全 文 ：林业科学研究摇 圆园员猿渊专刊冤院园远园 园远愿云燥则藻泽贼 砸藻泽藻葬则糟澡
摇 摇 文章编号院员园园员鄄员源怨愿渊圆园员猿冤专刊鄄园园远园鄄园怨
日本落叶松 耘杂栽鄄杂杂砸标记挖掘及特征分析
刘摇 超袁 张力鹏袁 王春国袁 宋文芹袁 陈成彬鄢
渊南开大学生命科学学院袁天津摇 猿园园园苑员冤
收稿日期院 圆园员猿鄄园愿鄄圆猿
基因项目院 国家野怨苑猿冶计划项目渊圆园园怨悦月员员怨员园缘冤袁国家自然科学基金渊猿员猿苑员圆源怨冤
作者简介院 刘摇 超渊员怨愿苑要冤男袁山东淄博袁研究方向袁植物遗传学援
鄢通讯作者院 耘鄄皂葬蚤造院糟澡藻灶糟遭岳 灶葬灶噪葬蚤援 藻凿怎援 糟灶袁电话院园圆圆鄄圆猿缘园愿圆源员援
摘要院基于日本落叶松转录组测序渊砸晕粤鄄泽藻择冤结果袁利用 杂杂砸陨栽工具查找 杂杂砸位点袁检测到 员 苑愿愿 个 耘杂栽鄄杂杂砸位点袁
平均长度是 员苑援 缘 遭责遥 进一步统计分析发现在落叶松中重复类型 杂杂砸位点出现次数最多的是六尧三核苷酸袁其余依
次是五尧二尧四核苷酸重复类型曰同时检测到 远缘远 种重复基元类型袁种类丰富遥 用 孕则蚤皂藻则 孕则藻皂蚤藻则 缘援 园 设计 缘园园 对引
物袁随机合成 员园圆 对袁以红豆杉科尧柏科尧松科材料为模板进行检测袁结果显示在红豆杉科和柏科里的扩增率分别为
怨缘豫 尧缘园豫 曰在松科不同属的通用性为落叶松属 怨怨援 园员豫 尧黄杉属 远苑援 源豫 尧雪松属 远猿援 愿豫 尧冷杉属 远苑援 源豫 尧云杉属
苑园郾 圆豫和松属 苑缘援 苑豫 遥 利用 员园员 对 杂杂砸引物对 苑 种不同落叶松品种亲缘关系进行了分析袁获得 苑怨 个多态性位点袁
在遗传相似系数 园援 远怨 处将其区分为 源 个类群遥
关键词院日本落叶松曰转录组测序曰杂杂砸曰通用性
中图分类号院杂苑怨员援 圆圆猿 文献标识码院粤
阅藻增藻造燥责皂藻灶贼 葬灶凿 悦澡葬则葬糟贼藻则蚤扎葬贼蚤燥灶 燥枣 耘杂栽鄄杂杂砸
酝燥造藻糟怎造葬则 酝葬则噪藻则泽 蚤灶 蕴葬则蚤曾 噪葬藻皂责枣藻则蚤
蕴陨哉 悦澡葬燥袁 在匀粤晕郧 蕴蚤鄄责藻灶早袁 宰粤晕郧 悦澡怎灶鄄早怎燥袁 杂韵晕郧 宰藻灶鄄择蚤灶袁 悦匀耘晕 悦澡藻灶早鄄遭蚤灶
渊悦燥造造藻早藻 燥枣 蕴蚤枣藻 杂糟蚤藻灶糟藻泽袁 晕葬灶噪葬蚤 哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠袁栽蚤葬灶躁蚤灶摇 猿园园园苑员袁 悦澡蚤灶葬冤
粤遭泽贼则葬糟贼院 月葬泽藻凿 燥灶 砸晕粤 泽藻择怎藻灶糟藻泽 蚤灶枣燥则皂葬贼蚤燥灶 燥枣 蕴葬则蚤曾 噪葬藻皂责枣藻则蚤袁 员 苑愿愿 耘杂栽鄄杂杂砸 造燥糟蚤 憎藻则藻 枣燥怎灶凿 遭赠 杂杂砸陨栽袁 憎蚤贼澡
葬灶 葬增藻则葬早藻 造藻灶早贼澡 燥枣 员苑援 缘 遭责援 栽澡藻 皂燥泽贼 葬遭怎灶凿葬灶贼 杂杂砸泽 憎蚤贼澡蚤灶 蕴葬则蚤曾 憎藻则藻 澡藻曾葬灶怎糟造藻燥贼蚤凿藻 葬灶凿 贼则蚤灶怎糟造藻燥贼蚤凿藻袁 枣燥造造燥憎藻凿
遭赠 责藻灶贼葬灶怎糟造藻燥贼蚤凿藻袁 凿蚤灶怎糟造藻燥贼蚤凿藻袁 葬灶凿 贼藻贼则葬灶怎糟造藻燥贼蚤凿藻援 粤贼 贼澡藻 皂藻葬灶贼蚤皂藻袁 远缘远 噪蚤灶凿泽 燥枣 则藻责藻葬贼 责则蚤皂蚤贼蚤增藻泽 憎藻则藻 凿藻贼藻糟鄄
贼藻凿援 陨灶 贼澡蚤泽 泽贼怎凿赠袁 葬 贼燥贼葬造 燥枣 缘园园 责则蚤皂藻则泽 憎藻则藻 凿藻泽蚤早灶藻凿 遭赠 野孕则蚤皂藻则 孕则藻皂蚤藻则 缘援 园冶 葬灶凿 员园圆 责葬蚤则泽 憎藻则藻 泽赠灶贼澡藻泽蚤扎藻凿援
栽澡藻泽藻 杂杂砸 责则蚤皂藻则泽 憎藻则藻 怎泽藻凿 贼燥 葬泽泽藻泽泽 贼澡藻 葬皂责造蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 藻枣枣蚤糟蚤藻灶糟赠 燥枣 栽葬曾葬糟藻葬藻袁 悦怎责则藻泽泽葬糟藻葬藻袁 葬灶凿 孕蚤灶葬糟藻葬藻援 栽澡藻
则藻泽怎造贼泽 泽澡燥憎藻凿 贼澡葬贼 怨缘豫 葬灶凿 缘园豫 燥枣 葬造造 责则蚤皂藻则泽 糟燥怎造凿 遭藻 葬皂责造蚤枣蚤藻凿 泽怎糟糟藻泽泽枣怎造造赠 蚤灶 栽葬曾葬糟藻葬藻 葬灶凿 悦怎责则藻泽泽葬糟藻葬藻援
粤灶凿 蚤灶 孕蚤灶葬糟藻葬藻袁 贼澡藻 贼则葬灶泽枣藻则葬遭蚤造蚤贼赠 燥枣 蕴葬则蚤曾 杂杂砸 蚤灶 蕴葬则蚤曾袁 孕泽藻怎凿燥贼泽怎早葬袁 粤遭蚤藻泽袁 悦藻凿则怎泽袁 孕蚤糟藻葬 葬灶凿 孕蚤灶怎泽 憎葬泽
怨怨郾 园员豫 袁 远苑援 源豫 援 袁 远苑援 源豫 袁 远猿援 愿豫 袁 苑园援 圆豫 袁 葬灶凿 苑缘援 苑豫 则藻泽责藻糟贼蚤增藻造赠援 杂藻增藻灶 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 增葬则蚤藻贼蚤藻泽 燥枣 蕴葬则蚤曾 早藻灶藻贼蚤糟
则藻造葬贼蚤燥灶泽澡蚤责 憎藻则藻 葬灶葬造赠扎藻凿 遭赠 怎泽蚤灶早 员园员 责葬蚤则泽 燥枣 杂杂砸 责则蚤皂藻则泽援 苑怨 责燥造赠皂燥则责澡蚤泽皂 造燥糟蚤 憎藻则藻 燥遭贼葬蚤灶藻凿袁 葬灶凿 蕴葬则蚤曾 憎葬泽
凿蚤增蚤凿藻凿 蚤灶贼燥 枣燥怎则 早则燥怎责泽 葬贼 贼澡藻 早藻灶藻贼蚤糟 泽蚤皂蚤造葬则蚤贼赠 糟燥藻枣枣蚤糟蚤藻灶贼 燥枣 园援 远怨援
运藻赠 憎燥则凿泽院 蕴葬则蚤曾 噪葬藻皂责枣藻则蚤渊蕴葬皂遭援 冤悦葬则则援 曰贼则葬灶泽糟则蚤责贼燥皂藻 泽藻择怎藻灶糟蚤灶早曰早藻灶蚤糟鄄杂杂砸曰贼则葬灶泽枣藻则葬遭蚤造蚤贼赠
简单重复序列渊泽蚤皂责造藻 泽藻择怎藻灶糟藻 则藻责藻葬贼袁 杂杂砸冤是
一种比较理想的分子标记技术袁因其多态性高尧开发
过程简单尧易于检测尧实验结果可靠咱员暂等优点受到广
大研究者的偏爱袁但是传统的 杂杂砸 分子标记开发步
骤繁琐袁成本较高袁限制了其应用遥 随着高通量测序
技术及生物信息学的发展袁出现了一种新的 杂杂砸 标
专刊 刘摇 超等院日本落叶松 耘杂栽鄄杂杂砸标记挖掘及特征分析
记开发方式袁即利用转录组 砸晕粤鄄泽藻择开发标记袁这些
基于转录组建立的标记是根据基因本身的差异而建
立的袁也称为基因内部标记渊早藻灶蚤糟鄄皂葬则噪藻则泽冤袁这类标
记多态主要是以片段长度多态为基础的袁是目前研
究和应用最多的一类袁检测方法主要是 孕悦砸袁操作简
便尧经济咱圆暂 袁特别是在那些缺乏基因组信息的物种
上遥 砸晕粤鄄泽藻择越来越受到研究者的关注遥 蕴怎则燥 等咱猿暂
在柑橘渊悦蚤贼则怎泽 糟造藻皂藻灶贼蚤灶葬冤的转录组中开发和验证了
源员 个 早藻灶蚤糟鄄杂杂砸标记袁并且证明了其在柑橘属内种
间有很好的通用性曰在藻灶早等咱源暂在箭叶淫羊藿渊耘责蚤皂藻鄄
凿蚤怎皂 泽葬早蚤贼贼葬贼怎皂冤的转录本中开发了 猿圆 个 早藻灶蚤糟鄄杂杂砸
标记袁在澡葬灶早 等咱缘暂利用芝麻转录组 渊 杂藻泽葬皂怎皂 蚤灶凿蚤鄄
糟怎皂冤开发了 猿圆 个多态性的 早藻灶蚤糟鄄杂杂砸 标记袁员源 个标
记已经整合到了 怨 个遗传图谱中曰杂葬噪葬早怎糟澡蚤 等咱远暂 尧
哉藻灶燥等咱苑暂分别在白柏松渊悦葬造造蚤贼则蚤泽 糟燥造怎皂藻造造葬则蚤泽冤尧日本
柳杉渊悦则赠责贼燥皂藻则蚤葬 躁葬责燥灶蚤糟葬冤中分别开发了 缘圆 个和 源源
个能够成功扩增并显示多态性的 早藻灶蚤糟鄄杂杂砸遥 目前
利用 砸晕粤鄄泽择藻 已在橡胶树渊匀藻增藻葬 遭则葬泽蚤造蚤藻灶泽蚤泽冤 咱愿暂 尧花
生 渊 粤则葬糟澡蚤泽 澡赠责燥早葬藻葬 冤 咱怨 原 员园暂 尧 番薯 渊 陨责燥皂燥藻葬 遭葬贼葬鄄
贼葬泽冤 咱员员暂 尧木豆咱员圆暂等植物的研究中报道遥 这些研究充
分证明了转录组作为一种有效的资源袁非常适于
杂杂砸分子标记的开发遥
日本落叶松原产日本袁适应范围广袁生长初期生
长较快袁抗病性较强袁是世界上主要的造林树种和纸
浆尧建筑用材树种袁具有重要的经济价值和生态价
值咱员猿暂 遥 关于落叶松 杂杂砸 标记开发的研究比起模式
植物和其他物种相对较少袁其中 陨泽燥凿葬 等咱员源暂从日本
落叶松基因组文库中分离了 员怨 个多态性较高的
杂杂砸标记袁杨秀艳等咱员缘暂在 员 远圆园 条落叶松 耘杂栽 序列
基础上开发得到了 苑 个具有多态性和通用性的分子
标记袁贯春雨咱员远暂根据数据库中的 源园远 园愿园 条松科
耘杂栽序列设计了 员猿圆 对不同的 杂杂砸引物遥 本研究利
用日本落叶松转录组测序获得的 员猿苑 远苑苑 条 耘杂栽 序
列开发了 缘园园 对落叶松 杂杂砸 引物袁并对其 杂杂砸 位点
分布特征进行分析袁在红豆杉科尧柏科尧松科的部分
属中进行了验证袁并对落叶松属的 苑 个品种进行了
亲缘关系分析遥
员摇 材料与方法
员援 员摇 材料来源及基因组 阅晕粤提取
落叶松属的材料于 圆园员员 年采自辽宁清原县大
孤家林场和黑龙江林口县青山林场袁其他材料 圆园员猿
年采自中国科学院植物研究所渊表 员冤遥 每种植物采
集 圆 株样本的幼嫩针叶于液氮中迅速冷冻后放入
原 愿园益低温冰箱中保存遥
基因组 阅晕粤 提取参照 匝陨粤郧耘晕 试剂盒说明进
行遥 晕葬灶阅则燥责 晕阅鄄员园园园 核酸测定仪检测提取 阅晕粤质
量和浓度遥 每种材料的 阅晕粤稀释到 员园园 灶早窑滋蕴 原员袁
原 圆园益保存备用遥
员援 圆摇 日本落叶松转录组测序及 杂杂砸位点查找
利用 陨造造怎皂蚤灶葬公司 杂燥造藻曾葬 测序技术对日本落叶
松杂交子代 蕴葬则蚤曾远 进行转录组测序袁共得 员 缘源怨 万
条 糟造藻葬灶 则藻葬凿泽袁序列组装后得约 员猿援 愿 万个 糟燥灶贼蚤早袁
糟燥灶贼蚤早经过进一步的组装获得 圆园 猿怨缘 条 怎灶蚤早藻灶藻袁其
中约 猿远豫的 怎灶蚤早藻灶藻 长度 跃 圆园园 葬葬遥 为进一步获得
怎灶蚤早藻灶藻的功能注释袁利用 月蕴粤杂栽工具在三个公共数
据库袁藻早早晕韵郧 数据库袁运耘郧郧 数据库和非冗余 郧藻灶鄄
月葬灶噪 悦阅杂数据库袁对所有序列进行同源性分析渊耘 原
增葬造怎藻臆员藻 原 缘冤袁结果显示被注释的序列包含愿 怨源员个
转录本渊源猿援 愿源豫 冤袁这些 怎灶蚤早藻灶藻 与云杉尧拟南芥尧杨
树尧葡萄尧水稻和番茄等物种已知基因高度同源遥 另
有 员员 源缘源 条 怎灶蚤早藻灶藻 未被注释袁认为是可能的新
基因遥
对聚类后的无冗余 员猿苑 远苑苑 条 耘杂栽 序列袁通过
杂杂砸位点查找工具 杂杂砸陨栽 进行 杂杂砸 位点的搜索定
位咱员苑暂 渊澡贼贼责院 辕 辕 憎憎憎郾 早则葬皂藻灶藻郾 燥则早 辕 凿遭 辕 皂葬则噪藻则泽 辕 泽泽则贼燥燥造冤遥
杂杂砸 筛选标准为院杂杂砸的最大长度为 苑圆 遭责 核苷酸袁
最小为 圆愿 遭责遥 单核苷酸袁二尧三尧四尧五和六核苷酸
的最少重复次数分别为 员源 次尧苑 次尧远 次尧缘 次尧源 次尧
猿 次以上袁所有重复类型的总核苷酸数不能少于 员源
个遥 将所有的 杂杂砸位点与原始序列一一对应袁统计
完全型渊重复序列以连续的方式首尾相连袁中间不被
打断冤尧不完全型渊重复序列之间有 猿 个及以下的非
重复碱基打断袁但是两端的重复序列重复次数大于
猿冤尧复合型渊重复序列之间有 猿 个或 猿 个以上的非重
复碱基打断袁同时重复序列的重复次数大于等于 缘冤
不同 杂杂砸位点的数量袁对 杂杂砸 位点原始数据进行统
计分析袁计算每种核苷酸重复类型所占的比例尧优势
重复基元类型等遥 最终在 员 远员愿 条 耘杂栽序列中检测
到 员 苑愿愿 个 杂杂砸位点袁检出比例渊含有 杂杂砸的 耘杂栽数
目与 耘杂栽 总数目之比值冤为 员援 员愿豫 袁其中 员 源苑猿 条
耘杂栽序列含一个 杂杂砸 位点袁员圆源 条 耘杂栽 序列含 圆 个
杂杂砸位点袁圆员 条 耘杂栽序列含 猿 个或 猿 个以上 杂杂砸 位
点袁一共定位 员 苑愿愿 个 杂杂砸 位点袁耘杂栽鄄杂杂砸 的出现频
率为 员援 猿豫 袁耘杂栽鄄杂杂砸位点平均长度为 员苑援 缘 遭责袁平均
圆援 园圆 运遭出现一个 杂杂砸位点遥
员远
林摇 业摇 科摇 学摇 研摇 究 第 圆远 卷
表 员摇 供试材料的来源
科 属 材料名称摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 采集地点
红豆杉科 红豆杉属 矮紫杉渊栽葬曾怎泽 糟怎泽责蚤凿葬贼藻 糟增援 晕葬灶葬冤 中国科学院植物研究所
东北红豆杉渊栽援 糟怎泽责蚤凿葬贼葬 杂蚤藻遭援 藻贼 在怎糟糟冤 中国科学院植物研究所
欧洲红豆杉渊栽援 遭葬糟糟葬贼葬 蕴援 冤 中国科学院植物研究所
柏科 刺松属 杜松渊允怎灶蚤责藻则怎泽援 则蚤早蚤凿葬 杂蚤藻遭援 藻贼 在怎糟糟冤 中国科学院植物研究所
侧柏属 千头柏渊孕造葬贼赠糟造葬凿怎泽 燥则蚤藻灶贼葬造蚤泽 蕴援 冤 中国科学院植物研究所
圆柏属 龙柏渊杂葬遭蚤灶葬 糟澡蚤灶藻灶泽蚤泽 渊蕴冤粤灶贼援 冤 中国科学院植物研究所
松科 黄杉属 花旗松渊孕泽藻怎凿燥贼泽怎早葬 皂藻灶扎蚤藻泽蚤蚤 渊酝蚤则遭造藻冤 云则葬灶糟燥冤 中国科学院植物研究所
雪松属 雪松渊悦藻凿则怎泽 凿藻燥凿葬则葬 渊砸燥曾遭援 冤 郧援 阅燥灶冤 中国科学院植物研究所
冷杉属 辽东冷杉渊粤遭蚤藻泽 澡燥造燥责澡赠造造葬 酝葬曾蚤皂冤 中国科学院植物研究所
东陵冷杉渊粤援 灶藻责澡则燥造藻责蚤泽渊栽则葬怎贼扎援 冤 皂葬曾蚤皂冤 中国科学院植物研究所
日本冷杉渊粤援 枣蚤则皂葬 杂蚤藻遭援 藻贼 在怎糟糟援 冤 中国科学院植物研究所
针纵渊粤援 藻曾糟藻造泽葬 孕燥蚤则藻贼冤 中国科学院植物研究所
云杉属 长叶云杉渊孕蚤糟藻葬 泽皂蚤贼澡蚤葬灶葬渊宰葬造造援 冤月燥蚤泽泽冤 中国科学院植物研究所
兰粉绿云杉渊孕援 责怎灶早藻灶泽 增葬则援 早造葬怎糟葬 砸藻早冤 中国科学院植物研究所
白杄渊孕援 皂藻赠藻则蚤 砸藻澡凿援 藻贼 宰蚤造泽援 冤 中国科学院植物研究所
青杄渊孕援 憎蚤造泽燥灶蚤蚤 酝葬泽贼援 冤 中国科学院植物研究所
松科 落叶松属 日草 远渊蕴葬则蚤曾 噪葬藻皂责枣藻则蚤愿圆 伊 蕴援 噪葬藻皂责枣藻则蚤 员猿冤 辽宁大孤家林场种子园
日草 员远 渊蕴援 运葬藻皂责枣藻则蚤 野砸蚤糟葬燥冶冤 辽宁大孤家林场种子园
日永 员员 渊 蕴援 噪葬藻皂责枣藻则蚤 野再燥灶早灶蚤灶早冶冤 辽宁大孤家林场种子园
朝抚 圆怨 渊蕴援 噪葬藻皂责枣藻则蚤 野悦澡葬燥枣怎冶冤 辽宁大孤家林场种子园
日 缘 伊兴 远 渊蕴援 噪葬藻皂责枣藻则蚤 伊 蕴援 早皂燥造蚤灶蚤冤 黑龙江林口县青山林场
日草 源园 伊日宽 员园 渊蕴援 噪葬藻皂责枣藻则蚤 砸悦 伊 蕴援 噪葬藻皂责枣藻则蚤 噪怎葬灶凿蚤葬灶冤 黑龙江林口县青山林场
日草 愿圆 伊日草 远员 渊蕴援 噪葬藻皂责枣藻则蚤愿圆 伊 蕴援 噪葬藻皂责枣藻则蚤 远员冤 辽宁大孤家林场种子园
日永 员员 伊朝抚 圆怨 渊蕴援 噪葬藻皂责枣藻则蚤再燥灶早灶蚤灶早 伊 蕴援 噪葬藻皂责枣藻则蚤 悦澡葬燥枣怎冤 辽宁大孤家林场种子园
松属 华山松渊孕蚤灶怎泽 葬则皂葬灶凿蚤蚤 云则葬灶糟澡援 冤 中国科学院植物研究所
长白赤松渊孕援 泽赠造增藻泽贼则蚤枣燥则皂蚤泽 增葬则援 泽赠造增藻泽贼则蚤枣燥则皂蚤泽冤 中国科学院植物研究所
高山松渊孕援 凿藻灶泽葬贼葬 酝葬泽贼援 冤 中国科学院植物研究所
短叶松渊孕援 遭葬灶噪泽蚤葬灶葬 蕴葬皂遭冤 中国科学院植物研究所
北美乔松渊孕援 泽贼则燥遭怎泽 蕴援 冤 中国科学院植物研究所
红松渊孕援 噪燥则葬蚤藻灶泽蚤泽 杂蚤藻遭援 藻贼 在怎糟糟冤 中国科学院植物研究所
刚松渊孕援 则蚤早蚤凿葬 酝蚤造造冤 中国科学院植物研究所
黑松渊孕援 贼澡怎灶遭藻则早蚤蚤 孕葬则造援 冤 中国科学院植物研究所
员援 猿摇 耘杂栽鄄杂杂砸引物设计
利用 孕则蚤皂藻则 孕则藻皂蚤藻则 缘援 园咱员愿 原 员怨暂软件设计引物袁由
上海生工生物技术公司合成遥 引物设计时主要参数
为院长度 员苑 遭责 圆猿 遭责曰郧悦 含量在 缘园豫左右曰上下
游引物 栽皂 值相差小于 圆益曰扩增片段长度在 缘园 遭责
缘园园 遭责之间曰尽量避免引物二聚体及发夹结构的
形成袁保持碱基的均匀分布遥
员援 源摇 孕悦砸扩增及引物筛选
利用 孕则蚤皂藻则 孕则藻皂蚤藻则 缘援 园 共设计引物 缘园园 对袁随
机合成 员园圆 对遥 以日本落叶松基因组 阅晕粤 为模板
进行 孕悦砸扩增袁筛选具有扩增产物的引物袁并检测
杂杂砸在 圆源 种不同物种中的通用性遥 孕悦砸 反应体系
为 圆缘 滋蕴袁其中包括 员园园 灶早 基因组 阅晕粤 模板袁上下
游引物各 缘 责皂燥造袁圆援 缘 滋蕴 的 员园 伊 月怎枣枣藻则袁源 灶皂燥造 的
凿晕栽孕泽袁缘 哉窑滋蕴 原员 阅晕粤 责燥造赠皂藻则葬泽藻 园援 圆 滋蕴袁水补足
至 圆缘 滋蕴曰反应程序是 怨源益预变性 缘 皂蚤灶袁循环反应
包括 怨源益 猿园 泽袁退火温度 猿园 泽袁苑圆益延伸 猿园 泽袁猿园 个
循环后袁苑圆益延伸 员园 皂蚤灶遥 猿豫琼脂糖凝胶电泳检测
扩增产物遥
员援 缘摇 亲缘关系分析
以 苑 种不同落叶松品种基因组 阅晕粤为模板袁利
用 员园员 对引物分别扩增袁然后通过 猿豫琼脂糖凝胶电
泳检测袁进行统计分析袁只针对在两次重复实验中都
稳定出现的条带进行统计袁忽略不稳定以及扩增较
圆远
专刊 刘摇 超等院日本落叶松 耘杂栽鄄杂杂砸标记挖掘及特征分析
弱的条带袁在相同迁移率位置上根据条带的野有冶或
野无冶分别记作野员冶和野园冶曰利用 晕栽杂再杂软件中 匝怎葬造蚤鄄
贼葬贼蚤增藻子程序计算样品之间的遗传相似系数袁选择
哉孕郧酝粤算法袁利用 杂匀粤晕子程序对 苑 组不同样品进
行聚类分析袁利用 郧则葬责澡蚤糟泽中的 栽则藻藻 责造燥贼子程序袁生
成 苑 种不同样品的聚类图遥
圆摇 结果与分析
圆援 员摇 落叶松 杂杂砸位点出现频率及分类
在已预处理的 员猿苑 远苑苑 条序列中袁通过 杂杂砸 位
点查找工具 杂杂砸陨栽进行 杂杂砸 位点的定位袁在其中的
员 远员愿条序列中检测到 员 苑愿愿 个 杂杂砸 位点袁检出比例
为 员援 员愿豫 袁其中 员 源苑猿 条 耘杂栽 序列含一个 杂杂砸位点袁
员圆源 条 耘杂栽含 圆 个 杂杂砸位点袁圆员 条 耘杂栽 序列含 猿 个
或 猿 个以上 杂杂砸位点袁一共定位 员 苑愿愿 个 杂杂砸位点袁
杂杂砸的出现频率为 员援 猿豫 袁 杂杂砸 位点平均长度为
员苑郾 缘 遭责袁平均 圆援 园圆 运遭 出现一个 杂杂砸 位点遥 对 杂杂砸
位点进行统计分类袁完全型尧不完全型和复合型 猿 种
类型的 杂杂砸位点都存在袁其中完全型 杂杂砸位点员 苑圆园
个尧不完全型 圆缘 个尧复合型 源猿 个遥 对于落叶松来
说袁完全型的 杂杂砸 位点占主导地位袁占总 杂杂砸 位点
的 怨远豫 袁不完全型尧复合型的 杂杂砸位点仅占 源豫 遥
圆援 圆摇 杂杂砸位点分布及特征
日本落叶松中六核苷酸重复类型 杂杂砸位点出现
次数最多袁共 缘愿猿 个袁占总 杂杂砸 位点的 猿圆援 远豫 曰其次
是三核苷酸重复类型袁占总 杂杂砸 位点的 圆怨援 远豫 曰然
后依次是五尧二尧四核苷酸袁分别占总 杂杂砸 位点的
圆员援 远豫 尧员员援 远豫 尧源援 远豫 袁对于 缘 种不同核苷酸重复类
型来说袁随着重复次数的增加出现的次数越来越少袁
呈明显降低趋势渊图 员冤遥
图 员摇 杂杂砸位点出现次数与重复次数关系
对落叶松所有重复基元类型进行统计袁共检测
到 远缘远 种不同重复基元类型渊表 圆冤袁种类十分丰富袁
其中出现次数最多的依次是 粤栽尧郧悦粤 辕 栽郧悦及 悦粤郧 辕
悦栽郧袁对于落叶松来说高级重复基元类型的 杂杂砸 位
点的重复次数一般很低遥
表 圆摇 落叶松中主要重复基元及频率
重复类型 重复基元 数目 各重复类型总数 频率
二核苷酸 粤栽 缘猿 圆园苑 圆缘援 远园
郧粤 辕 栽悦 源员 员怨援 愿员
粤郧 辕 悦栽 猿怨 员愿援 愿源
栽粤 猿怨 员愿援 愿源
其它 猿缘 员远援 怨员
三核苷酸 郧悦粤 辕 栽郧悦 源源 缘猿园 愿援 猿
悦粤郧 辕 悦栽郧 源圆 苑援 怨
粤粤郧 辕 悦栽栽 源员 苑援 苑
粤郧粤 辕 栽悦栽 猿怨 苑援 源
郧粤粤 辕 栽栽悦 猿怨 苑援 源
粤栽悦 辕 郧粤栽 猿愿 苑援 圆
栽悦粤 辕 栽郧粤 猿源 远援 源
其它 圆缘猿 源苑援 苑
四核苷酸 粤粤粤悦 远 愿圆 苑援 猿
栽栽栽粤 远 苑援 猿
粤栽栽悦 辕 郧粤粤栽 缘 远援 员
粤粤粤栽 源 源援 怨
其它 远员 苑源援 源
五核苷酸 粤栽粤粤粤 辕 栽栽栽粤栽 员缘 猿援 怨
粤粤粤粤栽 辕 粤栽栽栽栽 员猿 猿愿远 猿援 源
栽栽栽栽粤 员员 圆援 愿
悦粤郧粤郧 辕 悦栽悦栽郧 员园 圆援 远
其它 猿猿苑 愿苑援 猿
六核苷酸 粤粤粤粤粤栽 辕 粤栽栽栽栽栽 员圆 缘愿猿 圆援 员
栽栽栽栽栽粤 辕 栽粤粤粤粤粤 愿 员援 源
粤栽郧郧粤郧 辕 悦栽悦悦粤栽 苑 员援 圆
郧悦悦栽悦粤 辕 栽郧粤郧郧悦 远 员援 园
其它 缘缘园 怨源援 猿
圆援 猿摇 引物的筛选及通用性分析
根据日本落叶松转录组序列袁共设计 缘园园 对
杂杂砸引物袁随机合成 员园圆 对袁部分引物信息见表 猿遥
以提取的日本落叶松基因组 阅晕粤 为模板袁通过梯度
孕悦砸的方法优化每对引物的最佳条件袁对 员园圆 对
杂杂砸引物进行 孕悦砸扩增袁其中 员园员 对引物获得扩增
产物袁占 怨怨援 园员豫 袁扩增产物片段为 员园园 苑园园 遭责袁部
分引物电泳结果如图 圆 所示遥
员 员苑 分别为不同引物在落叶松中扩增结果袁酝为 员园园 遭责 酝葬则噪藻则
图 圆摇 员苑 对引物在落叶松中 孕悦砸扩增的电泳结果
猿远
林摇 业摇 科摇 学摇 研摇 究 第 圆远 卷
表 猿摇 部分 杂杂砸引物编号及碱基序列
引物名称 重复基元 重复次数 引物信息渊缘爷鄄猿爷冤 栽皂 辕 益 预期大小 辕 遭责
悦缘圆圆怨远猿 栽郧悦 远 云院粤粤郧栽栽悦悦粤粤郧悦悦粤郧粤郧悦悦栽砸院栽栽粤郧悦悦粤粤郧粤郧栽悦粤悦悦粤栽栽悦粤悦
缘远援 猿
缘苑援 员 圆愿远
杂悦粤苑源员 悦粤栽粤郧 源 云院悦悦郧粤郧粤粤粤栽郧栽粤郧粤粤郧郧粤粤郧栽砸院粤栽栽郧郧粤郧悦粤栽悦郧悦粤郧粤粤郧
缘猿援 猿
缘猿援 愿 圆苑猿
杂悦粤愿缘园怨 悦栽 苑 云院 栽悦悦栽栽粤栽悦粤粤悦悦郧悦悦粤粤悦砸院悦郧粤栽郧粤悦郧郧粤郧悦粤悦粤粤粤
缘猿援 苑
缘猿援 园 猿远园
悦远愿怨园员愿 栽栽悦粤栽郧 猿 云院郧郧粤郧郧粤郧悦郧郧郧粤悦栽粤悦粤栽砸院栽粤栽栽悦栽栽悦郧栽栽悦粤郧悦粤悦悦粤悦
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缘猿援 源 员远圆
悦远愿缘猿圆猿 悦粤栽悦栽悦 猿 云院悦悦悦郧栽郧郧粤栽栽郧栽粤郧粤郧郧粤悦砸院栽栽郧粤粤栽粤悦栽栽郧郧郧粤郧郧悦郧
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缘源援 园 员苑猿
悦缘圆圆怨远猿 栽郧悦 远 云院粤粤郧栽栽悦悦粤粤郧悦悦粤郧粤郧悦悦栽砸院栽栽粤郧悦悦粤粤郧粤郧栽悦粤悦悦粤栽栽悦粤悦
缘远援 猿
缘苑援 员 圆愿远
悦缘苑员怨远源 悦悦粤郧粤栽 猿 云院郧粤悦栽郧悦栽悦悦栽悦悦栽郧粤栽粤粤悦栽栽砸院悦郧粤粤栽郧悦栽栽郧悦栽栽悦栽郧栽郧
缘圆援 愿
缘圆援 远 怨怨
悦苑源猿愿源源 栽悦悦 缘 云院粤栽郧栽栽悦粤粤粤栽悦粤粤粤郧郧郧栽郧悦砸院悦悦栽郧粤粤郧悦悦粤栽悦栽悦悦栽悦栽悦栽
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缘缘援 园 圆员愿
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缘缘援 圆
缘缘援 苑 圆猿园
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悦远愿怨园员愿 栽栽悦粤栽郧 源 云院郧郧粤郧郧粤郧悦郧郧郧粤悦栽粤悦粤栽砸院栽粤栽栽悦栽栽悦郧栽栽悦粤郧悦粤悦悦粤悦
缘源援 圆
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悦远怨源怨员源 郧悦栽 苑 云院悦栽粤粤栽粤悦粤郧悦粤粤悦悦悦悦栽悦悦砸院郧栽郧粤栽郧栽郧粤悦栽悦悦栽栽悦栽悦悦粤
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缘缘援 园
缘源援 苑 员缘源
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缘猿援 猿 圆猿员
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缘缘援 园
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悦苑苑员愿怨圆 栽郧栽粤郧 源 云院悦栽悦栽郧悦悦郧悦粤郧栽栽粤粤栽栽栽粤砸院粤栽悦悦悦郧粤粤悦悦粤悦栽粤栽悦悦栽
缘员援 愿
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悦苑怨源源园源 粤粤郧 苑 云院粤栽悦栽悦郧悦栽粤悦悦栽郧郧悦栽粤粤栽砸院栽栽悦郧栽悦栽悦郧悦栽栽栽悦粤粤悦粤
缘员援 远
缘圆援 缘 源怨愿
杂悦粤愿怨员圆 郧粤郧悦悦郧 猿 云院栽粤郧栽郧粤粤粤栽郧郧粤郧郧粤粤郧郧郧砸院粤粤栽悦悦郧粤悦悦悦粤郧粤悦栽悦粤栽
缘圆援 圆
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缘源援 缘 圆圆怨
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缘猿援 猿
缘源援 员 源圆怨
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缘圆援 苑
缘员援 缘 圆愿圆
悦苑源圆圆圆园 栽郧悦 远 云院悦悦悦郧粤悦郧悦粤郧粤栽郧粤悦郧粤砸院郧悦粤郧郧粤郧悦悦粤悦郧郧粤郧粤栽郧
缘愿援 远
缘怨援 员 怨缘
源远
专刊 刘摇 超等院日本落叶松 耘杂栽鄄杂杂砸标记挖掘及特征分析
在上述引物筛选的基础上袁分别对 圆缘 种不同科
属植物材料中进行 孕悦砸 扩增遥 结果显示袁员园圆 对引
物中有 怨苑 对引物能够在红豆杉科中扩增成功袁缘员
对引物能够在柏科扩增袁苑源豫的引物能够在松科黄
杉属得到扩增产物袁而且扩增条带较多袁苑园豫的引物
在雪松属中有扩增产物袁苑源豫的引物在冷杉属中有
扩增产物袁苑苑豫和 愿猿豫的引物在云杉属和松属中有
扩增产物遥 不同引物在不同属中扩增结果多态性不
同袁如引物 悦愿园苑苑苑愿尧悦远园圆愿园源 等在黄杉属尧云杉属尧
雪松属和松属中仅能够扩增得到 员 条相同带而在冷
杉属中得到 圆 条大小不同的带遥 引物 杂悦粤猿圆猿远 和
杂悦粤愿苑圆 扩增条带较多袁不同种间差异明显遥 部分电
泳结果见图 猿尧图 源遥
摇 摇 员 员愿 分别为花旗松袁雪松袁辽东冷杉袁东陵冷杉袁日本冷杉袁长
叶云杉袁兰粉绿云杉袁白杄袁青杄袁华山松袁长白赤松袁高山松袁短叶
松袁北美乔松袁红松袁黑松袁刚松袁针纵遥 酝 为 皂葬噪藻则域遥 粤 为引物
悦苑怨苑源员源袁月为引物 悦苑远圆源缘圆 扩增结果
图 猿摇 引物 悦苑怨苑源员源 和引物 悦苑远圆源缘圆 在松科不同
植物中 孕悦砸扩增结果
圆援 源摇 松科不同属间亲缘关系分析
分别提取 苑 种不同落叶松品种基因组 阅晕粤袁利
用 员园员 对引物分别进行 孕悦砸扩增袁然后通过 猿豫琼
摇 摇 粤尧月 分别为引物 杂悦粤猿圆猿远 和 悦苑源圆圆圆园遥 员 猿 依次为红豆杉
科的东北红豆杉袁欧洲红豆杉和矮紫杉曰源 远 依次为柏科的杜松袁
千头柏和龙柏遥 酝为 皂葬噪藻则域遥
图 源摇 不同引物在红豆杉科和柏科中 孕悦砸扩增电泳结果
脂糖凝胶电泳检测遥 怨缘 对引物有扩增带袁占总引物
的 怨源援 园缘豫 袁其中 源圆 对引物具有多态性条带渊图 缘冤遥
员园员 对引物共扩增出 苑愿猿 条带袁有 苑怨 条具有多态性袁
多态性引物占总引物的 源员援 缘愿豫 遥 利用 晕栽杂再杂软件
计算 苑 种不同品种落叶松之间的遗传相似系数袁结
果如表 源袁在此基础上依据 哉孕郧酝粤 算法对 苑 种不同
落叶松进行聚类分析渊图 远冤袁通过树状聚类图发现 苑
种不同落叶松在遗传相似系数约 园援 远怨 处可将这 猿
种不同落叶松亲本和 源 种不同落叶松杂交种分为
源 类遥
摇 摇 员 苑 分别是日草 员远尧日永 员员尧朝抚 圆怨尧日 缘 伊兴安 远尧日草 源园
伊日宽 员园尧日草 愿圆 伊日草 远员尧日永 员员 伊朝抚 圆怨曰粤尧月尧悦引物分别为
杂悦粤缘员园园尧杂悦粤猿圆猿远 和 悦缘圆圆怨远猿
图 缘摇 不同引物在七种不同落叶松电泳扩增结果
表 源摇 苑 种不同落叶松之间遗传相似系数
样品名称 日草 员远 日永 员员 朝抚 圆怨 日 缘 伊兴安 远 日永 员员 伊朝抚 圆怨 日草 源园 伊日宽 员园 日草 愿圆 伊日草 远员
日草 员远 员援 园园园 园
日永 员员 园援 苑员源 猿 员援 园园园 园
朝抚 圆怨 园援 缘缘苑 圆 园援 远苑员 源 员援 园园园 园
日 缘 伊兴安 远 园援 源源圆 怨 园援 缘园园 园 园援 缘苑员 源 员援 园园园 园
日永 员员 伊朝抚 圆怨 园援 源苑员 源 园援 远员源 猿 园援 缘苑员 源 园援 远愿缘 苑 员援 园园园 园
日草 源园 伊日宽 员园 园援 缘源圆 怨 园援 远圆愿 远 园援 缘愿缘 愿 园援 苑缘苑 员 园援 苑圆愿 远 员援 园园园 园
日草 愿圆 伊日草 远员 园援 缘园园 园 园援 远员源 猿 园援 远愿缘 怨 园援 苑苑员 源 园援 远缘苑 员 园援 愿员源 猿 员援 园园园 园
摇 摇 通过遗传相似系数及树状聚类图发现 猿 种不同
落叶松亲本和 圆 种日本落叶松即日草 员远 与日永 员员
之间基因组差异最小袁遗传相似系数约为 园援 苑员袁朝
抚 圆怨 与日草 员远尧日永 员员 相比差异较大曰对于 源 种不
同落叶松杂交子代来说袁野日草 源园 伊日宽 员园冶与野日
草 愿圆 伊日草 远员冶这 圆 种落叶松基因组差异最小袁遗
缘远
林摇 业摇 科摇 学摇 研摇 究 第 圆远 卷
图 远摇 苑 种不同品种落叶松聚类图
传相似系数达到了 园援 愿员袁日永 员员 伊朝抚 圆怨 杂交子
代与其它 猿 组杂交子代相比基因组发生较大变化遥
猿摇 讨论
高通量 砸晕粤 测序技术 渊 陨造造怎皂蚤灶葬 辕 杂燥造藻曾葬鄄遭葬泽藻凿
砸晕粤鄄杂藻择 贼藻糟澡灶燥造燥早赠冤在过去几年间得到了飞速发
展袁运用大规模并行测序的策略产生转录组谱遥 与
传统的费钱尧费时的 杂葬灶早藻则 测序相比袁砸晕粤鄄杂藻择技术
更加简单袁性价比较高咱圆园暂 遥 近些年来也在许多非模
式植物的转录组研究中得到了广泛应用咱圆员暂 遥 研究
证实 陨造造怎皂蚤灶葬 辕 杂燥造藻曾葬鄄遭葬泽藻凿 砸晕粤鄄杂藻择 贼藻糟澡灶燥造燥早赠 已广
泛应用于植物物种的转录组研究咱 圆圆 原 圆源暂 袁对于多数
物种而言袁转录组学研究不仅是一种获得大量植物
基因资源的手段袁海量的转录组数据更是为基因组
序列的深入分析提供了很好的资源袁特别对于松尧杉
等基因组较大且含有大量重复序列的非模式植物袁
更是如此遥 本研究通过对日本落叶松转录组测序产
生的大量数据开发 耘杂栽鄄杂杂砸 分子标记袁实验表明这
是一种十分有效的 杂杂砸分子标记开发途径遥
在本实验中袁在转录组测序的数据中 杂杂砸 位点
的检出比例是 员援 员愿豫 袁与 月藻则怎遭藻咱圆缘暂等的研究十分相
似袁都在 员豫左右袁但明显低于白桦渊月藻贼怎造葬 责造葬贼赠责澡赠造鄄
造葬 杂怎噪冤 咱圆远暂 尧小麦渊栽则蚤贼蚤糟怎皂 葬藻泽贼蚤增怎皂冤 咱圆苑暂 尧橡胶树渊匀藻鄄
增藻葬 遭则葬泽蚤造蚤藻灶泽蚤泽冤 咱圆愿暂中的检出比例遥 杂杂砸 位点的平均
分布距离为 圆援 园圆 噪遭袁明显高于咖啡渊粤遭藻造皂燥泽糟澡怎泽 藻泽鄄
糟怎造藻灶贼怎泽冤 咱圆怨暂 尧黄瓜渊悦怎糟怎皂蚤泽 泽葬贼蚤增怎泽冤 咱猿园暂 尧小麦咱猿员暂中的
分布距离遥 这种差异主要由不同物种真实基因组信
息尧筛选标准和不同 杂杂砸 位点定位工具原理不同造
成的遥 在所有 杂杂砸 位点中袁三尧六核苷酸重复类型
杂杂砸位点出现次数最多袁与 在藻灶早 等咱源暂研究结果一
致袁可能是此类型长度变异不会导致整个序列开放
阅读框位移渊韵砸云 泽澡蚤枣贼冤遥 但是与 栽葬灶早 等咱猿圆暂 尧砸葬躁藻灶鄄
凿则葬噪怎皂葬则等咱猿猿暂的观点不同袁在他们的研究中二核苷
酸重复类型 杂杂砸位点是主导类型袁同样在二核苷酸
重复类型中袁检出比例最高的的 粤栽 重复基元袁与
粤则藻泽澡糟澡藻灶噪燥增葬咱猿源暂等的研究结果一致遥 造成这种重
复类型不同的原因袁可能是由于基因内 杂杂砸 与基因
组 杂杂砸的重复类型不同袁一般而言袁基因内 杂杂砸 中
三核苷酸分布最多袁而基因组 杂杂砸 中二核苷酸分布
最多遥
本实验中随机合成 员园圆 对 杂杂砸 引物袁在日本落
叶松中有 员园员 对引物成功扩增袁排除引物本身设计
的影响袁分析原因一方面可能是测序结果错误导致
用于引物设计的序列信息出错袁另外一方面可能是
在两个引物之间存在内含子或存在复杂的高级结构
导致引物和模板无法结合袁扩增失败遥 通过在不同
属中的 孕悦砸 扩增验证袁这些引物具有很高的通用
性袁在不同的研究中袁通用性比例各不相同咱猿缘 原 猿远暂 袁松
科扩增出的引物数占总引物的渊员园圆 对冤怨员援 圆豫 袁红
豆杉科 怨缘豫有扩增袁柏科的 缘园豫有扩增遥
在 苑 种不同落叶松中利用 员园员 对引物进行扩增
时袁有 怨缘 对引物有扩增产物袁源圆 个引物具有多态
性袁多态性条带 苑怨 个袁但是他们的多态性比较较低袁
已有的研究证实以 孕悦砸 为基础的基因内部标记在
种内的多态性较低咱猿苑 原 猿愿暂 遥 另外 耘杂栽 的高度保守性
也是导致其多态性较低的重要因素咱猿怨暂 遥 耘怎躁葬赠造
等咱源园暂通过比较不同来源的 杂杂砸扩增的多态性效率袁
发现 耘杂栽鄄杂杂砸 扩增较好袁 但是其多态性较低
渊圆缘豫 冤袁而来自基因组的 杂杂砸 的多态性较高
渊缘猿豫 冤遥 因此袁可以选择尽量靠近 猿忆或 缘忆端非编译
区段的标记袁因为这些区域变异性相对丰富咱源员暂 遥 尽
管 耘杂栽鄄杂杂砸引物多态性偏低袁但与传统 杂杂砸 引物相
比袁其开发成本低尧效率高曰且由于其来源于基因表
达序列袁信息含量丰富袁可以用于对物种进行遗传多
样性分析尧构建遗传图谱和特异分子标记的筛选等遥
参考文献院
咱员暂 运葬造蚤葬袁 砸 运袁砸葬蚤 酝 运袁运葬造蚤葬 杂袁 藻贼 葬造援 酝蚤糟则燥泽葬贼藻造造蚤贼藻 皂葬则噪藻则泽院 葬灶 燥鄄
增藻则增蚤藻憎 燥枣 贼澡藻 则藻糟藻灶贼 责则燥早则藻泽泽 蚤灶 责造葬灶贼泽咱 允暂 援 耘怎责澡赠贼蚤糟葬袁圆园员员袁员苑苑
渊猿冤院猿园怨 原 猿猿源
咱圆暂李小白袁向摇 林袁罗摇 洁袁等援转录组测序渊砸晕粤鄄泽藻择冤策略及其数
据在分子标记开发上的应用咱 允暂 援 中国细胞生物学学报袁圆园员猿袁
猿缘渊缘冤院员 原 苑
咱猿暂 蕴怎则燥 云 蕴袁 悦燥泽贼葬灶贼蚤灶燥 郧袁 栽藻则燥造 允袁 藻贼 葬造援 栽则葬灶泽枣藻则葬遭蚤造蚤贼赠 燥枣 贼澡藻 耘杂栽鄄
杂杂砸泽 凿藻增藻造燥责藻凿 燥灶 晕怎造藻泽 糟造藻皂藻灶贼蚤灶藻 渊 悦蚤贼则怎泽 糟造藻皂藻灶贼蚤灶葬 匀燥则贼 藻曾
栽葬灶冤 贼燥 燥贼澡藻则 悦蚤贼则怎泽 泽责藻糟蚤藻泽 葬灶凿 贼澡藻蚤则 藻枣枣藻糟贼蚤增藻灶藻泽泽 枣燥则 早藻灶藻贼蚤糟 皂葬责鄄
责蚤灶早咱允暂 援 月酝悦 郧藻灶燥皂蚤糟泽袁 圆园园愿袁 怨院 圆愿苑 原 圆怨员
咱源暂 在藻灶早 杂袁 载蚤葬燥 郧袁 郧怎燥 允袁 藻贼 葬造援 阅藻增藻造燥责皂藻灶贼 燥枣 葬 耘杂栽 凿葬贼葬泽藻贼 葬灶凿
糟澡葬则葬糟贼藻则蚤扎葬贼蚤燥灶 燥枣 耘杂栽鄄杂杂砸泽 蚤灶 葬 贼则葬凿蚤贼蚤燥灶葬造 悦澡蚤灶藻泽藻 皂藻凿蚤糟蚤灶葬造
远远
专刊 刘摇 超等院日本落叶松 耘杂栽鄄杂杂砸标记挖掘及特征分析
责造葬灶贼袁 耘责蚤皂藻凿蚤怎皂 泽葬早蚤贼贼葬贼怎皂 渊 杂蚤藻遭援 耘贼 在怎糟糟援 冤 酝葬曾蚤皂咱 允暂 援 月酝悦
郧藻灶燥皂蚤糟泽袁 圆园员园袁 员员院 怨源
咱缘暂 在澡葬灶早 匀袁 宰藻蚤 蕴袁 酝蚤葬燥 匀袁 藻贼 葬造援 阅藻增藻造燥责皂藻灶贼 葬灶凿 增葬造蚤凿葬贼蚤燥灶 燥枣 早藻灶鄄
蚤糟鄄杂杂砸 皂葬则噪藻则泽 蚤灶 泽藻泽葬皂藻 遭赠 砸晕粤鄄泽藻择咱允暂 援 月酝悦 郧藻灶燥皂蚤糟泽袁 圆园员圆袁
员猿院 猿员远
咱远暂 杂葬噪葬早怎糟澡蚤 杂袁 哉糟澡蚤赠葬皂葬 运袁 哉藻灶燥 杂袁 藻贼 葬造援 陨泽燥造葬贼蚤燥灶 葬灶凿 糟澡葬则葬糟贼藻则鄄
蚤扎葬贼蚤燥灶 燥枣 缘圆 责燥造赠皂燥则责澡蚤糟 耘杂栽鄄杂杂砸 皂葬则噪藻则泽 枣燥则 悦葬造造蚤贼则蚤泽 糟燥造怎皂藻造造葬则蚤泽
渊悦怎责则藻泽泽葬糟藻葬藻冤咱允暂 援 粤皂 允 月燥贼袁 圆园员员袁 怨愿渊员圆冤院 藻猿远猿 原 藻猿远愿
咱苑暂 哉藻灶燥 杂袁 酝燥则蚤早怎糟澡蚤 再袁 哉糟澡蚤赠葬皂葬 运袁 藻贼 葬造援 粤 泽藻糟燥灶凿 早藻灶藻则葬贼蚤燥灶
枣则葬皂藻憎燥则噪 枣燥则 贼澡藻 葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 皂蚤糟则燥泽葬贼藻造造蚤贼藻泽 蚤灶 藻曾责则藻泽泽藻凿 泽藻择怎藻灶糟藻
贼葬早泽 葬灶凿 贼澡藻 凿藻增藻造燥责皂藻灶贼 燥枣 耘杂栽鄄杂杂砸 皂葬则噪藻则泽 枣燥则 葬 糟燥灶蚤枣藻则袁 悦则赠责贼燥鄄
皂藻则蚤葬 躁葬责燥灶蚤糟葬咱允暂 援 月酝悦 郧藻灶燥皂蚤糟泽袁 圆园员圆袁 员猿院 员猿远
咱愿暂 蕴蚤 阅袁 阅藻灶早 在袁 匝蚤灶 月袁 藻贼 葬造援 阅藻灶燥增燥 葬泽泽藻皂遭造赠 葬灶凿 糟澡葬则葬糟贼藻则蚤扎葬贼蚤燥灶
燥枣 遭葬则噪 贼则葬灶泽糟则蚤责贼燥皂藻 怎泽蚤灶早 陨造造怎皂蚤灶葬 泽藻择怎藻灶糟蚤灶早 葬灶凿 凿藻增藻造燥责皂藻灶贼 燥枣
耘杂栽鄄杂杂砸 皂葬则噪藻则泽 蚤灶 则怎遭遭藻则 贼则藻藻 渊匀藻增藻葬 遭则葬泽蚤造蚤藻灶泽蚤泽 酝怎藻造造援 粤则早援 冤
咱允暂 援 月酝悦 郧藻灶燥皂蚤糟泽袁 圆园员圆袁 员猿渊员冤院 员怨圆
咱怨暂 在澡葬灶早 允袁 蕴蚤葬灶早 杂袁 阅怎葬灶 允袁 藻贼 葬造援 阅藻 灶燥增燥 葬泽泽藻皂遭造赠 葬灶凿 糟澡葬则葬糟贼藻则蚤鄄
泽葬贼蚤燥灶 燥枣 贼澡藻 贼则葬灶泽糟则蚤责贼燥皂藻 凿怎则蚤灶早 泽藻藻凿 凿藻增藻造燥责皂藻灶贼袁 葬灶凿 早藻灶藻则葬贼蚤燥灶
燥枣 早藻灶蚤糟鄄杂杂砸 皂葬则噪藻则泽 蚤灶 责藻葬灶怎贼 渊 粤则葬糟澡蚤泽 澡赠责燥早葬藻葬 蕴援 冤 咱 允暂 援 月酝悦
郧藻灶燥皂蚤糟泽袁 圆园员圆袁 员猿院 怨园
咱员园暂 蕴蚤葬灶早 载袁 悦澡藻灶 载袁 匀燥灶早 再袁 藻贼 葬造援 哉贼蚤造蚤贼赠 燥枣 耘杂栽鄄凿藻则蚤增藻凿 杂杂砸 蚤灶
糟怎造贼蚤增葬贼藻凿 责藻葬灶怎贼 渊粤则葬糟澡蚤泽 澡赠责燥早葬藻葬 蕴援 冤 葬灶凿 粤则葬糟澡蚤泽 憎蚤造凿 泽责藻糟蚤藻泽
咱允暂 援 月酝悦 孕造葬灶贼 月蚤燥造袁 圆园园怨袁 怨院 猿缘
咱员员暂 杂糟澡葬枣造藻蚤贼灶藻则 砸袁 栽蚤灶糟燥责葬 蕴 砸袁 孕葬造燥皂蚤灶燥 韵袁 藻贼 葬造援 粤 泽憎藻藻贼责燥贼葬贼燥
早藻灶藻 蚤灶凿藻曾 藻泽贼葬遭造蚤泽澡藻凿 遭赠 凿藻 灶燥增燥 葬泽泽藻皂遭造赠 燥枣 责赠则燥泽藻择怎藻灶糟蚤灶早 葬灶凿
杂葬灶早藻则 泽藻择怎藻灶糟藻泽 葬灶凿 皂蚤灶蚤灶早 枣燥则 早藻灶藻鄄遭葬泽藻凿 皂蚤糟则燥泽葬贼藻造造蚤贼藻 皂葬则噪藻则泽
咱允暂 援 月酝悦 郧藻灶燥皂蚤糟泽袁 圆园员园袁 员员渊员冤院 远园源
咱员圆暂 阅怎贼贼葬 杂袁 运怎皂葬憎葬贼 郧袁 杂蚤灶早澡 月 孕袁藻贼 葬造援 阅藻增藻造燥责皂藻灶贼 燥枣 早藻灶蚤糟鄄杂杂砸
皂葬则噪藻则泽 遭赠 凿藻藻责 贼则葬灶泽糟则蚤责贼燥皂藻 泽藻择怎藻灶糟蚤灶早 蚤灶 责蚤早藻燥灶责藻葬 咱 悦葬躁葬灶怎泽
糟葬躁葬灶 渊蕴援 冤 酝蚤造造泽责葬怎早澡暂 咱允暂 援 月酝悦 孕造葬灶贼 月蚤燥造袁 圆园员员袁 员员院 员苑
咱员猿暂 在澡葬灶早 允袁 在澡葬灶早 杂袁 蕴蚤 杂袁 藻贼 葬造援 粤 早藻灶燥皂藻鄄憎蚤凿藻 泽怎则增藻赠 燥枣 皂蚤糟则燥砸晕粤
贼则怎灶糟葬贼蚤燥灶 葬灶凿 猿鸳 灶怎糟造藻燥贼蚤凿藻 葬凿凿蚤贼蚤燥灶 藻增藻灶贼泽 蚤灶 造葬则糟澡 渊 蕴葬则蚤曾 造藻责贼燥造藻鄄
责蚤泽冤 援 孕造葬灶贼葬袁 圆园员猿袁 圆猿苑渊源冤院 员园源苑 原 员园缘远
咱员源暂陨泽燥凿葬 运袁宰葬贼葬灶葬遭藻 粤援 陨泽燥造葬贼蚤燥灶 葬灶凿 糟澡葬则葬糟贼藻则蚤扎葬贼蚤燥灶 燥枣 皂蚤糟则燥泽葬贼藻造造蚤贼藻
造燥糟蚤 枣则燥皂 蕴葬则蚤曾 噪藻葬皂责枣藻则蚤咱允暂 援 酝燥造藻糟怎造葬则 耘糟燥造燥早赠 晕燥贼藻泽袁圆园园远袁远渊猿冤
院 远远源 原 远远远
咱员缘暂 杨秀艳袁孙晓梅袁张守攻袁等援 日本落叶松 耘杂栽鄄杂杂砸 标记开发及
二代优树遗传多样性分析咱 允暂 援 林业科学袁圆园员圆袁 源苑渊员员冤院 缘圆
原 缘愿
咱员远暂 贯春雨袁张含国袁张摇 磊袁等援 基于松科树种 耘杂栽 序列的落叶松
杂杂砸引物开发咱允暂 援 东北林业大学学报袁圆园员员袁 猿怨渊员冤院圆园 原 圆猿
咱员苑暂 栽藻皂灶赠噪澡 杂袁 阅藻悦造藻则糟噪 郧袁蕴怎噪葬泽澡燥增葬 粤袁 藻贼 葬造援 悦燥皂责怎贼葬贼蚤燥灶葬造 葬灶凿
藻曾责藻则蚤皂藻灶贼葬造 葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 皂蚤糟则燥泽葬贼藻造造蚤贼藻泽 蚤灶 则蚤糟藻 渊韵则赠扎葬 泽葬贼蚤增葬 蕴援 冤院
枣则藻择怎藻灶糟赠袁 造藻灶早贼澡 增葬则蚤葬贼蚤燥灶袁 贼则葬灶泽责燥泽燥灶 葬泽泽燥糟蚤葬贼蚤燥灶泽袁 葬灶凿 早藻灶藻贼蚤糟
皂葬则噪藻则 责燥贼藻灶贼蚤葬造 咱 允暂 援 郧藻灶燥皂藻 砸藻泽藻葬则糟澡袁 圆园园员袁 员员 渊 愿 冤院 员源源员
原 员源缘圆
咱员愿暂 任摇 亮袁朱宝芹袁张轶博袁等援 利用软件 孕则蚤皂藻则 孕则藻皂蚤藻则 缘援 园 进行
孕悦砸引物设计的研究咱 允暂 援 锦州医学院学报袁圆园园源袁 圆缘渊远冤院源猿
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