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耐盐根瘤菌对紫花苜蓿接种效果的研究



全 文 :书耐盐根瘤菌对紫花苜蓿接种效果的研究
陈利云,张丽静,周志宇
(兰州大学草地农业科技学院,甘肃 兰州730020)
摘要:在甘肃省临泽县盐渍地采集紫花苜蓿耐盐根瘤菌,编号为 GL007,它能在pH 值为14,NaCl浓度为1.539
mol/L,Na2SO4 浓度为1.971mol/L的YMA培养基上正常生长。经温室蛭石盆栽试验对5个紫花苜蓿品种进行
接种效果的研究。结果表明,该根瘤菌与5个紫花苜蓿品种都能共生结瘤,表现出共生效应的多样性。接种该耐
盐根瘤菌的紫花苜蓿与不接种的对照相比其结瘤数增加了11.4%~77.7%,有效瘤重增加了26.4%~80.8%,地
上生物量鲜重增加了45.8%~87.5%,地上生物量干重增加了49.1%~106.3%,粗蛋白质含量增加了1.5%~
13.5%,初步筛选出的与耐盐根瘤菌GL007最佳匹配的紫花苜蓿品种是金黄后,其地上生物量鲜重、干重、粗蛋白
质含量分别比对照增加了82.6%,106.3%和13.5%,与对照有显著差异。
关键词:紫花苜蓿;耐盐根瘤菌;接种效果
中图分类号:S551+.703.4;S144.3  文献标识码:A  文章编号:10045759(2008)05004305
  苜蓿在全世界栽培广泛,许多国家以苜蓿作为农牧业的主要支柱作物,我国栽培苜蓿已有2000多年历史[1]。
苜蓿-根瘤菌的共生固氮作用在改良土壤肥力,提高作物产量,改善生态环境等方面有着十分重要的作用和意
义。目前,我国正在大力推广豆科植物的种植,尤其在广阔的西部盐渍地,已经把扩大豆科牧草———苜蓿的种植
列入国家重大规划项目,但环境因子的限制是其不能在农业生产上充分发挥作用的重要原因[2]。王卫卫[3]对河
西走廊豆科植物结瘤固氮特征的研究结果显示,干旱缺水严重制约了根瘤菌的固氮作用,在盐渍地豆科植物共生
固氮体系效能更低。因此,如何构建高效、抗逆性和适应性强的豆科植物-根瘤菌共生体系对这些地区苜蓿的产
业化发展至关重要。接种根瘤菌可提高苜蓿的成苗率、幼苗结瘤率,增加苜蓿产草量和蛋白质含量,同时还可以
增加土壤肥力,使苜蓿的后茬作物获得增产[4],但苜蓿根瘤菌的不同菌株与不同品种间有很强的选择性,只有共
生性很强的“菌株-品种”组合才能形成共生固氮最佳体系[5]。因此,为有限的特殊根瘤菌株筛选最佳匹配的植
物品种是必需的。本研究采用来源于高盐碱极干旱地区土壤的耐盐根瘤菌,接种于5个紫花苜蓿品种,通过温室
蛭石盆栽,为耐盐根瘤菌筛选出1个最佳匹配的紫花苜蓿品种,以期适宜于特殊盐渍地的生长,发挥高效的固氮
功能。
1 材料与方法
1.1 供试材料
供试紫花苜蓿品种金黄后(犕犲犱犻犮犪犵狅狊犪狋犻狏犪 MGoldenEmpress),陇东(犕.狊犪狋犻狏犪MLongdong),三得力
(犕.狊犪狋犻狏犪MSanditi),阿尔冈金(犕.狊犪狋犻狏犪MAlgonquin)(甘肃省农业大学)。中苜一号(犕.狊犪狋犻狏犪MZhong
muNo.1)(中国农业科学院种子研究中心)。供试菌株GL007来源于甘肃河西走廊兰州大学临泽草地生态实验
站干旱盐渍地,宿主为紫花苜蓿金黄后。
1.2 供试菌株来源地概况
供试菌株GL007来源地位于甘肃临泽县,主要的土壤类型为盐渍化草甸土与盐土,海拔1390m,该区属大
陆性温带干旱气候,具干旱、多风、寒冷等特点。年日照时数3042h,≥0℃的年积温3548℃,≥10℃的年积温
3026℃,年太阳总辐射>607kJ/cm2。年均温7.6℃,最低温度-28℃,最高温度38℃,年均降水量121.5
mm,其中夏、秋季降水量占全年总量的61%。冬季受冷高压的影响,降水稀少,春季常干旱,年蒸发量2337.6
第17卷 第5期
Vol.17,No.5
草 业 学 报
ACTAPRATACULTURAESINICA   
43-47
10/2008
 收稿日期:20071214;改回日期:20080520
基金项目:国家重点基础研究发展规划项目(2007CB108903)资助。
作者简介:陈利云(1974),女,甘肃天水人,在读硕士。Email:chenliy06@lzu.cn
通讯作者。Email:zyzhou@lzu.edu.cn
mm。大气相对湿度为47%,属极干旱地区。
1.3 试验方法
1.3.1 根瘤菌培养 将上述供试菌株平板划线培养,挑起单菌落接种在 YMA(酵母粉甘露醇培养基,配方:
K2HPO40.5g/L,酵母粉1g/L,MgSO4·7H2O0.2g/L,甘露醇10g/L,NaCl0.1g/L,琼脂15g/L)培养基
上,在28℃培养箱中培养72h,用无菌水洗下根瘤菌体,装入无菌三角瓶中待用。
1.3.2 种子萌发蛭石灭菌 将精选的苜蓿种子首先用95%乙醇处理5min,再用0.1%升汞处理5min,无菌水
冲洗7或8次后,平铺于内含无菌纱布和少量无菌水的灭菌培养皿中,28℃催芽1~2d,待幼根长至1cm左右时
接种。将蛭石包入牛皮纸中扎好高压灭菌(112℃)3h备用。
1.3.3 接种与培养 用镊子将发芽的种子放入培养皿中用菌液浸泡15min,然后栽植于8cm×10cm的盆中,
每盆栽植5株,吸取菌液接种于种子周围,测定菌液的OD值(λ=600nm),接种时保证每棵种苗接菌量达到1.
0×109 个以上,以不接种为对照,每处理重复5次。培养温室温度为22±3℃、光强7000~8000lx、光照时间
14h,根据盆中失水情况适时加入低氮营养液。
1.3.4 测定方法 培养至50d时开始观测结果,测定项目包括每盆(5棵苗)总瘤数、有效瘤重(瘤饱满且表面呈
微透明粉红色),株高(从子叶痕处至离生长点最近的展开叶顶端)、苗色(目测对比),地上和地下部分鲜重(在收
获时称重),地上部分干重(先在烘箱中120℃杀青40min,然后在60℃烘干48h,称重)[6],粗蛋白含量(凯氏定
氮法)[7]。
1.4 数据处理
采用SPSS11.5软件进行统计分析,均值显著性检验采用单因素方差(AVONA)和配对狋检验分析。
2 结果与分析
2.1 接种GL007对5种紫花苜蓿株高与苗色的影响
研究表明接种根瘤菌的紫花苜蓿由于光合作用的加强而使产量增加,这会在植株的外部形态上表现出来。
结果显示(表1),接种后的5个紫花苜蓿品种株高比对照都有所增加,其中阿尔冈金和金黄后增加显著,分别为
13.86%和12.88%,其他各接种品种与对照间差异不显著。接种后各植株的颜色均比对照更深,金皇后和中苜
一号分枝较其他品种多且茎秆粗壮,苗色深绿。
2.2 接种GL007对5种紫花苜蓿结瘤数和有效瘤重的影响
接种GL007后5个紫花苜蓿品种结瘤数与对照相比均有所增加(表2),其中金黄后、陇东、中苜一号和阿尔
冈金分别比对照增加67.72%,77.22%,62.36%和46.67%,差异显著,三得利与对照差异不显著。有效瘤重除
陇东和阿尔冈金外其他品种与对照间都差异显著,其中三得力有效瘤重增加率最高为80.86%,这主要是三得力
比其他苜蓿品种结瘤数少,所以有效瘤重明显增加。
表1 接种犌犔007后5种紫花苜蓿株高与苗色
犜犪犫犾犲1 犘犾犪狀狋犺犲犻犵犺狋犪狀犱狊犲犲犱犾犻狀犵犮狅犾狅狌狉狅犳犳犻狏犲犕.狊犪狋犻狏犪犮狌犾狋犻狏犪狉狊犪犳狋犲狉犻狀狅犮狌犾犪狋犲犱狊狋狉犪犻狀狊犌犔007
品种Cultivars
株高Plantheight(cm)
接种Inoculated 对照CK 增加率Increaserate(%)
苗色Seedlingcolour
接种Inoculated 对照CK
金皇后Goldenempress 12.79±0.81Ba 11.33±1.19Bb 12.88 深绿色Dottlegreen 浅绿色Reseda
陇东Longdong 14.64±1.17Aa 14.26±2.64Aa 2.66 绿色Green 黄绿色Kely
中苜一号ZhongmuNo.1 13.14±1.78ABa 11.84±1.69Ba 10.97 深绿色Dottlegreen 浅绿色Reseda
三得力Sanditi 12.29±1.34Ba 11.81±1.37Ba 4.06 绿色Green 黄绿色Kely
阿尔冈金Algonquin 12.40±1.49Ba 10.89±2.48Bb 13.86 深绿色Dottlegreen 绿色Green
 平均值±标准差;多重均值比较采用LSD方法;同列标有相同大写字母的表示差异不显著(犘>0.05);成对均值比较采用狋检验,同行标有相同小
写字母的表示差异不显著(犘>0.05),下同。
 Thedateintablewereexpressedasmeans±SD;LSD(Leastsignificantdifferent)and狋testmethodwasusedinmultiplecomparisonsandpair狋test
comparisons;Valuessuffixedwithsamecapitalletterswithinonecolumnandsmalletterwithinonerowmeannosignificantlydifferenceat犘>0.05.
Thesamebelow.
44 ACTAPRATACULTURAESINICA(Vol.17,No.5) 10/2008
2.3 接种GL007对5种紫花苜蓿鲜草与干草产量的影响
紫花苜蓿产量的高低是其种植推广的重要依据。结果表明(表3和4),接种根瘤菌GL007后5个紫花苜蓿
品种地上生物量鲜重和干重相对于对照均有所提高,但增加幅度各有不同。地上生物量鲜重单株产量大小依次
是金皇后>陇东>中苜一号>阿尔冈金>三得力,地上生物量干重单株产量为黄后>陇东>中苜一号>三得力
>阿尔冈金,地下生物量鲜重单株产量大小为金皇后>中苜一号>三得力>阿尔冈金>陇东。鲜草和干草之间
的差异是由于不同苜蓿品种的含水量不同造成的。地上干物质产量作为苜蓿品质的重要标志,是本试验筛选高
效紫花苜蓿品种的重要指标之一,金黄后干草增产显著,比对照增加106.3%,本试验中金黄后干草产量最高。
2.4 接种GL007对5种紫花苜蓿地上部分粗蛋白含量的影响
作为优质牧草的紫花苜蓿,评定干草品质的一个重要指标是其粗蛋白含量。结果显示(表4),接种GL007
能提高各品种单位面积内粗蛋白含量。接种后金黄后、中苜一号、阿尔冈金与对照间显著差异,陇东和三得力与
对照间无显著差异。接种的5个品种中金黄后与阿尔冈金2个品种粗蛋白含量没有显著差异,但与陇东、中苜一
号和三得力间具有显著差异。试验中以接种菌原寄主金黄后粗蛋白含量最高,比对照增加13.5%。
表2 接种犌犔007后5种紫花苜蓿结瘤数和有效瘤重
犜犪犫犾犲2 犖狅犱狌犾犲狀狌犿犫犲狉狊犪狀犱犲犳犳犲犮狋犻狏犲狀狅犱狌犾犲狑犲犻犵犺狋狅犳犳犻狏犲犕.狊犪狋犻狏犪犮狌犾狋犻狏犪狉狊犪犳狋犲狉犻狀狅犮狌犾犪狋犲犱狊狋狉犪犻狀狊犌犔007
品种Cultivars
结瘤数Nodulenumbers(个/株 Nodules/plant)
接种Inoculated 对照CK 增加率Increaserate(%)
瘤重Noduleweight(g/10个Plant)
接种Inoculated 对照CK 增加率Increaserate(%)
金皇后Goldenempress 42.6Aa 25.4Ab 67.72 0.00847Aa 0.0054ABb 56.85
陇东Longdong 35.8ABa 20.2Ab 77.22 0.00830ABa 0.0068Aa 22.05
中苜一号ZhongmuNo.1 30.2Ba 18.6Ab 62.36 0.00836ABa 0.0058ABb 44.13
三得力Sanditi 19.4BCa 17.4Aa 11.40 0.00832ABa 0.0046Bb 80.86
阿尔冈金Algonquin 24.2Ba 16.5Ab 46.67 0.00670Ba 0.0053ABa 26.41
表3 接种犌犔007后5种紫花苜蓿地上生物量
犜犪犫犾犲3 犃犫狅狏犲犵狉狅狌狀犱犫犻狅犿犪狊狊狅犳犳犻狏犲犕.狊犪狋犻狏犪犮狌犾狋犻狏犪狉狊犪犳狋犲狉犻狀狅犮狌犾犪狋犲犱狊狋狉犪犻狀狊犌犔007
品种Cultivars
地上生物量鲜重
Abovegroundbiomassfreshweight(g/株Plant)
接种Inoculated 对照CK 增加率Increaserate(%)
地上生物量干重
Abovegroundbiomassdryweight(g/株Plant)
接种Inoculated 对照CK 增加率Increaserate(%)
金皇后Goldenempress 0.610Aa 0.334Ab 82.63 0.227Aa 0.110Ab 106.36
陇东Longdong 0.580Aa 0.366Ab 58.46 0.224Aa 0.115Ab 94.78
中苜一号ZhongmuNo.1 0.506ABa 0.288Bb 75.69 0.198ABa 0.128Ab 54.68
三得力Sanditi 0.471Ba 0.323ABb 45.82 0.158Ba 0.107Ab 49.05
阿尔冈金Algonquin 0.480Ba 0.256Bb 87.50 0.147BCa 0.095Ab 54.73
表4 接种犌犔007后5种紫花苜蓿地下生物量鲜重和地上部分粗蛋白质含量
犜犪犫犾犲4 犝狀犱犲狉犵狉狅狌狀犱犫犻狅犿犪狊狊犳狉犲狊犺狑犲犻犵犺狋犪狀犱犪犫狅狏犲犵狉狅狌狀犱犮狅犪狉狊犲狆狉狅狋犲犻狀狅犳犳犻狏犲犕.狊犪狋犻狏犪犮狌犾狋犻狏犪狉狊犪犳狋犲狉犻狀狅犮狌犾犪狋犲犱狊狋狉犪犻狀狊犌犔007
品种Cultivars
地下生物量鲜重
Undergroundbiomassfreshweight(g/株Plant)
接种Inoculated 对照CK 增加率Increaserate(%)
地上部分粗蛋白质
Abovegroundcoarseprotein(%)
接种Inoculated 对照CK 增加率Increaserate(%)
金皇后Goldenempress 0.170Aa 0.129Ab 31.78 18.64Aa 16.42Ab 13.52
陇东Longdong 0.114Ca 0.072CDb 58.33 16.53Ca 15.76Ba 4.88
中苜一号ZhongmuNo.1 0.160ABa 0.083Cb 92.77 18.14Ba 16.54Ab 9.67
三得力Sanditi 0.152Ba 0.098BCb 55.10 16.01Da 15.77Ba 1.52
阿尔冈金Algonquin 0.118Ca 0.106Ba 11.32 18.39ABa 16.48Ab 11.58
54第17卷第5期 草业学报2008年
3 讨论
据 Mohammad等[8]报道,根瘤菌在抗干旱和抗盐碱方面具有相关性,一般来说,抗旱性强的根瘤菌耐盐碱能
力也强。关桂兰等[9]、黄玲等[10]对新疆干旱地区根瘤菌资源的调查研究发现,新疆地区根瘤菌的生长繁殖及对
寄主植物的侵染结瘤和固氮作用明显不同于其他生态区,它不仅能在高温、干旱、盐碱等不利条件下很好的生长
繁殖,而且还能侵染寄主并使之结瘤固氮,从而表现出对环境的良好适应性。本试验接种菌株来源于甘肃河西走
廊干旱盐渍地,前期的耐盐根瘤菌筛选试验显示它能在pH值为14、NaCl1.539mol/L、Na2SO41.971mol/L的
培养基上生长,具有极强的耐盐碱性,是珍贵的耐盐碱菌种资源。
紫花苜蓿接种高效根瘤菌是提高其产量和品质的重要措施,该共生体每年从空气中固定200~400kg/hm2
的氮[11],但不同菌系和不同品种间固氮量差异很大。Tan等[12]揭示根瘤菌-紫花苜蓿共生体系各种变异成分对
总变异的贡献超过30%,根瘤菌菌系的变异占26%,超过36%的变异是紫花苜蓿与根瘤菌的互作引起的。高振
生等[13]在黄河三角洲沿海滩涂区给5个紫花苜蓿品种接种根瘤菌,结果表明,该技术可使紫花苜蓿干草产量提
高50.0%~93.2%,宁国赞等[14]在辽宁、黑龙江、云南、江西及内蒙古等18个试验点给紫花苜蓿接种根瘤菌的结
果显示,干草平均增产37.8%,增产最高的地区达到100%。喻文虎等[15]在甘肃省高寒阴湿地区种植紫花苜蓿,
接种根瘤菌结果表明,紫花苜蓿接种根瘤菌后,花期产草量提高27%。本试验的条件处于低氮环境,土著菌只存
在于种子中,接种筛选出的耐盐根瘤菌后,干草产量比对照增产49.1%~106.3%,粗蛋白质含量增加了1.5%~
13.5%,接种效果十分明显。说明所筛选的耐盐根瘤菌竞争能力强,固氮效率高。从试验的结果分析看,供试的
耐盐根瘤菌与5个紫花苜蓿品种中的金黄后显示出最佳的接种效果,除与试验提供的温室蛭石低氮环境有关外,
可能还与金黄后本身的特征有关,该品种产自美国,具有抗寒性强、根系发达、草质优良的特征。同期进行的苜蓿
种子耐盐碱萌发试验显示,金皇后耐盐碱能力也较强。因此耐盐根瘤菌和金皇后之间在试验中体现了良好的接
种效果,具有很好的匹配性,是本温室蛭石试验筛选出的一个高效的共生固氮体系。
氮肥是促进根茎叶生长的主要肥料。本试验处于低氮环境中,植株所需的氮肥除极少量由低氮营养液提供
外,其余的全由根瘤菌固氮作用获得。筛选的高效共生体系从粗蛋白质含量,干草产量,苗高,颜色等方面都与对
照间有较大差异,说明该根瘤菌对接种的紫花苜蓿除有固氮作用外可能还存在分泌生长素等促生功能[16,17]。但
是这些功能是否真地在发挥着作用,还有待于进一步研究。影响苜蓿—根瘤菌高效共生的因素非常多,有时是复
杂的综合效应[18~20],有许多基础性问题需要加大深入研究的力度。所选出的高效共生体系在实际生产环境中的
效果尚待通过盐渍地大田试验进一步验证。
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CHENLiyun,ZHANGLijing,ZHOUZhiyu
(ColegeofPastoralAgricultureScienceandTechnology,LanzhouUniversity,Lanzhou730020,China)
犃犫狊狋狉犪犮狋:Wecolectedsalinetolerancerhizobiafromsalinesoil犕犲犱犻犮犪犵狅狊犪狋犻狏犪inLinzecountyofGansuprov
incewhichcangrowthwelintheculturemedium (pH14,NaCl1.539mol/LandNa2SO41.971mol/L).It
wasinoculatedinfivedifferent犕.狊犪狋犻狏犪cultivarsbygreenhousetest.Theresultsshowedthatthesalttoler
antstrainscanproductnodulesinfive犕.狊犪狋犻狏犪cultivarswhichindicatedthediversityofsymbioticeffect.In
addition,itcanpromotegrowthoffiveinoculated犕.狊犪狋犻狏犪cultivars.Totalnodulesnumberwereincreased
11.4%-77.7%,effectivenodulesweightwereincreased26.4%-80.8%,freshabovegroundbiomassweight
wereincreased45.8%-87.5%,dryabovegroundbiomassweightwereincreased49.1%-106.3%,andcrude
proteinwereincreased1.5%-13.5%afterinoculation.GoldenEmpressfreshabovegroundbiomassweight,dry
abovegroundbiomassweightandcrudeproteinwereincreased82.6%,106.3and13.5%,respectively.Which
weresignificantmorethanCK.
犓犲狔狑狅狉犱狊:犕犲犱犻犮犪犵狅狊犪狋犻狏犪;salinetolerancerhizobium;inoculationeffect
74第17卷第5期 草业学报2008年