全 文 ：书利用犈犛犜－犛犛犚标记分析西南扁穗牛鞭草
种质的遗传多样性
陈永霞１，２，张新全１，谢文刚１，马啸１，刘影１
（１．四川农业大学草业科学系，四川 雅安６２５０１４；２．西昌学院，四川 西昌６１５０００）
摘要：利用禾谷作物ＥＳＴ－ＳＳＲ标记对采自我国西南地区的４０份野生扁穗牛鞭草和３份扁穗牛鞭草国审品种的
遗传变异和亲缘关系进行了研究。试验筛选出２３对引物对４３份供试材料进行扩增，共获得３２３条带，其中多态性
条带２６１条，多态性条带比率（ＰＰＢ）达８０．４％，多态信息含量（ＰＩＣ）为０．３５４～０．５００，平均值为０．４７４，遗传相似系
数（ＧＳ）为０．６９０～０．９１３，表现出丰富的遗传多样性。聚类分析结果表明，各供试材料间的聚类与其地理来源及形
态特征具有一定的相关性。５个扁穗牛鞭草地理类群间的分子方差分析（ＡＭＯＶＡ）揭示了供试的扁穗牛鞭草类群
内的遗传变异占总变异的９５．３２％，类群间变异占总变异的４．６８％。表明禾谷作物的ＥＳＴ－ＳＳＲ能用于扁穗牛鞭
草遗传多样性研究，是一种有效的分子标记。本研究结果为扁穗牛鞭草种质的收集、利用及育种提供了理论依据。
关键词：扁穗牛鞭草；ＥＳＴ－ＳＳＲ；遗传多样性
中图分类号：Ｓ８１２０５；Ｑ９４３　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１００４５７５９（２０１１）０６０２４５０９
　 简单序列重复（ｓｉｎｇｌｅｓｅｑｕｅｎｃｅｒｅｐｅａｔｓ，ＳＳＲ），又称微卫星ＤＮＡ，是由１～６个碱基组成串联重复的ＤＮＡ序
列，广泛应用于遗传图谱构建、种质鉴定和分子标记辅助育种等领域。由于引物开发成本高，目前，仅有小麦
（犜狉犻狋犻犮狌犿犪犲狊狋犻狏狌犿）、玉米（犣犲犪犿犪狔狊）等农作物及模式植物开发了ＳＳＲ引物，在草上应用较少，仅应用于柱花草
（犛狋狔犾狅狊犪狀狋犺犲狊犵狌犻犪狀犲狀狊犻狊）［１］、紫花苜蓿（犕犲犱犻犮犪犵狅狊犪狋犻狏犪）［２］、披碱草（犈犾狔犿狌狊犱犪犺狌狉犻犮狌狊）［３］、鸭茅（犇犪犮狋狔犾犻狊
犵犾狅犿犲狉犪狋犪）［４］等少数草类。
ＥＳＴ－ＳＳＲ（ｅｘｐｒｅｓｓｅｄｓｅｑｕｅｎｃｅｔａｇｓＳＳＲ）是存在于表达序列标签（ｅｘｐｒｅｓｓｅｄｓｅｑｕｅｎｃｅｔａｇｓ）中的简单重复
序列［５］，具有ＳＳＲ多态信息含量高、重复性好和特异性强等特点［６］。由于ＥＳＴ－ＳＳＲ侧翼序列在物种之间高度
保守，ＥＳＴ－ＳＳＲ标记可在不同物种之间通用［７１０］。Ｍｉａｎ等［６］和 Ｗａｎｇ等［１１］的研究证实，禾谷作物的ＥＳＴ－
ＳＳＲ引物可用于禾本科草资源的遗传多样性研究及遗传图谱构建，且在竹子（犃狉狌狀犱犻狀犪狉犻犪）［１２］、柳枝稷（犘犪狀犻
犮狌犿狏犻狉犵犪狋狌犿）［１３］、鸭茅［１４］、黑麦草（犔狅犾犻狌犿）［１５］等植物上成功应用。
扁穗牛鞭草（犎犲犿犪狉狋犺狉犻犪犮狅犿狆狉犲狊狊犪）为禾本科牛鞭草属多年生暖季型优良饲草，是我国南方发展草地畜牧
业的骨干草种，在长江中下游各省推广百万余亩［１６］，取得显著的经济和生态效益。同时，在环境绿化、生态治理
上显示出广阔的应用前景［１７，１８］。我国西南地区地貌复杂，气候类型多样，蕴藏着丰富的野生扁穗牛鞭草资源。
但目前对野生扁穗牛鞭草种质的遗传背景及分子遗传分析方面研究报告较少，仅采用ＡＦＬＰ（ａｍｐｌｉｆｉｅｄｆｒａｇｍｅｎｔ
ｌｅｎｇｔｈｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ，扩增片段长度多态性）［１９］、ＩＳＳＲ（ｉｎｔｅｒｓｉｍｐｌｅｓｅｑｕｅｎｃｅｒｅｐｅａｔ，简单序列重复区间）［２０，２１］、
ＳＲＡＰ（ｓｅｑｕｅｎｃｅｒｅｌａｔｅｄａｍｐｌｉｆｉｅｄｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ，相关序列扩增多态性）［２２］等对其进行研究。可用的标记有限，
亟需开发新的标记。在Ｇｅｎｅｂａｎｋ数据库上没有关于牛鞭草的任何基因信息，不能开发ＥＳＴ－ＳＳＲ引物。
鉴于此，本研究选用禾谷作物的ＥＳＴ－ＳＳＲ引物对来自我国西南区不同生态类型的扁穗牛鞭草基因组
ＤＮＡ进行扩增，分析其遗传多样性，目的在于探讨禾谷作物ＥＳＴ－ＳＳＲ引物用于扁穗牛鞭草的可行性，并为扁
穗牛鞭草种质资源的收集利用和新品种选育提供理论依据。
第２０卷　第６期
Ｖｏｌ．２０，Ｎｏ．６
草　业　学　报
ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ 　　
２４５－２５３
２０１１年１２月
 收稿日期：２０１００９１５；改回日期：２０１０１１０３
基金项目：国家科技支撑计划（２０１１ＢＡＤ１７Ｂ０３）和科技部农转资金（２０１０ＧＢ２Ｆ０００４０２）资助。
作者简介：陈永霞（１９７８），女，四川西昌人，讲师，在读博士。Ｅｍａｉｌ：ｃｈｙｏｎｇｘｉａ＠１２６．ｃｏｍ
通讯作者。Ｅｍａｉｌ：ｚｈａｎｇｘｑ＠ｓｉｃａｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
１　材料与方法
１．１　供试材料
供试材料为四川农业大学收集保存的野生扁穗牛鞭草无性系４０份（表１），其中重庆１０份、四川２４份、贵州
５份、云南２份及“广益”、“重高”、“雅安”３个国审品种，保存于四川农业大学教学农场种质资源圃。
表１　扁穗牛鞭草无性系来源
犜犪犫犾犲１　犛狅狌狉犮犲狅犳狋犺犲犮犾狅狀犲狊狅犳犎．犮狅犿狆狉犲狊狊犪犮犾狅狀犲狊
编号
Ｃｏｄｅ
来源地
Ｏｒｉｇｉｎ
地理类群
Ｇｅｏｇｒａｐｈｉｃｇｒｏｕｐｓ
编号
Ｃｏｄｅ
来源地
Ｏｒｉｇｉｎ
地理类群
Ｇｅｏｇｒａｐｈｉｃｇｒｏｕｐｓ
Ｈ００２ 重庆Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ ＣＱ Ｈ０３７ 四川达县 Ｄａｘｉａｎ，Ｓｉｃｈｕａｎ ＳＣＰＺ
Ｈ００３ 四川雅安 Ｙａ’ａｎ，Ｓｉｃｈｕａｎ ＳＣＰＺ Ｈ０３８ 重庆梁平Ｌｉａｎｇｐｉｎｇ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ ＣＱ
Ｈ００４ 四川名山 Ｍｉｎｇｓｈａｎ，Ｓｉｃｈｕａｎ ＳＣＰＺ Ｈ０３９ 重庆垫江 Ｄｉａｎｊｉａｎｇ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ ＣＱ
Ｈ００５ 四川雅安 Ｙａ’ａｎ，Ｓｉｃｈｕａｎ ＳＣＰＺ Ｈ０４０ 重庆涪陵Ｆｕｌｉｎｇ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ ＣＱ
Ｈ００７ 四川洪雅 Ｈｏｎｇｙａ，Ｓｉｃｈｕａｎ ＳＣＰＺ Ｈ０４１ 贵州独山 Ｄｕｓｈａｎ，Ｇｕｉｚｈｏｕ ＧＺ
Ｈ００９ 四川洪雅 Ｈｏｎｇｙａ，Ｓｉｃｈｕａｎ ＳＣＰＺ Ｈ０４３ 贵州独山Ｄｕｓｈａｎ，Ｇｕｉｚｈｏｕ ＧＺ
Ｈ０１０ 重庆南山 Ｎａｎｓｈａｎ，Ｓｉｃｈｕａｎ ＣＱ Ｈ０４４ 贵州独山Ｄｕｓｈａｎ，Ｇｕｉｚｈｏｕ ＧＺ
Ｈ０１１ 南充嘉陵江Ｊｉａｌｉｎｇｒｉｖｅｒ ＳＣＰＺ Ｈ０４５ 贵州荔波Ｌｉｂｏ，Ｇｕｉｚｈｏｕ ＧＺ
Ｈ０１４ 四川大邑 Ｄａｙｅ，Ｓｉｃｈｕａｎ ＳＣＰＺ Ｈ０４７ 贵州荔波Ｌｉｂｏ，Ｇｕｉｚｈｏｕ ＧＺ
Ｈ０１６ 四川眉山 Ｍｅｉｓｈａｎ，Ｓｉｃｈｕａｎ ＳＣＰＺ Ｈ０４８ 云南巧家 Ｑｉａｏｊｉａ，Ｙｕｎｎａｎ ＹＮ
Ｈ０１７ 四川乐山Ｌｅｓｈａｎ，Ｓｉｃｈｕａｎ ＳＣＰＺ Ｈ０４９ 云南巧家Ｑｉａｏｊｉａ，Ｙｕｎｎａｎ ＹＮ
Ｈ０１９ 四川雅安 Ｙａ’ａｎ，Ｓｉｃｈｕａｎ ＳＣＰＺ Ｈ０５０ 四川宁南 Ｎｉｎｇｎａｎ，Ｓｉｃｈｕａｎ ＳＣＰＸ
Ｈ０２１ 四川绵阳 Ｍｉａｎｙａｎｇ，Ｓｉｃｈｕａｎ ＳＣＰＺ Ｈ０５２ 四川自贡Ｚｉｇｏｎｇ，Ｓｉｃｈｕａｎ ＳＣＰＺ
Ｈ０２３ 四川绵阳 Ｍｉａｎｙａｎｇ，Ｓｉｃｈｕａｎ ＳＣＰＺ Ｈ０５３ 四川自贡Ｚｉｇｏｎｇ，Ｓｉｃｈｕａｎ ＳＣＰＺ
Ｈ０２５ 四川绵阳 Ｍｉａｎｙａｎｇ，Ｓｉｃｈｕａｎ ＳＣＰＺ Ｈ０５４ 四川乐山Ｌｅｓｈａｎ，Ｓｉｃｈｕａｎ ＳＣＰＺ
Ｈ０２６ 四川宁南 Ｎｉｎｇｎａｎ，Ｓｉｃｈｕａｎ ＳＣＰＸ Ｈ０５６ 重庆江津Ｊｉａｎｇｊｉｎ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ ＣＱ
Ｈ０２８ 四川宁南Ｎｉｎｇｎａｎ，Ｓｉｃｈｕａｎ ＳＣＰＸ Ｈ０５７ 重庆大足 Ｄａｚｕ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ ＣＱ
Ｈ０２９ 四川宁南Ｎｉｎｇｎａｎ，Ｓｉｃｈｕａｎ ＳＣＰＸ Ｈ０６０ 四川西昌 Ｘｉｃｈａｎｇ，Ｓｉｃｈｕａｎ ＳＣＰＸ
Ｈ０３０ 四川宜宾 Ｙｉｂｉｎ，Ｓｉｃｈｕａｎ ＳＣＰＺ ＧＹ 四川雅安 Ｙａ’ａｎ，Ｓｉｃｈｕａｎ ＳＣＰＺ
Ｈ０３３ 重庆万洲 Ｗａｎｚｈｏｕ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ ＣＱ ＹＡ 四川雅安 Ｙａ’ａｎ，Ｓｉｃｈｕａｎ ＳＣＰＺ
Ｈ０３４ 重庆梁平Ｌｉａｎｇｐｉｎｇ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ ＣＱ ＣＧ 四川雅安Ｙａ’ａｎ，Ｓｉｃｈｕａｎ ＳＣＰＺ
Ｈ０３５ 重庆梁平Ｌｉａｎｇｐｉｎｇ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ ＣＱ
　ＣＱ：重庆 Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ；ＳＣＰＺ：四川盆周山区 ＴｈｅｍｏｕｎｔａｉｎａｒｅａｓａｒｏｕｎｄｔｈｅＳｉｃｈｕａｎ；ＳＣＰＸ：四川攀西地区 Ｐａｎｘｉｒｅｇｉｏｎ，Ｓｉｃｈｕａｎ；ＧＺ：贵州
Ｇｕｉｚｈｏｕ；ＹＮ：云南 Ｙｕｎｎａｎ；ＧＹ：广益Ｇｕａｎｇｙｉ；ＹＡ：雅安Ｙａ’ａｎ；ＣＧ：重高Ｃｈｏｎｇｇａｏ．
１．２　方法
１．２．１　ＤＮＡ提取　２０１０年５月，取扁穗牛鞭草幼嫩叶片，按植物基因组ＤＮＡ提取试剂盒（北京天根生物公司）
说明书提取ＤＮＡ，用０．８％的琼脂糖凝胶检测ＤＮＡ质量，合格ＤＮＡ样品于－２０℃保存。
１．２．２　ＥＳＴ－ＳＳＲ引物的筛选　根据 Ｗａｎｇ等［１１］的报道，选取４７对ＥＳＴ－ＳＳＲ引物，其中来自玉米２４对、水
稻（犗狉狔狕犪狊犪狋犻狏犪）１２对、高粱（犛狅狉犵犺狌犿狏狌犾犵犪狉犲）１１对，所有引物由上海生工合成。利用 Ｈ０５０、“广益”、“雅安”３
份材料对所有４７对ＥＳＴ－ＳＳＲ引物进行筛选，选择条带清晰，多态性好的２３对ＥＳＴ－ＳＳＲ引物（表２），再对所
有扁穗牛鞭草材料基因组ＤＮＡ进行扩增。
１．２．３　ＰＣＲ扩增及产物检测　ＰＣＲ反应体系（２０μＬ）包括ＤＮＡ２０ｎｇ、引物０．８ｍｍｏｌ／Ｌ、Ｔａｑ酶１Ｕ、ｄＮＴＰ
０．１ｍｍｏｌ／Ｌ、ＭｇＣｌ２０．７５ｍｍｏｌ／Ｌ，１×ＰＣＲｂｕｆｆｅｒ１０μＬ，用灭菌水补足２０μＬ。ＰＣＲ程序
［１１］为：９４℃预变性４
６４２ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１１） Ｖｏｌ．２０，Ｎｏ．６
ｍｉｎ；９４℃变性１ｍｉｎ，５０℃复性３０ｓ，７２℃延伸４０ｓ，共１０个循环；９４℃变性１ｍｉｎ，４５℃复性３０ｓ，７２℃延伸４０ｓ，
共３５个循环；７２℃延伸１０ｍｉｎ；４℃保存。在ｂｉｏｒａｄｉｃｙｃｌｅＰＣＲ仪上进行ＰＣＲ扩增。用６％的变性聚丙烯酰胺
凝胶（丙烯酰胺∶甲叉＝１９∶１，７．５ｍｏｌ／Ｌ尿素，１×ＴＢＥ缓冲液）在北京六一电泳仪厂的ＤＹＹ６Ｃ电泳仪上４００
Ｖ恒压电泳，至指示带距胶底部３～５ｃｍ，停止电泳；０．１％ ＡｇＮＯ３ 染色，ＮａＯＨ溶液中显影；照相观察并记录结果。
表２　引物信息表
犜犪犫犾犲２　犐狀犳狅狉犿犪狋犻狅狀狅犳犈犛犜－犛犛犚狆狉犻犿犲狉狊
引物编号Ｃｏｄｅ ＥＳＴ登录号ＥＳＴｍａｒｋｅｒＮｏ． 上游引物Ｆｐｒｉｍｅｒ 下游引物Ｒｐｒｉｍｅｒ
Ｍ４ ＡＩ６９１４３７ ＣＡＣＡＡＣＴＣＣＡＴＣＡＧＡＧＧＡＣＡＧＡＧＡ ＣＴＧＣＴＡＣＧＡＣＡＴＡＣＧＣＡＡＧＧＣ
Ｍ７ ＡＷ０６７０３１ ＣＴＣＧＡＴＡＧＣＴＣＴＴＧＣＴＧＣＴＴＣＣＴＣ ＣＡＡＣＡＣＣＡＧＣＣＣＴＡＣＣＣＡＧＡ
Ｍ８ ＡＷ０９１４６１ ＴＡＡＡＧＣＴＡＴＧＡＴＧＧＣＡＣＴＴＧＣＡＧＡ ＣＡＴＡＴＴＴＧＣＣＴＴＴＧＣＣＣＴＴＴＴＧＴＡ
Ｍ１０ ＡＷ０６７２７５ ＴＡＡＣＴＡＣＴＡＣＡＣＣＡＣＴＣＧＣＧＣＡＡＡ ＧＴＧＴＣＧＴＧＴＴＧＧＧＡＧＡＡＣＡＴＧＡＧ
Ｍ１１ ＡＷ３３０７３８ ＧＴＧＧＣＡＴＴＴＴＴＡＴＣＴＧＣＡＡＣＡＣＡＧ ＴＧＴＡＡＣＴＴＡＡＴＣＧＴＣＧＧＣＡＧＡＡＣＣ
Ｍ１６ ＡＪ０１１６１５ ＴＴＴＣＡＴＧＴＧＣＴＴＧＣＡＧＡＧＴＴＴＧＡＣ ＧＴＣＡＴＧＣＡＡＧＴＡＴＣＣＧＣＴＧＴＣＴＴ
Ｍ１７ ＡＩ９４８００８ ＡＡＧＡＡＡＡＣＡＧＧＴＡＡＣＧＧＧＣＡＴＧＴＡ ＴＧＧＡＡＴＴＣＴＴＣＴＧＡＣＴＡＣＣＣＣＡＡＧ
Ｍ２６ ＡＦ０１９１４６ ＣＴＧＴＣＧＴＡＡＧＡＧＧＣＣＡＡＣＡＧ ＴＣＴＧＡＡＣＧＡＴＧＡＡＣＡＧＴＡＣＡＣＧＣ
Ｍ３１ ＡＩ８５５３５２ ＧＡＡＧＴＣＧＣＧＡＴＧＡＧＡＡＣＧＴＡＡＣＣ ＧＣＴＡＧＣＴＡＧＴＧＴＧＡＧＴＴＣＴＴＣＣＧＣ
Ｍ３４ ＡＩ７７０５９２ ＧＣＡＴＣＴＧＴＡＧＣＣＴＴＴＴＴＧＴＧＴＧＴＧ ＣＴＣＡＧＣＴＴＧＣＡＧＧＴＴＡＴＣＧＣＴＴ
Ｍ３６ ＡＷ４０００７１ ＣＡＧＡＡＣＡＡＣＡＡＣＣＡＧＡＡＣＣＡＧＡＡＧ ＣＣＡＴＴＡＧＣＣＡＴＣＴＴＧＧＣＧＴＴ
Ｍ３７ ＡＷ４２４５６５ ＡＧＡＣＧＡＡＣＣＣＡＣＣＡＴＣＡＴＣＴＴＴＣ ＣＧＣＴＴＧＧＣＡＴＣＴＣＡＴＧＴＡＴＡＴＣＴ
Ｍ４８ ＡＩ８５４９１７ ＴＧＧＡＣＧＡＴＣＴＧＣＴＴＣＴＴＣＡＧＧ ＧＡＡＧＧＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＧＡＧＴＡＧＧＴＣ
Ｒ２ ＡＡ７５３９０６ ＡＡＧＴＣＣＧＴＣＧＡＣＡＧＧＡＴＧＡＧ ＧＣＴＧＣＴＣＴＴＣＣＴＴＧＴＧＧＣＴＡ
Ｒ５ ＡＵ０３０７８９ ＡＧＣＡＡＴＧＡＧＧＣＡＧＴＴＣＧＴＣＴ ＡＧＣＡＴＧＡＡＧＴＧＣＡＴＧＡＣＣＣ
Ｒ３４ ＢＩ８０２４９４ ＧＧＣＴＧＴＧＣＣＣＡＡＡＴＡＣＡＡＧＴ ＡＧＣＡＡＧＣＴＴＣＴＧＴＧＧＧＴＧＴＴ
Ｒ３８ ＢＭ４２０９２８ ＧＴＣＡＴＣＴＡＣＣＡＣＡＣＣＣＡＧＣＣ ＣＴＴＧＧＴＣＣＡＡＣＣＣＧＡＡＣＴＴＡ
Ｓ９ ＣＮＬ１６８ ＧＧＡＧＣＴＧＡＧＧＡＴＣＧＡＧＡＧＴＧ ＡＧＴＣＧＧＡＡＣＴＴＴＧＡＧＧＡＣＧＡ
Ｓ１３ ＣＮＬ１７２ ＣＧＣＡＡＧＧＣＡＡＣＡＴＣＡＧＴＡＴＣ ＴＣＡＧＧＡＧＧＡＧＴＣＧＡＧＣＡＴＣＴ
Ｓ１７ ＣＮＬ１７６ ＧＣＣＡＴＧＡＧＣＴＡＣＣＡＡＧＣＡＧ ＧＴＣＧＴＣＧＴＣＣＴＣＧＡＡＧＣＡ
Ｓ２１ ＣＮＬ１８０ ＣＡＣＡＡＴＡＡＴＧＡＴＣＣＣＡＣＣＡ ＧＴＡＧＴＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＧＡＴＣＧ
Ｓ２４ ＣＮＬ１８３ ＡＧＧＧＡＡＧＧＡＡＣＣＡＡＧＡＣＣＡＴ ＣＴＣＡＧＴＣＡＣＣＴＣＣＡＣＣＧＡＡＧ
Ｓ２７ ＣＮＬ１８６ ＧＧＧＡＴＴＴＧＧＧＧＡＡＴＴＴＧＧＡＴＴＴ ＡＴＣＧＡＣＴＧＧＴＡＧＡＡＴＣＡＡＣＧ
　Ｍ：玉米 Ｍａｉｚｅ；Ｒ：水稻 Ｒｉｃｅ；Ｓ：高粱Ｓｏｒｇｈｕｍ．
１．３　统计分析
在相同迁移位置，对强带和清晰弱带进行统计，有带记为“１”，无带记为“０”，建立原始矩阵。根据表征矩阵，
统计ＳＳＲ扩增产物的条带总数和多态性条带数，计算多态性条带所占的比率（ＰＰＢ）和引物多态性信息含量
（ＰＩＣ）［２３］，犘犐犆犻＝２犳犻（１－犳犻），式中，犘犐犆犻表示引物犻的多态性信息含量，犳犻表示有带所占的频率，（１－犳犻）表示
无带所占的频率。使用ＮＴＳＹＳ２．１计算Ｎｅｉ－Ｌｉ遗传相似系数（Ｇｓ），犌狊犻犼＝犪／（犪＋犫＋犮），犌狊犻犼是个体犻和犼的遗
传相似性系数，犪为两个体的共享片段数，犫和犮为犻个体和犼个体各自拥有的多态片段数。根据相似性系数进行
ＵＰＧＭＡ（ｕｎｗｅｉｇｈｔｅｄｐａｉｒｇｒｏｕｐｍｅｔｈｏｄａｎａｌｙｓｉｓ）聚类分析，构建系统树［２４］。
在ＨａｒｄｙＷｅｉｎｂｅｒｇ平衡的基础上，采用ＰＯＰＧＥＮＥ１．３１计算各地理类群 Ｎｅｉ基因多样性指数（犎、犐）和
Ｎｅｉ氏无偏估计的遗传一致度与遗传距离，再用ＮＴＳＹＳ２．１绘制 ＵＰＧＭＡ聚类图［２５］。用ＡＭＯＶＡ１．５５分析
计算地理类群内和地理类群间的变异分布［２６］。
７４２第２０卷第６期 草业学报２０１１年
２　结果与分析
２．１　ＥＳＴ－ＳＳＲ扩增的多态性
试验利用筛选出的２３对来自高粱、玉米、水稻的ＥＳＴ－ＳＳＲ引物，对４３份供试材料基因组ＤＮＡ进行扩增，
共得到３２３条清晰可辨的条带（图１），其中多态性条带２６１条，多态性条带比率达８０．４％。单对引物扩增条带数
变幅为７条（Ｍ１６）～２０条（Ｍ１７），每对引物平均扩增１４．０条，多态性条带１１．３条。同时，单对引物的多态信息
含量（ＰＩＣ）变幅为０．３５４（Ｓ２１）～０．５００（Ｍ１７、Ｒ５和Ｒ３８），平均值为０．４７４（表３）。表明ＥＳＴ－ＳＳＲ能检测较多
的遗传位点，获得多态性较好的ＰＣＲ结果。
图１　犕１１扩增产物部分电泳图
犉犻犵．１　犃狀犪犿狆犾犻犳犻犮犪狋犻狅狀狆狉狅犳犻犾犲狌狊犻狀犵犈犛犜－犛犛犚狆狉犻犿犲狉狆犪犻狉犕１１
表３　２３对犈犛犜－犛犛犚引物在供试材料中的扩增情况及多态性
犜犪犫犾犲３　犃犿狆犾犻犳犻犮犪狋犻狅狀犪狀犱狆狅犾狔犿狅狉狆犺犻狊犿狅犳狋犺犲犘犆犚狆狉狅犱狌犮狋狊狑犻狋犺２３狆犪犻狉狊狅犳犈犛犜－犛犛犚狆狉犻犿犲狉狊
引物编号
Ｃｏｄｅ
总条带
Ｎｕｍｂｅｒｏｆｔｏｔａｌｂａｎｄ
多态性条带
Ｎｕｍｂｅｒｏｆｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃｂａｎｄｓ
多态性比率（ＰＰＢ）
Ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｏｆｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃｂａｎｄｓ（％）
多态信息含量（ＰＩＣ）
Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｃｏｎｔｅｎｔ
Ｍ４ １２ １１ ９１．７ ０．４８５
Ｍ７ １０ ７ ７０．０ ０．４７０
Ｍ８ １１ ５ ４５．５ ０．４４５
Ｍ１０ １３ １１ ８４．６ ０．４６０
Ｍ１１ １８ １４ ７７．８ ０．４９６
Ｍ１６ ７ ６ ８５．７ ０．４８４
Ｍ１７ ２０ １７ ８５．０ ０．５００
Ｍ２６ １６ １４ ８７．５ ０．４９６
Ｍ３１ １８ １１ ６１．１ ０．４９８
Ｍ３４ １７ １２ ７０．６ ０．４６９
Ｍ３６ １５ １４ ９３．３ ０．４６４
Ｍ３７ １６ １６ １００．０ ０．４７２
Ｍ４８ １１ ７ ６３．６ ０．４９３
Ｒ２ １２ ９ ７５．０ ０．４９９
Ｒ５ １６ １１ ６８．８ ０．５００
Ｒ３４ ９ ６ ６６．７ ０．４２５
Ｒ３８ １４ １２ ８５．７ ０．５００
Ｓ９ １４ １４ １００．０ ０．４９９
Ｓ１３ １６ １６ １００．０ ０．４６４
Ｓ１７ １７ ８ ４７．１ ０．４６４
Ｓ２１ １９ １７ ８９．５ ０．３５４
Ｓ２４ １２ １２ １００．０ ０．４９８
Ｓ２７ １０ １０ １００．０ ０．４７１
总和Ｔｏｔａｌ ３２３ ２６０
平均值 Ｍｅａｎ １４．０ １１．３ ８０．４ ０．４７４
８４２ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１１） Ｖｏｌ．２０，Ｎｏ．６
２．２　ＥＳＴ－ＳＳＲ遗传相似性分析
遗传相似系数越大，亲缘关系越近。对所有无性系进行遗传相似系数分析，结果表明，４３份扁穗牛鞭草无性
系间的遗传相似系数为０．６９０～０．９１３，其中Ｈ０３９（重庆垫江）和 Ｈ０４０（重庆涪陵）遗传相似系数最大，为０．９１３，
二者亲缘关系最近；Ｈ０１０（重庆南山）和Ｈ０５２（四川自贡）遗传相似系数最小，亲缘关系最远。表明供试材料间差
异明显，具有较为丰富的遗传多样性。
２．３　ＥＳＴ－ＳＳＲ聚类分析
采用非加权平均法（ＵＰＧＭＡ）进行聚类分析，以３２３个位点的谱带原始矩阵构建ＳＳＲ分子系统树图（图２）。
４３份扁穗牛鞭草聚为５类，Ａ类包括３个国审品种和 Ｈ００２、Ｈ０１９，Ｂ类主要是来自云南和贵州。来自重庆和四
川的材料主要分布于Ｃ、Ｄ、Ｅ三类中，在聚类过程中存在较多交叉。结合陈永霞等［２７］对表型的划分，聚为Ａ类的
Ｈ００２、“广益”和“雅安”３份材料为高大直立型，Ｈ０１９与“重高”２份材料为粗壮低矮型，聚入其他４类的材料均为
纤细低矮型。Ａ类中，Ｈ００２与“广益”亲缘关系很近，具有“广益”独特的灰绿色叶片，可作为“广益”的复份材料
保存。“雅安”是四川农业大学从“广益”人工草地变异单株中选育的新品种，聚类结果显示，二者具有较近的亲缘
关系。可见，扁穗牛鞭草ＥＳＲ－ＳＳＲ聚类与采集地有一定的相关性，能反映扁穗牛鞭草的生态适应性和外部形
态特征，正确评价种质间的遗传进化关系。同时，也反映出现有３个品种遗传基础较窄。
图２　扁穗牛鞭草犈犛犜－犛犛犚的犝犘犌犕犃聚类图
犉犻犵．２　犝犘犌犕犃犱犲狀犱狉狅犵狉犪犿犳狅狉犈犛犜－犛犛犚狅犳犎．犮狅犿狆狉犲狊狊犪犮犾狅狀犲狊
２．４　地理类群遗传结构分析
参考赵汝植［２８］对西南区自然区划的划分，结合采集地生态地理环境，将供试的４３份扁穗牛鞭草划分为５个
地理类群，即重庆、四川攀西地区、四川盆周山区、贵州、云南。从Ｎｅｉ氏遗传多样性指数（犎）和香农信息指数（犐）
看，四川盆周山区和重庆扁穗牛鞭草资源的遗传多样性水平最高，最低的是云南的材料（表４）。ＡＭＯＶＡ分析结
果表明，９５．３２％的遗传变异存在于地理类群内部，仅４．６８％的遗传变异存在于地理类群间，群体间和群体内的
变异均为极显著（犘＜０．０１）（表５）。
９４２第２０卷第６期 草业学报２０１１年
表４　扁穗牛鞭草不同地理类群遗传多样性指数
犜犪犫犾犲４　犌犲狀犲狋犻犮狆狅犾狔犿狅狉狆犺犻狊犿犻狀犱犲狓犳狅狉犳犻狏犲犵犲狅犵狉犪狆犺犻犮犵狉狅狌狆狊
地理类群Ｇｒｏｕｐｓ 样本数Ｓａｍｐｌｅａｍｏｕｎｔ ＰＢ 犎 犐
重庆Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ １０ １８９ ０．１８３９ ０．２７９９
四川攀西地区Ｐａｎｘｉｒｅｇｉｏｎ，Ｓｉｃｈｕａｎ ５ １４４ ０．１５２２ ０．２２９８
四川盆周山区ＴｈｅｍｏｕｎｔａｉｎａｒｅａｓａｒｏｕｎｄｔｈｅＳｉｃｈｕａｎ ２１ ２１６ ０．１８４１ ０．２８６７
贵州Ｇｕｉｚｈｏｕ ５ １４０ ０．１４０７ ０．２１５３
云南Ｙｕｎｎａｎ ２ ５０ ０．０６４１ ０．０９３６
　ＰＢ：多态性条带数 Ｎｕｍｂｅｒｓｏｆｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｂａｎｄｓ；犎：Ｎｅｉ氏遗传多样性指数 Ｎｅｉ’ｓｇｅｎｅｔｉｃｄｉｖｅｒｓｉｔｙ；犐：香农信息多样性指数Ｓｈａｎｎｏｎ’ｓｉｎｆｏｒ
ｍａｔｉｏｎｉｎｄｅｘ．
表５　扁穗牛鞭草种质地理类群分子变异方差分析（犃犕犗犞犃）
犜犪犫犾犲５　犃狀犪犾狔狊犻狊狅犳犿狅犾犲犮狌犾犪狉狏犪狉犻犪狀犮犲（犃犕犗犞犃）狅犳犳犻狏犲犵犲狅犵狉犪狆犺犻犮犵狉狅狌狆狊狅犳犎．犮狅犿狆狉犲狊狊犪
变异来源
Ｓｏｕｒｃｅｏｆｖａｒｉａｎｃｅ
自由度
犱犳
偏差平方和
Ｓｕｍｏｆｓｕｑａｒｅｓ
变异组分
Ｖａｒｉａｎｃｅｃｏｍｐｏｎｅｎｔ
变异百分率
Ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｖａｒｉａｎｃｅ（％）
犘值
犘ｖａｌｕｅ
类群间Ａｍｏｎｇｇｒｏｕｐｓ ４ １９０．００６ １．７１８ ４．６８ ＜０．００１
类群内 Ｗｉｔｈｉｎｇｒｏｕｐｓ ３８ １３２８．９２４ ３４．９７１ ９５．３２ ＜０．００１
总计Ｔｏｔａｌ ４２ １５１８．９３０ ３６．６８９
２．５　地理类群遗传距离及聚类分析
为了解各个生态地理类群间的关系，利用Ｐｏｐｇｅｎ软件计算出各类群间的Ｎｅｉ氏一致度和遗传距离的无偏
估计值（表６），然后用ＮＴＳＹＳ２．１绘制ＵＰＧＭＡ聚类图（图３）。５个类群间的遗传一致度较高，均大于０．８５０。
各类群间遗传距离的变幅为０．０１９９（重庆与四川盆周山区）～０．１１７３（云南与贵州），重庆类群与四川盆周山区
类群遗传距离最小，首先聚为一类，后依次与四川攀西地区、贵州、云南类群聚在一起。云南类群与其他类群的距
离较远，表现出一定的特异性。地理类群的聚类结果与４３份材料的 ＵＰＧＭＡ聚类均显示出重庆和四川的扁穗
牛鞭草材料遗传一致度较高。
表６　各地理类群间犖犲犻氏遗传一致度和遗传距离
犜犪犫犾犲６　犖犲犻’狊犵犲狀犲狋犻犮犻犱犲狀狋犻狋狔犪狀犱犵犲狀犲狋犻犮犱犻狊狋犪狀犮犲犫犲狋狑犲犲狀犳犻狏犲犵犲狅犵狉犪狆犺犻犮犵狉狅狌狆狊
地理类群
Ｇｒｏｕｐ
重庆
Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ
四川攀西地区
Ｐａｎｘｉｒｅｇｉｏｎ
四川盆周山区
ＴｈｅｍｏｕｎｔａｉｎａｒｅａｓａｒｏｕｎｄｔｈｅＳｉｃｈｕａｎ
贵州
Ｇｕｉｚｈｏｕ
云南
Ｙｕｎｎａｎ
重庆Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ － ０．９６４４ ０．９８０３ ０．９４４４ ０．８９２７
四川攀西地区Ｐａｎｘｉｒｅｇｉｏｎ ０．０３６３ － ０．９７２０ ０．９３５１ ０．８９０８
四川盆周山区
ＴｈｅｍｏｕｎｔａｉｎａｒｅａｓａｒｏｕｎｄｔｈｅＳｉｃｈｕａｎ
０．０１９９ ０．０２８４ － ０．９５５３ ０．９０３２
贵州Ｇｕｉｚｈｏｕ ０．０５７２ ０．０６７１ ０．０４５７ － ０．８８９３
云南Ｙｕｎｎａｎ ０．１１３５ ０．１１５６ ０．１０１８ ０．１１７３ －
　注：Ｎｅｉ氏遗传一致度ＧＳ（对角线上方）和遗传距离ＧＤ（对角线下方）。
　Ｎｏｔｅ：Ｎｅｉ’ｓｇｅｎｅｔｉｃｉｄｅｎｔｉｔｙ（ａｂｏｖｅｄｉａｇｏｎａｌ）ａｎｄｇｅｎｅｔｉｃｄｉｓｔａｎｃｅ（ｂｅｌｏｗｄｉａｇｏｎａｌ）．
３　讨论
３．１　禾谷作物ＥＳＴ－ＳＳＲ引物在扁穗牛鞭草遗传多样性研究中的可行性
自Ｇｕｐｔａ等［２９］报道普通小麦ＥＳＴ－ＳＳＲ标记不仅在禾本科作物的单一种内通用，而且在相关种间也具有
０５２ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１１） Ｖｏｌ．２０，Ｎｏ．６
图３　５个地理类群基于犖犲犻氏一致度的聚类图
犉犻犵．３　犇犲狀犱狉狅犵狉犪犿狅犳犳犻狏犲犵犲狅犵狉犪狆犺犻犮犵狉狅狌狆狊犫犪狊犲犱狅狀狌狀犫犻犪狊犲犱犿犲犪狊狌狉犲狊狅犳犵犲狀犲狋犻犮犻犱犲狀狋犻狋狔
通用性以来，ＥＳＴ－ＳＳＲ引物的跨种扩增在多种植物的遗传多样性研究中得到成功应用。本研究首次将玉米、水
稻、高粱等禾谷作物ＥＳＴ－ＳＳＲ引物用于扁穗牛鞭草的ＳＳＲ标记，１００％的引物能从扁穗牛鞭草基因组ＤＮＡ扩
出条带，其中４８．９％（２３对）能扩增出条带清晰、多态性好的ＰＣＲ电泳图谱。２３对ＥＳＴ－ＳＳＲ引物对４３份扁穗
牛鞭草基因组ＤＮＡ进行扩增，共获得３２３个扩增片段，多态性条带比率（ＰＰＢ）为８０．４％，多态信息含量（ＰＩＣ）为
０．４７４。可见，ＥＳＴ－ＳＳＲ有较高的多态检出率。表明禾谷作物的ＥＳＴ－ＳＳＲ能用于扁穗牛鞭草遗传多样性研
究，是一种有效的分子标记。本研究中 ＥＳＴ－ＳＳＲ 多态性条带比率略低于 ＡＦＬＰ的８８．６％［１９］、ＩＳＳＲ 的
８４．２％［２０］和ＳＲＡＰ的９１．５％［２２］。这与 ＥＳＴ－ＳＳＲ扩增的是 ＤＮＡ 的转录区，发生变异有限有关［３０］。但与
ＡＦＬＰ、ＳＲＡＰ、ＩＳＳＲ等标记相比，ＥＳＴ－ＳＳＲ标记有大量的ＥＳＴ－ＳＳＲ引物可供选择，引物开发成本低，而且
ＥＳＴ序列来自基因表达区域，保守性高，可以与功能基因建立联系［３１］。因此，对牛鞭草等Ｇｅｎｂａｎｋ上没有基因
组相关信息的植物来说，根据禾谷作物的ＥＳＴ数据开发ＥＳＴ－ＳＳＲ标记不失为一种方便、快捷的方法，而且
Ｇｅｎｅｂａｎｋ上不断增长的各类ＥＳＴ数据，为ＥＳＴ－ＳＳＲ标记提供了丰富的资源。
３．２　ＥＳＴ－ＳＳＲ的遗传多样性
４３份扁穗牛鞭草无性系间的遗传相似系数变化范围为０．６９０～０．９１３，表明西南区扁穗牛鞭草具有较丰富的
遗传多样性，这与通过ＡＦＬＰ［２０］、ＳＲＡＰ［２３］的研究结果一致。供试材料间的亲缘关系与生态地理环境具有一定的
相关性和规律性，扁穗牛鞭草在长期适应相似的环境条件过程中，形成了相似的生态类型，采用ＳＲＡＰ和ＡＦＬＰ
分子标记研究野生狗牙根的遗传多样性时，也得到相似的结论［３２，３３］。川渝地区属于盆地丘陵类型，具有相似的
环境地理条件，来自该地区的材料聚类时相互交叉；云南、贵州为高原，贵州多阴雨，而云南干湿分明，日照充足，
各自形成了其独特的生态地理环境，来自云南、贵州的材料都是本地区的先聚在一起。但这种关系并不是绝对
的，如来自贵州的Ｈ０４１、Ｈ０４４和四川的材料聚为一类。聚类和地理来源不一致的原因可能是：１）扁穗牛鞭草具
有很强的无性繁殖能力，通过水流、交通、人为引种等交流，使其转入异地扩展繁殖。２）可能发生了基因突变，物
种在进化过程中，有个别的基因发生了变异，且该突变体能较好地适应当地的环境，这个变异基因就能得到保存；
３）尽管扁穗牛鞭草结实率很低，但仍然能进行天然杂交，可能导致其基因型的改变，使得野生扁穗牛鞭草的遗传
相似性和地理来源关系复杂化。
３．３　地理类群间的遗传关系
扁穗牛鞭草地理类群内的遗传变异（９５．３２％）高于类群间（４．６８％），该结果与范彦等［２２］通过ＳＲＡＰ方法研
究发现扁穗牛鞭草地理类群内有较高的遗传变异（８５．５９％）的结论吻合。Ｈｕａｎｇ等［２１］通过ＩＳＳＲ分析我国西南
地区１２个扁穗牛鞭草自然居群的遗传分化，发现４８．２％的变异存在于不同居群间，这是因为本研究供试材料不
是按照自然居群采样，来自不同地点的种质增加了类群内的变异。根据Ｎｅｉ氏遗传多样性指数（Ｈ）和香农信息
１５２第２０卷第６期 草业学报２０１１年
指数（Ｉ）计算结果，四川盆周山区和重庆类群的遗传多样性水平最高，其次是四川攀西地区和贵州类群，遗传多样
性最低的是云南类群。有研究表明，遗传多样性水平和群体样本数量间存在明显的相关性［３４３６］，可能正是因为贵
州、云南类群采集的样本数量少，特别是云南类群的２份材料来自同一采集点，导致类群内较低的遗传多样性。
因此，在对遗传多样性丰富地区进一步收集扁穗牛鞭草资源的同时，加强对材料少、代表性差的贵州、云南地区的
扁穗牛鞭草野生资源的收集力度，以丰富扁穗牛鞭草的基因源。
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ｔｈｒｅｅｍａｊｏｒｐｕｌｓｅｃｒｏｐｓ［Ｊ］．ＴｈｅｏｒｅｔｉｃａｌａｎｄＡｐｐｌｉｅｄＧｅｎｅｔｉｃｓ，２００５，１１０（７）：１２１０１２１７．
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ｇｒａｓｓｓｐｅｃｉｅｓｆｏｒｇｅｒｍｐｌａｓｍｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎａｎｄｅｖａｌｕａｔｉｏｎ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＧｅｎｅｔｉｃＲｅｓｏｕｒｃｅｓ：ＣｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎａｎｄＵｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ，
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ａｔｅｂａｍｂｏｏｃｏｌｅｃｔｉｏｎｂｙｕｓｉｎｇｔｒａｎｓｆｅｒｒｅｄＥＳＴ－ＳＳＲｍａｒｋｅｒｓ［Ｊ］．Ｇｅｎｏｍｅ，２００５，４８：７３１７３７．
［１３］　ＮａｒａｓｉｍｈａｍｏｏｒｔｈｙＢ，ＳａｈａＭＣ，ＳｗａｌｅｒＴ，犲狋犪犾．ＧｅｎｅｔｉｃｄｉｖｅｒｓｉｔｙｉｎｓｗｉｔｃｈｇｒａｓｓｃｏｌｅｃｔｉｏｎｓａｓｓｅｓｓｅｄｂｙＥＳＴ－ＳＳＲｍａｒｋ
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犵犾狅犿犲狉犪狋犪Ｌ．）［Ｊ］．ＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌＳｙｓｔｅｍａｔｉｃｓａｎｄＥｃｏｌｏｇｙ，２０１０，６（９）：７４０７４９．
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２５２ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１１） Ｖｏｌ．２０，Ｎｏ．６
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ｗｅｒｅ，１９９４．
［２６］　ＥｘｃｏｆｆｉｅｒＬ，ＳｍｏｕｓｅＰＥ，ＱｕａｔｔｒｏＪＭ．ＡｎａｌｙｓｉｓｏｆｍｏｌｅｃｕｌａｒｖａｒｉａｎｃｅｉｎｆｅｒｒｅｄｆｒｏｍｍｅｔｒｉｃｄｉｓｔａｎｃｅａｍｏｎｇＤＮＡｈａｐｌｏｔｙｐｅｓ：
ＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｔｏｈｕｍａｎｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａＤＮＡｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎｓｉｔｅｓ［Ｊ］．Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，１９９２，１３１：４７９４９１．
［２７］　陈永霞，张新全，杨春华，等．野生扁穗牛鞭草种质资源形态多样性研究［Ｊ］，中国草地，２００５，（１）：７７７９．
［２８］　赵汝植．西南区自然区划探讨［Ｊ］．西南师范大学学报（自然科学版），１９９７，２２（２）：１９３１９８．
［２９］　ＧｕｐｔａＰＫ，ＲｕｓｔｇｉＳ，ＳｈａｒｍａＳ，犲狋犪犾．ＴｒａｎｓｆｅｒａｂｌｅＥＳＴ－ＳＳＲｍａｒｋｅｒｓｆｏｒｔｈｅｓｔｕｄｙｏｆｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍａｎｄｇｅｎｅｔｉｃｄｉｖｅｒｓｉｔｙ
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ｉｔｓｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌｙｓｉｍｉｌａｒ犈犾狔犿狌狊犪犾犪狊犽犪狀狌狊［Ｊ］．ＰｌａｎｔＳｙｓｔｅｍａｔｉｃＥｖｏｌｕｔｉｏｎ，２００５，２５０：８１９１．
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狊狌狊（Ｓｃｈｒｅｎｋ）Ｔｚｖｅｌ．（Ｐｏａｃｅａｅ）［Ｊ］．ＧｅｎｅｔｉｃＲｅｓｏｕｒｃｅｓａｎｄＣｒｏｐＥｖｏｌｕｔｉｏｎ，２０００，４７（１）：１１２４．
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犌犲狀犲狋犻犮犱犻狏犲狉狊犻狋狔狅犳犎犲犿犪狉狋犺狉犻犪犮狅犿狆狉犲狊狊犪犵犲狉犿狆犾犪狊犿狊犳狉狅犿狊狅狌狋犺狑犲狊狋犲狉狀犆犺犻狀犪犫犪狊犲犱狅狀犈犛犜－犛犛犚犿犪狉犽犲狉狊
ＣＨＥＮＹｏｎｇｘｉａ１，２，ＺＨＡＮＧＸｉｎｑｕａｎ１，ＸＩＥＷｅｎｇａｎｇ１，ＭＡＸｉａｏ１，ＬＩＵＹｉｎｇ１
（１．ＳｉｃｈｕａｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙａ’ａｎ６２５０１４，Ｃｈｉｎａ；２．ＸｉｃｈａｎｇＣｏｌｅｇｅ，Ｘｉｃｈａｎｇ６１５０００，Ｃｈｉｎａ）
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－ＳＳＲｐｒｉｍｅｒｓｏｆＰｏａｃｅａｅ，３２３ｆｒａｇｍｅｎｔｓｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄ，ｏｆｗｈｉｃｈ２６１ｗｅｒｅｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ，ａｃｃｏｕｎｔｉｎｇｆｏｒ
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３５２第２０卷第６期 草业学报２０１１年