全 文 ：书犇犗犐：１０．１１６８６／犮狔狓犫２０１４３２１ 犺狋狋狆：／／犮狔狓犫．犾狕狌．犲犱狌．犮狀
杨顺义，岳秀利，王进军，刘长仲，沈慧敏，沈一凡，郭金梅．二斑叶螨抗甲氰菊酯种群解毒酶基因表达分析．草业学报，２０１５，２４（８）：１５０１５８．
ＹａｎｇＳＹ，ＹｕｅＸＬ，ＷａｎｇＪＪ，ＬｉｕＣＺ，ＳｈｅｎＨＭ，ＳｈｅｎＹＦ，ＧｕｏＪＭ．Ｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆａｄｅｔｏｘｉｆｉｃａｔｉｏｎｅｎｚｙｍｅｉｎ犜犲狋狉犪狀狔犮犺狌狊狌狉狋犻犮犪犲ｒｅｓｉｓｔａｎｔ
ｔｏｆｅｎｐｒｏｐａｔｈｒｉｎ．ＡｃｔａＰｒａｔａｃｕｌｔｕｒａｅＳｉｎｉｃａ，２０１５，２４（８）：１５０１５８．
二斑叶螨抗甲氰菊酯种群解毒酶基因表达分析
杨顺义１，岳秀利１，王进军２，刘长仲１，沈慧敏１，沈一凡１，郭金梅１
（１．甘肃农业大学草业学院，草业生态系统省部共建教育重点实验室，中美草地畜牧业可持续发展中心，甘肃 兰州７３００７０；
２．西南大学植物保护学院，昆虫学及害虫控制工程重点实验室，重庆４００７１６）
摘要：基因 ｍＲＮＡ水平相对表达量的显著变化是二斑叶螨对拟除虫菊酯类药剂产生抗性的重要机制。为了揭示
二斑叶螨对甲氰菊酯抗性产生的解毒酶分子机理，本研究采用实时荧光定量ＰＣＲ（ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｒｅａｌｔｉｍｅＰＣＲ，ｑＲＴ
－ＰＣＲ）方法分析二斑叶螨实验室敏感（ＳＳ）和田间种群（ＬＺＲ、ＧＮＲ、ＷＷＲ、ＴＳＲ和ＬＸＲ）主要解毒酶谷胱甘肽
转移酶（ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅｓｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅｓ，ＧＳＴｓ）、细胞色素Ｐ４５０单加氧酶（ｃｙｔｏｃｈｅｏｍｅＰ４５０ｍｏｎｏｏｘｙｇｅｎａｓｅｓ，Ｐ４５０ｓ）
及羧酸酯酶（ｃａｒｂｏｘｙｌ／ｃｈｏｌｉｎｅｓｔｅｒａｓｅｓ，ＣＣＥｓ）基因 ｍＲＮＡ水平相对表达量的差异。结果表明，二斑叶螨不同种群
不同解毒酶基因的相对表达量不同。ＷＷＲ和ＴＳＲ种群中犜狌犌犛犜犱０５以及ＬＸＲ种群中犜狌犌犛犜犱０１和 犜狌犌
犛犜犱０６基因表达量均显著上调，为ＳＳ种群的１．４２～２．３４倍，而ＧＮＲ种群中犜狌犌犛犜犱０４，ＬＺＲ种群中犜狌犌犛犜犱０５
和犌犛犜犱０９表达量显著下调，为ＳＳ种群的０．４１～０．７０倍；Ｐ４５０ｓ基因犆犢犘４０６犃１和犆犢犘４犆犔１表达量在ＬＺＲ、
ＧＮＲ以及 ＷＷＲ种群中均显著上调，分别为ＳＳ种群的１．８０～４．８８倍，此外，犆犢犘３８７犃１在ＬＺＲ种群中显著上
调２．１９倍，而在ＬＸＲ种群中显著下调０．４２倍；ＣＣＥｓ基因犜狌犆犆犈３５表达量在 ＷＷＲ和ＴＳＲ种群中显著上调，
分别为ＳＳ种群的２．８２和３．０９倍，而犜狌犆犆犈３６基因在所有种群中的表达量均不显著。二斑叶螨不同种群中解毒
酶基因ＧＳＴｓ、Ｐ４５０ｓ和ＣＣＥｓ的显著上调或下调可能与甲氰菊酯的抗性形成有关。
关键词：二斑叶螨；甲氰菊酯；解毒酶；表达水平；ｑＲＴ－ＰＣＲ　　
犌犲狀犲犲狓狆狉犲狊狊犻狅狀狅犳犪犱犲狋狅狓犻犳犻犮犪狋犻狅狀犲狀狕狔犿犲犻狀犜犲狋狉犪狀狔犮犺狌狊狌狉狋犻犮犪犲狉犲狊犻狊狋犪狀狋狋狅
犳犲狀狆狉狅狆犪狋犺狉犻狀
ＹＡＮＧＳｈｕｎＹｉ１，ＹＵＥ ＸｉｕＬｉ１，ＷＡＮＧＪｉｎＪｕｎ２，ＬＩＵ ＣｈａｎｇＺｈｏｎｇ１，ＳＨＥＮ ＨｕｉＭｉｎ１，ＳＨＥＮ
ＹｉＦａｎ１，ＧＵＯＪｉｎＭｅｉ１
１．犆狅犾犾犲犵犲狅犳犘狉犪狋犪犮狌犾狋狌狉犲，犌犪狀狊狌犃犵狉犻犮狌犾狋狌狉犪犾犝狀犻狏犲狉狊犻狋狔，犓犲狔犔犪犫狅狉犪狋狅狉狔狅犳犌狉犪狊狊犾犪狀犱犈犮狅狊狔狊狋犲犿犈犱狌犮犪狋犻狅狀犕犻狀犻狊狋狉狔，犜犺犲犛犻
狀狅犝．犛．犆犲狀狋犲狉狊犳狅狉犌狉犪狕犻狀犵犾犪狀犱犈犮狅狊狔狊狋犲犿犛狌狊狋犪犻狀犪犫犻犾犻狋狔，犔犪狀狕犺狅狌７３００７０，犆犺犻狀犪；２．犆狅犾犾犲犵犲狅犳犘犾犪狀狋犘狉狅狋犲犮狋犻狅狀，犛狅狌狋犺狑犲狊狋犝
狀犻狏犲狉狊犻狋狔，犆犺犻狀犪犓犲狔犔犪犫狅狉犪狋狅狉狔狅犳犈狀狋狅犿狅犾狅犵狔犪狀犱犘犲狊狋犆狅狀狋狉狅犾犈狀犵犻狀犲犲狉犻狀犵，犆犺狅狀犵狇犻狀犵４００７１６，犆犺犻狀犪
犃犫狊狋狉犪犮狋：ＴｈｅｖａｒｉａｔｉｏｎｏｆｍＲＮＡｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｓａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｐｙｒｅｔｈｒｏｉｄｉｎｓｅｃｔｉｃｉｄｅｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｍｅｃｈａｎｉｓｍ
ｉｎ犜犲狋狉犪狀狔犮犺狌狊狌狉狋犻犮犪犲．Ｔｏｉｄｅｎｔｉｆｙｔｈｅｍｏｌｅｃｕｌａｒｍｅｃｈａｎｉｓｍｆｏｒｐｒｏｄｕｃｉｎｇｄｅｔｏｘｉｆｉｃａｔｉｏｎｅｎｚｙｍｅｓｉｎ犜．狌狉狋犻
犮犪犲犻狀ｒｅｓｐｏｎｓｅｔｏｆｅｎｐｒｏｐａｔｈｒｉｎ，ｔｈｅｍＲＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓｏｆｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅｓｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅｓ（ＧＳＴｓ），ｃｙｔｏ
ｃｈｒｏｍｅ（Ｐ４５０ｓ）ａｎｄｃａｒｂｏｘｙｌ／ｃｈｏｌｉｎｅｓｔｅｒａｓｅｓ（ＣＣＥｓ）ｇｅｎｅｓｉｎｌａｂｏｒａｔｏｒｙｆｅｎｐｒｏｐａｔｈｒｉｎｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅ（ＳＳ），ｆｅｎ
ｐｒｏｐａｔｈｒｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｔ（ＳｐＲ）ａｎｄｆｉｅｌｄｓｔｒａｉｎｓ（ＬＺＲ，ＧＮＲ，ＷＷＲ，ＴＳＲａｎｄＬＸＲ）ｏｆ犜．狌狉狋犻犮犪犲ｗｅｒｅ
ｍｅａｓｕｒｅｄｕｓｉｎｇｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｒｅａｌｔｉｍｅＰＣＲ（ｑＲＴ－ＰＣＲ）．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｒｅｌａｔｉｖｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓｏｆ
第２４卷　第８期
Ｖｏｌ．２４，Ｎｏ．８
草　业　学　报
ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ
２０１５年８月
Ａｕｇ，２０１５
收稿日期：２０１４０７２１；改回日期：２０１５０１１４
基金项目：公益性行业（农业）科研专项 （２０１１０３０２０）和国家自然科学基金项目（３１２６０４４２）资助。
作者简介：杨顺义（１９７２），男，甘肃礼县人，副教授，硕士。Ｅｍａｉｌ：ｙａｎｇｓｈｙ＠ｇｓａｕ．ｅｄｕ．ｃｎ。岳秀利（１９８８），男，山东滕州人，硕士。Ｅｍａｉｌ：
ｙｕｅｘｉｕｌｉ．０１＠１６３．ｃｏｍ．共同第一作者Ｔｈｅｓｅａｕｔｈｏｒｓｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｄｅｑｕａｌｙｔｏｔｈｉｓｗｏｒｋ．
通讯作者Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ．Ｅｍａｉｌ：ｎｄｓｈｍ＠ｇｓａｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｄｅｔｏｘｉｆｉｃａｔｉｏｎｅｎｚｙｍｅｇｅｎｅｓｖａｒｉｅｄｗｉｔｈｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓｔｒａｉｎｓｏｆ犜．狌狉狋犻犮犪犲．ＣｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅＳＳｓｔｒａｉｎ，
ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓｏｆ犜狌犌犛犜犱０５ｉｎｔｈｅＷＷＲａｎｄＴＳＲｓｔｒａｉｎｓ，犜狌犌犛犜犱０１ａｎｄ犜狌犌犛犜犱０６ｉｎｔｈｅＬＸＲ
ｓｔｒａｉｎｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｕｐｒｅｇｕｌａｔｅｄ，１．４２－２．３４ｔｉｍｅｓｇｒｅａｔｅｒｔｈａｎｔｈｅＳＳｓｔｒａｉｎ，ｗｈｉｌｅ犜狌犌犛犜犱０４ｉｎｔｈｅ
ＧＮＲｓｔｒａｉｎ，犜狌犌犛犜犱０５ａｎｄ犜狌犌犛犜犱０９ｉｎｔｈｅＬＸＲｓｔｒａｉｎｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｅｄ，０．４１－０．７０
ｔｈａｔｏｆｔｈｅＳＳｓｔｒａｉｎ．ＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓｏｆＰ４５０ｓｇｅｎｅｓ犆犢犘４０６犃１ａｎｄ犆犢犘４犆犔１ｉｎｔｈｅＬＺＲ，ＧＮＲａｎｄ
ＷＷＲｓｔｒａｉｎｓｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｕｐｒｅｇｕｌａｔｅｄ，１．８０－４．８８ｔｉｍｅｓｔｈａｔｏｆｔｈｅＳＳｓｔｒａｉｎ．Ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｏｆ
Ｐ４５０ｓｇｅｎｅｓ犆犢犘３８７犃１ｉｎｔｈｅＬＺＲｓｔｒａｉｎｗａｓａｌｓｏｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒ（２．１９ｔｉｍｅｓ）ｔｈａｎｔｈｅＳＳｓｔｒａｉｎｗｈｅｒｅ
ａｓｔｈａｔｉｎｔｈｅＬＸＲｓｔｒａｉｎｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｌｏｗｅｒ（０．４２ｔｉｍｅｓ）ｔｈａｎｔｈｅＳＳｓｔｒａｉｎ．Ｓｉｍｉｌａｒｌｙ，ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ
ｌｅｖｅｌｓｏｆＣＣＥｓｇｅｎｅ犜狌犆犆犈３５ｉｎｔｈｅＷＷＲａｎｄＴＳＲｓｔｒａｉｎｓｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈｅＳＳｓｔｒａｉｎ．
Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｔｈｅｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓｏｆ犜狌犆犆犈３６ｄｉｄｎｏｔｃｈａｎｇｅｉｎａｌｓｔｒａｉｎｓ．Ｔｈｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｕｐｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ
ｏｒｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｄｅｔｏｘｉｆｉｃａｔｉｏｎｅｎｚｙｍｅｇｅｎｅｓ（ＧＳＴｓ，ｐ４５０ｓａｎｄＣＣＥｓ）ａｍｏｎｇｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓｔｒａｉｎｓｏｆ犜．狌狉
狋犻犮犪犲ｍａｙｂｅａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｔｈｅｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｔｏｆｅｎｐｒｏｐａｔｈｒｉｎ．
犓犲狔狑狅狉犱狊：犜犲狋狉犪狀狔犮犺狌狊狌狉狋犻犮犪犲；ｆｅｎｐｒｏｐａｔｈｒｉｎ；ｄｅｔｏｘｉｆｉｃａｔｉｏｎｅｎｚｙｍｅｓ；ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌ；ｑＲＴ－ＰＣＲ
二斑叶螨（犜犲狋狉犪狀狔犮犺狌狊狌狉狋犻犮犪犲）是一种重要的杂食性世界害螨，除危害粮食作物、果树、花卉、蔬菜等以外，
还可危害城市绿地植物及牧草等超过１４０科１１００多种植物［１３］。近年来，由于农药的大量且不合理使用，该物种
对有机磷类、氨基甲酸酯类、拟除虫菊酯类等多种杀虫、杀螨剂的抗性发展十分迅速，并且产生了严重的抗性和交
互抗性，被认为是节肢动物中最易产生抗性的害螨之一［４］。目前，二斑叶螨是甘肃省蔬菜和农作物上的第一大害
螨，严重影响着农业经济的发展。
二斑叶螨对外源化合物解毒能力的增强是其对农药产生抗药性的重要机制。参与代谢抗性的解毒酶系主要
包括谷胱甘肽转移酶（ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅｓｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ，ＧＳＴｓ），细胞色素Ｐ４５０单加氧酶（ｃｙｔｏｃｈｅｏｍｅＰ４５０ｍｏｎｏｏｘｙ
ｇｅｎａｓｅｓ，Ｐ４５０ｓ）及羧酸酯酶（ｃａｒｂｏｘｙｌｅｓｔｅｒａｓｅｓ，ＣＣＥｓ）等。ＶａｎＬｅｅｕｗｅｎ等［５６］研究表明酯酶（ｅｓｔｅｒａｓｅｓ，ＥＳ
Ｔｓ）和Ｐ４５０ｓ解毒能力的增强介导着田间二斑叶螨抗联苯菊酯种群高水平的抗药性，也可能是二斑叶螨对阿维
菌素敏感性降低的重要抗性机理［７］；ＶａｎＰｏｔｔｅｌｂｅｒｇｅ等［８］报道二斑叶螨抗螺螨酯种群中ＧＳＴｓ活性显著增加，
为敏感种群的２．５倍。在分子水平上，二斑叶螨对甲氰菊酯的靶标抗性研究也有所报道［９１０］，而二斑叶螨基因组
的成功测序［１］更是促进了其抗性分子机制研究。Ｄｅｍａｅｇｈｔ等［１１］研究报道在二斑叶螨田间抗性种群中，ＥＳＴｓ基
因犜狌犆犆犈０４以及 Ｐ４５０ｓ基因 犆犢犘３９２犈７ 和 犆犢犘３９２犈１０ 相对表达量均显著上调，并且螺螨酯能诱导
犆犢犘３９２犈１０基因的高表达，而犆犢犘３９２犈１０基因对螺螨酯也有代谢作用。本实验室高新菊和沈慧敏［１２］以及段辛
乐等［１３］从生理生化方面研究表明二斑叶螨对甲氰菊酯产生抗性可能与解毒酶活性的增强有关。因此，本实验在
对甘肃地区５个二斑叶螨不同田间种群解毒酶活性研究的基础上，根据已报道的与二斑叶螨或昆虫抗性相关的
关键解毒酶基因［１１］，选取了二斑叶螨ＧＳＴｓ、Ｐ４５０ｓ以及ＣＣＥｓ中共１４个基因，采用ｑＲＴ－ＰＣＲ的方法，从生理
生化和分子水平深入探讨了其ｍＲＮＡ水平相对表达量的变化，旨在揭示二斑叶螨对甲氰菊酯产生抗性过程中
主要解毒酶的分子机理，为二斑叶螨对拟除虫菊酯类农药的抗性治理提供理论依据。
１　材料与方法
１．１　供试螨类
实验室种群：敏感种群（ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅｓｔｒａｉｎ，ＳＳ），２００７年６月采自甘肃省兰州市兴隆山国家级森林公园［１２］。
田间种群：２０１２年８月采自甘肃省５个不同地区的二斑叶螨种群，分别为兰州种群（ＬＺＲ）、甘南种群（ＧＮ
Ｒ）、武威种群（ＷＷＲ）、天水种群（ＴＳＲ）以及临夏种群（ＬＸＲ）。
二斑叶螨ＳＳ、ＬＺＲ、ＧＮＲ、ＷＷＲ、ＴＳＲ、ＬＸＲ种群饲养在养虫室盆栽的豇豆（犞犻犵狀犪狌狀犵狌犻犮狌犾犪狋犪）苗上。
控制条件：温度（２６±１）℃，相对湿度（７５±５）％，光照１４ｈ，黑暗１０ｈ。
１．２　主要的试剂
考马斯亮蓝Ｇ２５０（Ｆｌｕｋａ），牛血清蛋白（上海源聚生物科技有限公司），１氯２，４二硝基苯（上海生工生物科
１５１第８期 杨顺义　等：二斑叶螨抗甲氰菊酯种群解毒酶基因表达分析
技有限公司），还原性谷胱甘肽（上海生工生物科技有限公司），α萘酚（天津光复精细化工研究所），固蓝Ｂ盐（上
海源叶生物科技有限公司），ＲＮＡ提取试剂盒ＲＮｅａｓｙ?ＰｌｕｓＭｉｃｒｏＫｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ公司），反转录试剂盒Ｐｒｉｍｅｒ
Ｓｃｒｉｐｔ? ＲＴＲｅａｇｅｎｔＫｉｔＰｅｒｆｅｃｔＲｅａｌｔｉｍｅ（Ｔａｋａｒａ公司），荧光染料ＧｏＴａｑ?ｑＰＣＲＭａｓｔｅｒＭｉｘ（Ｐｒｏｍｅｇａ公司）。
１．３　毒力测定方法
二斑叶螨不同种群对甲氰菊酯的毒力测定方法采用ＦＡＯ［１４］推荐的玻片浸渍法（ｓｌｉｄｅｄｉｐｍｅｔｈｏｄ）并加以改
进。每个处理重复３次，分别计算出各种群致死中浓度（ＬＣ５０），并以ＳＳ种群为对照，计算出ＬＺＲ、ＧＮＲ、ＷＷ
Ｒ、ＴＳＲ和ＬＸＲ种群的抗性倍数，抗性倍数＝抗性种群ＬＣ５０／敏感种群ＬＣ５０。
１．４　解毒酶活性分析
二斑叶螨不同种群的酶源蛋白含量测定参照Ｂｒａｄｆｏｒｄ［１５］的方法，ＧＳＴｓ活性测定参照Ｃｌａｒｋ等［１６］的方法，
Ｐ４５０ｓ活性测定参照 Ｈａｎｓｅｎ和Ｈｏｄｇｓｏｎ［１７］的方法，ＣＣＥｓ活性测定参照ＶａｎＡｓｐｅｒｅｎ［１８］的方法。每个处理设３
个重复和对照，采用酶标仪进行ＯＤ值的测定。
１．５　总ＲＮＡ提取及第一链ｃＤＮＡ的合成
分别选取二斑叶螨ＳＳ、ＬＺＲ、ＧＮＲ、ＷＷＲ、ＴＳＲ和ＬＸＲ共６个种群雌成螨约４００头，按照ＲＮｅａｓｙ?Ｐｌｕｓ
ＭｉｃｒｏＫｉｔ试剂盒说明书提取各种群总 ＲＮＡ。对总 ＲＮＡ 进行１％的琼脂糖电泳胶电泳检测完整性。选取
ＯＤ２６０／２８０在１．８～２．２之间的ＲＮＡ反转录合成第一链ｃＤＮＡ，具体步骤参照ＰｒｉｍｅｒＳｃｒｉｐｔ? ＲＴＲｅａｇｅｎｔＫｉｔＰｅｒ
ｆｅｃｔＲｅａｌｔｉｍｅ试剂盒说明书进行。
１．６　引物的设计
参照二斑叶螨在线基因组信息（ｈｔｔｐ：／／ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ．ｐｓｂ．ｕｇｅｎｔ．ｂｅ／ｏｒｃａｅ／ｏｖｅｒｖｉｅｗ／Ｔｅｔｕｒ）设计用于
ＧＳＴｓ、Ｐ４５０ｓ及ＣＣＥｓ相关解毒酶基因ｑＲＴ－ＰＣＲ研究的引物，引物序列见表１。
表１　本研究所用的狇犚犜－犘犆犚定量引物及相关信息
犜犪犫犾犲１　犘狉犻犿犲狉狊狌狊犲犱犳狅狉狇犚犜－犘犆犚犪狀犱狋犺犲犻狉狉犲犾犪狋犻狏犲犻狀犳狅狉犿犪狋犻狅狀犻狀狋犺犲犲狓狆犲狉犻犿犲狀狋
基因名称
Ｇｅｎｅ
ｎａｍｅ
基因ＩＤ
ＧｅｎｅＩＤｎｕｍｂｅｒ
引物序列
Ｐｒｉｍｅｒｓｅｑｕｅｎｃｅ
（５′３′）
扩增效率
Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ
ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ（％）
决定系数
Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ
ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ（犚２）
犜狌犌犛犜犱０１ ｔｅｔｕｒ０１ｇ０２２３０ Ｆ：ＧＡＡＡＧＣＴＣＧＴＧＣＡＡＣＴＧＴＣＧ，Ｒ：ＡＴＣＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＡＣＧＧＴＧＴ ９５．２２ ０．９７４
犜狌犌犛犜犱０４ ｔｅｔｕｒ０１ｇ０２５００ Ｆ：ＴＧＧＧＡＡＡＧＴＣＧＧＧＣＡＡＴＣＡＴ，Ｒ：ＡＧＣＡＧＣＧＣＴＴＡＴＧＣＴＡＣＡＣＡ １０１．４０ ０．９４７
犜狌犌犛犜犱０５ ｔｅｔｕｒ０１ｇ０２５１０ Ｆ：ＣＴＧＧＡＴＣＴＧＡＴＧＣＡＡＧＧＣＧＡ，Ｒ：ＴＣＧＧＴＣＴＡＣＡＧＴＴＧＣＡＣＧＡＧ ９６．０９ ０．９９８
犜狌犌犛犜犱０６ ｔｅｔｕｒ０３ｇ０７９２０ Ｆ：ＣＴＧＧＧＡＴＧＣＡＧＧＡＡＣＣＴＴＧＴ，Ｒ：ＧＧＴＣＡＡＣＴＣＡＴＣＡＣＣＡＧＣＧＡ １０９．３３ ０．９９３
犜狌犌犛犜犱０９ ｔｅｔｕｒ２６ｇ０２８０１ Ｆ：ＣＣＴＣＧＣＣＡＴＡＡＡＣＣＣＡＴＴＣＣＡ，Ｒ：ＣＡＧＣＧＡＴＴＧＡＴＴＧＴＴＧＣＴＣＧＴ １００．７５ ０．９９４
犜狌犌犛犜犱１６ ｔｅｔｕｒ３１ｇ０１３９０ Ｆ：ＡＧＴＣＣＡＣＣＴＴＧＴＣＧＡＡＣＡＧＴ，Ｒ：ＴＣＡＣＣＡＴＣＡＡＣＣＡＡＡＧＴＧＧＧＡ １０３．２０ ０．９９１
犆犢犘４０６犃１ ｔｅｔｕｒ０１ｇ０４４４０ Ｆ：ＴＧＡＣＧＴＴＧＣＴＣＴＴＧＡＡＡＴＧＣ，Ｒ：ＴＡＧＧＣＴＴＴＴＧＧＧＴＴＧＡＴＧＣＴ ９４．８４ ０．８３３
犆犢犘４犆犔１ ｔｅｔｕｒ０１ｇ００６５０ Ｆ：ＧＣＧＴＣＴＣＣＴＧＣＴＡＧＣＴＣＡＴＣ，Ｒ：ＴＣＣＣＡＴＣＡＡＴＧＧＧＴＴＡＡＡＣＧ ９８．８１ ０．９６８
犆犢犘３８７犃１ ｔｅｔｕｒ０８ｇ０６１７０ Ｆ：ＡＴＣＧＣＴＧＣＴＧＧＧＡＴＡＡＧＡＴＧ，Ｒ：ＡＧＧＧＡＡＴＣＧＧＴＧＧＧＴＡＡＡＧＴ １０１．７５ ０．９９２
犆犢犘３９２犃６ ｔｅｔｕｒ１１ｇ００５３０ Ｆ：ＣＴＴＧＧＣＧＴＧＡＡＣＡＧＡＧＧＡＡＴ，Ｒ：ＣＡＴＣＴＴＧＴＴＧＧＧＧＴＣＣＴＴＧＴ ８７．１４ ０．９９８
犆犢犘３９２犇８ ｔｅｔｕｒ０３ｇ０５０７０ Ｆ：ＧＧＡＡＡＣＡＡＣＡＧＣＧＡＣＧＡＧＴＴ，Ｒ：ＡＴＣＧＡＴＧＣＣＣＡＡＡＣＡＴＡＡＧＧ ９０．１９ ０．９９９
犆犢犘３９２犈１０ ｔｅｔｕｒ２７ｇ０１０３０ Ｆ：ＧＣＡＡＡＧＡＴＡＣＴＣＧＣＣＣＡＡＴＣ，Ｒ：ＴＴＣＧＧＴＧＴＴＣＡＴＣＡＡＣＣＴＣＡ ９８．８１ ０．９９４
犜狌犆犆犈３５ ｔｅｔｕｒ１２ｇ０４６００ Ｆ：ＴＴＣＧＡＴＧＡＡＡＴＴＧＧＣＴＣＴＧＡ，Ｒ：ＧＡＧＣＴＣＣＡＴＴＧＧＧＴＣＴＣＴＣＡ １０７．１８ ０．９８５
犜狌犆犆犈３６ ｔｅｔｕｒ１２ｇ０４６１０ Ｆ：ＣＧＡＡＧＣＴＧＡＴＣＧＧＧＡＴＡＧＡＣ，Ｒ：ＣＣＣＡＡＴＣＧＡＴＧＧＴＴＧＡＧＡＴＴ ８７．１４ ０．９９０
α狋狌犫狌犾犻狀 ｔｅｔｕｒ０３ｇ００２３０ Ｆ：ＴＡＣＣＧＧＣＡＡＴＴＡＴＴＣＣＡＴＣＣ，Ｒ：ＴＣＣＡＧＴＴＣＣＡＣＣＴＣＣＡＡＡＡＣ １０９．０８ ０．９６９
　注：“Ｆ”表示正向序列，“Ｒ”表示反向序列。
　Ｎｏｔｅ：“Ｆ”ａｎｄ“Ｒ”ｉｎｄｉｃａｔｅｆｏｒｗａｒｄａｎｄｒｅｖｅｒｓｅｓｅｑｕｅｎｃｅ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．
２５１ 草　业　学　报 第２４卷
１．７　ｑＲＴ－ＰＣＲ分析
ｑＲＴ－ＰＣＲ反应体系为：１０μＬ荧光染料ＧｏＴａｑ?ｑＰＣＲＭａｓｔｅｒＭｉｘ，７μＬ双蒸水，上下游引物各１μＬ，ｃＤ
ＮＡ模版１μＬ。反应条件为：９５℃预变性２ｍｉｎ；然后９５℃变性１５ｓ，６０℃退火３０ｓ，７２℃延伸１５ｓ共４０个循环；
最后６０℃到９５℃为熔解曲线过程。然后将ｃＤＮＡ模板按１∶３梯度稀释成５个浓度梯度进行标准曲线分析，并
计算不同引物的扩增效率（表１）。对照用已经处理过的灭菌水代替ｃＤＮＡ模板当做空白对照，每个处理３次重
复。
１．８　数据统计与分析
采用ＤＰＳ６．０５软件对二斑叶螨ＬＺＲ、ＧＮＲ、ＷＷＲ、ＴＳＲ和ＬＸＲ种群的酶活性进行单因素方差分析，并
用Ｄｕｎｃａｎ新复极差法（ＤＭＲＴ，犘＜０．０５）进行多重比较；采用比较Ｃｔ值的方法［１９］，以ＳＳ种群的相对表达量为
对照样品，分别计算其不同种群解毒酶基因相对表达量的差异，利用ＳＰＳＳ１９．０软件对数据进行独立样本狋检验
（Ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｓａｍｐｌｅｓ狋Ｔｅｓｔ，犘＜０．０５）。
２　结果与分析
２．１　二斑叶螨不同种群抗性倍数测定
二斑叶螨不同地理种群的采集信息及生物测定结果如表２所示，相对于ＳＳ种群，在田间采集的５个种群中，
ＧＮＲ的抗性倍数最大，达到６０．５３倍，而ＬＺＲ，ＷＷＲ，ＴＳＲ和ＬＸＲ种群的抗性倍数相对较低，为２２．５０～
２７．３８倍。
表２　二斑叶螨所有种群来源及抗性倍数
犜犪犫犾犲２　犜犺犲狅狉犻犵犻狀狅犳犪犾狊狋狉犪犻狀狊狅犳犜．狌狉狋犻犮犪犲犪狀犱狋犺犲犻狉狉犲狊犻狊狋犪狀犮犲狉犪狋犻狅
种群
Ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ
采集地点
Ｃｏｌｅｃｔｉｏｎｓｉｔｅ
寄主植物
Ｈｏｓｔｐｌａｎｔ
卡方值（χ２）
Ｃｈｉｓｑｕａｒｅｖａｌｕｅ
ＬＣ５０（９５％置信区间
Ｃｏｎｆｉｄｅｎｃｅｉｎｔｅｒｖａｌ）（ｍｇ／Ｌ）
抗性倍数（ＲＲ）
Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｒａｔｉｏ
ＳＳ 兰州Ｌａｎｚｈｏｕ 金花忍冬犔狅狀犻犮犲狉犪犮犺狉狔狊犪狀狋犺犪 ２．０８ ７４．７９（４．０５～１６２．２３） －
ＬＺＲ 兰州Ｌａｎｚｈｏｕ 茄子犛狅犾犪狀狌犿犿犲犾狅狀犵犲狀犪 ３．０８ １７２４．７０（１３６８．５８～２１８３．４７） ２３．０６
ＧＮＲ 甘南Ｇａｎｎａｎ 铜钱草犎狔犱狉狅犮狅狋狔犾犲狏狌犾犵犪狉犻狊 ２．６２ ４５２７．１７（３０６９．３４～９５５５．３７） ６０．５３
ＷＷＲ 武威 Ｗｕｗｅｉ 南瓜犆狌犮狌狉犫犻狋犪犿狅狊犮犺犪狋犪 １．３９ ２０４８．１２（１３３０．７６～７０７７．５５） ２７．３８
ＴＳＲ 天水Ｔｉａｎｓｈｕｉ 野豇豆犞犻犵狀犪狏犲狓犻犾犾犪狋犪 １．９２ １７１６．５９（１３８５．５６～２１３３．４８） ２２．９５
ＬＸＲ 临夏Ｌｉｎｘｉａ 榆树犝犾犿狌狊狆狌犿犻犾犪 ０．６０ １６８２．６４（１３５４．２９～２４５３．４０） ２２．５０
２．２　二斑叶螨不同种群解毒酶活性的变化
２．２．１　不同种群ＧＳＴｓ活性测定结果　　ＧＳＴｓ活性测定结果见表３。对田间采集的５个种群及室内ＳＳ种群
ＧＳＴｓ总活力进行比较，发现ＴＳＲ种群ＧＳＴｓ总活力最高，为１．６２μｍｏｌ／ｍｉｎ；ＧＮＲ种群ＧＳＴｓ总活力最低，为
０．７２μｍｏｌ／ｍｉｎ；与ＳＳ种群相比，ＬＺＲ和ＧＮＲ种群的总活力均低于ＳＳ种群；而其他种群ＧＳＴｓ总活力显著高
于ＳＳ种群（犘＜０．０５）。
ＴＳＲ和ＬＸＲ种群ＧＳＴｓ比活力分别为１３３１．６９和１３４２．５６μｍｏｌ／（ｍｇ·ｍｉｎ），彼此之间差异不显著，但显
著高于ＳＳ种群，为ＳＳ种群的１．３４和１．３５倍。同ＳＳ种群相比，ＬＺＲ、ＧＮＲ和 ＷＷＲ种群的ＧＳＴｓ比活力没
有显著变化（犘＞０．０５）。
２．２．２　不同种群Ｐ４５０ｓ活性测定结果　　Ｐ４５０ｓ活性测定结果见表４。ＴＳＲ种群Ｐ４５０ｓ总活力和比活力最
高，分别为０．００２０ｎｍｏｌ／ｍｉｎ和０．０１０９ｎｍｏｌ／（ｍｇ·ｍｉｎ）；ＬＺＲ种群的总活力和比活力最低，分别为０．００１３
ｎｍｏｌ／ｍｉｎ和０．００７４ｎｍｏｌ／（ｍｇ·ｍｉｎ）。ＤＭＲＴ分析显示，ＴＳＲ种群Ｐ４５０ｓ比活力显著高于其他种群，其中与
ＳＳ种群的相对比值为１．４７；而其他田间种群与ＳＳ种群相比差异不显著（犘＞０．０５）。
２．２．３　不同种群ＣＣＥｓ活性测定结果　　ＣＣＥｓ活性测定结果见表５。与ＳＳ种群相比，５个田间种群的ＣＣＥｓ
总活力和比活力均有显著性升高，而田间５个种群之间的总活力和比活力差异不显著（犘＞０．０５）。ＣＣＥｓ总活力
３５１第８期 杨顺义　等：二斑叶螨抗甲氰菊酯种群解毒酶基因表达分析
从大到小依次为：ＬＺＲ种群、ＬＸＲ种群、ＷＷＲ种群、ＴＳＲ种群、ＧＮＲ种群、ＳＳ种群，但ＴＳＲ种群的ＣＣＥｓ
的比活力在５个田间种群中最低，为１８．７５ｎｍｏｌ／（ｍｇ·ｍｉｎ）。ＬＺＲ种群、ＧＮＲ种群、ＷＷＲ种群、ＴＳＲ种群
和ＬＸＲ种群ＣＣＥｓ比活力同ＳＳ种群的相对比值分别为１．５６，１．３６，１．４５，１．３３和１．４４。
表３　二斑叶螨不同地理种群犌犛犜狊活性测定
犜犪犫犾犲３　犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳狋犺犲犪犮狋犻狏犻狋犻犲狊狅犳犌犛犜狊犳狉狅犿犱犻犳犳犲狉犲狀狋狆狅狆狌犾犪狋犻狅狀狊狅犳犜．狌狉狋犻犮犪犲
种群
Ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ
蛋白含量
Ｐｒｏｔｅｉｎｃｏｎｔｅｎｔ（μｇ／ｍＬ）
总活力
Ｔｏｔａｌａｃｔｉｖｉｔｙ（μｍｏｌ／ｍｉｎ）
比活力
Ｓｐｅｃｉｆｉｃａｃｔｉｖｉｔｙ（μｍｏｌ／ｍｇ·ｍｉｎ）
比活力变化倍数
Ｆｏｌｄｃｈａｎｇｅｓｏｆｓｐｅｃｉｆｉｃａｃｔｉｖｉｔｙ
ＳＳ ５１．６９±２．５６ｂｃ １．０２±０．０３ｃ ９９２．７２±６５．５１ｂｃ －
ＬＺＲ ５４．５６±１．６０ａｂｃ ０．９５±０．０７ｃ ８７２．８７±７３．００ｂｃ ０．８８
ＧＮＲ ５０．１０±１．５３ｃ ０．７２±０．０９ｄ ７１６．９３±６５．３４ｃ ０．７２
ＷＷＲ ５９．４９±０．６３ａｂ １．２９±０．０４ｂ １０８７．５１±４２．５０ａｂ １．１０
ＴＳＲ ６１．５９±３．８６ａ １．６２±０．０６ａ １３３１．６９±１１９．７６ａ １．３４
ＬＸＲ ５６．１５±３．２０ａｂｃ １．５０±０．０６ａ １３４２．５６±７１．５０ａ １．３５
　注：同列数据后标注不同小写字母代表存在显著性差异（Ｄｕｎｃａｎ新复极差法，犘＜０．０５）。下同。
　Ｎｏｔｅ：Ｄａｔａｆｏｌｏｗｅｄｂｙｄｉｆｆｅｒｅｎｔｌｅｔｔｅｒｓｗｉｔｈｉｎｔｈｅｓａｍｅｃｏｌｕｍｎｉｎｄｉｃａｔｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｄｉｆｆｅｒｅｎｔａｔ０．０５ｌｅｖｅｌｂｙｕｓｉｎｇｔｈｅｍｅｔｈｏｄｏｆＤｕｎｃａｎ’ｓｍｕｌｔｉ
ｐｌｅｒａｎｇｅｔｅｓｔ．Ｔｈｅｓａｍｅｂｅｌｏｗ．
表４　二斑叶螨不同地理种群犘４５０狊活性测定
犜犪犫犾犲４　犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳狋犺犲犪犮狋犻狏犻狋犻犲狊狅犳犘４５０狊犳狉狅犿犱犻犳犳犲狉犲狀狋狆狅狆狌犾犪狋犻狅狀狊狅犳犜．狌狉狋犻犮犪犲
种群
Ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ
蛋白含量
Ｐｒｏｔｅｉｎｃｏｎｔｅｎｔ（μｇ／ｍＬ）
总活力
Ｔｏｔａｌａｃｔｉｖｉｔｙ（ｎｍｏｌ／ｍｉｎ）
比活力
Ｓｐｅｃｉｆｉｃａｃｔｉｖｉｔｙ（ｎｍｏｌ／ｍｇ·ｍｉｎ）
比活力变化倍数
Ｆｏｌｄｃｈａｎｇｅｓｏｆｓｐｅｃｉｆｉｃａｃｔｉｖｉｔｙ
ＳＳ ５６．６１５４±０．９０１５ｂ ０．００１３±０．０００２ａ ０．００７４±０．０００２ｂ －
ＬＺＲ ６０．１５３８±３．５４８５ａｂ ０．００１３±０．０００２ａ ０．００７４±０．００１３ｂ １．００
ＧＮＲ ６４．５１２８±１．４６５８ａｂ ０．００１５±０．０００１ａ ０．００７６±０．０００３ｂ １．０３
ＷＷＲ ６２．８７１８±２．４９０８ａｂ ０．００１４±０．０００３ａ ０．００７６±０．００１３ｂ １．０３
ＴＳＲ ６０．９２３１±３．１０８８ａｂ ０．００２０±０．０００６ａ ０．０１０９±０．０００６ａ １．４７
ＬＸＲ ６６．０５１３±１．７１８５ａ ０．００１４±０．０００２ａ ０．００６８±０．０００９ｂ ０．９２
表５　二斑叶螨不同地理种群犆犆犈狊活性测定
犜犪犫犾犲５　犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳狋犺犲犪犮狋犻狏犻狋犻犲狊狅犳犆犆犈狊犳狉狅犿犱犻犳犳犲狉犲狀狋狆狅狆狌犾犪狋犻狅狀狊狅犳犜．狌狉狋犻犮犪犲
种群
Ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ
蛋白含量
Ｐｒｏｔｅｉｎｃｏｎｔｅｎｔ（μｇ／ｍＬ）
总活力
Ｔｏｔａｌａｃｔｉｖｉｔｙ（ｎｍｏｌ／ｍｉｎ）
比活力
Ｓｐｅｃｉｆｉｃａｃｔｉｖｉｔｙ（ｎｍｏｌ／ｍｇ·ｍｉｎ）
比活力变化倍数
Ｆｏｌｄｃｈａｎｇｅｓｏｆｓｐｅｃｉｆｉｃａｃｔｉｖｉｔｙ
ＳＳ ６６．９７±３．７３ａ １．８８±０．１９ｂ １４．１２±０．８２ｂ －
ＬＺＲ ５７．８５±０．９０ｂ ２．８７±０．１０ａ ２２．０３±０．８５ａ １．５６
ＧＮＲ ５９．３３±２．９７ａｂ ２．５８±０．２７ａ １９．２５±１．１０ａ １．３６
ＷＷＲ ５８．４１±１．７８ｂ ２．６８±０．１２ａ ２０．４９±１．５５ａ １．４５
ＴＳＲ ６１．８５±２．６６ａｂ ２．６２±０．２８ａ １８．７５±１．２１ａ １．３３
ＬＸＲ ５９．３８±１．４３ａｂ ２．７１±０．１８ａ ２０．２９±１．１１ａ １．４４
２．３　二斑叶螨不同种群解毒酶基因相对表达量的变化
２．３．１　不同种群ＧＳＴｓ基因相对表达量的测定　　以α狋狌犫狌犾犻狀为内参基因［２０］，分析二斑叶螨不同种群Ｄｅｌｔａ
家族ＧＳＴｓ基因犜狌犌犛犜犱０１、犜狌犌犛犜犱０４、犜狌犌犛犜犱０５、犜狌犌犛犜犱０６、犜狌犌犛犜犱０９和犜狌犌犛犜犱１６ｍＲＮＡ水平相对
４５１ 草　业　学　报 第２４卷
表达量，敏感种群的表达量默认为１，结果如图１所示。犜狌犌犛犜犱０１表达量在ＬＸＲ种群中显著升高，为ＳＳ种群
的１．６３倍；犜狌犌犛犜犱０５表达量在 ＷＷＲ和ＴＳＲ种群中显著升高１．４２和１．４９倍，而在ＬＺＲ种群中却显著降
低；犜狌犌犛犜犱０６表达量在ＬＸＲ种群中显著升高２．３４倍；犜狌犌犛犜犱０４和犜狌犌犛犜犱０９表达量分别在ＧＮＲ种群和
ＬＺＲ种群中显著降低，分别为ＳＳ的０．４１和０．４６倍；犜狌犌犛犜犱１６的表达量在所有种群中没有显著变化。
图１　二斑叶螨不同种群犌犛犜狊基因相对表达量
犉犻犵．１　犜犺犲犌犛犜狊犵犲狀犲狉犲犾犪狋犻狏犲犲狓狆狉犲狊狊犻狅狀犾犲狏犲犾狊犻狀犱犻犳犳犲狉犲狀狋狊狋狉犪犻狀狊狅犳犜．狌狉狋犻犮犪犲
　“”表示显著水平（犘＜０．０５）；“”表示极显著水平（犘＜０．０１）。“”ａｎｄ“”ｉｎｄｉｃａｔｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎａｔｔｈｅｌｅｖｅｌｏｆ０．０５ａｎｄ０．０１
ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．下同。Ｔｈｅｓａｍｅｂｅｌｏｗ．
图２　二斑叶螨不同种群犘４５０狊基因相对表达量
犉犻犵．２　犜犺犲犘４５０狊犵犲狀犲狉犲犾犪狋犻狏犲犲狓狆狉犲狊狊犻狅狀犾犲狏犲犾狊犻狀犱犻犳犳犲狉犲狀狋狊狋狉犪犻狀狊狅犳犜．狌狉狋犻犮犪犲
　
２．３．２　不同种群Ｐ４５０ｓ基因相对表达量的测定　　
图３　二斑叶螨不同种群犆犆犈狊基因相对表达量
犉犻犵．３　犜犺犲犆犆犈狊犵犲狀犲狉犲犾犪狋犻狏犲犲狓狆狉犲狊狊犻狅狀犾犲狏犲犾狊犻狀
犱犻犳犳犲狉犲狀狋狊狋狉犪犻狀狊狅犳犜．狌狉狋犻犮犪犲
二斑叶螨不同种群Ｐ４５０ｓ基因相对表达量的结果如图
２所示，犆犢犘４０６犃１、犆犢犘４犆犔１和犆犢犘３８７犃１基因属
于ＣＹＰ４家族，犆犢犘３９２犃６、犆犢犘３９２犇８和犆犢犘３９２犈
１０基因属于 ＣＹＰ２家族。犆犢犘４０６犃１ 和犆犢犘４犆犔１
表达量在ＬＺＲ、ＧＮＲ以及 ＷＷＲ种群中均显著升
高，分别为ＳＳ种群的２．８２，１．８５，３．３７和４．８８，１．８０，
３．８８倍，犆犢犘３８７犃１表达量在ＬＺＲ种群中显著升高
２．１９倍，但在ＬＸＲ种群中却显著下调０．４２倍；然而，
ＣＹＰ２家族的３个基因在所有的种群中均没有显著的
变化。
２．３．３　不同种群ＣＣＥｓ基因相对表达量的测定　　二斑叶螨不同种群ＣＣＥｓ基因相对表达量的结果如图３所
示，犜狌犆犆犈３５和犜狌犆犆犈３６基因均属于羟基胆碱酯酶。在所有种群中，只有 ＷＷＲ和ＴＳＲ种群的犜狌犆犆犈３５
５５１第８期 杨顺义　等：二斑叶螨抗甲氰菊酯种群解毒酶基因表达分析
基因表达量显著升高，为ＳＳ种群的２．８２和３．０９倍，在 ＬＸＲ种群中更是达到了５．０５倍，但差异不显著；
犜狌犆犆犈３６基因在所有种群中的表达量均不显著。
３　讨论
代谢抗性是害螨（昆虫）对杀螨（虫）剂敏感性降低的重要抗性机制，而涉及与代谢抗性相关的主要解毒酶类
包括ＧＳＴｓ、Ｐ４５０ｓ和ＣＣＥｓ等。本研究通过对田间５个不同种群主要解毒酶活性的分析，发现解毒酶活性的高
低与各地理种群的抗性水平之间没有明显的相关性，但与室内ＳＳ种群相比，ＴＳＲ和ＬＸＲ种群ＧＳＴｓ比活力、
ＴＳＲ种群Ｐ４５０ｓ比活力以及所有田间种群ＣＣＥｓ的比活力均显著升高（犘＜０．０５），这与本实验室前期研究发现
二斑叶螨对甲氰菊酯抗性的产生与相应的解毒酶活力增强有关结果一致［１２］。ＶａｎＰｏｔｔｅｌｂｅｒｇｅ等［８］通过酶活测
定发现酯酶、ＧＳＴｓ和Ｐ４５０ｓ参与了对螺螨酯的解毒代谢。同样，解毒酶活性的增强在Ｔｉｒｅｌｏ等［２１］研究二斑叶
螨抗吡螨胺、阿维菌素等种群中也有相关报道。Ｎｉｕ等［２２］在研究柑橘全爪螨（犘犪狀狅狀狔犮犺狌狊犮犻狋狉犻）９个不同地理种
群与哒螨灵敏感性中发现，ＧＳＴｓ参与了其对哒螨灵的田间抗性。Ｈｅ等［２３］在研究朱砂叶螨（犜犲狋狉犪狀狔犮犺狌狊犮犻狀狀犪
犫犪狉犻狀狌狊）对阿维菌素的抗性机制中也发现３种解毒酶解毒活力的增强在其抗性发展过程中起着重要作用。
Ｚｈｏｎｇ等［２４］指出中华按蚊（犃狀狅狆犺犲犾犲狊狊犻狀犲狀狊犻狊）对溴氰菊酯的抗性产生与靶标击倒抗性和Ｐ４５０ｓ的活性有关，并
且Ｐ４５０ｓ的作用尤为明显。随着现代分子生物学的快速发展，对害螨及昆虫抗药性相关的ＧＳＴｓ、Ｐ４５０ｓ和ＣＣＥｓ
的研究已逐步深入到基因表达及功能上。本研究ｑＲＴ－ＰＣＲ结果也表明不同田间种群ＧＳＴｓ、Ｐ４５０ｓ和ＣＣＥｓ
各家族部分基因的表达量有所升高，与生理生化水平上对解毒酶的活性变化研究结果基本一致。Ｄｅｍａｅｇｈｔ
等［１１］采用基因芯片技术比较了二斑叶螨敏感和抗螺螨酯种群，发现ＣＣＥｓ、Ｐ４５０ｓ以及脂笼蛋白基因表达量均显
著的上调，其中犆犢犘３９２犈１０在催化代谢螺螨酯的过程中起着关键作用。Ｒｉｖｅｒｏｎ等［２５］研究不吉库蚊（犃狀狅狆犺犲犾犲狊
犳狌狀犲狊狋狌狊）对氯菊酯抗性的产生主要是由于犆犢犘６犘９犪和犆犢犘６犘９犫基因的过量表达引起的，功能分析表明重组的
ＣＹＰ６Ｐ９ｂ蛋白对Ｉ型和ＩＩ型的拟除虫菊酯类农药均有代谢作用。
目前，随着二斑叶螨基因组的成功测序［１］，其靶标抗性［２６］和代谢抗性的研究逐渐上升到分子水平研究领域，
极大地促进了害螨的防治及抗性治理［２７］，并且基于高通量测序的转录组分析［２８］和全基因组［２９］分析在其他物种
作用机制的研究中也逐渐得到大量应用。然而，二斑叶螨基因组中有３２个ＧＳＴｓ，８６个Ｐ４５０ｓ及７１个ＣＣＥｓ基
因［１］，本试验只是研究了其中的１４个解毒基因，虽然结果不能反应全部解毒酶家族 ｍＲＮＡ表达水平的变化，但
是为进一步研究二斑叶螨抗甲氰菊酯解毒酶的分子机理提供了依据。
本研究分别从生理生化水平和分子水平分析二斑叶螨不同地理种群ＧＳＴｓ、Ｐ４５０ｓ和ＣＣＥｓ超家族酶的活性
变化及基因的表达差异，发现抗性种群 ＧＳＴｓ、Ｐ４５０ｓ和ＣＣＥｓ的活性和基因表达量均发生不同程度的变化。
ＧＳＴｓ基因犜狌犌犛犜犱０１、犜狌犌犛犜犱０４、犜狌犌犛犜犱０５、犜狌犌犛犜犱０６和犜狌犌犛犜犱０９，Ｐ４５０ｓ基因犆犢犘４０６犃１、犆犢犘４犆犔１
和犆犢犘３８７犃１以及ＣＣＥｓ基因犜狌犆犆犈３５基因表达的显著上调或下调可能参与了抗性的分子解毒作用，与二斑
叶螨对甲氰菊酯的抗性形成有关。
犚犲犳犲狉犲狀犮犲狊：
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狌狊狌狉狋犻犮犪犲ａｎｄｏｔｈｅｒｉｍｐｏｒｔａｎｔＡｃａｒｉ：Ａｒｅｖｉｅｗ．ＩｎｓｅｃｔＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，２０１０，４０（８）：５６３５７２．
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６５１ 草　业　学　报 第２４卷
ｃｏｌｅｃｔｅｄｒｅｓｉｓｔａｎｔａｎｄｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅｓｔｒａｉｎｓｏｆ犜犲狋狉犪狀狔犮犺狌狊狌狉狋犻犮犪犲．ＰｅｓｔＭａｎａｇｅｍｅｎｔＳｃｉｅｎｃｅ，２００５，６１（５）：４９９５０７．
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ｒｅｓｉｓｔａｎｔｓｔｒａｉｎｏｆ犜犲狋狉犪狀狔犮犺狌狊狌狉狋犻犮犪犲Ｋｏｃｈ（Ａｃａｒｉ：Ｔｅｔｒａｎｙｃｈｉｄａｅ）．ＰｅｓｔＭａｎａｇｅｍｅｎｔＳｃｉｅｎｃｅ，２００９，６５（４）：３５８３６６．
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ｆｅｎｐｒｏｐａｔｈｒｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｉｎ犜犲狋狉犪狀狔犮犺狌狊狌狉狋犻犮犪犲．ＰｅｓｔｉｃｉｄｅＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，２０１０，９７（２）：９３１００．
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ｓｏｄｉｕｍｃｈａｎｎｅｌｏｆｔｈｅｔｗｏｓｐｏｔｔｅｄｓｐｉｄｅｒｍｉｔｅ犜犲狋狉犪狀狔犮犺狌狊狌狉狋犻犮犪犲（Ａｃａｒｉ：Ｔｅｔｒａｎｙｃｈｉｄａｅ）．ＩｎｓｅｃｔＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，２００９，
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狉犪狀狔犮犺狌狊狌狉狋犻犮犪犲：犆犢犘３９２犈１０ｍｅｔａｂｏｌｉｚｅｓｓｐｉｒｏｄｉｃｌｏｆｅｎ，ｂｕｔｎｏｔｉｔｓｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇｅｎｏｌ．ＩｎｓｅｃｔＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄＭｏｌｅｃｕｌａｒ
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狅狀狔犮犺狌狊狌犾犿犻Ｋｏｃｈ）．ＦＡＯＭｅｔｈｏｄＮｏ．１０ａ．ＦＡＯＰｌａｎｔＰｒｏｄｕｃｔｉｏｎａｎｄＰｒｏｔｅｃｔｉｏｎＰａｐｅｒ，１９８０，２１：４９５３．
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犮犺狌狊犮犻狋狉犻（Ａｃａｒｉ：Ｔｅｔｒａｎｙｃｈｉｄａｅ）ｔｏｐｙｒｉｄａｂｅｎａｎｄａｚｏｃｙｃｌｏｔｉｎ．ＦｌｏｒｉｄａＥｎｔｏｍｏｌｏｇｉｓｔ，２０１１，９４（２）：３２１３２９．
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狉犪狀狔犮犺狌狊犮犻狀狀犪犫犪狉犻狀狌狊（Ｂｏｉｄｕｖａｌ）．ＰｅｓｔｉｃｉｄｅＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，２００９，９３（１）：４７５２．
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ｍａｌｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｔｏｐｙｒｅｔｈｒｏｉｄｓｉｎ犃狀狅狆犺犲犾犲狊狊犻狀犲狀狊犻狊．ＰＬｏＳＯＮＥ，２０１３，８（２）：１１０．
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ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｉｎｔｈｅｍａｊｏｒｍａｌａｒｉａｖｅｃｔｏｒＡｎｏｐｈｅｌｅｓｆｕｎｅｓｔｕｓ．ＰｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓｏｆｔｈｅＮａｔｉｏｎａｌＡｃａｄｅｍｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅｓｏｆｔｈｅＵｎｉｔｅｄ
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狉犪狀狔犮犺狌狊狌狉狋犻犮犪犲．ＡｃｔａＰｒａｔａｃｕｌｔｕｒａｅＳｉｎｉｃａ，２０１４，２３（５）：１５３１６０．
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７５１第８期 杨顺义　等：二斑叶螨抗甲氰菊酯种群解毒酶基因表达分析
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