全 文 ：书苜蓿乙烯应答因子基因的表达特性和
生物信息学分析
陈婷婷１，２，杨青川１，张新全２，康俊梅１，丁旺１，张铁军１
（１．中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，北京１００１９３；２．四川农业大学草业科学系，四川 雅安６２５０１４）
摘要：乙烯应答因子（ｅｔｈｙｌｅｎｅｒｅｓｐｏｎｓｅｆａｃｔｏｒ，ＥＲＦ）是植物特有的一类转录因子，参与植物生长发育和胁迫应答等
多个生理生化过程。本研究以拟南芥ＡＰ２结构域为探针搜索美国国立生物技术信息中心（ＮＣＢＩ）的苜蓿属蛋白质
数据库，运用生物信息学软件分析苜蓿乙烯应答因子的系统进化、疏水轮廓、二级结构、信号肽以及亚细胞定位情
况。运用半定量ＲＴ－ＰＣＲ技术研究５个紫花苜蓿乙烯应答因子基因（犕狊犈犚犉１，犕狊犈犚犉２，犕狊犈犚犉６，犕狊犈犚犉７，
犕狊犈犚犉９）表达的组织差异性以及多种处理条件下的表达特性。结果表明，５个乙烯应答因子基因在叶中的表达量
都明显高于其他组织，不同基因有不同的组织表达特性；ＮａＣｌ和 ＰＥＧ６０００对 犕狊犈犚犉２的表达没有影响，但
Ａｌ２（ＳＯ４）３能诱导其表达，其余基因的表达都受这３种处理的诱导；脱落酸对 犕狊犈犚犉２的表达没有影响，能够诱导
其他基因的表达；生长素只能诱导犕狊犈犚犉６的表达，对其他基因的表达没有影响；赤霉素、茉莉酸甲酯和乙烯利对
５个基因的表达都起促进作用。本研究为进一步研究苜蓿乙烯应答因子的结构和功能奠定了基础，同时为研究不
同信号传导途径之间的相互作用提供了依据。
关键词：紫花苜蓿；乙烯应答因子；生物信息学分析；半定量ＲＴ－ＰＣＲ；表达分析
中图分类号：Ｓ５５１＋．７０３；Ｑ９４３．２ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００４５７５９（２０１２）０６０１６６０９
ＡＰ２／ＥＲＦ转录因子包含ＡＰ２结构域，最早从拟南芥（犃狉犪犫犻犱狅狆狊犻狊狋犺犪犾犻犪狀犪）中分离得到。ＡＰ２结构域由高
度保守的５７～７０个氨基酸残基组成，包含ＹＲＧ区和ＲＡＹＤ区，ＹＲＧ区的Ｎ端由富含２０个氨基酸残基的碱性
和亲水性区域组成，对识别各类顺式作用元件并与之相互结合起关键作用；ＲＡＹＤ区位于ＡＰ２／ＥＲＦ结构域的
Ｃ端，约含有４０个氨基酸残基，其中约１８个氨基酸残基组成的核心区可形成双亲性的α螺旋。ＤＮＡ结合区与
ＤＮＡ的结合依赖于ＹＲＧ区，ＲＡＹＤ区通过影响ＹＲＧ区的构象或与其他蛋白发生相互作用调节ＡＰ２结构域与
ＤＮＡ的结合［１，２］。根据ＡＰ２结构域的数量可以将 ＡＰ２／ＥＲＦ转录因子分为３个家族［３］，分别为 ＡＰ２、ＥＲＦ和
ＲＡＶ家族。ＡＰ２家族包含２个ＡＰ２结构域，主要调控植物的生长发育；ＲＡＶ家族包含１个ＡＰ２结构域和１个
Ｂ３结构域；ＥＲＦ家族蛋白只包含１个 ＡＰ２结构域，又可分为２个亚家族：ＣＢＦ／ＤＲＥＢ亚家族和ＥＲＦ亚家族，
ＣＢＦ／ＤＲＥＢ在植物应答非生物胁迫的过程中发挥重要作用［４６］，ＥＲＦ亚家族主要参与生物胁迫应答［７］，许多研究
表明ＥＲＦ亚家族成员同时也参与非生物胁迫应答。苜蓿（犕犲犱犻犮犪犵狅狊犪狋犻狏犪）是一种优质的豆科牧草［８，９］，研究其
乙烯应答因子具有重要意义。本研究以拟南芥ＡＰ２结构域为探针搜索ＮＣＢＩ的苜蓿属蛋白质数据库，对苜蓿属
ＥＲＦ蛋白进行鉴定和分析，并通过半定量ＲＴ－ＰＣＲ技术对紫花苜蓿５个犈犚犉基因的组织表达差异性和多种
条件下的表达特性进行研究，以期为进一步开展苜蓿ＥＲＦ蛋白结构和功能的研究提供理论基础。
１ 材料与方法
１．１ 生物信息学分析
以拟南芥ＡＰ２结构域（Ｇｅｎｂａｎｋ登录号：１ＧＣＣ＿Ａ）为探针，运用ＢｌａｓｔＰ工具（ｈｔｔｐ：／／ｂｌａｓｔ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．
ｇｏｖ／）在ＮＣＢＩ的苜蓿属蛋白质数据库中进行比对，获得的氨基酸序列根据ＥＲＦ蛋白的结构特征进行筛选，筛选
的标准为：只含有１个ＡＰ２结构域，且不包含Ｂ３结构域。剩余的氨基酸序列运用 ＭＥＧＡ４．１软件构建系统进化
１６６－１７４
２０１２年１２月
草 业 学 报
ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ
第２１卷 第６期
Ｖｏｌ．２１，Ｎｏ．６
收稿日期：２０１１１１１５；改回日期：２０１１１２２８
基金项目：国家现代牧草产业技术体系（ＣＡＲＳ３５）和国家自然科学基金（３０８７１８１９）资助。
作者简介：陈婷婷（１９８７），女，山东曹县人，在读硕士。Ｅｍａｉｌ：ｃｈｅｎｔｉｎｇｔｉｎｇ８７０１＠１６３．ｃｏｍ
通讯作者。Ｅｍａｉｌ：ｑｃｈｙａｎｇ６６＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ
树；运用瑞士生物信息学研究所网站的Ｐｒｏｔｓｃａｌｅ软件（ｈｔｔｐ：／／ｅｘｐａｓｙ．ｏｒｇ／ｔｏｏｌｓ／ｐｒｏｔｓｃａｌｅ．ｈｔｍｌ）进行疏水性轮
廓预测；ＰＢＩＬＬＹＯＮ－ＧＥＲＬＡＮＤ数据库在线预测二级结构；ＳｉｇｎａｌＰ３．０软件（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｂｓ．ｄｔｕ．ｄｋ／
ｓｅｒｖｉｃｅｓ／ＳｉｇｎａｌＰ／）预测信号肽；ＰｒｏｔＣｏｍｐＶｅｒｓｉｏｎ９．０（ｈｔｔｐ：／／ｌｉｎｕｘ１．ｓｏｆｔｂｅｒｒｙ．ｃｏｍ／ｂｅｒｒｙ．ｐｈｔｍｌ）软件预测亚
细胞定位情况。
１．２ 植物材料和处理
紫花苜蓿“中苜１号”由中国农业科学院北京畜牧兽医研究所牧草研究室保存及提供。挑选饱满的种子播种
于 ＭＳ固体培养基，置于光照培养箱中培养。生长２周的幼苗转入分别含有２００ｍｍｏｌ／ＬＮａＣｌ、１５％ＰＥＧ６０００、
６０μｍｏｌ／ＬＡｌ２（ＳＯ４）３、５０μｍｏｌ／Ｌ生长素（ＩＡＡ）、１００μｍｏｌ／Ｌ脱落酸（ＡＢＡ）、５０μｍｏｌ／Ｌ赤霉素（ＧＡ）、１００
μｍｏｌ／Ｌ水杨酸（ＳＡ）、４０μｍｏｌ／Ｌ乙烯利（Ｅｔｈ）和１００μｍｏｌ／Ｌ茉莉酸甲酯（ＭｅＪＡ）的１／２ＭＳ液体培养基中进行
处理。ＮａＣｌ、ＰＥＧ６０００和Ａｌ２（ＳＯ４）３ 的处理时间分别为０，１，６，１２和２４ｈ，激素处理的时间分别为０，１和１２ｈ，
处理完成后分别提取各处理的总ＲＮＡ保存备用；２０１１年６月１４日在畜牧所试验地中挑选１株生长３年且长势
良好的苜蓿植株，分别取根、茎、叶、花蕾和花于液氮中速冻后－８０℃保存，用于组织表达特异性分析。实验于
２０１１年６月－２０１１年８月进行。
１．３ ＲＮＡ提取及反转录
采用Ｔｒｉｚｏｌ法分别提取各处理的总ＲＮＡ，取１００ｍｇ幼苗全株于研钵中加入液氮充分研磨，转入１．５ｍＬ离
心管中，加入１ｍＬＴｒｉｚｏｌ试剂（博迈德，北京），漩涡振荡器上剧烈震荡１ｍｉｎ；加入０．２ｍＬ氯仿，剧烈震荡３０ｓ
后置于室温３ｍｉｎ，４℃，１２０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ后将上清转移至另一离心管中，加入与上清等体积的异丙醇，
冰上放置５ｍｉｎ，４℃，１２０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ后弃上清，用７５％的酒精悬浮沉淀２次；室温晾干沉淀，加入３０
μＬ焦碳酸二乙酯（ｄｉｅｔｈｙｌｐｙｒｏｃａｒｂｏｎａｔｅ，ＤＥＰＣ）水溶解沉淀，保存于－８０℃备用。提取的总ＲＮＡ参照 ＭＭＬＶ
反转录酶（Ｔａｋａｒａ，大连）说明书进行反转录获得ｃＤＮＡ第一链。
１．４ 半定量ＲＴ－ＰＣＲ分析
根据核苷酸序列设计半定量引物，以紫花苜蓿肌动蛋白基因（犃犮狋犻狀）作为内参，ｃＤＮＡ第一链为模板，对紫花
苜蓿乙烯应答因子基因表达的组织特异性以及不同处理下的表达特性进行研究，所有引物序列见表１。反应体
系为：Ｈ２Ｏ１７．２５μＬ、１０×ｂｕｆｆｅｒ２．５μＬ、ｄＮＴＰ２μＬ、上下游引物各１μＬ、ＴａｑＤＮＡ聚合酶０．２５μＬ、模板１
μＬ；反应程序为：９４℃预变性３ｍｉｎ，９４℃变性３０ｓ，５４℃退火３０ｓ，７２℃延伸４０ｓ，２９个循环后，７２℃延伸５ｍｉｎ。
ＰＣＲ产物经２％琼脂糖凝胶电泳后拍照并进行分析。
表１ 用于乙烯应答因子半定量犚犜－犘犆犚的引物
犜犪犫犾犲１ 犘狉犻犿犲狉狊犳狅狉狊犲犿犻狇狌犪狀狋犻狋犪狋犻狏犲犚犜－犘犆犚
基因名称Ｇｅｎｅｎａｍｅ 正向引物Ｆｏｒｗａｒｄｐｒｉｍｅｒ 反向引物Ｒｅｖｅｒｓｅｐｒｉｍｅｒ
犕狊犈犚犉１ ５′ＴＣＴＣＴＧＡＣＣＣＧＴＴＴＣＴＡＣＡＴＣ３′ ５′ＴＣＣＴＡＣＣＡＣＡＡＣＴＡＴＴＴＧＧＣＴ３′
犕狊犈犚犉２ ５′ＧＡＧＧＡＴＧＡＡＧＡＴＧＡＴＧＡＴＧＡＡＧＧ３′ ５′ＣＣＡＡＴＧＧＴＴＴＣＴＧＴＴＣＣＡＣＴＴ３′
犕狊犈犚犉６ ５′ＣＴＣＡＧＡＡＧＡＴＡＡＧＡＡＴＧＴＧＧＣＴ３′ ５′ＧＡＡＡＴＧＴＴＧＧＡＴＴＧＴＧＡＡＣＣＴＧ３′
犕狊犈犚犉７ ５′ＣＣＡＣＴＴＣＣＡＴＣＴＣＣＴＡＴＴＴＣＡＡＣ３′ ５′ＡＡＧＧＴＴＣＣＡＡＧＣＣＡＡＡＣＴＣＴＴ３′
犕狊犈犚犉９ ５′ＣＴＣＣＴＡＴＴＴＣＡＡＣＡＣＣＴＴＧＣＴ３′ ５′ＣＴＴＴＧＴＣＴＡＡＣＴＣＣＴＣＴＧＴＡＧＴＧ３′
犃犮狋犻狀 ５′ＧＣＡＴＴＧＴＡＧＧＴＣＧＴＣＣＴＣＧＴＣＡＣ３′ ５′ＧＧＡＡＧＧＧＣＡＴＡＡＣＣＣＴＣＧＴＡＧＡＴ３′
２ 结果与分析
２．１ 生物信息学分析
以拟南芥ＡＰ２结构域为探针搜索苜蓿属蛋白质数据库，获得的氨基酸序列根据ＥＲＦ家族的结构特征进行
筛选，获得４１个与探针高度匹配且符合ＥＲＦ家族结构特征的氨基酸序列，系统进化分析结果表明这４１个氨基
酸序列又可分为５组（图１）。从每组各选取１个成员（Ａ１：ＡＣＪ８４９０１．１；Ａ２：ＡＢＯ９３３７２．１；Ａ３：ＡＣＪ８５１８１．１；Ａ４：
７６１第２１卷第６期 草业学报２０１２年
ＡＢＷ０６１０２．２；Ａ５：ＡＣＪ８４４４６．１），对它们的二级结构、疏水性轮廓、信号肽和亚细胞定位情况进行预测。结果表
明这５个蛋白都包含大量α螺旋和无规卷曲结构（图２），大部分区域表现为亲水性（图３），都没有信号肽，定位于
细胞核中。将这５个蛋白编码基因的紫花苜蓿同源序列命名为 犕狊犈犚犉１、犕狊犈犚犉２、犕狊犈犚犉６、犕狊犈犚犉７和
犕狊犈犚犉９。
图１ 苜蓿乙烯应答因子的进化树
犉犻犵．１ 犘犺狔犾狅犵犲狀犲狋犻犮狋狉犲犲狅犳犕犲犱犻犮犪犵狅犲狋犺狔犾犲狀犲狉犲狊狆狅狀狊犲犳犪犮狋狅狉狊
２．２ 紫花苜蓿乙烯应答因子基因表达的组织差异性
犕狊犈犚犉１基因在根和叶中的表达量高于茎、花和花蕾（图４）；犕狊犈犚犉２在根、叶和花中的表达量最高，茎中的
表达量次之，在花蕾中的表达量最低；犕狊犈犚犉６在叶和花蕾中的表达高于其他组织；犕狊犈犚犉７在根、茎、叶和花中
高表达，在花蕾中的表达量较低；犕狊犈犚犉９在根、茎和叶中的表达量高于花蕾，在花中没有表达。
２．３ ＮａＣｌ处理对犕狊犈犚犉基因表达的影响
ＮａＣｌ处理１ｈ后，犕狊犈犚犉１、犕狊犈犚犉７和犕狊犈犚犉９的表达量提高（图５），且一直保持高表达水平；犕狊犈犚犉６
的表达量在处理１ｈ后明显升高，随着处理时间的增加，表达量呈下降趋势，处理１２ｈ后表达量恢复到没有处理
时的水平，处理２４ｈ后表达量又有轻微上调；ＮａＣｌ处理对犕狊犈犚犉２的表达没有影响。
２．４ ＰＥＧ６０００对犕狊犈犚犉基因表达的影响
ＰＥＧ６０００处理条件下，随着处理时间的增加，犕狊犈犚犉１的表达量呈上升趋势（图６），在６ｈ达到最高值并保
持高表达；犕狊犈犚犉７和犕狊犈犚犉９的表达量呈上升趋势，在６ｈ表达量最高并保持一段时间（６～１２ｈ），随后表达量
有轻微下降；犕狊犈犚犉６基因的表达量随着处理时间的增加呈上升趋势，在６ｈ达到最高值后呈下降趋势，并最终
下降到没有处理时的表达水平；犕狊犈犚犉２的表达不受ＰＥＧ６０００诱导。
８６１ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１２） Ｖｏｌ．２１，Ｎｏ．６
图２ 苜蓿乙烯应答因子的二级结构
犉犻犵．２ 犛犲犮狅狀犱犪狉狔狊狋狉狌犮狋狌狉犲狅犳犕犲犱犻犮犪犵狅
犲狋犺狔犾犲狀犲狉犲狊狆狅狀狊犲犳犪犮狋狅狉狊
蓝色Ｂｌｕｅ：α螺旋 Ａｌｐｈａｈｅｌｉｘ；红色 Ｒｅｄ：延伸链Ｅｘｔｅｎｄｅｄｓｔｒａｎｄ；
紫色Ｐｕｒｐｌｅ：无规卷曲 Ｒａｎｄｏｍｃｏｉｌ．
２．５ Ａｌ２（ＳＯ４）３ 处理对犕狊犈犚犉基因表达的影响
Ａｌ２（ＳＯ４）３ 能诱导这５个基因的表达，犕狊犈犚犉１的表达量随着处理时间的增加而上升（图７），在２４ｈ达到最
大值；犕狊犈犚犉２基因的表达呈先上升后降低的趋势，６ｈ的表达量最高；犕狊犈犚犉６基因的表达随着处理时间的增
加而上升，在６ｈ达到较高水平后呈下降趋势，而后又呈上升趋势；犕狊犈犚犉７和犕狊犈犚犉９的表达量在１２ｈ达到最
高，然后呈下降趋势。
２．６ 激素处理对犕狊犈犚犉基因表达的影响
脱落酸能诱导犕狊犈犚犉１、犕狊犈犚犉６、犕狊犈犚犉７和犕狊犈犚犉９的表达，其中犕狊犈犚犉１和犕狊犈犚犉６呈先上升后降
低的趋势，犕狊犈犚犉７和犕狊犈犚犉９的表达在短时间处理时没有明显变化，在长时间处理条件下才表现上升趋势，
犕狊犈犚犉２的表达不受脱落酸诱导（图８）；生长素处理条件下，犕狊犈犚犉６的表达量先上升后降低，其他基因的表达
量都没有发生变化；茉莉酸甲酯处理条件下，犕狊犈犚犉１、犕狊犈犚犉６、犕狊犈犚犉７和犕狊犈犚犉９的表达量先上升后降低，
而犕狊犈犚犉２的表达量呈一直上升的趋势；水杨酸处理条件下，犕狊犈犚犉１的表达量在短时间没有变化，在１２ｈ表
达量呈上升趋势，犕狊犈犚犉２和犕狊犈犚犉７的表达呈先上升后下降的趋势，犕狊犈犚犉６和犕狊犈犚犉９的表达量在短时间
就表现上升趋势，且一直维持在高表达水平；赤霉素处理条件下，犕狊犈犚犉１的表达量一直上升，犕狊犈犚犉２和
犕狊犈犚犉６的表达量先上升后下降；犕狊犈犚犉７和犕狊犈犚犉９的表达量在处理１ｈ后有明显上升，且随着处理时间的
９６１第２１卷第６期 草业学报２０１２年
图３ 苜蓿乙烯应答因子的疏水性结构
犉犻犵．３ 犎狔犱狉狅狆犺狅犫犻犮犻狋狔犪狀犪犾狔狊犻狊狅犳犕犲犱犻犮犪犵狅
犲狋犺狔犾犲狀犲狉犲狊狆狅狀狊犲犳犪犮狋狅狉狊
增加，其表达一直维持在高水平；乙烯利处理条件下，
图４ 犕狊犈犚犉基因表达的组织差异性
犉犻犵．４ 犈狓狆狉犲狊狊犻狅狀犪狀犪犾狔狊犻狊狅犳犕狊犈犚犉犵犲狀犲狊犻狀犱犻犳犳犲狉犲狀狋狋犻狊狊狌犲狊
Ｒ：根 Ｒｏｏｔｓ；Ｓ：茎Ｓｔｅｍｓ；Ｌ：叶Ｌｅａｖｅｓ；Ｆ：花Ｆｌｏｗｅｒｓ；
ＦＢ：花蕾Ｂｕｄｆｌｏｗｅｒｓ．
犕狊犈犚犉１的表达随着处理时间的增加呈一直上升的
趋势，犕狊犈犚犉２和犕狊犈犚犉９在短时间处理时表达量有
显著上升，然后维持在高水平；犕狊犈犚犉６和 犕狊犈犚犉７
的表达在短时间没有明显变化，处理１２ｈ后，表达量
上升。
３ 讨论
在长期的进化过程中，植物逐渐形成由功能蛋白
和转录因子组成的分子调控网络以适应环境的变化。
内外环境被植物感知后转变为各种信号，通过一系列
的信号传导，引起相关基因表达的改变，最终作出适应
性反应。通常情况下，基因表达的调控发生在转录水
平上，转录因子通过与顺势作用元件结合，从而调控基
０７１ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１２） Ｖｏｌ．２１，Ｎｏ．６
图５ 犖犪犆犾处理下犕狊犈犚犉基因的表达量变化
犉犻犵．５犈狓狆狉犲狊狊犻狅狀狅犳犕狊犈犚犉犵犲狀犲狊
狌狀犱犲狉犖犪犆犾狋狉犲犪狋犿犲狀狋
图６ 犘犈犌６０００处理下犕狊犈犚犉基因的表达量变化
犉犻犵．６ 犈狓狆狉犲狊狊犻狅狀狅犳犕狊犈犚犉犵犲狀犲狊
狌狀犱犲狉犘犈犌６０００狋狉犲犪狋犿犲狀狋
图７ 犃犾２（犛犗４）３ 处理下犕狊犈犚犉基因的表达量变化
犉犻犵．７ 犈狓狆狉犲狊狊犻狅狀狅犳犕狊犈犚犉犵犲狀犲狊
狌狀犱犲狉犃犾２（犛犗４）３狋狉犲犪狋犿犲狀狋
因的表达。乙烯是五大类植物激素之一，与植物的生
长发育和胁迫应答有密切关系，参与植物种子萌发、果
实成熟、根生长、花器官形成、叶和花的衰老等植物发
育过程的调控，并调控植物应答病害侵染和非生物胁
迫等过程。通过对模式植物拟南芥的研究表明，植物
体内乙烯信号传导途径为：外界信号→ＥＴＲ→ＣＴＲ→
ＥＩＮ２→ＥＩＮ３→ＥＲＦ→生理生化反应［１０１２］，乙烯应答
因子在整个乙烯信号通路中占据关键位置。
转录因子在高等植物的生长发育及其对外界环境
的反应中起着重要的调控作用［１３］。乙烯应答因子是
ＡＰ２／ＥＲＦ转录因子家族成员，只包含１个 ＡＰ２结构
域且不包含Ｂ３结构域。本研究以拟南芥ＡＰ２结构域
为探针，运用ＢｌａｓｔＰ工具在ＮＣＢＩ的苜蓿属蛋白质数据库中进行比对，获得的氨基酸序列剔除ＡＰ２家族和ＲＡＶ
家族成员，剩余的序列符合ＥＲＦ家族的结构特征，即为苜蓿ＥＲＦ家族成员。同大多数转录因子基因一样，犈犚犉
基因的表达受到复杂的调控。大多数犈犚犉基因都是诱导表达的，干旱、低温、盐碱、乙烯、脱落酸、病害、赤霉素、
水杨酸等能诱导其表达，但是不同的犈犚犉基因有不同的诱导表达模式，即使是同源性很高，同一条件下它们的
表达模式也会有很大的不同。在已发现的同源性较高的ＥＲＦ转录因子ＯＲＣＡｓ中，犗犚犆犃２［１４］和犗犚犆犃３［１５］的表
达受茉莉素诱导，调控启动子含有茉莉素应答元件基因的表达，而犗犚犆犃１则不受茉莉素的诱导，本研究中的５
个犈犚犉基因在同一条件下的表达模式有差异，这与以前的研究结果吻合。
图８ 激素处理下犕狊犈犚犉基因的表达量变化
犉犻犵．８ 犈狓狆狉犲狊狊犻狅狀狅犳犕狊犈犚犉犵犲狀犲狊狌狀犱犲狉犺狅狉犿狅狀犲狋狉犲犪狋犿犲狀狋狊
１７１第２１卷第６期 草业学报２０１２年
植物感知各种外界信号，形成不同的信号传导途径，各种不同的信号传导途径可以形成交互作用［１６，１７］。由
于交互作用的存在，植物在受到不同伤害时，往往会表现出同样的适应性反应，交互作用是通过多个基因之间形
成的信号传导网络来实现的。作为植物特有的一类转录因子，乙烯应答因子在植物体内多种信号通路中起着调
控下游基因表达的功能，与植物的多种生理生化反应都有密切关系。已有的研究表明，犈犚犉基因参与植物的抗
病反应和生长发育，以及对非生物胁迫的应答［１８，１９］。本研究结果表明同一个犈犚犉基因同时受２种或多种条件
的诱导，表明这些乙烯应答因子可能在植物体内信号传导途径的交互作用中发挥作用。
以前的研究表明犈犚犉基因主要参与生物胁迫的应答，也有研究表明它们参与非生物胁迫应答。在拟南芥
中超表达犅狉犈犚犉４基因可以提高转基因植物的抗盐性和抗旱性［２０］；在水稻（犗狉狔狕犪狊犪狋犻狏犪）中超表达犑犈犚犉３基
因可以提高犠犆犗犚４１３犾犻犽犲，犗狊犈狀狅犾和犗狊犛犘犇犛２基因的表达，使转基因水稻的抗旱性和抗渗透胁迫能力提
高［２１］；在水稻中超表达犑犈犚犉１可以提高转基因植株的抗旱性［２２］。本研究结果表明犕狊犈犚犉２基因的表达不受
ＮａＣｌ和ＰＥＧ６０００处理的影响，表明它可能不参与植物对渗透胁迫和 Ｎａ／Ｃｌ离子毒害的应答，而其表达受
Ａｌ２（ＳＯ４）３的诱导，表明它参与铝盐毒害的信号传导途径；脱落酸被称为“胁迫酸”，植物存在依赖脱落酸和不依
赖脱落酸的胁迫应答机制，犕狊犈犚犉２的表达不受ＡＢＡ的诱导，表明它属于非ＡＢＡ依赖型，其余４个基因都能被
ＮａＣｌ、ＰＥＧ６０００、Ａｌ２（ＳＯ４）３ 和ＡＢＡ诱导，表明它们的胁迫应答都属于依赖ＡＢＡ型；ＭｅＪＡ、ＳＡ、ＧＡ和Ｅｔｈ与植
物的抗病虫性，５个基因的表达都能被这４种激素诱导，由此可以推测它们极有可能与苜蓿的抗病虫性相关；生
长素处理时只有犕狊犈犚犉６基因的表达受轻微影响，其余基因的表达量都没有变化，据此推测它们都不参与到与
ＩＡＡ应答的分子调控网络中。本研究通过半定量ＲＴ－ＰＣＲ的方法对５个紫花苜蓿乙烯应答因子基因的组织表
达差异性及各种处理条件下的表达模式进行分析，对进一步开展这些基因功能的研究奠定了基础，同时也为研究
植物体内的信号传导和不同信号传导途径的交互作用提供了依据。
４ 结论
本研究以ＡＰ２结构域为探针搜索ＮＣＢＩ的苜蓿蛋白质数据库，根据乙烯应答因子的结构特征对获得的蛋白
序列进行鉴定。系统进化分析表明苜蓿乙烯应答因子可以分为５组，从每组中选取１个成员进行二级结构、疏水
性轮廓、信号肽和亚细胞定位情况分析，结果表明这５个蛋白都包含大量α螺旋和无规卷曲结构，大部分区域表
现为亲水性，定位于细胞核中，都没有信号肽；运用半定量ＲＴ－ＰＣＲ技术研究５个紫花苜蓿乙烯应答因子基因
（犕狊犈犚犉１，犕狊犈犚犉２，犕狊犈犚犉６，犕狊犈犚犉７，犕狊犈犚犉９）表达的组织差异性以及各种处理条件下的表达特性。结
果表明，５个乙烯应答因子基因在叶中的表达量都明显高于其他组织，不同基因有不同的组织表达特性；ＮａＣｌ和
ＰＥＧ６０００对犕狊犈犚犉２的表达没有影响，但Ａｌ２（ＳＯ４）３ 能诱导其表达，其余基因的表达都受这３种处理的诱导；
脱落酸对犕狊犈犚犉２的表达没有影响，能够诱导其他基因的表达；生长素只能影响犕狊犈犚犉６的表达，对其他基因
的表达没有影响；赤霉素、茉莉酸甲酯和乙烯利对５个基因的表达都起促进作用。本研究为进一步研究苜蓿蛋白
的结构和功能奠定了基础，同时为研究不同信号传导途径之间的交互作用提供了依据。
参考文献：
［１］ ＬｉｕＱ，ＺｈａｎｇＧＹ，ＣｈｅｎＳＹ．Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅａｎｄｒｅｇｕｌａｔｏｒｙｆｕｎｃｔｉｏｎｏｆｐｌａｎｔｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒｓ［Ｊ］．ＣｈｉｎｅｓｅＳｃｉｅｎｃｅＢｕｌｅｔｉｎ，
２００１，４６（４）：２７１２７８．
［２］ ＪａｃｋＫ，ＯｋａｍｕｒＯ，ＣａｓｔｅｒＢ，犲狋犪犾．ＴｈｅＡＰ２ｄｏｍａｉｎｏｆＡＰＥＴＡＬＡ２ｄｅｆｉｎｅｓａｌａｒｇｅｎｅｗｆａｍｉｌｙｏｆＤＮＡｂｉｎｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎｉｎ
犃狉犪犫犻犱狅狆狊犻狊［Ｊ］．ＰｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓｏｆｔｈｅＮａｔｉｏｎａｌＡｃａｄｅｍｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＵＳＡ，１９９７，９４（６）：７０７６７０８１．
［３］ ＮａｋａｎｏＴ，ＳｕｚｕｋｉＫ，ＦｕｊｉｍｕｒａＴ，犲狋犪犾．ＧｅｎｏｍｅｗｉｄｅａｎａｌｙｓｉｓｏｆｔｈｅＥＲＦｇｅｎｅｆａｍｉｌｙｉｎ犃狉犪犫犻犱狅狆狊犻狊ａｎｄｒｉｃｅ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ
Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，２００６，１４０（２）：４１１４３２．
［４］ ＹａｍａｇｕｃｈｉＳｈｉｎｏｚａｋｉＫ，ＳｈｉｎｏｚａｋｉＫ．Ａｎｏｖｅｌｃｉｓａｃｔｉｎｇｅｌｅｍｅｎｔｉｎａｎ犃狉犪犫犻犱狅狆狊犻狊ｇｅｎｅｉｓｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｎｅｓｓｔｏ
ｄｒｏｕｇｈｔ，ｌｏｗｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ，ｏｒｈｉｇｈｓａｌｔｓｔｒｅｓｓ［Ｊ］．ＴｈｅＰｌａｎｔＣｅｌ，１９９４，６（２）：２５１２６４．
２７１ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１２） Ｖｏｌ．２１，Ｎｏ．６
［５］ 王舟，刘建秀．ＤＲＥＢ／ＣＢＦ类转录因子研究进展及其在草坪草和牧草抗逆基因工程中的应用［Ｊ］．草业学报，２０１１，２０（１）：
２２２２３６．
［６］ 刘晓静，郝凤，张德罡，等．抗冻基因ＣＢＦ２表达载体构建及转化紫花苜蓿的研究［Ｊ］．草业学报，２０１１，２０（２）：１９３２００．
［７］ ＨａｏＤＹ，ＯｈｍｅＴａｋａｇｉＭ，ＳａｒａｉＡ．ＵｎｉｑｕｅｍｏｄｅｏｆＧＣＣｂｏｘｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎｂｙｔｈｅＤＮＡｂｉｎｄｉｎｇｄｏｍａｉｎｏｆｅｔｈｙｌｅｎｅｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ
ｅｌｅｍｅｎｔｂｉｎｄｉｎｇｆａｃｔｏｒ（ＥＲＦｄｏｍａｉｎ）ｉｎｐｌａｎｔ［Ｊ］．ＴｈｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９９８，２７３（４１）：２６８５７２６８６１．
［８］ 杨红善，常根柱，周学辉，等．美国引进苜蓿品种半湿润区栽培试验［Ｊ］．草业学报，２０１０，１９（１）：１２１１２７．
［９］ 张改娜，贾敬芬．豌豆清蛋白１（ＰＡｌ）基因的克隆及对苜蓿的转化［Ｊ］．草业学报，２００９，１８（３）：１１７１２５．
［１０］ ＢｌｅｅｃｋｅｒＡＢ，ＫｅｎｄｅＨ．ＥＴＨＹＬＥＮＥ：Ａｇａｓｅｏｕｓｓｉｇｎａｌｍｏｌｅｃｕｌｅｉｎｐｌａｎｔｓ［Ｊ］．ＡｎｎｕａｌＲｅｖｉｅｗｏｆＣｅｌａｎｄＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ
Ｂｉｏｌｏｇｙ，２０００，１６：１１８．
［１１］ ＣｈａｎｇＣ．ＴｈｅｅｔｈｙｌｅｎｅｓｉｇｎａｌｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎｐａｔｈｗａｙｉｎＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ：ａｎｅｍｅｒｇｉｎｇｐａｒａｄｉｇｍ［Ｊ］．ＴｒｅｎｄｓｉｎＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙＳｃｉ
ｅｎｃｅ，１９９６，２１（４）：１２９１３３．
［１２］ ＥｃｋｅｒＪ．Ｔｈｅｅｔｈｙｌｅｎｅｓｉｇｎａｌｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎｐａｔｈｗａｙｉｎｐｌａｎｔｓ［Ｊ］．Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９５，２６８：６６７６７５．
［１３］ 江腾，林勇祥，刘雪，等．苜蓿全基因组 ＷＲＫＹ转录因子基因的分析［Ｊ］．草业学报，２０１１，２０（３）：２１１２１８．
［１４］ ＭｅｎｋｅＦＬＨ，ＣｈａｍｐｉｏｎＡ，ＫｉｊｎｅＪＷ，犲狋犪犾．Ａｎｏｖｅｌｊａｓｍｏｎａｔｅａｎｄｅｌｉｃｉｔｏｒｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｅｌｅｍｅｎｔｉｎｔｈｅｐｅｒｉｗｉｎｋｌｅｓｅｃｏｎｄａｒｙ
ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｂｉｏｓｙｎｔｈｅｔｉｃｇｅｎｅＳｔｒｉｎｔｅｒａｃｔｓｗｉｔｈａｊａｓｍｏｎａｔｅａｎｄｅｌｉｃｉｔｏｒｉｎｄｕｃｉｂｌｅＡＰ２ｄｏｍａｉｎｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒ，犗犚犆犃２［Ｊ］．
ＴｈｅＥＭＢＯＪｏｕｒｎａｌ，１９９９，１８：４４５５４４６３．
［１５］ ＶａｎｄｅｒＦｉｔｓＬ，ＭｅｍｅｌｉｎｋＪ．ＴｈｅｊａｓｍｏｎａｔｅｉｎｄｕｃｉｂｌｅＡＰ２／ＥＲＦｄｏｍａｉｎｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒ犗犚犆犃３ａｃｔｉｖａｔｅｓｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓ
ｓｉｏｎｖｉａｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｗｉｔｈａｊａｓｍｏｎａｔｅｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｐｒｏｍｏｔｅｒｅｌｅｍｅｎｔ［Ｊ］．ＴｈｅＰｌａｎｔＪｏｕｒｎａｌ，２００１，２５（１）：４３５３．
［１６］ ＺｈａｎｇＧＹ，ＣｈｅｎＭ，ＬｉＬＣ，犲狋犪犾．ＯｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｔｈｅｓｏｙｂｅａｎＧｍＥＲＦ３ｇｅｎｅ，ａｎＡＰ２／ＥＲＦｔｙｐｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒｆｏｒ
ｉｎｃｒｅａｓｅｄｔｏｌｅｒａｎｃｅｓｔｏｓａｌｔ，ｄｒｏｕｇｈｔ，ａｎｄｄｉｓｅａｓｅｓｉｎｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｔｏｂａｃｃｏ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＢｏｔａｎｙ，２００９，６０（１３）：
３７８１３７９６．
［１７］ ＭａｕｃｈＭａｎｉＢ，ＭａｕｃｈＦ．Ｔｈｅｒｏｌｅｏｆａｂｓｃｉｓｉｃａｃｉｄｉｎｐｌａｎｔｐａｔｈｏｇｅｎｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ［Ｊ］．ＣｕｒｒｅｎｔＯｐｉｎｉｏｎｉｎＰｌａｎｔＢｉｏｌｏｇｙ，
２００５，８（４）：４０９４１４．
［１８］ ＴｈａｒａＶＫ，ＴａｎｇＸＹ，ＧｕＹＱ，犲狋犪犾．ＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｓｙｒｉｎｇａｅｐｖｔｏｍａｔｏｉｎｄｕｃｅｓｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｔｏｍａｔｏＥＲＥＢＰｌｉｋｅｇｅｎｅｓ
Ｐｔｉ４ａｎｄＰｔｉ５ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｏｆｅｔｈｙｌｅｎｅ，ｓａｌｉｃｙｌａｔｅａｎｄｊａｓｍｏｎａｔｅ［Ｊ］．ＴｈｅＰｌａｎｔＪｏｕｒｎａｌ，１９９９，２０（４）：４７５４８３．
［１９］ ＬｉｕＱ，ＫａｓｕｇａＭ，ＳａｋｕｍａＹ，犲狋犪犾．Ｔｗｏｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒｓ，ＤＲＥＢ１ａｎｄＤＲＥＢ２，ｗｉｔｈａｎＥＲＥＢＰ／ＡＰ２ＤＮＡｂｉｎｄｉｎｇｄｏ
ｍａｉｎｓｅｐａｒａｔｅｔｗｏｃｅｌｕｌａｒｓｉｇｎａｌｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎｐａｔｈｗａｙｓｉｎｄｒｏｕｇｈｔａｎｄｌｏｗｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ｒｅｓｐｅｃ
ｔｉｖｅｌｙ，ｉｎ犃狉犪犫犻犱狅狆狊犻狊［Ｊ］．ＴｈｅＰｌａｎｔｃｅｌ，１９９８，１０：１３９１１４０６．
［２０］ ＳｅｏＹＪ，ＰａｒｋＪＢ，ＣｈｏＹＪ，犲狋犪犾．ＯｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｔｈｅｅｔｈｙｌｅｎｅｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｆａｃｔｏｒｇｅｎｅＢｒＥＲＦ４ｆｒｏｍｂｒａｓｓｉｃａｒａｐａｉｎｃｒｅａ
ｓｅｓｔｏｌｅｒａｎｃｅｔｏｓａｌｔａｎｄｄｒｏｕｇｈｔｉｎ犃狉犪犫犻犱狅狆狊犻狊Ｐｌａｎｔｓ［Ｊ］．ＭｏｌｅｃｕｌｅｓａｎｄＣｅｌｓ，２０１０，３０：２７１２７７．
［２１］ ＺｈａｎｇＨ Ｗ，ＬｉｕＷ，ＷａｎＬＹ，犲狋犪犾．ＦｕｎｃｔｉｏｎａｌａｎａｌｙｓｅｓｏｆｅｔｈｙｌｅｎｅｒｅｓｐｏｎｓｅｆａｃｔｏｒＪＥＲＦ３ｗｉｔｈｔｈｅａｉｍｏｆｉｍｐｒｏｖｉｎｇｔｏｌｅｒ
ａｎｃｅｔｏｄｒｏｕｇｈｔａｎｄｏｓｍｏｔｉｃｓｔｒｅｓｓｉｎｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｒｉｃｅ［Ｊ］．ＴｒａｎｓｇｅｎｉｃＲｅｓｅａｒｃｈ，２０１０，１９：８０９８１８．
［２２］ ＺｈａｎｇＺＪ，ＬｉＦ，ＬｉＤＪ，犲狋犪犾．ＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｅｔｈｙｌｅｎｅｒｅｓｐｏｎｓｅｆａｃｔｏｒＪＥＲＦ１ｉｎｒｉｃｅｉｍｐｒｏｖｅｓｔｏｌｅｒａｎｃｅｔｏｄｒｏｕｇｈｔ［Ｊ］．Ｐｌａｎ
ｔａ，２０１０，２３２：７６５７７４．
３７１第２１卷第６期 草业学报２０１２年
犅犻狅犻狀犳狅狉犿犪狋犻犮狊犪狀犱犲狓狆狉犲狊狊犻狅狀犪狀犪犾狔狊犲狊狅犳犲狋犺狔犾犲狀犲狉犲狊狆狅狀狊犲犳犪犮狋狅狉犵犲狀犲狊犻狀犕犲犱犻犮犪犵狅
ＣＨＥＮＴｉｎｇｔｉｎｇ１，２，ＹＡＮＧＱｉｎｇｃｈｕａｎ１，ＺＨＡＮＧＸｉｎｑｕａｎ２，ＫＡＮＧＪｕｎｍｅｉ１，
ＤＩＮＧＷａｎｇ１，ＺＨＡＮＧＴｉｅｊｕｎ１
（１．ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＡｎｉｍａｌＳｃｉｅｎｃｅ，ＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１００１９３，Ｃｈｉｎａ；
２．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＧｒａｓｓｌａｎｄＳｃｉｅｎｃｅ，ＳｉｃｈｕａｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙａ’ａｎ６２５０１４，Ｃｈｉｎａ）
犃犫狊狋狉犪犮狋：Ｅｔｈｙｌｅｎｅｒｅｓｐｏｎｓｅｆａｃｔｏｒｓａｒｅｐｌａｎｔｓｐｅｃｉａｌｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒｓｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｐｌａｎｔｇｒｏｗｔｈａｎｄｄｅｖｅｌｏｐ
ｍｅｎｔ．Ｔｈｅ犃狉犪犫犻犱狅狆狊犻狊ＡＰ２ｄｏｍａｉｎｗａｓｕｓｅｄａｓａｐｒｏｂｅｔｏｓｅａｒｃｈｔｈｅＮＣＢＩ犕犲犱犻犮犪犵狅ｐｒｏｔｅｉｎｄａｔａｂａｓｅａｎｄｔｏ
ａｎａｌｙｚｅｔｈｅｐｈｙｌｅｔｉｃｅｖｏｌｕｔｉｏｎ，ｓｅｃｏｎｄａｒｙｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，ｈｙｄｒｏｐｈｏｂｉｃｉｔｙ，ｓｉｇｎａｌｐｅｐｔｉｄｅ，ｓｕｂｃｅｌｕｌａｒｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎｏｆ
犕犲犱犻犮犪犵狅ｅｔｈｙｌｅｎｅｒｅｓｐｏｎｓｅｆａｃｔｏｒｓｕｓｉｎｇｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓｓｏｆｔｗａｒｅ．Ｐｒｉｍｅｒｓｗｅｒｅｄｅｓｉｇｎｅｄｂａｓｅｄｏｎｔｈｅｓｅ
ｑｕｅｎｃｅｓｏｂｔａｉｎｅｄｔｏａｎａｌｙｚｅｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐａｔｔｅｒｎｓｏｆ犕狊犈犚犉 ｇｅｎｅｓ （犕狊犈犚犉１，犕狊犈犚犉２，犕狊犈犚犉６，
犕狊犈犚犉７，犕狊犈犚犉９）．Ｔｈｅ犕狊犈犚犉ｇｅｎｅｓｈａｄｈｉｇｈｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓｉｎｌｅａｖｅｓａｎｄｓｈｏｗｅｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ
ｏｆｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｔｉｓｓｕｅｓ．Ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆ犕狊犈犚犉２ｗａｓｎｏｔｉｎｄｕｃｅｄｂｙＮａＣｌａｎｄＰＥＧ６０００，ｂｕｔｗａｓ
ｐｒｏｍｏｔｅｄｂｙＡｌ２（ＳＯ４）３．Ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｏｔｈｅｒｇｅｎｅｓｗａｓｉｎｄｕｃｅｄｂｙｔｈｅｓｅｔｈｒｅｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ，ｂｕｔｔｈｅｅｘｐｒｅｓ
ｓｉｏｎｐａｔｔｅｒｎｓｗｅｒｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔ．ＡＢＡｒｅｄｕｃｅｄｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｔｈｅｓｅｇｅｎｅｓｅｘｃｅｐｔｆｏｒ犕狊犈犚犉２．ＩＡＡｈａｄｎｏ
ｅｆｆｅｃｔｏｎｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｔｈｅｓｅｇｅｎｅｓｅｘｃｅｐｔ犕狊犈犚犉６．ＧＡ３，ＭｅＪＡ，ａｎｄＥｔｈｒｅｄｕｃｅｄｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆａｌｆｉｖｅ
ｇｅｎｅｓ．Ｔｈｉｓｒｅｓｅａｒｃｈｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄａｓｏｌｉｄｆｏｕｎｄａｔｉｏｎｔｏｆｕｒｔｈｅｒｓｔｕｄｙｔｈｅｆｕｎｃｔｉｏｎｏｆｔｈｅｓｅｇｅｎｅｓａｎｄｐｒｏｖｉｄｅｄｅｖ
ｉｄｅｎｃｅｔｏｓｔｕｄｙｔｈｅｃｒｏｓｓｔａｌｋｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓｉｇｎａｌｐａｔｈｗａｙｓ．
犓犲狔狑狅狉犱狊：犕犲犱犻犮犪犵狅狊犪狋犻狏犪；ｅｔｈｙｌｅｎｅｒｅｓｐｏｎｓｅｆａｃｔｏｒ；ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓａｎａｌｙｓｉｓ；ｓｅｍｉｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅＲＴ－ＰＣＲ；
ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓ
４７１ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１２） Ｖｏｌ．２１，Ｎｏ．６