全 文 ：林业科学研究 ２０１５，２８（４）：４８８ ４９６
ＦｏｒｅｓｔＲｅｓｅａｒｃｈ
文章编号：１００１１４９８（２０１５）０４０４８８０９
云南野生黄牡丹 ＰｌｂＨＬＨ３转录因子
基因的克隆与表达
史倩倩，周 琳，李 奎，王 雁
（中国林业科学研究院林业研究所，国家林业局林木培育重点实验室，北京 １０００９１）
收稿日期：２０１４０８２９
项目基金：“８６３”计划（ＳＱ２０１０ＡＡ１０００６８７００８）、国家自然科学基金项目（３１２０１６５４）
作者简介：史倩倩（１９８７—），女，在读博士．主要研究方向：花卉遗传改良．电话：１５２１００３６８５９；Ｅｍａｉｌ：ｓｈｉｑｉａｎｑｉａｎ２００５＠１６３．ｃｏｍ
通讯作者：王 雁，国家林业局林木培育重点实验室（中国林业科学研究院林业研究所），研究员．Ｅｍａｉｌ：ｃｈｗｙ８９１５＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ
摘要：以云南野生黄牡丹为试材，基于已构建的花瓣转录组数据库，筛选到了２４个与花色素苷合成相关的ｂＨＬＨ转
录因子蛋白同源性高的Ｕｎｉｇｅｎｅ序列，命名为ＰｌｂＨＬＨ１ ２４。通过开放阅读框（ＯＲＦ）的氨基酸序列比较和系统进
化树分析，发现ＰｌｂＨＬＨ３可能参与调控花色素苷合成，其ＯＲＦ包含一个 ２０４０ｂｐ的开放阅读框，编码一个６７９个氨
基酸的蛋白；其氨基酸序列与葡萄ＶｖＭＹＣ１和苹果ＭｄｂＨＬＨ３的亲缘关系最近，相似性达６０％以上。相对荧光定量
ＰＣＲ分析表明，ＰｌｂＨＬＨ３在黄牡丹和紫牡丹的不同组织中均有表达，在两者的花药，心皮和花瓣中的表达显著高于
在萼片和叶片中的表达；ＰｌｂＨＬＨ３在紫牡丹的硬蕾期高丰度表达，而在黄牡丹的硬蕾期表达量最低，在其他４个时
期的表达量显著或极显著高于在硬蕾期的表达量。本研究推测ＰｌｂＨＬＨ３参与黄牡丹花色素苷合成的调控作用，为
今后深入探讨黄牡丹花色形成机制奠定理论基础。
关键词：黄牡丹；ｂＨＬＨ；花色素合成；基因克隆；表达分析
中图分类号：Ｓ６８５．１１ 文献标识码：Ａ
ＩｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＰｌｂＨＬＨ３Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ
ＦａｃｔｏｒＧｅｎｅｓｉｎＰａｅｏｎｉａｌｕｔｅａ
ＳＨＩＱｉａｎｑｉａｎ，ＺＨＯＵＬｉｎ，ＬＩＫｕｉ，ＷＡＮＧＹａｎ
（ＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＴｒｅｅＢｒｅｅｄｉｎｇａｎｄＣｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ，ＳｔａｔｅＦｏｒｅｓｔｒｙＡｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ，ＲｅｓｅａｒｃｈＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＦｏｒｅｓｔｒｙ，
ＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＦｏｒｅｓｔｒｙ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １０００９１，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＴｗｅｎｔｙｆｏｕｒｕｎｉｇｅｎｅｓｅｑｕｅｎｃｅｓｓｈａｒｅｄｈｉｇｈｈｏｍｏｌｏｇｙｗｉｔｈｂＨＬＨｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒｐｒｏｔｅｉｎｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎ
ｐｌａｎｔａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓｗｅｒｅｏｂｔａｉｎｅｄｆｒｏｍｐｒｅｖｉｏｕｓｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄｔｒｅｅｐｅｏｎｙ（Ｐａｅｏｎｉａｌｕｔｅａ）ｐｅｔａｌｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｅ
ｄａｔａｂａｓｅａｎｄｎａｍｅｄａｓＰｌｂＨＬＨ１ ２４．Ｂｙａｍｉｎｏａｃｉｄｓｅｑｕｅｎｃｅｃｏｍｐａｒｉｎｇａｎｄｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃｔｒｅｅａｎａｌｙｓｉｓ，ｉｔｓｈｏｗｅｄ
ｔｈａｔＰｌｂＨＬＨ３ｗａｓｃｏｎｓｉｄｅｒｅｄｔｏｂｅｒｅｌａｔｅｄｔｏｒｅｇｕｌａｔｅａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，ｃｏｎｔａｉｎｅｄａ２０４０ｂｐＯＲＦｅｎｃｏｄｉｎｇ
６７９ａｍｉｎｏａｃｉｄｒｅｓｉｄｕｅｓｗｉｔｈｔｙｐｉｃａｌｂＨＬＨｓｔｒｕｃｔｕｒａｌｄｏｍａｉｎ；ｔｈｅｐｒｅｄｉｃｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆＰｌｂＨＬＨ３ａｌｓｏｓｈａｒｅｄ
ｈｉｇｈｓｉｍｉｌａｒｉｔｙｗｉｔｈｏｔｈｅｒｂＨＬＨｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒｔｈａｔｒｅｌａｔｅｄｔｏａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓｓｕｃｈａｓＶｖＭＹＣ１ａｎｄＭｄ
ｂＨＬＨ３．ＲｅｌａｔｉｖｅＲｅａｌＴｉｍｅＰＣＲａｎａｌｙｓｉｓｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔＰｌｂＨＬＨ３ｅｘｐｒｅｓｓｅｄｉｎｄｉｆｅｒｅｎｔｔｉｓｓｕｅｓｏｆＰ．ｌｕｔｅａａｎｄＰ．
ｄｅｌａｖａｙｉ，ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｃａｒｐｅｌ，ａｎｔｈｅｒａｎｄｐｅｔａｌｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈａｔｉｎｓｅｐａｌａｎｄｌｅａｆ；ＰｌｂＨＬＨ３
ｒｅａｃｈｅｄｔｈｅｈｉｇｈｅｓｔａｂｕｎｄａｎｃｅａｔｅａｒｌｙｓｔａｇｅｏｆＰ．ｌｕｔｅａ，．ＦｏｒＰ．ｄｅｌａｖａｙｉ，ｔｈｅＰｌｂＨＬＨ３ｒｅａｃｈｅｄｔｈｅｌｏｗｅｓｔｌｅｖｅｌａｔ
ｅａｒｌｙｓｔａｇｅ，ａｎｄｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｏｒｅｘｔｒｅｍｅｌｙｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｌｏｗｅｒｔｈａｎｔｈａｔｉｎｏｔｈｅｒｆｏｕｒｓｔａｇｅｓ．Ｉｎｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ，ｉｔｉｓｉｎ
ｆｅｒｅｄｔｈａｔＰｌｂＨＬＨ３ｍｉｇｈｔａｓｓｏｃｉａｔｅｗｉｔｈｔｈｅｒｅｇｕｌａｔｏｒｙｏｆａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓｉｎＰ．ｌｕｔｅａａｎｄｔｈｉｓｗｏｕｌｄｐｒｏｖｉｄｅ
ｔｈｅｂａｓｉｓｆｏｒｉｎｓｉｇｈｔｉｎｔｏｔｈｅｍｏｌｅｃｕｌａｒｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｕｎｄｅｒｌｙｉｎｇｔｒｅｅｐｅｏｎｙｙｅｌｏｗｆｌｏｗｅｒｐｉｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｐａｅｏｎｉａｌｕｔｅａ；ｂＨＬＨ；ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ；ｇｅｎｅｃｌｏｎｉｎｇ；ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓ
第４期 史倩倩等：云南野生黄牡丹ＰｌｂＨＬＨ３转录因子基因的克隆与表达
花色素主要包括类黄酮、类胡萝卜素、叶绿素和
甜菜色素及其衍生物，其中类黄酮是大多数花色形
成的决定性素群［１］，多分布于种子植物的叶、花、果
实、种子及其他组织的液泡中。花色素生物合成由
结构基因和调控基因共同调控［２］，其中目前研究证
明花色素合成的转录因子包括 ＭＹＢ蛋白、ｂＨＬＨ蛋
白和ＷＤ４０重复蛋白［３］。
ｂＨＬＨ（ｂａｓｉｃｈｅｌｉｘｌｏｏｐｈｅｌｉｘ，碱性螺旋－环－螺
旋）转录因子构成了真核生物蛋白质中的一个大家
族，其成员在生物的生长发育调控过程中起着非常
重要的作用。每个 ｂＨＬＨ基序约由６０个氨基酸组
成，其中的１９个位点具有高度保守性，含有两个亚
功能区，即位于Ｃ末端的ＨＬＨ区域和Ｎ末端的碱性
氨基酸区域［４］。ｂＨＬＨ转录因子在植物的花色素合
成［５］、花器官发育［６－７］、光形态建成［８］、激素应
答［９－１２］、金属离子体内平衡［１３－１４］等方面发挥重要
作用。目前拟南芥（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓｔｈａｌｉａｎａ）ＴＴ８、玉米
（Ｚｅａｍａｙｓ）（Ｌｃ、Ｂ、Ｒ／Ｂ）、水稻（ＯｒｙｚａｓａｔｉｖａＬｉｎｎ）
ＯＳＢ１、矮牵牛（Ｐｅｔｕｎｉａｈｙｂｒｉｄａ）（ＡＮ１、ＡＮ４、ＡＮ１１）、
金鱼草（Ａｎｔｉｒｈｉｎｕｍｍａｊｕｓ）Ｄｅｌｉｌａ、牵牛（Ｉｐｏｍｏｅａｎｉｌ）
（ＩｎＤＥＬ、ＩｎＩＶＳ、ＩｎｂＨＬＨ３）、非洲菊（Ｇｅｒｂｅｒａｊａｍｅｓｏ
ｎｉ）ｇｍｙｃ１、龙胆（Ｇｅｎｔｉａｎａｓｃａｂｒａ）ＧｔｂＨＬＨ１、亚洲杂
交百合（Ａｓｉａｎｈｙｂｒｉｄｌｉｌｙ）ＬｈｂＨＬＨ２、苹果（Ｍａｌｕｓｄｏ
ｍｅｓｔｉｃａ）ＭｄｂＨＬＨ３等多种植物的调控花色素合成相
关基因的ｂＨＬＨ转录因子得到了克隆并进行了功能
鉴定［１５－２８］。
云南野生黄牡丹（Ｐａｅｏｎｉａｌｕｔｅａ）是中国西南地
区特有种，属于芍药科芍药属牡丹组的落叶亚灌
木［２９－３２］，不仅是我国特有的珍贵木本花卉和具极高
药用价值的药用植物，而且是牡丹花色改良育种的
珍稀育种资源［３３］。目前虽然中原牡丹的花色素合
成途径的部分结构基因（ＰｓＣＨＳ１、ＰｓＣＨＩ１、ＰｓＤＦＲ１、
ＰｓＦ３Ｈ１、ＰｓＦ３’Ｈ１、ＰｓＡＮＳ１）已被分离［３４－３５］，但关于
黄牡丹的花色素代谢途径的结构基因和转录因子基
因ｂＨＬＨ还未见报道。因此本研究拟依据黄牡丹转
录组测序获得的 ｕｎｉｇｅｎｅ信息并结合 ＲＴＰＣＲ和
ＲＡＣＥ技术，克隆并筛选出与花色素苷相关的候选
ｂＨＬＨ基因，并对其在黄牡丹和紫牡丹（Ｐ．ｄｅｌａｖａｙｉ）
不同发育阶段和花盛开期的不同组织中的表达模式
进行分析，为探究 ｂＨＬＨ转录因子在黄牡丹花色形
成过程中的作用，特别是为牡丹花色定向遗传改良
和品种创新提供新的理论依据和基因资源。
１ 材料与方法
１．１ 实验材料
４月底至５月上旬，采取位于滇西北香格里拉
县城以西２５ｋｍ左右的滑雪场附近（２７°５７′Ｎ，９９°
３５′Ｅ）的黄牡丹（Ｐ．ｌｕｔｅａ）和紫牡丹（Ｐ．ｄｅｌａｖａｙｉ）的
５个时期（ｓｔａｇｅ１：硬蕾期、ｓｔａｇｅ２：圆桃期、ｓｔａｇｅ３：透
色期、ｓｔａｇｅ４：初开期和ｓｔａｇｅ５：盛开期）的花瓣及盛
开期（ｓｔａｇｅ５）的叶片、萼片、雄蕊和雌蕊，取下后分
别用锡箔纸包好，立即用液氮速冻后于 －８０℃冰箱
中保存备用。
Ａ：黄牡丹（左）和紫牡丹（右）盛开期的花；Ｂ：黄牡丹的５个开放时期
图１ 试验材料
９８４
林 业 科 学 研 究 第２８卷
１．２ 基因全长序列的克隆
采用改进的 ＣＴＡＢ法［３５］提取试验材料的总
ＲＮＡ。检测质量合格后，以１μｇ总 ＲＮＡ为模板，利
用ＭＭＬＶ反转录酶（Ｐｒｏｍｅｇａ公司）合成 ｃＤＮＡ第
一链。然后根据已测得的黄牡丹转录组数据库中的
ｂＨＬＨ转录因子Ｕｎｉｇｅｎｅ信息设计特异引物（表１）。
ＰＣＲ扩增产物经１．２％琼脂糖凝胶检测，凝胶回收
与预期片段大小一致的条带，连接到 ＰＭＤＴ１９载体
（Ｔａｋａｒａ）上，再转化到大肠杆菌 ＤＨ５ａ，通过蓝白筛
选及质粒酶切鉴定后，由北京中美泰和科技公司进
行测序。其中引物设计采用 ＰｒｉｍｅｒＰｒｅｍｉｅｒ５．０和
ＤＮＡＭＡＮ（ｖｅｒ．６．０．３．９９）软件进行。除 ＲＡＣＥ实验
中通用引物为试剂盒附带以外（序列见 ＳＭＡＲＴＴＭ
ＲＡＣＥｃＤＮＡＡｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎＫｉｔ说明书），其余各基因
扩增引物委托上海生工生物公司合成，序列如表
所示。
表１ 黄牡丹ｂＨＬＨ基因克隆及表达分析所用引物
作用 基因 Ｕｎｉｇｅｎｅ编号 引物序列（５’３’）
分离基因
ｑＲＴＰＣＲ
ＰｌｂＨＬＨ３ ＣＬ４９３８．ｃｏｎｔｉｇ２
ＰｌｂＨＬＨ５ ＣＬ６５３５．ｃｏｎｔｉｇ２
ＰｌｂＨＬＨ８ Ｕｎｉｇｅｎｅ９２７７
ＰｌｂＨＬＨ９ ＣＬ１０５８９．ｃｏｎｔｉｇ１
ＰｌｂＨＬＨ１１ Ｕｎｉｇｅｎｅ１４８３
ＰｌｂＨＬＨ１２ Ｕｎｉｇｅｎｅ２８６２
ＰｌｂＨＬＨ１５ Ｕｎｉｇｅｎｅ９５２２
ＰｌｂＨＬＨ１７ Ｕｎｉｇｅｎｅ９６１１
ＰｌｂＨＬＨ２４ Ｃｌ２９９７．ｃｏｎｔｉｇ６
ＰｌｂＨＬＨ３ ＣＬ４８９３．ｃｏｎｔｉｇ２
Ｈｅｌｉｃａｓｅ ＣＬ６０２９．Ｃｏｎｔｉｇ２
ＣＡＣＴＡＣＴＣＣＣＣＴＣＣＡＣＡＡＴＣＣＴＣＡＴＣＴ ５＇ＲＡＣＥ
ＴＴＴＡＧＣＧＴＧＣＣＡＴＴＴＣＴＴＣＡＣＡＡＣＡ ３＇ＲＡＣＥ
ＴＧＧＡＧＴＧＧＴＡＧＡＡＴＴＧＧＧＧＴＣＴＧＴＧ ３＇ＲＡＣＥ
ＣＣＴＴＴＧＣＴＴＣＴＣＡＧＧＣＴＧＴＡＴＧＧＴＴ ５＇ＲＡＣＥ
ＴＣＴＧＧＡＧＧＣＡＡＴＧＧＡＴＴＡＣＡＴＡＣＧＡＴ ３＇ＲＡＣＥ
ＡＡＧＧＧＧＴＴＴＧＣＣＡＴＡＴＣＧＣＴＧＡ ５＇ＲＡＣＥ
ＴＧＧＧＧＣＴＴＣＴＴＣＴＴＧＴＴＣＣＴＣＴＧＣ ３＇ＲＡＣＥ
ＴＣＣＴＡＧＣＴＴＴＣＴＴＴＡＧＡＧＣＣＣＣＡＣＣ ５＇ＲＡＣＥ
ＡＣＣＡＣＴＧＡＣＴＡＴＴＧＧＡＡＣＣＴＧＣＴＴＴＧ ５＇ＲＡＣＥ
ＴＣＣＣＡＧＴＴＣＧＧＴＴＧＧＡＡＴＧＴＡＴＧＡ ３＇ＲＡＣＥ
ＣＣＴＴＴＧＡＴＴＴＴＣＴＴＧＴＣＣＴＴＧＴＴＣＴＣＧ ５＇ＲＡＣＥ
ＡＧＡＧＧＣＡＡＡＧＡＧＧＴＣＧＴＡＴＧＡＡＧＴＧＧ ３＇ＲＡＣＥ
ＴＣＴＴＴＧＴＣＣＡＣＴＧＧＴＴＣＡＴＴＣＧＴＣＴＴ ５＇ＲＡＣＥ
ＧＡＣＣＴＡＴＣＣＣＡＣＴＣＡＡＧＣＡＣＣＴＣＣ ３＇ＲＡＣＥ
ＴＧＴＡＡＧＧＧＡＡＣＣＡＣＡＡＡＧＡＣＡＧＧＡＧＣ ５＇ＲＡＣＥ
ＡＧＴＣＧＧＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＴＡＡＴＧＧＡＡＡＧＧ ３＇ＲＡＣＥ
ＧＧＡＡＣＣＧＣＡＡＡＧＧＡＣＧＡＣＴＡ／ＣＧＴＡＧＧＣＧＧＣＡＡＡＣＴＡＴＣＣＡ
ＧＡＧＴＧＣＧＧＧＴＴＧＡＡＴＣＧＴＴＧ／ＡＡＧＡＴＴＴＣＴＧＧＡＴＡＧＧＴＣＴＧＴＧＧＣ
１．３ 生物信息学分析
利用ＤＮＡＭＡＮ６．０软件进行序列翻译和氨基酸
相似性比对，并通过 ＥｘＰＡＳＹＰｒｏｔｐａｒａｍ（ｈｔｐ：／／
ｗｗｗ．ｅｘｐａｓｙ．ｏｒｇ／ｃｏｍｐｕｔｅ＿ｐｉ／）运用 ＣｏｍｐｕｔｅｐＩ／Ｍｗ
软件对目的基因编码蛋白等电点和分子量进行预
测，并运用ＰｒｏｔＳｃａｌｅ软件对其疏水性预测分析。联
网至 ｈｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ／ｃｄｄ／．
ｗｒｐｓｂ．ｃｇｉ预测蛋白质保守结构域。利用ＭＥＧＡ５．２．
２软件中的ＮｅｉｇｈｂｏｒＪｏｉｎｉｎｇ（邻位相连法，ＮＪ）法进
行系统进化树分析。
１．４ ｑＲＴＰＣＲ表达分析
以Ｈｅｌｉｃａｓｅ为内参基因，应用 ｑＲＴＰＣＲ法分析
ＰｌｂＨＬＨ３在不同发育阶段和不同组织的表达模式，
引物序列见表 １。反转录反应体系为：总 ＲＮＡ２
μＬ，５×ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔＴＭＲＴＥｎｚｙｍｅＭｉｘⅠ１μＬ，Ｒａｎｄｏｍ
ｐｒｉｍｅｒ（１００μｍｏｌ·Ｌ－１）和 ＯｌｉｇｏｄＴｐｒｉｍｅｒ（５０μｍｏｌ
·Ｌ－１）各１μＬ，ＲＮＡｆｒｅｅＨ２Ｏ１１μＬ。参照ＴａＫａＲａ
公司的荧光定量试剂盒 ＳＴＢＲＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔＴＭＲＴＰＣＲ
Ｋｉｔ说明书，建立２０μＬ反应体系：ｃＤＮＡ模板２μＬ，
２×ＳＹＢＲＰｒｅｍｉｘＥｘＴａｑＴＭ１０μＬ，特异引物（１０μｍｏｌ
·Ｌ－１）０．４μＬ，５０×ＲＯＸＲｅｆｅｒｅｎｃｅＤｙｅⅡ０．４μＬ，
Ｈ２Ｏ６．８μＬ。荧光定量 ＰＣＲ在 ＡＢＩ７５００实时定量
ＰＣＲ仪上进行，反应程序为９５℃，３０ｓ；４０个循环：
９５℃，５ｓ；６０℃，３０ｓ；通过加热扩增产物 ６０至
９５℃，获得溶解曲线。每个试验设 ３次重复，利用
ＡＢＩ７５００ＰＣＲ仪 ＳｅｑｕｅｎｃｅＤｅｔｅｃｔｉｏｎｓｏｆｔｗａｒｅ软件进
行数据分析。
２ 结果与分析
２．１ 黄牡丹ＰｌｂＨＬＨ基因家族的分离及花色素苷相
关ｂＨＬＨ转录因子的筛选
对本课题组前期构建的黄牡丹花瓣转录组数据
库（未发表）进行 Ｂｌａｓｔｘ分析发现有 ３１个 Ｕｎｉｇｅｎｅ
注释为 ｂＨＬＨ转录因子（表 ２）。但其中同一 Ｕｎｉ
ｇｅｎｅ的不同 ｃｏｎｔｉｇ的序列一致性很高，如 ＣＬ６９７７．
ｃｏｎｔｉｇ１与 ＣＬ６９７７．ｃｏｎｔｉｇ２的序列一致，ＣＬ１０５８９．
０９４
第４期 史倩倩等：云南野生黄牡丹ＰｌｂＨＬＨ３转录因子基因的克隆与表达
ｃｏｎｔｉｇ１与 ＣＬ１０５８９．ｃｏｎｔｉｇ２ 序 列 完 全 相 同，
ＣＬ１３３９７．Ｃｏｎｔｉｇ１与 ＣＬ１３３９７．Ｃｏｎｔｉｇ２序列相同，
ＣＬ１４６６０．Ｃｏｎｔｉｇ１与 ＣＬ１４６６０．Ｃｏｎｔｉｇ２序列相似等。
据此推测２４个 ｂＨＬＨ序列可能参与调控花色素苷
合成。其中９个ｂＨＬＨ转录因子序列较短或均在保
守区域，需要根据ｕｎｉｇｅｎｅ信息设计特异引物，利用
ＲＡＣＥ技术对其进行ＯＲＦ全长扩增（表１）。然后将
这２４个ＰｌｂＨＬＨ成员与已经鉴定了调控花色素合成
的ｂＨＬＨ转录因子，如拟南芥 ＴＴ８、玉米（Ｌｃ、Ｂ、Ｒ／
Ｂ）、水稻 ＯＳＢ１、矮牵牛（ＡＮ１、ＡＮ４、ＡＮ１１）、金鱼草
Ｄｅｌｉｌａ、牵牛（Ｉｐｏｍｏｅａｐｕｒｐｕｒｅａ）（ＩｎＤＥＬ、ＩｎＩＶＳ、Ｉｎ
ｂＨＬＨ３）、非洲菊 ｇｍｙｃ１、龙胆 ＧｔｂＨＬＨ１、亚洲杂交百
合ＬｈｂＨＬＨ２、苹果（ＭｄｂＨＬＨ３、ＭｄｂＨＬＨ３３）等多种植
物进行系统进化树分析［１５－２８］（图２）。由图可见：Ｐｌ
ｂＨＬＨ３与葡萄 ＶｖＭＹＣ１先聚类在一起，再与苹果
ＭｄｂＨＬＨ３、矮牵牛 ＰｈＡＮ１聚为一枝，与其他植物调
控花色素合成的ｂＨＬＨ基因聚类在一起；而其他２３
个ｂＨＬＨ成员聚为一大枝；这说明ＰｌｂＨＬＨ３可能参
与花色素合成的调控。
表２ 与ｂＨＬＨ转录因子基因相关的２４个Ｕｎｉｇｅｎｅ基本信息
Ｕｎｉｇｅｎｅ编号 Ｕｎｉｇｅｎｅ长度／ｂｐ Ｂｌａｓｔｘ比对结果
ＣＬ６５３５．Ｃｏｎｔｉｇ１ １６３５ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒｂＨＬＨ１３［Ｖｉｔｉｓｖｉｎｉｆｅｒａ］
ＣＬ６９７７．Ｃｏｎｔｉｇ１ １２８４ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒｂＨＬＨ１２３ｌｉｋｅ［Ｖｉｔｉｓｖｉｎｉｆｅｒａ］
ＣＬ６９７７．Ｃｏｎｔｉｇ２ ３３０ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒｂＨＬＨ１２３ｌｉｋｅ［Ｖｉｔｉｓｖｉｎｉｆｅｒａ］
ＣＬ７９１０．Ｃｏｎｔｉｇ２ ７５３ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒｂＨＬＨ３５ｌｉｋｅ［Ｆｒａｇａｒｉａｖｅｓｃａｓｕｂｓｐ．ｖｅｓｃａ］
ＣＬ１０５８９．Ｃｏｎｔｉｇ１ １５９３ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒｂＨＬＨ４９ｌｉｋｅ［Ｖｉｔｉｓｖｉｎｉｆｅｒａ］
ＣＬ１０５８９．Ｃｏｎｔｉｇ２ ２４９ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒｂＨＬＨ４９ｌｉｋｅ［Ｖｉｔｉｓｖｉｎｉｆｅｒａ］
ＣＬ１３３９７．Ｃｏｎｔｉｇ１ ３９６ ＴｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒｂＨＬＨ６１ｉｓｏｆｏｒｍ２［Ｔｈｅｏｂｒｏｍａｃａｃａｏ］
ＣＬ１３３９７．Ｃｏｎｔｉｇ２ ４７７ ＴｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒｂＨＬＨ６１ｉｓｏｆｏｒｍ２［Ｔｈｅｏｂｒｏｍａｃａｃａｏ］
ＣＬ１４６６０．Ｃｏｎｔｉｇ１ １６２０ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒＩＣＥ１ｉｓｏｆｏｒｍ１［Ｖｉｔｉｓｖｉｎｉｆｅｒａ］
ＣＬ１４６６０．Ｃｏｎｔｉｇ２ １６２０ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒＩＣＥ１ｉｓｏｆｏｒｍ１［Ｖｉｔｉｓｖｉｎｉｆｅｒａ］
Ｕｎｉｇｅｎｅ１４８３ １００８ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒｂＨＬＨ６８［Ｖｉｔｉｓｖｉｎｉｆｅｒａ］
Ｕｎｉｇｅｎｅ２８６２ １４９１ ＴｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒｂＨＬＨ６９，ｐｕｔａｔｉｖｅｉｓｏｆｏｒｍ１［Ｔｈｅｏｂｒｏｍａｃａｃａｏ］
Ｕｎｉｇｅｎｅ６８９３ ６４５ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒｂＨＬＨ１０４ｌｉｋｅ［Ｖｉｔｉｓｖｉｎｉｆｅｒａ］
Ｕｎｉｇｅｎｅ９２７７ ４５６ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒｂＨＬＨ１１３ｌｉｋｅ［Ｆｒａｇａｒｉａｖｅｓｃａｓｕｂｓｐ．ｖｅｓｃａ］
Ｕｎｉｇｅｎｅ９２９３ ６９９ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒｂＨＬＨ５１ｌｉｋｅ［Ｖｉｔｉｓｖｉｎｉｆｅｒａ］
Ｕｎｉｇｅｎｅ９５２２ ８１９ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒｂＨＬＨ６３ｌｉｋｅ［Ｖｉｔｉｓｖｉｎｉｆｅｒａ］
Ｕｎｉｇｅｎｅ９５９６ ８６４ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒｂＨＬＨ７１［Ｖｉｔｉｓｖｉｎｉｆｅｒａ］
Ｕｎｉｇｅｎｅ９６１１ ８６１ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒｂＨＬＨ９６ｌｉｋｅ［Ｖｉｔｉｓｖｉｎｉｆｅｒａ］
Ｕｎｉｇｅｎｅ１１８０８ ２１６９ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒｂＨＬＨ１４０ｌｉｋｅ［Ｖｉｔｉｓｖｉｎｉｆｅｒａ］
Ｕｎｉｇｅｎｅ１２３５２ ２１１５ ＤＮＡｂｉｎｄｉｎｇｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙｐｒｏｔｅｉｎ，ｐｕｔａｔｉｖｅｉｓｏｆｏｒｍ１［Ｔｈｅｏｂｒｏｍａｃａｃａｏ］
Ｕｎｉｇｅｎｅ１３６１７ ９１８ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒＵＮＥ１２［Ｖｉｔｉｓｖｉｎｉｆｅｒａ］
Ｕｎｉｇｅｎｅ２０５０４ ７１１ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒｂＨＬＨ１４７［Ｖｉｔｉｓｖｉｎｉｆｅｒａ］
Ｕｎｉｇｅｎｅ２２８９０ ８３７ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒｂＨＬＨ７９ｉｓｏｆｏｒｍ１［Ｖｉｔｉｓｖｉｎｉｆｅｒａ］
ＣＬ２２５３．Ｃｏｎｔｉｇ１ ９３０ ＴｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒｂＨＬＨ６９，ｐｕｔａｔｉｖｅ［Ｔｈｅｏｂｒｏｍａｃａｃａｏ］
ＣＬ２２５３．Ｃｏｎｔｉｇ２ １０４１ ＴｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒｂＨＬＨ６９，ｐｕｔａｔｉｖｅ［Ｔｈｅｏｂｒｏｍａｃａｃａｏ］
ＣＬ２３０６．Ｃｏｎｔｉｇ２ ３７２ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒｂＨＬＨ６２ｌｉｋｅ［Ｖｉｔｉｓｖｉｎｉｆｅｒａ］
ＣＬ２３０６．Ｃｏｎｔｉｇ４ １２９９ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒｂＨＬＨ６２ｌｉｋｅ［Ｖｉｔｉｓｖｉｎｉｆｅｒａ］
ＣＬ２８４３．Ｃｏｎｔｉｇ１ ７８９ ｂＨＬＨｌｉｋｅＤＮＡｂｉｎｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ［Ｖｉｔｉｓｖｉｎｉｆｅｒａ］
ＣＬ２８４３．Ｃｏｎｔｉｇ２ ７８９ ｂＨＬＨｌｉｋｅＤＮＡｂｉｎｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ［Ｖｉｔｉｓｖｉｎｉｆｅｒａ］
ＣＬ２９９７．Ｃｏｎｔｉｇ６ ６４５ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒｂＨＬＨ４７ｌｉｋｅｉｓｏｆｏｒｍ１［Ｖｉｔｉｓｖｉｎｉｆｅｒａ］
ＣＬ２９９７．Ｃｏｎｔｉｇ７ ３８７ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒｂＨＬＨ４７ｌｉｋｅｉｓｏｆｏｒｍ１［Ｖｉｔｉｓｖｉｎｉｆｅｒａ］
２．２ 黄牡丹ＰｌｂＨＬＨ３ｃＤＮＡ序列分析
利用 ＮＣＢＩ提供的 ＯＲＦＦｉｎｄｅｒ进行分析发现
ＰｌｂＨＬＨ３ｃＤＮＡ包含一个 ２０４０ｂｐ的开放阅读框
（ｏｐｅｎｒｅａｄｉｎｇｆｒａｍｅ，ＯＲＦ）和一个ｐｏｌｙ（Ａ）尾巴，５’非
编码区长２６５ｂｐ，３’非编码区长１２７ｂｐ。其ＯＲＦ编
码一个含６７９个氨基酸的蛋白质（图３），Ｐｒｏｔｐａｒａｍ
（ｈｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｘｐａｓｙ．ｏｒｇ／ｃｏｍｐｕｔｅ＿ｐｉ／）预测所编码
蛋白的分子量（Ｍｗ）为 １６７．３６４ｋＤ，理论等电点
１９４
林 业 科 学 研 究 第２８卷
（ｐＩ）为４．９０。
ＩｐＢＨ２ａ：ＡＢＷ６９６８６；ＩｐＢＨ２ｂ：；ＡＢＷ６９６８７；ＩｐＢＨ２ｃ：
ＡＢＷ６９６８７；ＩｎＩＶＳ：ＢＡＥ９４３９４；ＩｔｂＨＬＨ２：ＢＡＤ１８９８４；
ＰｆＥＧＬ３：ＡＢ１０３１７２； ＰｆＦ３Ｇ１： ＢＡＣ５６９９８； ＰｈＡＮ１：
ＡＡＧ２５９２７； ＭｄｂＨＬＨ３： ＡＤＬ３６５９７； ＶｖＭＹＣ１：
ＡＣＣ６８６８５； ＡｔＴＴ８： ＡＪ２７７５０９； ＤｖＩＶＳ： ＢＡＪ３３５１６；
ＺｍＩＮ１： ＡＡＢ０３８４１； ＺｍＬＣ： ＡＢＤ７２７０７； ＺｍＢ：
ＣＡＡ４０５４４；ＯｓＲａ：ＡＡＣ４９２１９；ＭｄｂＨＬＨ３３：ＡＢＢ８４４７４；
ＡｔＭＹＣ１：ＢＡＡ１１９３３；ＡｔＥＧＬ３：ＮＰ＿１７６５５２；ＡｔＧＬ３：ＮＰ＿
６８０３７２；ＤｖＤＥＬ：ＢＡＪ３３５１６；ＡｍＤＥＬ：ＡＡＡ３２６６３；Ｐｆ
ＭＹＣＲＰ：ＢＡＡ７５５１３；ＰｈＪＡＦ１３：ＡＡＣ３９４５５；ＩｎＤＥＬ：
ＡＢ２３２７７４；ＩｎｂＨＬＨ３：ＢＡＥ９４３９５
图２ ＰｌｂＨＬＨ１ ２４与其他物种ｂＨＬＨ氨基酸序列
的系统进化树分析
Ｍ：ＤＮＡｍａｒｋｅｒＤＬ２０００．Ａ：５’ＲＡＣＥ扩增；Ｂ：３’ＲＡＣＥ扩增；
Ｃ：ＯＲＦ扩增产物
图３ 黄牡丹ＰｌｂＨＬＨ３基因的ＰＣＲ扩增电泳
利用 ＢｌａｓｔＰ对 ＰｌｂＨＬＨ３编码的蛋白保守域进行预
测发现，ＰｌｂＨＬＨ３编码的蛋白的保守结构域为 ＨＬＨ
（图４－Ａ）。在ＨＬＨ保守域的特异位点（图５）包括
由６个残基组成的ＤＮＡ结合位点（第４７２、４７３、４７４、
４７６、４９６、４９９个氨基酸残基），１个残基组成的 Ｅ
ｂｏｘ／Ｎｂｏｘ特异位点（第４７３个氨基酸残基）和１４个
残基构成的二聚接口（第 ４８１、４８２、４８５、４８６、４８８、
４８９、５０１、５０４、５０８、５０９、５１０、５１４、５１６、５１７个氨基酸
残基）；ＨＬＨ保守域的非特异位点分两类：一类是螺
旋－环－螺旋 ＤＮＡ结合域（图４－Ａ），另一类是ｈｅ
ｌｉｘｌｏｏｐｈｅｌｉｘ域（图４－Ａ），属于典型的碱性 －螺旋
－环 －螺旋（ｂａｓｉｃｈｅｌｉｘＬｏｏｐＨｅｌｉｘ）结构域。其编
码蛋白的疏水性分析表明，编码蛋白均为为亲水区
（图４－Ｂ）。三级结构预测，其模型相似度与４ｆ２ｌＢ
模型达到３４．５５％ （图 ４－Ｃ）。
Ａ．结构域分析；Ｂ疏水性分析．；Ｃ．三级结构预测
图４ 黄牡丹ＰｌｂＨＬＨ３基因的生物信息学分析
２９４
第４期 史倩倩等：云南野生黄牡丹ＰｌｂＨＬＨ３转录因子基因的克隆与表达
利用ＤＮＡＭＡＮ软件对黄牡丹 ＰｌｂＨＬＨ３编码氨
基酸与其他物种花色素苷合成相关的 ｂＨＬＨ蛋白进
行同源性分析。结果发现，黄牡丹 ＰｌｂＨＬＨ３与已知
其他植物的调控花色素合成的 ｂＨＬＨ蛋白氨基酸序
列有较高的同源性，其中与葡萄 ＶｖＭＹＣ１相似性最
高，达６３．３７％；其次与苹果 ＭｄｂＨＬＨ３和 ＰｈＡＮ１相
似性也较高，分别为 ６２．５０％和 ５１．９８％；与玉米
ＺｍＩＮ１和拟南芥ＡｔＴＴ８相似性最低，分别为３４．０３％
和３４．６５％ （图５）。氨基酸序列比对结果分析与构
建的系统进化树（图 ２）分析结果一致，说明 Ｐｌ
ｂＨＬＨ３基因参与花色素合成的调控。
方框处为ＤＮＡ结合位点；星号处为Ｅｂｏｘ／Ｎｂｏｘ特异位点；下划线处为二聚接口。
ＡｔＴＴ８：拟南芥，ＤｖＩＶＳ：大丽花 ，ＩｎＩＶＳ：牵牛花 ，ＭｄｂＨＬＨ３：苹果，ＰｆＥＧＬ３：白苏，ＰｈＡＮ１：矮牵牛，ＶｖＭＹＣ１：葡萄，ＺｍＩＮ１：玉米。
图５ ＰｌｂＨＬＨ３与其他植物氨基酸序列的同源性比较
２．３ 相对荧光定量ＰＣＲ表达分析
以黄牡丹Ｈｅｌｉｃａｓｅ基因为内参照，采用荧光定量
ＰＣＲ方法对黄牡丹和紫牡丹的不同发育时期（图６
－Ａ）和盛开期的不同组织（图６－Ｂ）中ＰｌｂＨＬＨ３的
表达进行检测，结果表明，ＰｌｂＨＬＨ３在黄牡丹和紫牡
丹的不同时期的表达模式不同，在紫牡丹的硬蕾期
高丰度表达，在其他４个开放时期的表达量相似，极
显著低于在硬蕾期的表达量；而在黄牡丹的硬蕾期
表达量最低，在其他４个时期的表达量显著或极显
著高于在硬蕾期的表达量，在第２、３、４时期的表达
量相似。
ＰｌｂＨＬＨ３在黄牡丹和紫牡丹盛开期的不同组织
中均有表达。在黄牡丹的组织中，表达量从高到低
依次为心皮、花药、花瓣、萼片和叶片，在叶片中的表
达量显著低于在其他组织中的表达量。而在紫牡丹
的花药中的表达量最高，其次是心皮和花瓣，在叶片
中的表达量最低。这与黄牡丹和紫牡丹的不同组织
的形态一致。
３９４
林 业 科 学 研 究 第２８卷
Ａ．ＰｌｂＨＬＨ３在不同发育阶段的表达模式，１ ５：花瓣的五个发育阶段 ；Ｂ．ＰｌｂＨＬＨ３在盛开期的不同组织中的表达
模式
□ 黄牡丹；■ 紫牡丹
图６ 在黄牡丹和紫牡丹中ＰｌｂＨＬＨ３转录因子的相对表达量
３ 讨论
ｂＨＬＨ转录因子蛋白具有典型的碱性螺旋 －环
－螺旋（ｂａｓｉｃＨｅｌｉｘＬｏｏｐＨｅｌｉｘ，ＨＬＨ）结构域，以二
聚体的形式结合到特异的ＤＮＡ序列上，调控下游基
因的表达［３６］。本研究分离得到的 ＰｌｂＨＬＨ３基因所
推测编码的蛋白序列也具有 ｂＨＬＨ结构域，表明黄
牡丹ＰｌｂＨＬＨ３基因属于ｂＨＬＨ类转录因子基因。
ｂＨＬＨ转录因子以多基因家族形式存在植物体
内，参与多种植物生命活动，如类黄酮生物合成［５］、
植物逆境胁迫响应［３７－３８］、雄蕊和花粉粒发育［６－７］
等，其中调节类黄酮生物合成是植物 ｂＨＬＨ转录因
子最重要的功能之一。Ｌｉ对拟南芥和水稻ｂＨＬＨ家
族基因序列和表达活性的研究表明序列相似的
ｂＨＬＨ基因在水稻和拟南芥中具有相似的功能［３９］。
本研究分离得到的２４个 ｂＨＬＨ基因中，ＰｌｂＨＬＨ３基
因所编码的蛋白质序列与调控花色素苷合成的
ｂＨＬＨ蛋白同源性较高如葡萄 ＶｖＭＹＣ１［４０］、苹果
ＭｄｂＨＬＨ３［４１］和矮牵牛 ＰｈＡＮ１［４２］，推测 ＰｌｂＨＬＨ３基
因可能参与调控黄牡丹花色素的生物合成。Ｐｌ
ｂＨＬＨ３基因的生物学功能还需后续工作进行阐明，
如探究其表达规律、研究基因功能等。
ｂＨＬＨ转录因子对植物花色素合成基因的表达
的调控作用，具有组织特异性。如金鱼草的 ｂＨＬＨ
转录因子 ＤＥＬＩＬＡ的表达具有较强的组织特异性，
主要在花冠、萼片、子叶和茎中起作用［４３］；矮牵牛
ＰｈＡＮ１在其花色素生物合成调控中起重要作用，主
要参 与 花 瓣 或 花 药 花 色 素 生 物 合 成 的 调
控［２５，４２，４４－４６］。ｂＨＬＨ转录因子与 ＭＹＢ蛋白相互作
用共同调控花色素的合成，如非洲菊的 Ｒ２Ｒ３ＭＹＢ
蛋白ＧＭＹＢ１０与ｂＨＬＨ蛋白 ＧＭＹＣ１相互作用共同
激活ＤＦＲ表达，且ＧＭＹＣ１具有较强的器官、组织和
花类型特异性。如其调节花冠和心皮中的 ＤＦＲ表
达，对冠毛和雄蕊中却不调节［４７］。本研究中，Ｐｌ
ｂＨＬＨ３在黄牡丹和紫牡丹的花药，心皮和花瓣中的
表达显著高于在萼片和叶片中的表达，这与两者的
不同组织的形态一致。
黄牡丹的花瓣的花色素成分主要为查尔酮和黄
酮、黄酮醇的混合物，包括２’，４’，６’，４四羟基查尔
酮、异杞柳苷及山奈酚、槲皮素、异鼠李素、金圣草素
等［４８，４９］，而紫牡丹的花瓣的花色素成分主要是芍药
花素３，５二葡糖苷［５０－５１］。ＰｌｂＨＬＨ３在紫牡丹的硬
蕾期高丰度表达；而在黄牡丹的硬蕾期表达量最低，
在其他４个时期的表达量显著或极显著高于在硬蕾
期的表达量，在第２、３、４时期的表达量相似，这与
ＰｓＤＦＲ１中原牡丹的紫色系和黑色系品种的花瓣的
整个着色过程中都保持较一致的表达水平，而在黄
色系品种的‘透色期’表达量达到最高，并随着花朵
的开放表达量逐渐降低［３５］。同时这与切花菊
（Ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｕｍ×ｍｏｒｉｆｏｌｉｕｍＲａｍａｔ．）的ｂＨＬＨ在不
同发育时期的表达模式基本一致，即转录因子
ｂＨＬＨ表达先于结构基因在蕾期即有强烈表达［５２］。
因此综合研究结果表明 ＰｌｂＨＬＨ３转录因子参与调
控黄牡丹的花色素合成，其如何发挥作用及与 ＭＹＢ
转录因子和ＷＤＲ重复蛋白的协调作用还需进一步
的探讨。
参考文献：
［１］黄金霞，王亮生，李晓梅，等．花色变异的分子基础与进化模式研
究进展［Ｊ］．植物学通报，２００６，２３（４）：３２１－３３３．
［２］ＨｏｌｔｏｎＴＡ，ＣｏｒｎｉｓｈＥＣ．Ｇｅｎｅｔｉｃｓａｎｄｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙｏｆａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎ
４９４
第４期 史倩倩等：云南野生黄牡丹ＰｌｂＨＬＨ３转录因子基因的克隆与表达
ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＣｅｌ，１９９５，７（７）：１０７１－１０８３．
［３］ＲａｍｓａｙＮＡ，ＧｌｏｖｅｒＢＪ．ＭＹＢｂＨＬＨＷＤ４０ｐｒｏｔｅｉｎｃｏｍｐｌｅｘａｎｄ
ｔｈｅｅｖｏｌｕｔｉｏｎｏｆｃｅｌｕｌａｒｄｉｖｅｒｓｉｔｙ［Ｊ］．ＴｒｅｎｄｓＰｌａｎｔＳｃｉ，２００５，１０
（２）：６３－７０．
［４］张全琪，朱家红，倪燕妹，等．植物ｂＨＬＨ转录因子的结构特点及
其生物学功能［Ｊ］．热带亚热带植物学报，２０００，１９（１）：８４－９０．
［５］ＮｅｓｉＮ，ＤｅｂｅａｕｊｏｎＩ，ＪｏｎｄＣ，ｅｔａｌ．ＴｈｅＴＴ８ｇｅｎｅｅｎｃｏｄｅｓａｂａｓｉｃ
ｈｅｌｉｘｌｏｏｐｈｅｌｉｘｄｏｍａｉｎｐｒｏｔｅｉｎｒｅｑｕｉｒｅｄｆｏｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＤＦＲａｎｄ
ＢＡＮｇｅｎｅｓｉｎＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓｓｉｌｉｑｕｅｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＣｅｌ，２０００，１２（１０）：
１８６３－１８７８．
［６］ＨｅｉｓｌｅｒＭＧ，ＡｔｋｉｎｓｏｎＡ，ＢｙｌｓｔｒａＹＨ，ｅｔａｌ．ＳＰＡＴＵＬＡ，ａｇｅｎｅｔｈａｔ
ｃｏｎｔｒｏｌｓｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｃａｒｐｅｌｍａｒｇｉｎｔｉｓｓｕｅｓｉｎＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ，ｅｎｃｏｄｅｓ
ａｂＨＬＨｐｒｏｔｅｉｎ［Ｊ］．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，２００１，１２８：１０８９－１０９８．
［７］ＳｏｒｅｎｓｅｎＡＭ，ＫｒｂｅｒＳ，ＵｎｔｅＵＳ，ｅｔａｌ．ＴｈｅＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ
ＡＢＯＲＴＥＤＭＩＣＲＯＳＰＯＲＥＳ（ＡＭＳ）ｇｅｎｅｅｎｃｏｄｅｓａＭＹＣｃｌａｓｓｔｒａｎ
ｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＪ，２００３，３３（２）：４１３－４２３．
［８］ＬｅｉｖａｒＰ，ＭｏｎｔｅＥ，ＯｋａＹ，ｅｔａｌ．Ｍｕｌｔｉｐｌｅｐｈｙｔｏｃｈｒｏｍｅｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇ
ｂＨＬＨｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒｓｒｅｐｒｅｓｓｐｒｅｍａｔｕｒｅｓｅｅｄｌｉｎｇｐｈｏｔｏｍｏｒｐｈｏ
ｇｅｎｅｓｉｓｉｎｄａｒｋｎｅｓｓ［Ｊ］．ＣｕｒＢｉｏｌ，２００８，１８（２３）：１８１５－１８２３．
［９］ＡｂｅＨ，ＵｒａｏＴ，ＩｔｏＴ，ｅｔａｌ．ＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓＡｔＭＹＣ２（ｂＨＬＨ）ａｎｄＡｔ
ＭＹＢ２（ＭＹＢ）ｆｕｎｃｔｉｏｎａｓｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌａｃｔｉｖａｔｏｒｓｉｎａｂｓｃｉｓｉｃａｃｉｄ
ｓｉｇｎａｌｉｎｇ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＣｅｌ，２００３，１５（１）：６３－７８．
［１０］ＬｏｒｅｎｚｏＯ，ＣｈｉｃｏＪＭ，ＳáｎｃｈｅｚＳｅｒａｎｏＪＪ，ｅｔａｌ．ＪＡＳＭＯＮＡＴＥ
ＩＮＳＥＮＳＩＴＩＶＥ１ｅｎｃｏｄｅｓａＭＹＣｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒｅｓｓｅｎｔｉａｌｔｏｄｉｓ
ｃｒｉｍｉｎａｔｅｂｅｔｗｅｅｎｄｉｆｅｒｅｎｔｊａｓｍｏｎａｔｅｒｅｇｕｌａｔｅｄｄｅｆｅｎｓｅｒｅｓｐｏｎｓｅｓｉｎ
Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＣｅｌ，２００４，１６（７）：１９３８－１９５０．
［１１］ＬｉＨ，ＳｕｎＪ，ＸｕＹ，ｅｔａｌ．ＴｈｅｂＨＬＨｔｙｐｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒ
ＡｔＡＩＢｐｏｓｉｔｉｖｅｌｙｒｅｇｕｌａｔｅｓＡＢＡｒｅｓｐｏｎｓｅｉｎＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ．ＰｌａｎｔＭｏｌ
Ｂｉｏｌ．２００７，６５（５）：６５５－６６５．
［１２］ＢｏｕＴｏｒｅｎｔＪ，ＲｏｉｇＶｉｌａｎｏｖａＩ，ＧａｌｓｔｙａｎＡ，ｅｔａｌ．ＰＡＲ１ａｎｄ
ＰＡＲ２ｉｎｔｅｇｒａｔｅｓｈａｄｅａｎｄｈｏｒｍｏｎｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌｎｅｔｗｏｒｋｓ［Ｊ］．
ＰｌａｎｔＳｉｇｎａｌＢｅｈａｖ．２００８，３（７）：４５３－４５４．
［１３］ＲａｍｐｅｙＲＡ，ＷｏｏｄｗａｒｄＡＷ，ｅｔａｌ．ＡｎＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓｂａｓｉｃｈｅｌｉｘ
ｌｏｏｐｈｅｌｉｘｌｅｕｃｉｎｅｚｉｐｐｅｒｐｒｏｔｅｉｎｍｏｄｕｌａｔｅｓｍｅｔａｌｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓａｎｄ
ａｕｘｉｎｃｏｎｊｕｇａｔｅｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｎｅｓｓ［Ｊ］．Ｇｅｎｅｔｉｃｓ．２００６，１７４（４）：１８４１
－１８５７．
［１４］ＬｏｎｇＴＡ，ＴｓｕｋａｇｏｓｈｉＨ，ＢｕｓｃｈＷ，ｅｔａｌ．ＴｈｅｂＨＬＨｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ
ｆａｃｔｏｒＰＯＰＥＹＥｒｅｇｕｌａｔｅｓｒｅｓｐｏｎｓｅｔｏｉｒｏｎｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙｉｎＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ
ｒｏｏｔｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＣｅｌ，２０１０，２２（７）：２２１９－２２３６．
［１５］ＬｕｄｗｉｇＳＲ，ＨａｂｅｒａＬＦ，ＤｅｌａｐｏｒｔａＳＬ，ｅｔａｌ．Ｌｃ，ａｍｅｍｂｅｒｏｆｔｈｅ
ｍａｉｚｅＲｇｅｎｅｆａｍｉｌｙｒｅｓｐｏｎｓｉｂｌｅｆｏｒｔｉｓｓｕｅｓｐｅｃｉｆｉｃａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎｐｒｏ
ｄｕｃｔｉｏｎ，ｅｎｃｏｄｅｓａｐｒｏｔｅｉｎｓｉｍｉｌａｒｔｏｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌａｃｔｉｖａｔｏｒｓａｎｄ
ｃｏｎｔａｉｎｓｔｈｅｍｙｃｈｏｍｏｌｏｇｙｒｅｇｉｏｎ［Ｊ］．ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ，
１９９８，８６（１８）：７０９２－７０９６．
［１６］ＣｈａｎｄｌｅｒＶＬ，ＲａｄｉｅｅｌａＪＰ，ＲｏｂｂｉｎｓＴＰ，ｅｔａｌ．Ｔｗｏｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ
ｇｅｎｅｓｏｆｔｈｅｍａｉｚｅａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎｐａｔｈｗａｙａｒｅｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ：Ｉｓｏｌａｔｉｏｎｏｆ
ＢｕｔｉｌｉｚｉｎｇＲｇｅｎｏｍｉｃｓｅｑｕｅｎｅｅｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＣｅｌ，１９８９，１（１２）：１１７５
－１１８３．
［１７］ＧｏｆＳＡ，ＣｏｎｅＫＣ，ＣｈａｎｄｌｅｒＶＬ．Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌａｎａｌｙｓｉｓｏｆｔｈｅ
ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌａｃｔｉｖａｔｏｒｅｎｃｏｄｅｄｂｙｔｈｅｍａｉｚｅＢｇｅｎｅ：ｅｖｉｄｅｎｃｅｆｏｒａ
ｄｉｒｅｃｔｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎｔｗｏｃｌａｓｓｅｓｏｆｒｅｇｕｌａｔｏｒｙｐｒｏｔｅｉｎｓ
［Ｊ］．ＧｅｎｅｓＤｅｖ．，１９９２，６（５）：８６４－８７５．
［１８］ＧｏｏｄｒｉｃｈＪ，ＣａｒｐｅｎｔｅｒＲａｎｄＣｏｅｎＥＳ．１９９２．Ａｃｏｍｍｏｎｇｅｎｅ
ｒｅｇｕｌａｔｅｓｐｉｇｍｅｎｔａｔｉｏｎｐａｔｅｎｉｎｄｉｖｅｒｓｅｐｌａｎｔｓｐｅｃｉｅｓ．Ｃｅｌ，６８（５）：
９５５－９６４．
［１９］ＥｌｏｍａａＰ，ＭｅｈｔｏＭ，ＫｏｔｉｌａｉｎｅｎＭ，ｅｔａｌ．ＡｂＨＬＨｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ
ｆａｃｔｏｒｍｅｄｉａｔｅｓｏｒｇａｎ，ｒｅｇｉｏｎａｎｄｆｌｏｗｅｒｔｙｐｅｓｐｅｃｉｆｉｃｓｉｇｎａｌｓｏｎｄｉ
ｈｙｄｒｏｆｌａｖｏｎｏｌ４ｒｅｄｕｃｔａｓｅ（ｄｆｒ）ｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｔｈｅｉｎｆｌｏｒｅｓｃｅｎｃｅ
ｏｆＧｅｒｂｅｒａｈｙｂｒｉｄａ（Ａｓｔｅｒａｃｅａｅ）．ＰｌａｎｔＪ．，１９９８，１６（１）：９３－９９．
［２０］ＳａｋａｍｏｔｏＷ，ＯｈｍｏｒｉＴ，ＫａｇｅｙａｍａＫ，ｅｔａｌ．Ｔｈｅｐｕｒｐｌｅｌｅａｆ（Ｐｌ）
ｌｏｃｕｓｏｆｒｉｃｅ：Ｔｈｅｐｌａｌｅｌｅｈａｓａｃｏｍｐｌｅｘｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎａｎｄｉｎｃｌｕｄｅｓ
ｔｗｏＧｅｎｅｓｅｎｃｏｄｉｎｇｂａｓｉｅｈｅｌｉｘｌｏｏｐｈｅｌｉｘｐｒｏｔｅｉｎｓｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎａｎｔｈｏ
ｃｙａｎｉｎｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ．ＰｌａｎｔＣｅｌＰｈｙｓｉｏｌ，２００１，４２（９）：９８２－９９１．
［２１］ＰａｒｋＫ，ＩｓｈｉｋａｗａＮ，ＭｏｒｉｔａＹ，ｅｔａｌ．ＡｂＨＬＨｒｅｇｕｌａｔｏｒｙｇｅｎｅｉｎ
ｔｈｅｃｏｍｍｏｎｍｏｒｎｉｎｇｇｌｏｒｙ，ＩｐｏｍｏｅａＰｕｒｐｕｒｅａ，ｃｏｎｔｒｏｌｓａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎ
ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓｉｎｆｌｏｗｅｒｓ，ｐｒｏａｎｔｈｏｃｙａｎｉｄｉｎａｎｄｐｈｙｔｏｌｎｅｌａｎｉｎｐｉｇｍｅｎ
ｔａｔｉｏｎｉｎｓｅｅｄｓ，ａｎｄｓｅｅｄｔｒｉｃｈｏｍｅｆｏｒｍａｔｉｏｎ．ＴｈｅＰｌａｎｔＪｏｕｍａｌ，
２００７ｂ，４９（４）：６４１－６５４
［２２］ＮａｋａｔｓｕｋａＴ，ＨａｒｕｔａＫＳ，ＰｉｔａｋｓｕｔｈｅｅｐｏｎｇＣ，ｅｔａｌ．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ
ａｎｄｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆＲ２Ｒ３ＭＹＢａｎｄｂＨＬＨｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒｓ
ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓｉｎｇｅｎｔｉａｎｆｌｏｗｅｒｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＣｅｌ
Ｐｈｙｓｉｏｌ．２００８，４９：１８１８－１８２９．
［２３］ＥｓｐｌｅｙＲＶ，ＨｅｌｅｎｓＲＰ，ＰｕｔｅｒｉｌＪ，ｅｔａｌ．Ｒｅｄｃｏｌｏｕｒａｔｉｏｎｉｎａｐ
ｐｌｅｆｒｕｉｔｄｕｅｔｏｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｔｈｅＭＹＢｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒ，Ｍｄ
ＭＹＢ１０［Ｊ］．ＰｌａｎｔＪ．，２００７，４９：４１４－４２７．
［２４］ＦｒａｎｋｅｎＰ．，ＳｃｈｒｅｌＳ．，ＰｅｔｅｒｓｏｎＰＡ．，ｅｔａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒａｎａｌｙｓｉｓ
ｏｆｐｒｏｔｅｉｎｄｏｍａｉｎｆｕｎｃｔｉｏｎｅｎｃｏｄｅｄｂｙｔｈｅｍｙｂｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓｍａｉｚｅ
ｇｅｎｅｓＣＩ，Ｚｍ１ａｎｄＺｍ３８［Ｊ］．ＴｈｅＰｌａｎｔＪｏｕｒｎａｌ，１９９４，６（１）：２１
－３０．
［２５］ＳｐｅｌｔＣ，ＱｕａｔｒｏｃｃｈｉｏＦ，ＭｏｌＪＮＭ，ｅｔａｌ．Ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎ１ｏｆｐｅｔｕｎｉａ
ｅｎｃｏｄｅｓａｂａｓｉｃｈｅｌｉｘｌｏｏｐｈｅｌｉｘｐｒｏｔｅｉｎｔｈａｔｄｉｒｅｃｔｌｙａｃｔｉｖａｔｅｓｔｒａｎ
ｓｃｒｉｐｔｉｏｎｏｆｓｔｒｕｃｔｕｒａｌａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎｇｅｎｅｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＣｅｌ，２０００，１２
（９）：１６１９－１６３１．
［２６］ＹａｍａｇｉｓｈｉＭ，ＳｈｉｍｏｙａｍａｄａＹ，ＮａｋａｔｓｕｋａＴ，ｅｔａｌ．ＴｗｏＲ２Ｒ３
ＭＹＢｇｅｎｅｓ，ｈｏｍｏｌｏｇｓｏｆｐｅｔｕｎｉａＡＮ２，ｒｅｇｕｌａｔｅａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎｂｉｏｓｙｎ
ｔｈｅｓｅｓｉｎｆｌｏｗｅｒｔｅｐａｌｓ，ｔｅｐａｌｓｐｏｔｓａｎｄｌｅａｖｅｓｏｆＡｓｉａｔｉｃｈｙｂｒｉｄｌｉｌｙ
［Ｊ］．ＰｌａｎｔＣｅｌＰｈｙｓｉｏｌ，２０１０，５１：４６３－４７４．
［２７］ＷａｎｇＫｕｉｌｉｎ，Ｂｏｌｉｔｈｏ，Ｋ．，Ｇｒａｆｔｏｎ，Ｋ．，ｅｔａｌ．ＡｎＲ２Ｒ３ＭＹＢ
ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｔｈｅａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎｂｉｏ
ｓｙｎｔｈｅｔｉｃｐａｔｈｗａｙｉｎＲｏｓａｃｅａｅ［Ｊ］．ＢＭＣＰｌａｎｔＢｉｏｌｏｇｙ，２０１０，
１０：５０．
［２８］王 勇，陈克平，姚 勤．ｂＨＬＨ转录因子家族研究进展［Ｊ］．遗
传，２００８，３０（７）：８２１－８３０．
［２９］方文培．中国芍药属植物的研究［Ｊ］．植物分类学报，１９５８，７
（４）：２９７－３２３．
［３０］王莲英．中国牡丹品种图志［Ｍ］．北京：中国林业出版社，
１９９７，２－７．
［３１］李嘉珏．中国牡丹与芍药［Ｍ］．北京：中国林业出版社，１９９９．
［３２］龚 询．滇牡丹复合群体分类研究［Ｊ］．７昆明植物研究
所，１９９０．
［３３］王志芳，王 雁，岳 桦．珍稀资源：黄牡丹［Ｊ］．中国城市林
业，２００７，５（２）：５９－６０．
［３４］ＺｈｏｕＬ，ＷａｎｇＹ，ＲｅｎＬ，ｅｔａｌ．ＯｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＰｌＣＨＩ１，ａ
ｈｏｍｏｌｏｇｕｅｏｆｔｈｅｃｈａｌｃｏｎｅｉｓｏｍｅｒａｓｅｇｅｎｅｆｒｏｍｔｒｅｅｐｅｏｎｙ（Ｐａｅｏｎｉａ
５９４
林 业 科 学 研 究 第２８卷
ｓｕｆｒｕｔｉｃｏｓａ），ｒｅｄｕｃｅｓｔｈｅｉｎｔｅｎｓｉｔｙｏｆｆｌｏｗｅｒｐｉｇｍｅｎｔａｔｉｏｎｉｎｔｒａｎｓ
ｇｅｎｉｃｔｏｂａｃｃｏ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＣｅｌ，ＴｉｓｓｕｅａｎｄＯｒｇａｎＣｕｌｔｕｒｅ，２０１４，１６
（３）：２８５－２９５．
［３５］ＺｈｏｕＬ，ＷａｎｇＹ，ＰｅｎｇＺ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎａｎｄｅｘｐｒｅｓ
ｓｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓｏｆｃｈａｌｃｏｎｅｓｙｎｔｈａｓｅｇｅｎｅｄｕｒｉｎｇｆｌｏｗｅｒｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｉｎ
ｔｒｅｅｐｅｏｎｙ（Ｐａｅｏｎｉａｓｕｆｒｕｔｉｃｏｓａ）［Ｊ］．ＡｆｒＪＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，２０１１，１０
（８）：１２７５－１２８４．
［３６］ＦａｎＣ，ＰｕｒｕｇｇａｎａｎＭＤ，ＴｈｏｍａｓＤＴ，ｅｔａｌ．Ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｏｕｓｅｖｏ
ｌｕｔｉｏｎｏｆｔｈｅＭｙｃｌｉｋｅＡｎｔｈｏｃｙａｎｉｎｒｅｇｕｌａｔｏｒｙｇｅｎｅａｎｄｉｔｓｐｈｙｌｏｇｅ
ｎｅｔｉｃｕｔｉｌｉｔｙｉｎＣｏｒｎｕｓＬ．（Ｃｏｒｎａｃｅａｅ）［Ｊ］．ＭｏｌＰｈｙｌｏｇｅｎｅｔＥｖｏｌ，
２００４，３３（３）：５８０－５９４．
［３７］ＪｉａｎｇＹ，ＤｅｙｈｏｌｏｓＭＫ．Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌｐｒｏｆｉｌｉｎｇｏｆ
ＮａＣｌ－ｓｔｒｅｓｓｅｄＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓｒｏｏｔｓｒｅｖｅａｌｓｎｏｖｅｌｃｌａｓｓｅｓｏｆｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ
ｇｅｎｅｓ［Ｊ］．ＢＭＣＰｌａｎｔＢｉｏｌ，２００６，６（１）：２５．
［３８］ＪｉａｎｇＹ，ＹａｎｇＢ，ＤｅｙｈｏｌｏｓＭＫ．Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆｔｈｅ
ＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓｂＨＬＨ９２ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒｉｎａｂｉｏｔｉｃｓｔｒｅｓｓ［Ｊ］．Ｍｏｌ
ＧｅｎｅｔＧｅｎｏｍｉｃｓ，２００９，２８２（５）：５０３－５１６．
［３９］ＬｉＸＸ，ＤｕａｎＸＰ，ＪｉａｎｇＨＸ，ｅｔａｌ．Ｇｅｎｏｍｅｗｉｄｅａｎａｌｙｓｉｓｏｆｂａｓｉｃ／
ｈｅｌｉｘｌｏｏｐｈｅｌｉｘｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒｆａｍｉｌｙｉｎｒｉｃｅａｎｄＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ
［Ｊ］．ＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，２００６，１４１（４）：１１６７－１１８４．
［４０］ＨｉｃｈｒｉＩ，ＨｅｐｐｅｌＳＣ，ＰｉｌｅｔＪ，ｅｔａｌ．Ｔｈｅｂａｓｉｃｈｅｌｉｘｌｏｏｐｈｅｌｉｘ
ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒＭＹＣ１ｉｓｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｔｈｅｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｆｌａ
ｖｏｎｏｉｄｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓｐａｔｈｗａｙｉｎｇｒａｐｅｖｉｎｅ［Ｊ］．ＭｏｌＰｌａｎｔ，２０１０，３
（３）：５０９－５２３．
［４１］ＸｉｅＸＢ，ＬｉＳ，ＺｈａｎｇＲＦ，ｅｔａｌ．ＴｈｅｂＨＬＨｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒ
ＭｄｂＨＬＨ３ｐｒｏｍｏｔｅｓａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎａｎｄｆｒｕｉｔｃｏｌｏｕｒａｔｉｏｎ
ｉｎｒｅｓｐｏｎｓｅｔｏｌｏｗｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｉｎａｐｐｌｅｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＣｅｌＥｎｖｉｒｏｎ，
２０１２，３５（１１）：１８８４－１８９７．
［４２］ＱｕａｔｒｏｃｃｈｉｏＦ，ＷｉｎｇＪＦ，ＶａＫ，ｅｔａｌ．ＡｎａｌｙｓｉｓｏｆｂＨＬＨａｎｄ
ＭＹＢｄｏｍａｉｎｐｒｏｔｅｉｎｓ：ｓｐｅｃｉｅｓｓｐｅｃｉｆｉｃｒｅｇｕｌａｔｏｒｙｄｉｆｅｒｅｎｃｅｓａｒｅ
ｃａｕｓｅｄｂｙｄｉｖｅｒｇｅｎｔｅｖｏｌｕｔｉｏｎｏｆｔａｒｇｅｔａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎｇｅｎｅｓ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ
Ｊ，１９９８，１３（４）：４７５－４８８．
［４３］ＭａｒｔｉｎＣ，ＰｒｅｓｃｏｔＡ，ＭａｃｋａｙＳ，ｅｔａｌ．Ｃｏｎｔｒｏｌｏｆａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎｂｉｏ
ｓｙｎｔｈｅｓｉｓｉｎｆｌｏｗｅｒｓｏｆＡｎｔｉｒｈｉｎｕｍｍａｊｕｓ．ＰｌａｎｔＪ．１９９１，１（１）：３７
－４９．
［４４］ＱｕａｔｒｏｃｃｈｉｏＦ，ＷｉｎｇＪＦ，ＬｅｐｐｅｎＨ，ｅｔａｌ．Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙｇｅｎｅｓｃｏｎ
ｔｒｏｌｉｎｇａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎｐｉｇｍｅｎｔａｔｉｏｎａｒｅｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｙｃｏｎｓｅｒｖｅｄａｍｏｎｇ
ｐｌａｎｔｓｐｅｃｉｅｓａｎｄｈａｖｅｄｉｓｔｉｎｃｔｓｅｔｓｏｆｔａｒｇｅｔｇｅｎｅｓ［Ｊ］．ＴｈｅＰｌａｎｔ
Ｃｅｌ，１９９３，５（１１）：１４９７－１５１２．
［４５］ＱｕａｔｒｏｃｃｈｉｏＦ，ＢａｕｄｒｙＡ，ＬｅｐｉｎｉｅｃＬ，ｅｔａｌ．Ｔｈｅｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｆｌａ
ｖｏｎｏｉｄｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ．Ｉｎ：ＧｒｏｔｅｗｏｌｄＥ（ｅｄ）Ｔｈｅｓｃｉｅｎｃｅｏｆｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ
［Ｊ］．ＮｅｗＹｏｒｋ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，ｐｐ．２００６：９７－１２２．
［４６］ｄｅＶｅｔｅｎＮ，ＱｕａｔｒｏｃｃｈｉｏＦ，ＭｏｌＪ，ｅｔａｌ．Ｔｈｅａｎ１１ｌｏｃｕｓｃｏｎｔｒｏｌ
ｌｉｎｇｆｌｏｗｅｒｐｉｇｍｅｎｔａｔｉｏｎｉｎｐｅｔｕｎｉａｅｎｃｏｄｅｓａｎｏｖｅｌＷＤｒｅｐｅａｔｐｒｏ
ｔｅｉｎｃｏｎｓｅｒｖｅｄｉｎｙｅａｓｔ，ｐｌａｎｔｓ，ａｎｄａｎｉｍａｌｓ［Ｊ］．Ｇｅｎｅｓ＆Ｄｅｖｅｌｏｐ
ｍｅｎｔ，１９９７，１１：１４２２－１４３４．
［４７］ＥｌｏｍａａＰ，ＭｅｈｔｏＭ，ＫｏｔｉｌａｉｎｅｎＭ，ｅｔａｌ．ＡｂＨＬＨｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ
ｆａｃｔｏｒｍｅｄｉａｔｅｓｏｒｇａｎ，ｒｅｇｉｏｎａｎｄｆｌｏｗｅｒｔｙｐｅｓｐｅｃｉｆｉｃｓｉｇｎａｌｓｏｎｄｉ
ｈｙｄｒｏｆｌａｖｏｎｏｌ４ｒｅｄｕｃｔａｓｅ（ｄｆｒ）ｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｔｈｅｉｎｆｌｏｒｅｓｃｅｎｃｅ
ｏｆＧｅｒｂｅｒａｈｙｂｒｉｄａ（Ａｓｔｅｒａｃｅａｅ）．ＰｌａｎｔＪ．，１９９８，１６（１）：９３－９９．
［４８］ＬｉＣ，ＤｕＨ，ＷａｎｇＬ，ｅｔａｌ．Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎａｎｄａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ
ａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｔｒｅｅｐｅｏｎｙ（ＰａｅｏｎｉａｓｅｃｔｉｏｎＭｏｕｔａｎ）ｙｅｌｏｗｆｌｏｗｅｒｓ［Ｊ］．Ｊ
ＡｇｒｉｃＦｏｏｄＣｈｅｍ，２００９，５７：８４９６－８５０３．
［４９］周 琳，王 雁，律春燕，等．云南野生黄牡丹花色素成分的鉴
定［Ｊ］．东北林业大学学报，２０１１，３９（８）：５２－５４．
［５０］ＷａｎｇＬＳ，ＨａｓｈｉｍｏｔｏＦ，ＳｈｉｒａｉｓｈｉＡ，ｅｔａｌ．Ｐｈｅｎｅｔｉｃｓｉｎｔｒｅｅｐｅｏｎｙ
ｓｐｅｃｉｅｓｆｒｏｍＣｈｉｎａｂｙｆｌｏｗｅｒｐｉｇｍｅｎｔｃｌｕｓｔｅｒａｎａｌｙｓｉｓ［Ｊ］．ＪＰｌａｎｔ
Ｒｅｓ，２００１ａ，１１４：２１３－２２１．
［５１］ＷａｎｇＬＳ，ＳｈｉｒａｉｓｈｉＡ，ＨａｓｈｉｍｏｔｏＦ，ｅｔａｌ．Ａｎａｌｙｓｉｓｏｆｐｅｔａｌａｎ
ｔｈｏｃｙａｎｉｎｓｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｆｌｏｗｅｒｃｏｌｏｒａｔｉｏｎｏｆＺｈｏｎｇｙｕａｎ（Ｃｈｉｎｅｓｅ）
ａｎｄＤａｉｋｏｎＩｓｌａｎｄ（Ｊａｐａｎｅｓｅ）ｔｒｅｅｐｅｏｎｙｃｕｌｔｉｖａｒｓ［Ｊ］．ＪＰｌａｎｔＲｅｓ，
２００１ｂ，１１４：３３－４３．
［５２］韩科厅，赵 莉，唐杏姣，等．菊花花色素苷合成关键基因表达
与花色表型的关系［Ｊ］．园艺学报，２０１２，３９（３）：５１６－５２４．
６９４