全 文 ：书犇犗犐：１０．１１６８６／犮狔狓犫２０１５１４８ 犺狋狋狆：／／犮狔狓犫．犾狕狌．犲犱狌．犮狀
张虎，寇江涛，师尚礼．紫花苜蓿种子萌发对钴胁迫的生理生化响应．草业学报，２０１５，２４（９）：１４６１５３．
ＺＨＡＮＧＨｕ，ＫＯＵＪｉａｎｇＴａｏ，ＳＨＩＳｈａｎｇＬｉ．Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌａｎｄｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｒｅｓｐｏｎｓｅｓｏｆ犕犲犱犻犮犪犵狅狊犪狋犻狏犪ｓｅｅｄｔｏｃｏｂａｌｔｓｔｒｅｓｓ．ＡｃｔａＰｒａｔａｃｕｌｔｕｒａｅ
Ｓｉｎｉｃａ，２０１５，２４（９）：１４６１５３．
紫花苜蓿种子萌发对钴胁迫的生理生化响应
张虎１，２，寇江涛１，２，师尚礼１，２
（１．甘肃农业大学草业学院，甘肃 兰州７３００７０；２．草业生态系统教育部重点实验室，甘肃省草业工程实验室，
中－美草地畜牧业可持续研究中心，甘肃 兰州７３００７０）
摘要：以“甘农３号”紫花苜蓿为试验材料，研究不同浓度Ｃｏ２＋（０，０．２５，０．５０，１．００，２．５０，５．００ｍｍｏｌ／ＬＣｏＣｌ２）胁迫
对紫花苜蓿种子萌发及幼苗生理生化特性的影响。结果表明：Ｃｏ胁迫对紫花苜蓿种子的萌发及幼苗的生长有明
显的抑制作用，随着Ｃｏ胁迫浓度的增大，种子发芽势、发芽率、发芽指数、活力指数及幼苗的胚芽长、胚根长、根系
活力和干重均显著降低，而且Ｃｏ胁迫对发芽势的抑制作用大于发芽率，对胚根生长的抑制作用大于胚芽；低浓度
Ｃｏ胁迫（０．２５和０．５０ｍｍｏｌ／Ｌ）下，苜蓿幼苗叶片中可溶性蛋白、可溶性糖含量和蛋白水解酶、超氧化物歧化酶
（ＳＯＤ）、抗坏血酸过氧化物酶（ＡＰＸ）、愈创木酚过氧化物酶（ＧＰＸ）、过氧化氢酶（ＣＡＴ）活性与ＣＫ均无显著差异，
而游离脯氨酸含量显著升高；随着Ｃｏ胁迫浓度的升高，可溶性蛋白、可溶性糖、游离脯氨酸含量及蛋白水解酶、
ＳＯＤ、ＡＰＸ、ＧＰＸ、ＣＡＴ活性均显著下降，超氧阴离子自由基（Ｏ２·－）产生速率、羟自由基（ＯＨ· ）浓度、Ｈ２Ｏ２ 及丙
二醛（ＭＤＡ）含量均显著增加。说明高浓度Ｃｏ胁迫使得苜蓿幼苗抗氧化系统活性下降，活性氧清除能力降低，膜
脂过氧化程度加剧，从而抑制了紫花苜蓿种子的萌发及幼苗的生长。
关键词：钴胁迫；紫花苜蓿；种子萌发；幼苗生长；抗氧化酶；渗透调节；活性氧
犘犺狔狊犻狅犾狅犵犻犮犪犾犪狀犱犫犻狅犮犺犲犿犻犮犪犾狉犲狊狆狅狀狊犲狊狅犳犕犲犱犻犮犪犵狅狊犪狋犻狏犪狊犲犲犱狋狅犮狅犫犪犾狋狊狋狉犲狊狊
ＺＨＡＮＧＨｕ１，２，ＫＯＵＪｉａｎｇＴａｏ１，２，ＳＨＩＳｈａｎｇＬｉ１，２
１．犆狅犾犾犲犵犲狅犳犌狉犪狊狊犾犪狀犱犛犮犻犲狀犮犲，犌犪狀狊狌犃犵狉犻犮狌犾狋狌狉犪犾犝狀犻狏犲狉狊犻狋狔，犔犪狀狕犺狅狌７３００７０，犆犺犻狀犪；２．犓犲狔犔犪犫狅狉犪狋狅狉狔狅犳犈犮狅狊狔狊狋犲犿犕犻狀犻狊
狋狉狔狅犳犈犱狌犮犪狋犻狅狀，犘狉犪狋犪犮狌犾狋狌狉犪犾犈狀犵犻狀犲犲狉犻狀犵犔犪犫狅狉犪狋狅狉狔狅犳犌犪狀狊狌犘狉狅狏犻狀犮犲，犛犻狀狅犝犛犆犲狀狋犲狉犳狅狉犌狉犪狕犻狀犵犾犪狀犱犈犮狅狊狔狊狋犲犿犛狌狊狋犪犻狀
犪犫犻犾犻狋狔，犔犪狀狕犺狅狌７３００７０，犆犺犻狀犪
犃犫狊狋狉犪犮狋：Ｔｈｅａｉｍｏｆｔｈｉｓｓｔｕｄｙｗａｓｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｃｏｂａｌｔ（Ｃｏ）ｓｔｒｅｓｓｄａｍａｇｅｏｎ犕犲犱犻犮犪犵狅
狊犪狋犻狏犪ａｓｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｍａｔｅｒｉａｌｓ，Ｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ（０，０．２５，０．５０，１．００，２．５０，５．００
ｍｍｏｌ／ＬＣｏＣｌ２）ｏｆＣｏｏｎ犕．狊犪狋犻狏犪（ｃｖ．ＧａｎｎｏｎｇＮｏ．３）ｓｅｅｄｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎａｎｄｓｅｅｄｌｉｎｇｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌａｎｄｂｉｏ
ｃｈｅｍｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｗｅｒｅａｓｓｅｓｓｅｄ．ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｉｎｄｉｃａｔｅｔｈａｔＣｏｓｔｒｅｓｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｎｈｉｂｉｔｅｄｓｅｅｄｇｅｒｍｉｎａ
ｔｉｏｎａｎｄｓｅｅｄｌｉｎｇｇｒｏｗｔｈ．Ｓｅｅｄｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｐｏｔｅｎｔｉａｌ，ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｒａｔｅ，ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｉｎｄｅｘ，ｖｉｇｏｒｉｎｄｅｘ，ｓｅｅｄ
ｌｉｎｇｓｐｒｏｕｔｌｅｎｇｔｈ，ｒａｄｉｃｌｅｌｅｎｇｔｈ，ｒｏｏｔａｃｔｉｖｉｔｙａｎｄｄｒｙｗｅｉｇｈｔｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｒｅｄｕｃｅｄｗｉｔｈｉｎｃｒｅａｓｉｎｇｃｏｂａｌｔ
ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ．ＴｈｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｅｆｆｅｃｔｓｏｆＣｏｓｔｒｅｓｓｏｎｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｐｏｔｅｎｔｉａｌｗａｓｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈａｔｏｆｃｏｂａｌｔｓｔｒｅｓｓ
ｏｎｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｒａｔｅ，ａｎｄｔｈｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｅｆｆｅｃｔｓｏｆＣｏｓｔｒｅｓｓｏｎｒａｄｉｃａｌｇｒｏｗｔｈｗａｓｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈａｔｏｎｔｈｅｐｌｕ
ｍｕｌｅ．Ｃｏｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｒｅｄｕｃｅｄｔｈｅｓｏｌｕｂｌｅｐｒｏｔｅｉｎｃｏｎｔｅｎｔ，ｓｏｌｕｂｌｅｓｕｇａｒｃｏｎｔｅｎｔ，ｐｒｏｔｅｏｌｙｔｉｃｅｎｚｙｍｅａｃｔｉｖｉｔｙ，
第２４卷 第９期
Ｖｏｌ．２４，Ｎｏ．９
草 业 学 报
ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ
２０１５年９月
Ｓｅｐ，２０１５
收稿日期：２０１５０３１７；改回日期：２０１５０４２０
基金项目：国家现代牧草产业技术体系建设专项（ＣＡＲＡ３５），全国种质资源保种（ＮＢ２１３０１３５）和农业部行业专项“牧区优质高效饲草生产利用
技术研究与示范”（２０１００３０２３）资助。
作者简介：张虎（１９７８），男，甘肃镇原人，助教，在读硕士。Ｅｍａｉｌ：ｚｈａｎｇｈ＠ｇｓａｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
通讯作者Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ．Ｅｍａｉｌ：ｓｈｉｓｈｌ＠ｇｓａｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅｄｉｓｍｕｔａｓｅ（ＳＯＤ），ａｓｃｏｒｂａｔｅｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ（ＡＰＸ），ｇｕａｉａｃｏｌｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ（ＧＰＸ）ａｎｄｃａｔａｌａｓｅ（ＣＡＴ）ｉｎ
ｓｅｅｄｌｉｎｇｌｅａｖｅｓ．ＨｏｗｅｖｅｒｆｒｅｅｐｒｏｌｉｎｅｃｏｎｔｅｎｔｉｎｃｒｅａｓｅｄｄｒａｍａｔｉｃａｌｙａｔｌｏｗｅｒＣｏｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｂｕｔｄｅｃｌｉｎｅｄａｔ
ｈｉｇｈｅｒｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ．ＡｔｈｉｇｈｅｒＣｏｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ，Ｏ２·－（ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅａｎｉｏｎｒａｄｉｃａｌ），ＯＨ·（ｈｙｄｒｏｘｙｌｒａｄｉｃａｌ），
Ｈ２Ｏ２ａｎｄｍａｌｏｎｄｉａｌｄｅｈｙｄｅｉｎｃｒｅａｓｅｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ．ＴｈｉｓｉｌｕｓｔｒａｔｅｓｔｈａｔｕｎｄｅｒｈｉｇｈＣｏｓｔｒｅｓｓ，ｔｈｅｓｅｅｄｌｉｎｇａｎ
ｔｉｏｘｉｄａｎｔｓｙｓｔｅｍａｃｔｉｖｉｔｙａｎｄａｃｔｉｖｅｏｘｙｇｅｎｓｃａｖｅｎｇｉｎｇａｂｉｌｉｔｙｏｆ犕．狊犪狋犻狏犪ｄｅｃｒｅａｓｅｄ，ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ犕．狊犪狋犻狏犪ｓｅｅｄ
ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎａｎｄｓｅｅｄｌｉｎｇｇｒｏｗｔｈ．
犓犲狔狑狅狉犱狊：ｃｏｂａｌｔｓｔｒｅｓｓ；犕犲犱犻犮犪犵狅狊犪狋犻狏犪；ｓｅｅｄｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ；ｓｅｅｄｌｉｎｇｇｒｏｗｔｈ；ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｅｎｚｙｍｅ；ｏｓｍｏｔｉｃ
ａｄｊｕｓｔｍｅｎｔ；ａｃｔｉｖｅｏｘｙｇｅｎ
土壤是人类赖以生存的自然环境要素和重要的农业生产资源，人类活动的不断增加导致全球土地重金属污
染越来越严重，并严重危害着人类自身的健康，因此，近年来治理重金属污染成为国际科学界研究的热点问题［１］。
钴（Ｃｏ）是动植物体生长发育所必需的微量营养元素之一，对保持生物机体的正常代谢功能必不可少［２］，其在土
壤中广泛存在并参与豆科植物的根瘤固氮［３４］，在植物的矿质营养中通常作为植物生长发育的有益元素而发挥作
用，对多种植物具有提高产量、改善品质的作用［５］。
调查表明，世界土壤钴的平均含量范围一般在０．０５～３００ｍｇ／ｋｇ之间，大多数土壤钴含量范围为２～４０
ｍｇ／ｋｇ，目前多引用１０ｍｇ／ｋｇ［６］。我国土壤中钴含量的变幅较大，一般为０．５７～１０４ｍｇ／ｋｇ，大部分土壤钴含量
在５～４０ｍｇ／ｋｇ之间。我国土壤钴的背景值为１１．６ｍｇ／ｋｇ，且南北方差异较大，北方土壤钴含量高、变幅小，一
般范围为１２～３５ｍｇ／ｋｇ，南方则从痕量到２００ｍｇ／ｋｇ［７８］。钴虽然植物生长的必需微量营养元素，在植物的生长
过程中有重要的作用［９］，但土壤中过量的钴会阻滞植物的生长发育并使之受到毒害［１０］。
紫花苜蓿（犕犲犱犻犮犪犵狅狊犪狋犻狏犪）作为多年生的高产、优质豆科经济作物，具有生长速度快、生活史短、地上部及
根系生物量大等特点，但有关钴胁迫对紫花苜蓿萌发、生长及生理生化的影响还缺乏研究。本文以紫花苜蓿为材
料，研究不同浓度钴胁迫对紫花苜蓿种子发芽及幼苗生理生化特性的影响，旨在探明钴胁迫对紫花苜蓿幼苗的伤
害机理，为明确紫花苜蓿对钴胁迫的耐性机制提供理论依据。
１ 材料与方法
１．１ 供试材料及处理
供试品种为甘农３号紫花苜蓿（犕．狊犪狋犻狏犪ｃｖ．ＧａｎｎｏｎｇＮｏ．３），由甘肃农业大学草业学院提供。
试验于２０１２年在甘肃农业大学草业生态系统教育部重点实验室进行。试验选取饱满均匀的苜蓿种子，用
０．１％ ＨｇＣｌ２ 溶液消毒５ｍｉｎ，去离子水冲洗３～４次，吸水纸吸干，置于垫有２层滤纸的培养皿中，每皿１００粒种
子，将培养皿置于种子发芽箱中［光通量密度７０μｍｏｌ／ｍ
２·ｓ，温度（２５±１）℃，相对湿度８０％］进行发芽。试验
药品为ＣｏＣｌ２，设６个Ｃｏ２＋胁迫浓度，分别为０（ＣＫ：蒸馏水），０．２５，０．５０，１．００，２．５０，５．００ｍｍｏｌ／Ｌ，每个处理重
复６次，为保证处理浓度稳定，每隔２４ｈ更换１次处理液。
自种子发芽之日起，每日观察并记录发芽种子数（以胚根伸出种皮作为发芽标准），于处理第４天时统计种子
的发芽势，测定可溶性蛋白、可溶性糖及游离脯氨酸含量、蛋白水解酶活性；第１０天时统计种子的发芽率，测量苜
蓿幼苗的胚芽长、胚根长、幼苗干重，计算发芽指数、活力指数，并测定幼苗的根系活力，超氧化物歧化酶（ｓｕｐｅｒ
ｏｘｉｄｅｄｉｓｍｕｔａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙ，ＳＯＤ）、抗坏血酸过氧化物酶（ａｓｃｏｒｂａｔｅｐｅｒｏｘｉｄａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙ，ＡＰＸ）、愈创木酚过氧化物
酶（ｇｕａｉａｃｏｌｐｅｒｏｘｉｄａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙ，ＧＰＸ）、过氧化氢酶（ｃａｔａｌａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙ，ＣＡＴ）活性，超氧阴离子自由基（Ｏ２·－）产
生速率，羟自由基（ＯＨ·）浓度、双氧水（Ｈ２Ｏ２）及丙二醛（ｍａｌｏｎｄｉａｌｄｅｈｙｄｅｃｏｎｔｅｎｔ，ＭＤＡ）含量。
１．２ 测定方法
种子发芽势、发芽率采用常规统计方法测定：发芽势（％）＝（４ｄ内正常发芽种子粒数／供试种子数）×１００，
发芽率（％）＝（１０ｄ内正常发芽的种子数／供试种子数）×１００。胚芽长、胚根长的测定：发芽第１０天时，每处理
７４１第９期 张虎 等：紫花苜蓿种子萌发对钴胁迫的生理生化响应
随机选取２０株幼苗，采用精度为０．１ｍｍ的游标卡尺分别测量胚芽长、胚根长，求平均值。幼苗干重的测定：发
芽第１０天时，每处理随机选取２０株幼苗，９５℃杀青１０ｍｉｎ，６５℃下烘干称重。发芽指数（犌犐）＝ ∑（犌狋／犇狋），活
力指数（犞犐）＝犌犐×犛。其中，犌狋为在狋日的发芽种子数，犇狋为发芽天数，犛为单株鲜重。根系活力采用氯化三苯
基四氮唑（ＴＴＣ）法，参考邹琦［１１］的方法测定。
可溶性蛋白含量采用考马斯亮蓝Ｇ２５０染色法［１１］测定，可溶性糖含量采用蒽酮比色法［１１］测定，游离脯氨酸
含量采用酸性茚三酮比色法［１１］测定，蛋白水解酶活性测定参考Ｚｈａｎｇ等［１２］的方法。超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）、抗
坏血酸过氧化物酶（ＡＰＸ）、愈创木酚过氧化物酶（ＧＰＸ）及过氧化氢酶（ＣＡＴ）活性参考 ＡｎｄｒéＤｉａｓｄｅＡｚｅｖｅｄｏ
Ｎｅｔｏ等［１３］方法测定。超氧阴离子自由基（Ｏ２·－）产生速率采用对氨基苯磺酸法［１４］测定，羟自由基（ＯＨ·）浓度
采用２脱氧Ｄ核糖显色法［１４］测定，双氧水（Ｈ２Ｏ２）含量采用ＫＩ显色法［１４］测定，丙二醛（ＭＤＡ）含量采用硫代巴
比妥酸（ＴＢＡ）显色法［１４］测定，以上各指标重复３次。
１．３ 数据处理与分析
采用Ｅｘｃｅｌ２００３进行数据处理和图表绘制，并采用ＳＰＳＳ１６．０软件进行单因素方差分析（ｏｎｅｗａｙＡＮＯ
ＶＡ）和最小显著差数法（ＬＳＤ法）进行多重比较。
２ 结果与分析
图１ 犆狅胁迫对紫花苜蓿种子发芽势和发芽率的影响
犉犻犵．１ 犈犳犳犲犮狋狅犳犮狅犫犪犾狋狊狋狉犲狊狊狅狀犪犾犳犪犾犳犪狊犲犲犱
犵犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狆狅狋犲狀狋犻犪犾犪狀犱犵犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狉犪狋犲
不同小写字母表示处理间差异达５％显著水平，下同。Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｌｅｔ
ｔｅｒｓａｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｄｉｆｆｅｒｅｎｔａｔ犘＜０．０５，ｔｈｅｓａｍｅｂｅｌｏｗ．
２．１ Ｃｏ胁迫对紫花苜蓿种子萌发及幼苗生长的影响
紫花苜蓿种子在Ｃｏ胁迫条件下能否正常萌发是
其能否在Ｃｏ污染的土壤中生长的先决条件。Ｃｏ胁迫
对紫花苜蓿种子的萌发有显著的影响，并存在明显的
浓度效应，随着Ｃｏ胁迫浓度的增大，紫花苜蓿种子的
发芽势、发芽率（图１）和发芽指数、活力指数（表１）均
呈降低的趋势。由图１可知，Ｃｏ胁迫对紫花苜蓿种子
发芽势的抑制程度大于发芽率，当Ｃｏ胁迫浓度达到
２．５ｍｍｏｌ／Ｌ时，其发芽势低于５０％，发芽率也低于
６０％。由表１可知，０．２５ｍｍｏｌ／ＬＣｏ胁迫对紫花苜
蓿种子的发芽指数和活力指数无显著的影响，当Ｃｏ
胁迫浓度达到０．５ｍｍｏｌ／Ｌ时，紫花苜蓿种子的发芽
指数和活力指数均显著降低。
Ｃｏ胁迫对紫花苜蓿幼苗的根系活力（表１）及生
长（表２）也有明显的影响。０．２５～０．５０ｍｍｏｌ／ＬＣｏ
胁迫对紫花苜蓿幼苗的根系活力无显著影响，当Ｃｏ
胁迫浓度达到１．００ｍｍｏｌ／Ｌ时，紫花苜蓿幼苗的根系
活力开始降低，并随着Ｃｏ胁迫浓度的增大而显著降
低。０．２５ｍｍｏｌ／ＬＣｏ胁迫对紫花苜蓿幼苗的胚芽
长、干重无显著的影响，但显著降低了幼苗的胚根长，
当Ｃｏ胁迫浓度达到０．５０ｍｍｏｌ／Ｌ时，紫花苜蓿幼苗
的胚芽长和干重均显著降低，并且随着Ｃｏ胁迫浓度
的增大，紫花苜蓿幼苗的胚芽长、胚根长和干重呈显著的下降趋势。
以上结果表明，Ｃｏ胁迫明显抑制了紫花苜蓿种子的萌发及幼苗的生长，致使紫花苜蓿种子的发芽势、发芽
率、发芽指数及活力指数下降，显著降低了幼苗的根系活力、胚芽长、胚根长和干重。
８４１ 草 业 学 报 第２４卷
２．２ Ｃｏ胁迫对紫花苜蓿种子萌发中渗透调节物质含
量及蛋白水解酶活性的影响
可溶性蛋白、可溶性糖是植物生长发育的主要营
养成分，也是植物体内的重要信号分子，能够参与植物
在逆境胁迫下的信号转导和渗透调节；游离脯氨酸也
在植物渗透调节中发挥着重要的作用；蛋白水解酶能
够催化贮藏蛋白的氧化分解与能量释放，在种子萌发
初期提供萌发所需要的营养物质和能量来源。由表３
可知，当Ｃｏ胁迫浓度为０．２５和０．５０ｍｍｏｌ／Ｌ时，紫
花苜蓿种子萌发过程中的可溶性蛋白、可溶性糖含量
及蛋白水解酶活性均与ＣＫ差异不显著；当Ｃｏ胁迫浓
度达到１．００ｍｍｏｌ／Ｌ时，紫花苜蓿种子萌发过程中的
蛋白水解酶活性显著受到抑制，可溶性蛋白、可溶性糖
含量显著降低，均显著低于ＣＫ，并且随着Ｃｏ胁迫浓
度的增大而显著下降；０．２５和０．５０ｍｍｏｌ／ＬＣｏ胁迫
下紫花苜蓿种子萌发过程中的游离脯氨酸含量显著高
于ＣＫ，其中以０．５０ｍｍｏｌ／ＬＣｏ胁迫浓度下最高，
１．００ｍｍｏｌ／ＬＣｏ胁迫对游离脯氨酸含量无显著的影
响，当Ｃｏ胁迫浓度达到２．５０ｍｍｏｌ／Ｌ时，游离脯氨酸
含量显著下降。
２．３ Ｃｏ胁迫对紫花苜蓿幼苗抗氧化酶活性的影响
逆境条件下，植物为了避免活性氧诱导对细胞产
生的伤害，能够利用抗氧化酶系统及时清除活性氧，从
而保护植物机体的生理机能。由图２可知，随着Ｃｏ
胁迫浓度的增大，紫花苜蓿幼苗叶片的ＳＯＤ、ＡＰＸ、
ＧＰＸ活性均呈先升高后降低的趋势，而ＣＡＴ活性呈
表１ 犆狅胁迫对紫花苜蓿种子发芽指数、活力指数
及幼苗根系活力的影响
犜犪犫犾犲１ 犈犳犳犲犮狋狅犳犮狅犫犪犾狋狊狋狉犲狊狊狅狀犪犾犳犪犾犳犪狊犲犲犱犵犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀
犻狀犱犲狓，狏犻犵狅狉犻狀犱犲狓犪狀犱狊犲犲犱犾犻狀犵狉狅狅狋犪犮狋犻狏犻狋狔
浓度
Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
（ｍｍｏｌ／Ｌ）
发芽指数
Ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ
ｉｎｄｅｘ
活力指数
Ｖｉｇｏｒｉｎｄｅｘ
根系活力
Ｒｏｏｔａｃｔｉｖｉｔｙ
（μｇ／ｇ·ｈ）
０ １６７．２２±５．６２ａ ４２．４６±２．１２ａ ２８９．３２±７．０５ａ
０．２５ １６０．７５±６．１８ａｂ ３９．９１±１．９７ａ ２９４．７６±８．２５ａ
０．５０ １５１．８８±５．４２ｂｃ ３５．２４±２．２１ｂ ２８７．５２±１１．１２ａ
１．００ １４２．４８±６．０９ｃ ３１．２９±２．４３ｃ ２５２．７４±１２．０９ｂ
２．５０ １１８．２１±８．０５ｄ ２５．５６±２．６５ｄ ２０２．６４±１２．００ｃ
５．００ ９３．７６±１０．２３ｅ １８．５２±３．０７ｅ １５３．６０±１４．７９ｄ
不同小写字母表示处理间差异达５％显著水平，下同。Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｌｅｔ
ｔｅｒｓａｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｄｉｆｆｅｒｅｎｔａｔ犘＜０．０５，ｔｈｅｓａｍｅｂｅｌｏｗ．
表２ 犆狅胁迫对紫花苜蓿幼苗生长的影响
犜犪犫犾犲２ 犈犳犳犲犮狋狅犳犮狅犫犪犾狋狊狋狉犲狊狊狅狀犪犾犳犪犾犳犪狊犲犲犱犾犻狀犵犵狉狅狑狋犺
浓度
Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
（ｍｍｏｌ／Ｌ）
胚芽长
Ｅｐｉｃｏｔｙｌｌｅｎｇｔｈ
（ｍｍ）
胚根长
Ｈｙｐｏｃｏｔｙｌｌｅｎｇｔｈ
（ｍｍ）
干重
Ｄｒｙｗｅｉｇｈｔ
（ｍｇ／ｐｌａｎｔ）
０ ２５．３９±１．７７ｂ ４２．５３±４．０２ａ １９．２１±１．２８ａ
０．２５ ２８．８３±１．１０ａ ２０．２２±３．２１ｂ ２０．１１±０．９２ａ
０．５０ ２６．４０±２．６０ｂ １１．６５±１．８０ｃ １７．１５±０．８９ｂ
１．００ ２０．９０±２．７９ｃ １０．７１±２．５３ｃ １６．８５±１．０２ｂ
２．５０ １５．５３±１．１６ｄ ６．６７±１．４６ｄ ６．６８±１．１３ｃ
５．００ １３．９１±１．９０ｄ ２．４１±０．８１ｅ ２．９１±０．７８ｄ
下降的趋势。当Ｃｏ胁迫浓度为０．２５和０．５０ｍｍｏｌ／Ｌ时，紫花苜蓿幼苗的ＳＯＤ、ＡＰＸ、ＧＰＸ、ＣＡＴ活性均与ＣＫ
差异不显著；在１．００和２．５０ｍｍｏｌ／ＬＣｏ胁迫浓度下，紫花苜蓿幼苗的ＳＯＤ活性显著高于ＣＫ，当Ｃｏ胁迫浓度
达到５．００ｍｍｏｌ／Ｌ时，ＳＯＤ活性有所下降，与ＣＫ无显著差异；在１．００ｍｍｏｌ／ＬＣｏ胁迫浓度下，紫花苜蓿幼苗
的ＡＰＸ、ＧＰＸ活性达到最高，并且显著高于ＣＫ，当Ｃｏ胁迫浓度达到２．５０ｍｍｏｌ／Ｌ时，ＡＰＸ、ＧＰＸ活性开始下
降，在２．５０和５．００ｍｍｏｌ／ＬＣｏ胁迫浓度下，ＡＰＸ、ＧＰＸ活性均与ＣＫ差异不显著；当Ｃｏ胁迫浓度达到１．００
ｍｍｏｌ／Ｌ时，随着Ｃｏ胁迫浓度的增大，紫花苜蓿幼苗的ＣＡＴ活性也开始降低，并且均显著低于ＣＫ。
表３ 犆狅胁迫对紫花苜蓿种子萌发中渗透调节物质含量及蛋白水解酶活性的影响
犜犪犫犾犲３ 犈犳犳犲犮狋狅犳犮狅犫犪犾狋狊狋狉犲狊狊狅狀犪犾犳犪犾犳犪狊犲犲犱犾犻狀犵狅狊犿狅狋犻犮犪犱犼狌狊狋犿犲狀狋狊狌犫狊狋犪狀犮犲狊犮狅狀狋犲狀狋犪狀犱狆狉狅狋犲狅犾狔狋犻犮犲狀狕狔犿犲犪犮狋犻狏犻狋狔
浓度Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
（ｍｍｏｌ／Ｌ）
可溶性蛋白
Ｓｏｌｕｂｌｅｐｒｏｔｅｉｎ（ｍｇ／ｇＦＷ）
可溶性糖
Ｓｏｌｕｂｌｅｓｕｇａｒ（ｍｍｏｌ／ｇＦＷ）
游离脯氨酸
Ｆｒｅｅｐｒｏｌｉｎｅ（μｍｏｌ／ｇＦＷ）
蛋白水解酶Ｐｒｏｔｅａｓｅ（ｍｇ
ＢＳＡｈｙｄｒｏｌｙｓｅｄ／ｍｇｐｒｏｔｅｉｎ·ｈ）
０ ７．４５±０．３４ａ ３４．２１±２．１７ｂ １４．４２±０．９７ｃ １．１９±０．１４ａ
０．２５ ８．１１±０．５０ａ ４３．９３±４．２７ａ １６．８９±０．８８ｂ １．３７±０．１５ａ
０．５０ ７．２８±０．４２ａ ４１．６０±４．４０ａ ２０．４２±１．０９ａ １．２０±０．１３ａ
１．００ ５．２９±０．４７ｂ ３３．１３±２．２８ｂ １３．６５±１．１８ｃ ０．９２±０．１２ｂ
２．５０ ４．６９±０．７７ｂ ２２．４９±２．４９ｃ １０．１２±１．２６ｄ ０．６５±０．１３ｃ
５．００ ３．００±０．８６ｃ １７．７８±３．０１ｃ ６．９０±１．１９ｅ ０．３８±０．１２ｄ
９４１第９期 张虎 等：紫花苜蓿种子萌发对钴胁迫的生理生化响应
图２ 犆狅胁迫对紫花苜蓿幼苗抗氧化酶活性的影响
犉犻犵．２ 犈犳犳犲犮狋狅犳犮狅犫犪犾狋狊狋狉犲狊狊狅狀犪犾犳犪犾犳犪狊犲犲犱犾犻狀犵犪狀狋犻狅狓犻犱犪狀狋犲狀狕狔犿犲犪犮狋犻狏犻狋狔
２．４ Ｃｏ胁迫对紫花苜蓿幼苗活性氧积累及膜脂过氧化的影响
Ｃｏ胁迫对紫花苜蓿幼苗体内活性氧代谢有显著的影响（表４）。Ｃｏ胁迫下，紫花苜蓿幼苗体内的Ｏ２·－产生
速率、ＯＨ·浓度、Ｈ２Ｏ２ 含量及膜脂过氧化产物ＭＤＡ含量均显著增加，并且随着Ｃｏ胁迫浓度的增大而升高。在
０．２５ｍｍｏｌ／ＬＣｏ胁迫浓度下，紫花苜蓿幼苗体内的Ｏ２·－产生速率、ＯＨ·浓度、Ｈ２Ｏ２ 及 ＭＤＡ含量均与ＣＫ差
异不显著。当Ｃｏ胁迫浓度达到０．５ｍｍｏｌ／Ｌ时，Ｏ２·－产生速率、ＯＨ·浓度、Ｈ２Ｏ２ 及 ＭＤＡ含量均显著高于
ＣＫ，并随着Ｃｏ胁迫浓度的增大而显著升高。说明Ｃｏ胁迫诱导产生了大量的活性氧，并引起了紫花苜蓿幼苗的
膜脂过氧化，而且随着Ｃｏ胁迫浓度的增大，紫花苜蓿幼苗膜脂过氧化程度进一步加剧。
表４ 犆狅胁迫对苜蓿幼苗活性氧积累和膜脂过氧化的影响
犜犪犫犾犲４ 犈犳犳犲犮狋狅犳犮狅犫犪犾狋狊狋狉犲狊狊狅狀犪犾犳犪犾犳犪狊犲犲犱犾犻狀犵犪犮狋犻狏犲狅狓狔犵犲狀犪犮犮狌犿狌犾犪狋犻狅狀犪狀犱犿犲犿犫狉犪狀犲犾犻狆犻犱狆犲狉狅狓犻犱犪狋犻狅狀
浓度
Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
（ｍｍｏｌ／Ｌ）
超氧阴离子自由基
Ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅａｎｉｏｎｆｒｅｅ
ｒａｄｉｃａｌ（μｍｏｌ／ｍｉｎ·ｇＦＷ）
羟自由基
Ｈｙｄｒｏｘｙｌｆｒｅｅｒａｄｉｃａｌ
（Ａ·１０００／ｇＦＷ）
Ｈ２Ｏ２
Ｈｙｄｒｏｇｅｎｐｅｒｏｘｉｄｅ
（μｍｏｌ／ｇＦＷ）
ＭＤＡ
Ｍａｌｏｎｄｉａｌｄｅｈｙｄｅ
（μｍｏｌ／ｇＦＷ）
０ ３．５６±０．３４ｄ ５４２．３２±１４．６１ｅ １．２０±０．２０ｅ ４．２６±０．５６ｅ
０．２５ ３．９９±０．３３ｄ ５２９．８５±１６．９８ｅ １．５２±０．２２ｄｅ ４．７１±０．４６ｄｅ
０．５０ ５．３７±０．５７ｃ ６３４．４３±２２．３１ｄ ２．３４±０．５０ｄ ５．６２±０．５１ｄ
１．００ ７．３３±０．４３ｂ ６９７．９０±２５．５３ｃ ３．６２±０．６５ｃ ７．５６±０．７２ｃ
２．５０ ８．１５±０．７５ａｂ ８１８．５５±３１．７４ｂ ４．６８±０．４５ｂ ９．１２±０．６９ｂ
５．００ ９．０７±０．６５ａ ９８３．１２±３４．８９ａ ６．７７±０．７０ａ １１．３１±０．６７ａ
３ 讨论与结论
种子在逆境胁迫下能否正常萌发及幼苗生长状况是植物能否存活的前提条件，也是某物种能否在某一地区
形成自然群落的关键因素［１５］。一般情况下，种子的发芽势高，说明种子的生命力强，种子出苗较为整齐一致，而
０５１ 草 业 学 报 第２４卷
发芽率则能够反映种子的出苗情况。发芽指数反映了种子的发芽速率和整齐程度，而活力指数反映了种子在较
广的范围能否迅速发芽和生长的整齐度。本试验中，Ｃｏ胁迫显著降低了紫花苜蓿种子的发芽势、发芽率、发芽指
数及活力指数，抑制了紫花苜蓿种子的萌发。根系作为植物体最活跃的吸收器官和合成器官，其活力水平可直接
影响地上部的生长和营养状况及产量水平。在种子萌发过程中，胚芽长、胚根长及幼苗干重也是反映幼苗生长状
况的关键指标。Ｃｏ胁迫也显著降低了紫花苜蓿幼苗的根系活力，降低了胚芽长、胚根长及幼苗干重，说明Ｃｏ胁
迫对紫花苜蓿幼苗生长有显著的抑制作用。一般认为，重金属对植物种子萌发及幼苗的影响存在一个较低浓度
下的刺激效应和高浓度下的抑制效应。随着Ｃｏ胁迫浓度的增大，对紫花苜蓿种子萌发及幼苗生长的抑制作用
加剧，这与前人［１６１９］的研究结果一致，但本试验结果不存在低浓度下的刺激效应，这可能和Ｃｏ的胁迫浓度有关，
也可能和植物种类有关。由于种子萌发后，胚根最先突破种皮吸水，受Ｃｏ胁迫的时间比胚芽长，并且胚根是种
子发芽过程中吸收水分和营养的主要器官，Ｃｏ进入幼苗体内后，大多数积累在胚根部位，所以胚根受到的抑制程
度大于胚芽。
任何逆境都会引起渗透胁迫，渗透调节是植物减少逆境伤害的一个重要特征［２０］。逆境胁迫下，植物体能够
通过代谢调控积累一些小分子有机物质进行渗透调节，缓解逆境造成的渗透胁迫［２１］，可溶性蛋白、可溶性糖、游
离脯氨酸含量的高低能够在一定程度上反映植物对逆境胁迫的耐性，而蛋白水解酶活性的升高有利于植物在逆
境胁迫下积累游离氨基酸［２２］。研究表明，逆境胁迫能够诱导植物的基因表达发生改变，正常蛋白合成受阻，逆境
应激蛋白被诱导合成，应激蛋白的协同作用可以清除变性蛋白、维持细胞正常代谢［２３］。所以重金属胁迫诱导可
溶性蛋白含量增加，可能是植物抵抗重金属毒害的一种解毒机制［２４］。本试验中，可溶性蛋白含量的下降可能是
由于Ｃｏ２＋在苜蓿幼苗体内过量积累而导致细胞结构遭到破坏而引起的。同时，Ｃｏ胁迫增加了苜蓿幼苗的代谢
强度，进而增加了苜蓿幼苗对营养和能量的需求，对可溶性糖的需求和利用量增加，所以可溶性糖含量下降。
Ｃｏ２＋在苜蓿幼苗体内的过量积累，引起蛋白质变性，也造成了可溶性蛋白含量下降，蛋白水解酶活性也受到了抑
制。在低浓度Ｃｏ胁迫下，游离脯氨酸含量升高以缓解Ｃｏ胁迫引起的渗透胁迫，在高浓度Ｃｏ胁迫下，苜蓿幼苗
体内的渗透调节平衡被打破，游离脯氨酸含量下降。
在正常生理条件下，植物体内的抗氧化酶促系统和非酶促系统共同发挥作用，使得体内的活性氧代谢处于动
态平衡［２５］。植物遭受逆境胁迫后，体内活性氧（ｒｅａｃｔｉｖｅｏｘｙｇｅｎｓｐｅｃｉｅｓ，ＲＯＳ）代谢平衡会被打破，ＲＯＳ大量产生
并积累，ＲＯＳ会以极强的氧化性造成细胞膜脂过氧化反应，导致膜系统损伤和细胞氧化，并大量积累过氧化产物
ＭＤＡ，从而引起植物的氧化伤害［２６］。本试验中，在低浓度Ｃｏ胁迫（０．２５和０．５０ｍｍｏｌ／Ｌ）下，紫花苜蓿幼苗的
ＳＯＤ、ＡＰＸ、ＧＰＸ、ＣＡＴ活性均与ＣＫ差异不显著，在１．００ｍｍｏｌ／ＬＣｏ胁迫浓度下，紫花苜蓿幼苗的ＳＯＤ、ＡＰＸ、
ＧＰＸ活性均显著升高，ＣＡＴ活性开始下降，之后随着Ｃｏ胁迫浓度的增大，ＳＯＤ、ＡＰＸ、ＧＰＸ、ＣＡＴ活性均下降，
说明Ｃｏ胁迫对苜蓿幼苗抗氧化酶系统造成了损伤。０．２５ｍｍｏｌ／ＬＣｏ胁迫对紫花苜蓿幼苗的活性氧代谢无显
著影响，Ｃｏ胁迫浓度达到０．５０ｍｍｏｌ／Ｌ时，紫花苜蓿幼苗的活性氧代谢发生紊乱，Ｏ２·－产生速率、ＯＨ·浓度、
Ｈ２Ｏ２ 及 ＭＤＡ含量均显著升高，说明Ｃｏ胁迫对紫花苜蓿幼苗的质膜结构造成了严重的伤害，这与王松华等［２７］
的结果一致，说明重金属胁迫诱导膜脂过氧化是紫花苜蓿受害表现的普遍现象。
犚犲犳犲狉犲狀犮犲狊：
［１］ ＣｈａｎｅｙＲＬ，ＭａｌｉｋＭ，ＬｉＹ Ｍ，犲狋犪犾．Ｐｈｙｔｏｒｅｍｅｄｉａｔｉｏｎｏｆｓｏｉｌｍｅｔａｌｓ．ＣｕｒｒｅｎｔＯｐｉｎｉｏｎｓｉｎＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１９９７，８：２７９
２８４．
［２］ ＭｅｎｇＹＸ，ＷａｎｇＳＨ，ＷａｎｇＪＣ，犲狋犪犾．ＩｎｆｌｕｅｎｃｅｓｏｆＣｏＣｌ２ｏｎｔｈｅｇｒｏｗｔｈａｎｄｓｅｅｄｌｉｎｇｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌｉｎｄｅｘｅｓｏｆ犎狅狉犱犲狌犿
狏狌犾犵犪狉犲ｕｎｄｅｒＮａＣｌｓｔｒｅｓｓ．ＡｃｔａＰｒａｔａｃｕｌｔｕｒａｅＳｉｎｉｃａ，２０１４，２３（３）：１６０１６６．
［３］ ＬｏｃｋｅＪＭ，ＢｒｙｃｅＪＨ，ＭｏｒｒｉｓＰＣ．Ｃｏｎｔｒａｓｔｉｎｇｅｆｆｅｃｔｓｏｆｅｔｈｙｌｅｎｅｐｅｒｃｅｐｔｉｏｎａｎｄｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓｏｎｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎａｎｄ
ｓｅｅｄｌｉｎｇｇｒｏｗｔｈｏｆｂａｒｌｅｙ（犎狅狉犱犲狌犿狏狌犾犵犪狉犲Ｌ．）．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＢｏｔａｎｙ，２０００，５１：１８４３１８４９．
［４］ ＨａｎｓｅｎＨ，ＬａｒｓｓｅｎＴ，ＳｅｉｐＨＭ，犲狋犪犾．Ｔｒａｃｅｍｅｔａｌｓｉｎｓｏｉｌｓａｔｆｏｕｒｓｉｔｅｓｉｎｓｏｕｔｈｅｒｎｃｈｉｎａ．Ｗａｔｅｒ，Ａｉｒ，ａｎｄＳｏｉｌＰｏｌｕｔｉｏｎ，
２００１，１３０：１７２１１７２６．
［５］ ＨｅｗｉｔｔＥＪ．Ｅｆｆｅｃｔｏｆｍｉｎｅｒａｌｄｅｆｉｃｉｅｎｃｉｅｓａｎｄｅｘｃｅｓｓｅｓｏｎｇｒｏｗｔｈａｎｄｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ．Ｉｎ：ＢｏｕｌｄＣ，ＨｅｗｉｔｔＥＪ，ＮｅｅｄｈａｍＰ，犲狋
犪犾．ＤｉａｇｎｏｓｉｓｏｆＭｉｎｅｒａｌＤｉｓｏｒｄｅｒｓｉｎＰｌａｎｔｓ［Ｍ］．Ｌｏｎｄｏｎ：Ｐｒｉｎｉｐａｌｓ，１９８３：５４１１０．
１５１第９期 张虎 等：紫花苜蓿种子萌发对钴胁迫的生理生化响应
［６］ ＸｉｎｇＧＸ，ＺｈｕＪＧ．ＳｏｉｌＴｒａｃｅＥｌｅｍｅｎｔｓａｎｄＲａｒｅＥａｒｔｈＥｌｅｍｅｎｔｓＣｈｅｍｉｓｔｒｙ［Ｍ］．Ｂｅｉｊｉｎｇ：ＳｃｉｅｎｃｅＰｒｅｓｓ，２００３．
［７］ ＣｈｉｎａＮａｔｉｏｎａｌＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌＭｏｎｉｔｏｒｉｎｇＣｅｎｔｒｅ．ＣｈｉｎａＢａｃｋｇｒｏｕｎｄＶａｌｕｅｏｆＳｏｉｌＥｌｅｍｅｎｔｓ［Ｍ］．Ｂｅｉｊｉｎｇ：ＣｈｉｎａＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎ
ｔａｌＳｃｉｅｎｃｅＰｒｅｓｓ，１９９０．
［８］ ＷａｎｇＹ，ＷｅｉＦＳＨ．ＳｏｉｌＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌＥｌｅｍｅｎｔｓＣｈｅｍｉｓｔｒｙ［Ｍ］．Ｂｅｉｊｉｎｇ：ＣｈｉｎａＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌＳｃｉｅｎｃｅＰｒｅｓｓ，１９９５．
［９］ ＧｕｏＸ，ＪｉｅＸＭ，ＬｉＭ，犲狋犪犾．Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆｓｅｌｅｎｉｕｍａｎｄｃｏｂａｌｔｆｅｒｔｉｌｉｚａｔｉｏｎｏｎｎｕｔｒｉｔｉｏｎｌｅｖｅｌｓｏｆａｌｆａｌｆａｈａｙ．ＰｌａｎｔＮｕｔｒｉｔｉｏｎａｎｄ
ＦｅｒｔｉｌｉｚｅｒＳｃｉｅｎｃｅ，２０１０，１６（２）：４３９４４８．
［１０］ ＡｅｒｙＡＣ，ＪａｇｅｔｉｙａＢＬ．ＥｆｆｅｃｔｏｆｃｏｂａｌｔｔｒｅａｔｍｅｎｔｓｏｎｄｒｙｍａｔｔｅｒｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｗｈｅａｔａｎｄＤＴＰＡｅｘｔｒａｃｔａｂｌｅｃｏｂａｌｔｃｏｎｔｅｎｔ
ｉｎｓｏｉｌｓ．ＣｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓｉｎＳｏｉｌＳｃｉｅｎｃｅａｎｄｐｌａｎｔＡｎａｌｙｓｉｓ，２００２，３１：９１０．
［１１］ ＺｏｕＱ．ＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔＧｕｉｄａｎｃｅ［Ｍ］．Ｂｅｉｊｉｎｇ：ＣｈｉｎａＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅＰｒｅｓｓ，２０００．
［１２］ ＺｈａｎｇＺＧ，ＲｕｉＱ，ＸｕＬＬ．ＲｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｂｅｔｗｅｅｎｅｎｄｏｐｅｐｔｉｄａｓｅｓａｎｄＨ２Ｏ２ｄｕｒｉｎｇｗｈｅａｔｌｅａｖｅｓａｇｉｎｇ．ＡｃｔａＢｏｔａｎｙＳｉｎｉｃａ，
２００１，４３：１２７１３１．
［１３］ ＡｎｄｒéＤｉａｓｄｅＡｚｅｖｅｄｏＮｅｔｏ，ＪｏｓéＴａｒｑｕｉｎｉｏＰｒｉｓｃｏ，ＪｏａｑｕｉｍＥｎéａｓＦｉｌｈｏ，犲狋犪犾．Ｈｙｄｒｏｇｅｎｐｅｒｏｘｉｄｅｐｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｉｎｄｕｃｅｓ
ｓａｌｔｓｔｒｅｓｓａｃｃｌｉｍａｔｉｏｎｉｎｍａｉｚｅｐｌａｎｔｓ．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，２００５，１６２：１１１４１１２２．
［１４］ ＫｏｕＪＴ，ＳｈｉＳＬ，ＨｕＧＸ，犲狋犪犾．Ｅｆｆｅｃｔｏｆ犗犱狅狀狋狅狋犺狉犻狆狊犾狅狋犻ｏｎｒｅａｃｔｉｖｅｏｘｙｇｅｎｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｏｆ犕犲犱犻犮犪犵狅狊犪狋犻狏犪．Ｊｏｕｒｎａｌｏｆ
ＮｕｃｌｅａｒＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，２０１３，２７（１２）：１９４８１９５４．
［１５］ ＺｈｏｕＷ Ｈ，ＳｈｉＳＬ，ＫｏｕＪＴ．ＥｆｆｅｃｔｏｆｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅｏｎａｌｆａｌｆａｓｅｅｄｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｕｎｄｅｒＮａＣｌｓｔｒｅｓｓ．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＮｕｃｌｅａｒＡｇｒｉ
ｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，２０１２，２６（４）：７１０７１６．
［１６］ ＤｉｎｇＹ，ＸｉｅＨＲ，ＷｅｉＱ，犲狋犪犾．Ｉｍｐａｃｔｓｏｆｈｅａｖｙｍｅｔａｌｓｔｒｅｓｓｏｎａｌｆａｌｆａｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＮａｎｃｈａｎｇＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＡｅｒｏ
ｎａｕｔｉｃａｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（ＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅ），２００４，１８（４）：４５４７，５３．
［１７］ ＺｈａｎｇＣＲ，ＬｉＨ，ＸｉａＬＪ，犲狋犪犾．Ｅｆｆｅｃｔｏｆｚｉｎｃｃａｄｍｉｕｍｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆ犕犲犱犻犮犪犵狅狊犪狋犻狏犪ｓｅｅｄｓａｎｄｇｒｏｗｔｈｏｆｓｅｅｄｉｎｇ．Ａｃｔａ
ＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｅＢｏｒｅａｌｉｓｉｎｉｃａ，２００５，２０（１）：９６９９．
［１８］ ＹｕＹＨ，ＷａｎｇＷ Ｑ，ＺｈｅｎｇＣＸ，犲狋犪犾．ＴｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆＰｂ２＋，Ｃａ２＋ ＆Ｃｄ２＋ｉｎｓｏｉｌｏｎｓｐｒｏｕｔａｎｄｇｒｏｗｔｈｏｆａｌｆａｌｆａｓｅｅｄｓ．
ＪｏｕｒｎａｌｏｆＸｉｎｊｉａｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，２００６，２９（２）：５８６１．
［１９］ ＣｉＥ，ＧａｏＭ，ＷａｎｇＺＦ，犲狋犪犾．Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆｃａｄｍｉｕｍｏｎｓｅｅｄｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎａｎｄｇｒｏｗｔｈｏｆａｌｆａｌｆａ．ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＥｃｏＡｇｒｉ
ｃｕｌｔｕｒｅ，２００７，１５（１）：９６９８．
［２０］ ＧｅｇｇＭＥ，ＢｅｌｔｒａｎＢ，ＳａｌａｓＰｉｎｏＳ，犲狋犪犾．Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｅｆｆｅｃｔｏｆｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅｏｎｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅｍｅｔａｂｏｌｉｓｍａｎｄｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ
ｆｕｎｃｔｉｏｎｉｎａｓｔｒｏｃｙｔｅｓａｎｄｎｅｕｒｏｎｓ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓｆｏｒｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ／ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＮｅｕｒｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００３，
８６（１）：２２８２３７．
［２１］ ＺｈｏｕＷ Ｈ，ＳｈｉＳＬ，ＫｏｕＪＴ．Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆｅｘｏｇｅｎｏｕｓｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅｏｎｔｈｅｇｒｏｗｔｈａｎｄｎｉｔｒｏｇｅｎｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｏｆａｌｆａｌｆａｓｅｅｄｌｉｎｇｓ
ｕｎｄｅｒｓａｌｔｓｔｒｅｓｓ．ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｐｐｌｉｅｄＥｃｏｌｏｇｙ，２０１２，２３（１１）：３００３３００８．
［２２］ ＰｏｕｓｔｉｎｉＫ，ＳｉｏｓｅｍａｒｄｅｈＡ，ＲａｎｊｂａｒＭ．Ｐｒｏｌｉｎｅａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎａｓａｒｅｓｐｏｎｓｅｔｏｓａｌｔｓｔｒｅｓｓｉｎ３０ｗｈｅａｔ（犜狉犻狋犻犮狌犿犪犲狊狋犻狏狌犿
Ｌ．）ｃｕｌｔｉｖａｒｓｄｉｆｆｅｒｉｎｇｉｎｓａｌｔｔｏｌｅｒａｎｃｅ．ＧｅｎｅｔｉｃＲｅｓｏｕｒｃｅｓａｎｄＣｒｏｐＥｖｏｌｕｔｉｏｎ，２００７，５４：９２５９３４．
［２３］ ＨｅＺＬ，ＷａｎｇＨＣ．ＴｈｅｅｍｅｒｇｅｎｃｅｏｆｓａｌｔｉｎｄｕｃｅｄｐｒｏｔｅｉｎｓｉｎａｌｆａｌｆａｕｎｄｅｒＮａＣｌｓｔｒｅｓｓ．ＡｃｔａＰｈｙｔｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａＳｉｎｉｃａ，
１９９１，１７：７１７９．
［２４］ ＨｏｎｇＲＹ，ＹａｎｇＧＸ，ＬｉｕＤＨ，犲狋犪犾．Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆｃａｄｍｉｕｍｏｎｔｈｅｇｒｏｗｔｈａｎｄｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌａｎｄｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｒｅａｃｔｉｏｎｓｏｆ
ｗｈｅａｔｓｅｅｄｌｉｎｇｓ．ＡｃｔａＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｅＢｏｒｅａｌｉｓｉｎｉｃａ，１９９１，６（３）：７０７５．
［２５］ ＺｈｏｕＷ Ｈ，ＳｈｉＳＬ，ＫｏｕＪＴ．Ｅｘｏｇｅｎｏｕｓｓａｌｉｃｙｌｉｃａｃｉｄｏｎａｌｅｖｉａｔｉｎｇｓａｌｔｓｔｒｅｓｓｉｎａｌｆａｌｆａｓｅｅｄｌｉｎｇｓ．ＡｃｔａＰｒａｔａｃｕｌｔｕｒａｅＳｉｎｉ
ｃａ，２０１２，２１（３）：１７１１７６．
［２６］ ＺｈａｏＴＨ，ＳｕｎＪＷ，ＦｕＹ．Ａｄｖａｎｃｅｓｏｆｒｅｓｅａｒｃｈｏｎｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｏｆｐｌａｎｔｒｅａｃｔｉｖｅｏｘｙｇｅｎｓｐｅｃｉｅｓａｎｄｅｘｏｇｅｎｏｕｓｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ
ｕｎｄｅｒａｂｉｏｔｉｃｓｔｒｅｓｓｅ．Ｃｏｒｐｓ，２００８，３：１０１３．
［２７］ ＷａｎｇＳＨ，ＺｈａｎｇＨ，ＨｅＱＹ．Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆｃｏｐｐｅｒｓｔｒｅｓｓｏｎ犕犲犱犻犮犪犵狅狊犪狋犻狏犪ｓｅｅｄｌｉｎｇｓｌｅａｆａｎｔｉｏｘｉｄａｔｉｖｅｓｙｓｔｅｍ．Ｃｈｉｎｅｓｅ
ＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｐｐｌｉｅｄＥｃｏｌｏｇｙ，２０１１，２２（９）：２２８５２２９０．
参考文献：
［２］ 孟亚雄，王世红，汪军成，等．ＣｏＣｌ２ 对ＮａＣｌ胁迫下大麦生长及幼苗生理指标的影响．草业学报，２０１４，２３（３）：１６０１６６．
［６］ 邢光熹，朱建国．土壤微量元素和稀土元素化学［Ｍ］．北京：科学出版社，２００３．
［７］ 中国环境监测总站．中国土壤元素背景值［Ｍ］．北京：中国环境科学出版社，１９９０．
［８］ 王云，魏复盛．土壤环境元素化学［Ｍ］．北京：中国环境科学出版社，１９９５．
［９］ 郭孝，介晓磊，李明，等．硒、钴对苜蓿青干草营养水平影响的研究．植物营养与肥料学报，２０１０，１６（２）：４３９４４８．
［１１］ 邹琦．植物生理学实验指导［Ｍ］．北京：中国农业出版社，２０００．
［１４］ 寇江涛，师尚礼，胡桂馨，等．牛角花齿蓟马为害对紫花苜蓿活性氧代谢的影响．核农学报，２０１３，２７（１２）：１９４８１９５４．
［１５］ 周万海，师尚礼，寇江涛．一氧化氮对ＮａＣｌ胁迫下苜蓿种子萌发的影响．核农学报，２０１２，２６（４）：７１０７１６．
２５１ 草 业 学 报 第２４卷
［１６］ 丁园，谢海荣，魏洽，等．重金属胁迫对紫花苜蓿种子萌发的影响．南昌航空工业学院学报（自然科学版），２００４，１８（４）：
４５４７，５３．
［１７］ 张春荣，李红，夏立江，等．镉、锌对紫花苜蓿种子萌发及幼苗的影响．华北农学报，２００５，２０（１）：９６９９．
［１８］ 余艳华，王文全，郑春霞，等．土壤中Ｐｂ２＋，Ｃａ２＋，Ｃｄ２＋对苜蓿种子发芽和生长的影响．新疆农业大学学报，２００６，２９（２）：
５８６１．
［１９］ 慈恩，高明，王子芳，等．镉对紫花苜蓿种子萌发与幼苗生长的影响研究．中国生态农业学报，２００７，１５（１）：９６９８．
［２１］ 周万海，师尚礼，寇江涛．盐胁迫下外源ＮＯ对苜蓿幼苗生长及氮代谢的影响．应用生态学报，２０１２，２３（１１）：３００３３００８．
［２３］ 贺志理，王洪春．盐胁迫下苜蓿中盐蛋白的诱导产生．植物生理学报，１９９１，１７：７１７９．
［２４］ 洪仁远，杨广笑，刘东华，等．镉对小麦幼苗的生长和生理生化反应的影响．华北农学报，１９９１，６（３）：７０７５．
［２５］ 周万海，师尚礼，寇江涛．外源水杨酸对苜蓿幼苗盐胁迫的缓解效应．草业学报，２０１２，２１（３）：１７１１７６．
［２６］ 赵天宏，孙加伟，付宇．逆境胁迫下植物活性氧代谢及外源调控机理的研究进展．作物杂志，２００８，３：１０１３．
［２７］ 王松华，张华，何庆元．铜胁迫对紫花苜蓿幼苗叶片抗氧化系统的影响．应用生态学报，２０１１，２２（９）：２２８５２２９０．
３５１第９期 张虎 等：紫花苜蓿种子萌发对钴胁迫的生理生化响应