡正嘉．一种测定土壤几丁质酶活性的方法．土壤通报，１９９４，２５（６）：２８４２８５．
５２第２５卷第２期 草业学报２０１６年
［２９］ 鲍士旦．土壤农化分析［Ｍ］．北京：中国农业出版社，１９９８．
［３２］ 王长庭，龙瑞军，王启基，等．高寒草甸不同海拔梯度土壤有机质、氮磷分布和生产力变化及其与环境因子的关系．草业学
报，２００５，１４（４）：１５２０．
［３３］ 孙志高，刘景双，于君宝．三江平原小叶章湿地土壤中碱解氮和全氮含量的季节变化特征．干旱区资源与环境，２００９，
２３（８）：１４５１４９．
［４０］ 胡雷，王长庭，王根绪，等．三江源不同退化演替阶段高寒草甸土壤酶活性和微生物群落结构的变化．草业学报，２０１４，
２３（３）：８１９．
［４２］ 杨晓霞，任飞，周华坤，等．青藏高原高寒草甸植物群落生物量对氮、磷添加的响应．植物生态学报，２０１４，３８（２）：１５９
１６６．
６２ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１６） Ｖｏｌ．２５，Ｎｏ．２