全 文 ：林业科学研究摇 圆园员猿袁圆远渊源冤院缘园远 缘员园云燥则藻泽贼 砸藻泽藻葬则糟澡
摇 摇 文章编号院员园园员鄄员源怨愿渊圆园员猿冤园源鄄园缘园远鄄园缘
鹅掌楸 郧藻灶燥皂蚤糟鄄杂杂砸反应体系优化
贾摇 波员袁 徐海滨圆袁 徐摇 阳员袁 龙晓飞员袁 陈金慧员袁 施季森员鄢
渊员郾 南京林业大学林木遗传与生物技术省部共建教育部重点实验室袁江苏 南京摇 圆员园园猿苑 曰
圆郾 中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所濒危药材繁育国家工程实验室袁 北京摇 员园园员怨猿冤
收稿日期院 圆园员猿鄄园圆鄄园愿
基金项目院 国家高技术研究发展计划渊愿远猿 计划冤资助渊课题编号院圆园员猿粤粤员园圆苑园缘冤袁国家自然基金渊猿员员苑园远员怨冤
作者简介院 贾摇 波渊员怨愿源要冤袁男袁山东泰安人袁博士研究生袁主要从事林木遗传改良研究援
鄢 通讯作者院施季森渊员怨缘圆要冤袁男袁江苏启东人袁主要从事林木遗传育种研究援
关键词院郧藻灶燥皂蚤糟鄄杂杂砸曰鹅掌楸曰正交试验曰单因素梯度试验
中图分类号院杂苑员愿援 源远 文献标识码院粤
韵责贼蚤皂蚤扎葬贼蚤燥灶 燥枣 郧藻灶燥皂蚤糟鄄杂杂砸 砸藻葬糟贼蚤燥灶 杂赠泽贼藻皂 蚤灶 蕴蚤则蚤燥凿藻灶凿则燥灶
允陨粤 月燥员袁 载哉 匀葬蚤鄄遭蚤灶圆袁 载哉 再葬灶早员袁 蕴韵晕郧 载蚤葬燥鄄枣藻蚤员袁 悦匀耘晕 允蚤灶鄄澡怎蚤员袁 杂匀陨 允蚤鄄泽藻灶员
渊员郾 运藻赠 蕴葬遭燥则葬贼燥则赠 燥枣 云燥则藻泽贼 郧藻灶藻贼蚤糟泽 驭 月蚤燥贼藻糟澡灶燥造燥早赠 燥枣 酝蚤灶蚤泽贼则赠 燥枣 耘凿怎糟葬贼蚤燥灶袁 晕葬灶躁蚤灶早 云燥则藻泽贼则赠 哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠袁 晕葬灶躁蚤灶早摇 圆员园园猿苑袁 允蚤葬灶早泽怎袁 悦澡蚤灶葬曰
圆郾 栽澡藻 晕葬贼蚤燥灶葬造 耘灶早蚤灶藻藻则蚤灶早 蕴葬遭燥则葬贼燥则赠 枣燥则 月则藻藻凿蚤灶早 燥枣 耘灶凿葬灶早藻则藻凿 酝藻凿蚤糟蚤灶葬造 酝葬贼藻则蚤葬造泽袁 陨灶泽贼蚤贼怎贼藻 燥枣 酝藻凿蚤糟蚤灶葬造 孕造葬灶贼 阅藻增藻造燥责皂藻灶贼袁
悦澡蚤灶藻泽藻 粤糟葬凿藻皂赠 燥枣 酝藻凿蚤糟葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽 驭 孕藻噪蚤灶早 哉灶蚤燥灶 酝藻凿蚤糟葬造 悦燥造造藻早藻袁 月藻蚤躁蚤灶早摇 员园园员怨猿袁 悦澡蚤灶葬冤
粤遭泽贼则葬糟贼院栽澡藻 燥责贼蚤皂蚤扎葬贼蚤燥灶 燥枣 贼澡藻 郧藻灶燥皂蚤糟鄄杂杂砸 则藻葬糟贼蚤燥灶 泽赠泽贼藻皂 蚤泽 葬 遭葬泽蚤糟 责则燥贼燥糟燥造 憎澡藻灶 贼澡藻 郧藻灶燥皂蚤糟鄄杂杂砸 蚤泽 怎泽藻凿
枣燥则 早藻灶藻贼蚤糟 葬灶葬造赠泽蚤泽 蚤灶 蕴蚤则蚤燥凿藻灶凿则燥灶援 栽澡藻 糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶泽 燥枣 酝早圆 垣 袁 凿晕栽孕袁 孕则蚤皂藻则 葬灶凿 则栽葬择 憎藻则藻 贼藻泽贼藻凿 遭赠 蕴怨渊猿源冤 燥则鄄贼澡燥早燥灶葬造 藻曾责藻则蚤皂藻灶贼 葬灶凿 泽蚤灶早造藻 枣葬糟贼燥则 早则葬凿蚤藻灶贼 藻曾责藻则蚤皂藻灶贼 贼燥 早葬蚤灶 贼澡藻 燥责贼蚤皂葬造 则藻葬糟贼蚤燥灶 泽赠泽贼藻皂援 栽澡藻 则藻泽怎造贼泽 蚤灶凿蚤糟葬贼藻凿
贼澡葬贼 贼澡藻 燥责贼蚤皂葬造 则藻葬糟贼蚤燥灶 泽赠泽贼藻皂 泽澡燥怎造凿 糟燥灶贼葬蚤灶 苑缘 灶早 燥枣 早藻灶燥皂蚤糟 阅晕粤袁 员 滋蕴 燥枣 员园 伊 遭怎枣枣藻则袁 园郾 源 滋蕴 燥枣 员园 皂皂燥造窑
蕴 原员凿晕栽孕袁 园郾 苑缘 滋蕴 燥枣 圆郾 缘 皂皂燥造窑蕴 原员 酝早悦造圆袁 园援 圆缘滋蕴 燥枣 员园 滋皂燥造窑蕴 原员 孕则蚤皂藻则袁 园郾 园缘 滋蕴 燥枣 缘 哉 则栽葬择 葬灶凿 枣蚤灶葬造增燥造怎皂藻 燥枣 员园滋蕴援 砸藻责藻葬贼藻凿 贼则蚤葬造泽 葬灶凿 贼憎燥 增藻则蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 贼藻泽贼泽 泽澡燥憎藻凿 贼澡葬贼 贼澡蚤泽 燥责贼蚤皂葬造 则藻葬糟贼蚤燥灶 泽赠泽贼藻皂 憎葬泽 泽贼葬遭造藻袁 则藻造蚤葬鄄
遭造藻袁 藻枣枣蚤糟蚤藻灶贼 葬灶凿 泽怎蚤贼葬遭造藻 枣燥则 贼澡藻 葬责责造蚤糟葬贼蚤燥灶泽 燥枣 郧藻灶燥皂蚤糟鄄杂杂砸 蚤灶 蕴蚤则蚤燥凿藻灶凿则燥灶 责燥责怎造葬贼蚤燥灶 早藻灶藻贼蚤糟泽 葬灶凿 择怎葬灶贼蚤贼葬贼蚤增藻
早藻灶藻贼蚤糟泽 则藻泽藻葬则糟澡援
运藻赠 憎燥则凿泽院 郧藻灶燥皂蚤糟鄄杂杂砸曰 蕴蚤则蚤燥凿藻灶凿则燥灶曰 燥则贼澡燥早燥灶葬造 藻曾责藻则蚤皂藻灶贼曰 泽蚤灶早造藻 枣葬糟贼燥则 早则葬凿蚤藻灶贼 藻曾责藻则蚤皂藻灶贼
鹅掌楸属渊蕴蚤则蚤燥凿藻灶凿则燥灶 蕴冤袁是木兰科渊酝葬早灶燥造蚤鄄
葬糟藻葬藻冤植物袁属古老属种之一遥 由于第三纪晚期气
候剧变和更新世冰川作用袁到目前为止仅剩中国马
褂木渊 蕴援 糟澡蚤灶藻灶泽藻 渊匀藻皂泽造援 冤 杂葬则早援 冤 和北美鹅掌楸
渊蕴援 贼怎造蚤责蚤枣藻则葬 蕴援 冤两个残遗种咱员暂 遥 鹅掌楸属植物在
植物系统学中有特殊地位袁以及具有原始的花结构
等袁这使得它们成为研究植物进化尧开花植物历史进
程尧群体结构以及交配系统等的理想材料咱圆 原 源暂 遥 此
外袁鹅掌楸植物具有重要的经济价值和生态价值咱缘暂 遥
除为生产提供优质木材外袁还具较强抗性咱远 原 苑暂 袁内含
丰富的医用化合物咱愿 原 怨暂 以及生物质燃料的生
产咱员园 原 员圆暂等遥
鹅掌楸拥有木兰科最少的染色体数渊圆灶 越 圆曾 越
猿愿冤袁二倍体基因组大小约为 员 愿园圆 酝遭责袁基因组巨
大咱员猿暂 遥 在常规育种周期较长及基因组信息较少的
情况下袁借助分子标记辅助育种来加速鹅掌楸的育
种工作是一种比较可行的方法遥 目前袁杂杂砸 标记在
林木的研究中应用最为广泛遥 杂杂砸 标记具备多态
性高尧共显性且均匀覆盖整个基因组等特点袁已成
为遗传连锁图谱构建尧群体遗传尧交配系统分析和
匝栽蕴定位等的林木遗传育种研究的有效工具咱员源暂 遥
在对某一物种进行 杂杂砸标记开发以及利用 杂杂砸
标记对植物基因组研究时都应对该物种的 杂杂砸标记
反应体系进行优化袁以建立一套适宜该物种 杂杂砸 标
第 源 期 贾摇 波等院鹅掌楸 郧藻灶燥皂蚤糟鄄杂杂砸反应体系优化
记的 孕悦砸反应体系遥 目前有关鹅掌楸 郧藻灶燥皂蚤糟鄄杂杂砸
的反应体系以及 郧藻灶燥皂蚤糟鄄杂杂砸在鹅掌楸中应用的研
究还未见报道遥 因此袁本研究利用正交试验设计结
合单因素分析试验对鹅掌楸 郧藻灶燥皂蚤糟鄄杂杂砸 的反应体
系进行优化袁旨在建立一套高效的尧稳定的 杂杂砸反应
体系袁为后期的鹅掌楸 郧藻灶燥皂蚤糟鄄杂杂砸 标记的开发尧鹅
掌楸连锁图谱构建尧系统进化以及关联分析等研究
奠定基础遥
员摇 材料与方法
员援 员摇 材料
应用于鹅掌楸 郧藻灶燥皂蚤糟鄄杂杂砸反应体系优化的实
验材料为庐山渊蕴杂员冤和南卡渊晕运冤圆 个种源个体袁采
自于南京林业大学下蜀林场鹅掌楸种源试验林曰应
用于 孕悦砸反应体系验证的实验材料包括采自下蜀
林场鹅掌楸种源试验林的 源 个北美种源个体院密苏
里渊酝杂蕴冤尧南卡渊晕运冤尧佐治亚渊在在再冤尧路易斯渊蕴再杂冤
和 源 个中国种源个体院桑植渊杂在冤尧武夷山渊宰再杂冤尧庐
山渊蕴杂员冤和松阳渊杂再冤以及南京林业大学校园的 员远
个 晕运 伊 蕴杂员 的杂交子代遥 取健康植株上刚展开的
嫩叶袁液氮处理后放置 原愿园 益备用遥
员援 圆摇 阅晕粤提取及检测
阅晕粤提取袁使用 阅晕藻葬泽赠 孕造葬灶贼 酝葬曾蚤 噪蚤贼 渊匝蚤葬早藻灶冤
试剂盒进行提取曰阅晕粤 质量检测袁采用琼脂糖凝胶
电泳检测及管家基因渊员愿杂冤检测袁员愿杂鄄泽院粤栽栽栽悦栽郧悦鄄
悦悦栽粤栽悦粤粤悦栽栽栽悦郧 和 员愿杂鄄葬院粤栽栽栽粤栽栽郧栽悦粤悦栽粤悦鄄
悦栽悦悦悦悦郧曰孕悦砸反应体系院圆园 滋蕴总体积袁包括院圆 滋蕴
员园 伊 遭怎枣枣藻则尧员郾 远 滋蕴 凿晕栽孕尧员郾 圆 滋蕴 酝早悦造圆尧员 滋蕴 责则蚤皂鄄藻则尧园援 圆 滋蕴 则栽葬择 阅晕粤 责燥造赠皂藻则葬泽藻尧员园园 灶早阅晕粤遥 孕悦砸
扩增程序院 怨源益预变性 缘 皂蚤灶袁怨源 益变性 猿园 泽袁缘圆 益
复性 猿园 泽袁苑圆 益延伸 猿园 泽袁猿缘 个循环袁苑圆 益延伸 员园
皂蚤灶袁源 益保存遥
员援 猿摇 郧藻灶燥皂蚤糟鄄杂杂砸反应体系优化
杂杂砸扩增体系遥 员园 滋蕴 总体积袁其中 阅晕粤 模板
量为 苑缘 灶早袁员 滋蕴 员园 伊 遭怎枣枣藻则袁其余成分进行优化设
计遥 随机选择 员 对本实验室所开发的鹅掌楸 郧藻鄄
灶燥皂蚤糟鄄杂杂砸 引 物 蕴贼郧酝杂园远园袁 云院 栽郧郧郧粤悦粤粤郧栽鄄
栽悦粤粤悦悦悦悦栽粤和 砸院悦郧悦粤郧粤郧郧粤郧粤郧郧粤郧粤郧粤粤粤袁
利用 蕴杂员 和 晕运对 孕悦砸反应体系进行优化遥 首先选
用 蕴怨渊猿源冤 正交表袁进行 源 因素渊酝早圆 垣 袁凿晕栽孕袁责则蚤皂藻则袁则栽葬择冤猿 水平的正交试验共 怨 个组合渊表 员冤遥 选择
最佳组合作为反应的基本体系袁再设计单因素梯度
试验袁逐个优化其他反应成分终用量袁从而确定适合
鹅掌楸 郧藻灶燥皂蚤糟鄄杂杂砸 反应的体系遥 试验设 猿 次
重复遥
表 员摇 孕悦砸 正交试验设计表 咱蕴怨渊猿源冤暂
组合号
孕悦砸反应体系
酝早圆 垣
体积 辕 滋蕴
凿晕栽孕
体积 辕 滋蕴
孕则蚤皂藻则
体积 辕 滋蕴
则栽葬择
体积 辕 滋蕴
员 园援 苑缘 园援 员 园援 圆缘 园援 园缘
圆 园援 苑缘 园援 圆 园援 源缘 园援 员
猿 园援 苑缘 园援 猿 园援 远缘 园援 员缘
源 员援 圆缘 园援 员 园援 源缘 园援 员缘
缘 员援 圆缘 园援 圆 园援 远缘 园援 园缘
远 员援 圆缘 园援 猿 园援 圆缘 园援 员
苑 员援 苑缘 园援 员 园援 远缘 园援 员
愿 员援 苑缘 园援 圆 园援 圆缘 园援 员缘
怨 员援 苑缘 园援 猿 园援 源缘 园援 园缘
摇 摇 注院酝早圆 垣浓度袁圆郾 缘 皂皂燥造窑蕴 原员 曰凿晕栽孕 浓度 员园 皂皂燥造窑蕴 原员 渊 杂陨郧鄄
酝粤冤袁孕则蚤皂藻则 浓度 员园 滋皂燥造窑蕴 原员 袁则栽葬择浓度 缘 哉渊栽葬噪葬砸葬冤
杂杂砸扩增程序遥 采用 栽燥怎糟澡鄄凿燥憎灶 孕悦砸袁 怨源益预
变性 缘 皂蚤灶袁怨源 益变性 员缘 泽袁远员 益复性 员缘 泽渊吟益 越
原员冤袁苑圆 益延伸 猿园 泽袁怨 个循环曰怨源 益变性 员缘 泽袁缘圆
益复性 员缘 泽袁苑圆 益延伸 猿园 泽袁员缘 个循环曰苑圆 益延伸 员园
皂蚤灶袁源 益保存遥 孕悦砸 产物采用 愿豫聚丙烯酰胺凝胶
电泳检测遥
员援 源摇 郧藻灶燥皂蚤糟鄄杂杂砸反应体系的验证
再随机选择 圆 对鹅掌楸 郧藻灶燥皂蚤糟鄄杂杂砸 引物 蕴贼鄄
郧酝杂园源圆袁 云院 悦粤栽栽粤粤郧悦悦粤栽郧悦粤栽悦郧粤郧粤 和 砸院
郧悦栽粤郧栽郧悦栽郧栽郧栽悦悦郧栽郧粤粤曰蕴贼郧酝杂 员园远袁 云院粤悦郧栽鄄
郧粤粤粤悦悦悦栽粤郧悦郧栽郧粤粤 和 砸院 悦栽悦悦悦悦栽栽郧悦悦栽鄄
栽悦栽悦栽栽栽栽遥 利用 愿 个种源个体和 员远 个杂交子代对
构建的鹅掌楸 郧藻灶燥皂蚤糟鄄杂杂砸反应体系进行验证遥
圆摇 结果与分析
圆援 员摇 鹅掌楸基因组 阅晕粤质量检测结果
获得高质量的 阅晕粤袁是进行 孕悦砸 扩增的前提遥
使用渊匝蚤葬早藻灶冤试剂盒从新鲜鹅掌楸嫩叶中提取的基
因组 阅晕粤渊图 员粤冤浓度介于 猿远缘郾 圆愿 源愿远郾 远远 灶早窑
滋蕴 原员 之 间袁 韵阅圆远园 辕 韵阅圆愿园 比 值 为 员郾 苑 员郾 怨袁
韵阅圆远园 辕 韵阅圆猿园 比值均为 圆郾 园 圆郾 源袁表明 阅晕粤 质量
高遥 为了进一步检测所提取 阅晕粤的质量袁排除 阅晕粤
质量问题是造成 孕悦砸 扩增产生的耶空带爷现象的原
因袁利用鹅掌楸的管家基因 员愿杂 引物对其进行检测
渊图 员月冤遥 经检测袁所有 阅晕粤 均能扩增出相应大小
的片段袁进一步证明了所提取的 阅晕粤能够满足 孕悦砸
反应的要求遥
苑园缘
林摇 业摇 科摇 学摇 研摇 究 第 圆远 卷
图 员摇 粤院 部分鹅掌楸基因组 阅晕粤的电泳检测结果
月院 部分鹅掌楸基因组 阅晕粤的 员愿杂引物检测结果
圆援 圆摇 利用正交设计和单因素梯度试验对鹅掌楸
郧藻灶燥皂蚤糟鄄杂杂砸反应体系优化
圆援 圆援 员摇 正交试验设计初步优化反应体系摇 通过设
计正交试验组合对 蕴杂员 和 晕运基因组 阅晕粤进行 杂杂砸
扩增渊图 圆冤袁所有的组合都能扩增出清晰和易辨识
的条带遥 但是袁第 苑尧愿 和 怨 组合均造成一个等位基
因丢失袁导致 杂杂砸信息丢失曰第 源 组合在 蕴杂员 中丢失
一个等位基因曰第 缘 组合在 蕴杂员 和 晕运 中虽都保持
全部的等位基因信息袁但其中一个等位基因均模糊
不清遥 第 员尧圆尧猿 和 远 组合在两个体中的扩增效果都
较好遥 其中袁第 猿 个组合最佳袁为此正交试验所获得
的最佳反应条件遥 员 猿 中 酝早圆 垣用量为 园郾 苑缘 滋蕴尧源
缘 中 酝早圆 垣浓度为 员郾 圆缘 滋蕴尧苑 怨 中 酝早圆 垣浓度均
为 员郾 苑缘 滋蕴袁而在这 猿 个组合中其他 猿 个因素浓度均
处于不同的水平袁表明 酝早圆 垣用量为影响鹅掌楸 郧藻鄄
灶燥皂蚤糟鄄杂杂砸 孕悦砸 反应的关键因素袁当其用量为 园郾 苑缘
滋蕴 时扩增效果最好袁而其他 猿 种反应成分的终浓度
水平尚需进一步研究遥
从左到右依次为组合 员 怨
图 圆摇 正交试验设计反应体系扩增结果
圆援 圆援 圆摇 单因素梯度试验进一步优化反应体系摇 在
正交试验设计初步优化反应体系的基础上袁设计 猿
个单因素梯度试验包括 凿晕栽孕院园郾 员尧园郾 圆尧园郾 猿 和 园郾 源
滋蕴曰孕则蚤皂藻则院园郾 圆缘尧园郾 源缘尧园郾 远缘 和 园郾 愿缘 滋蕴曰则栽葬择院园郾 园缘尧
园郾 员尧园郾 员缘 和 园郾 圆 滋蕴袁当一种反应成分进行用量梯度
变化实验时袁其它反应成分的用量不变遥
圆郾 圆郾 圆郾 员摇 凿晕栽孕用量对 孕悦砸反应体系的影响摇 在 源
个 凿晕栽孕 的水平下袁孕悦砸 反应所产生的特异性产物
效果均较好袁扩增出了所有的等位基因袁带迹清晰
渊图 猿冤遥 源 个处理对 孕悦砸反应体系的影响差异不是
很显著袁但是随着 凿晕栽孕 用量的增加袁条带的亮度也
逐渐增加袁且产生的杂带数也越来越少遥 经过多次
试验重复后袁决定最终选择 园郾 源 滋蕴 辕 员园 滋蕴为反应体
系的最优用量遥
从左到右依次为 园郾 员 园郾 源 滋蕴
图 猿摇 不同 凿晕栽孕的用量条件下 杂杂砸鄄孕悦砸 扩增的产物结果
圆郾 圆郾 圆郾 圆 摇 孕则蚤皂藻则 用量对 孕悦砸 反应体系的影响 摇
孕悦砸产物的亮度随着引物的用量的增加而增加渊图
源冤遥 蕴杂员 中两个等位基因因为大小差别较大袁很容
易辨识袁但是 晕运中两个等位基因因大小差别较小袁
随着 孕则蚤皂藻则 用量的增加而变得越来越难辨识袁且杂
带也随之增多遥 因此袁选择 园郾 圆缘 滋蕴 辕 员园 滋蕴 为反应
体系的最优用量遥
从左到右依次为 园郾 圆缘 园郾 愿缘 滋蕴
图 源摇 不同 孕则蚤皂藻则的用量条件下 杂杂砸鄄 孕悦砸 扩增的产物结果
圆郾 圆郾 圆郾 猿摇 则栽葬择用量对 孕悦砸反应体系的影响摇 图 缘
愿园缘
第 源 期 贾摇 波等院鹅掌楸 郧藻灶燥皂蚤糟鄄杂杂砸反应体系优化
所示袁孕悦砸产物的亮度随着 则栽葬择 用量水平增加而增
加遥 同 孕则蚤皂藻则用量处理试验的结果基本一致袁在 晕运
中两个等位基因的大小差别较小袁随亮度的增加而
越发难以辨识遥 同样袁杂带也是随之增多遥 因此袁选
择 园郾 园缘 滋蕴 辕 员园 滋蕴为反应体系的最优用量遥
从左到右依次为 园郾 园缘 园郾 圆 滋蕴
图 缘摇 不同 则栽葬择的用量条件下 杂杂砸鄄孕悦砸 扩增的产物结果
圆郾 猿摇 鹅掌楸 郧藻灶燥皂蚤糟鄄杂杂砸反应体系的验证
随机选择对鹅掌楸 郧藻灶燥皂蚤糟鄄杂杂砸 引物院 蕴贼鄄
郧酝杂园源员尧蕴贼郧酝杂园远园尧蕴贼郧酝杂员园远袁分别利用 酝杂蕴尧晕运尧
在在再尧蕴再杂尧杂在尧宰再杂尧蕴杂员尧杂再 愿 个个体以及 员远 个 晕运
伊 蕴杂员 的杂交子代对优化后的反应体系院苑缘 灶早阅晕粤尧
员 滋蕴 遭怎枣枣藻则尧园郾 源 滋蕴 凿晕栽孕尧园郾 苑缘 滋蕴 酝早悦造圆尧园郾 圆缘 滋蕴孕则蚤皂藻则尧园郾 园缘 滋蕴 则栽葬择袁 凿凿匀圆韵补齐至 员园 滋蕴体积袁进
行验证遥
验证结果如图 远 所示院带迹清晰袁可辨识度高袁
表明此优化体系扩增效果较好袁可以广泛应用于引
物开发尧遗传多样性分析尧基因分型尧系统进化以及
关联分析等方面的研究遥 其中袁以遗传多样性为例袁
可以很好的统计等位基因数尧期望杂合度和 孕陨悦 等
数据渊表 圆冤遥
员 愿 分别为 酝杂蕴尧晕运尧在在再尧蕴再杂尧杂在尧宰再杂尧蕴杂和 杂再
图 远摇 鹅掌楸 郧藻灶燥皂蚤糟鄄杂杂砸反应体系验证结果 陨
表 圆摇 郧藻灶燥皂蚤糟鄄杂杂砸引物扩增不同鹅掌楸种质的遗传多样性
引物编号 等位基因数量 杂合度 期望杂合度 多态性信息含量
蕴贼郧酝杂园源圆 苑 园郾 远圆缘 园 园郾 苑怨远 怨 园郾 苑远怨 远
蕴贼郧酝杂园远园 远 园郾 缘园园 园 园郾 苑愿怨 员 园郾 苑缘远 远
蕴贼郧酝杂员园远 缘 园郾 源圆愿 远 园郾 苑缘缘 员 园郾 苑员远 员
晕运尧蕴杂员 及其 员远 个杂交子代对反应体系进行验
证袁结果如图 苑 所示遥 蕴贼郧酝杂园源员尧 蕴贼郧酝杂园远园尧 蕴贼鄄
郧酝杂员园远 猿 对引物通过优化后的体系对 晕运尧蕴杂员 及
其 员远 个杂交子代进行扩增袁都可以得到清晰尧稳定尧
特异性高的产物袁且杂带也较少遥 图 苑 从雌雄交配
角度去分析袁蕴贼郧酝杂园源圆 在 晕运尧蕴杂员 及其 员远 个杂交
子代中的扩增产物的信息可判读为院葬糟 伊 遭糟 产生
葬遭尧葬糟尧遭糟尧糟糟 源 种分离类型袁在 员远 个杂交子代中的
扩增产物也都符合这一孟德尔分离定律遥 蕴贼鄄
郧酝杂园远园 的扩增信息可判读为 葬遭 伊 遭糟袁蕴贼郧酝杂员园远 的
扩增信息可判读为 葬遭 伊 糟糟遥
猿摇 结论和讨论
通过设计 蕴怨 渊猿源 冤正交试验结合单因素梯度实
验对 孕悦砸反应体系中的 酝早圆 垣 尧凿晕栽孕尧孕则蚤皂藻则 和 则栽葬择
的用量进行了优化袁最终确定了鹅掌楸 郧藻灶燥皂蚤糟鄄杂杂砸
的 孕悦砸最佳反应体系袁即 苑缘 灶早 的 阅晕粤尧员 滋蕴 员园 伊
遭怎枣枣藻则尧 园郾 源滋蕴 员园 皂皂燥造窑蕴 原员浓度的 凿晕栽孕尧园郾 苑缘 滋蕴
圆郾 缘 皂皂燥造窑蕴 原员浓度的 酝早悦造圆尧园郾 圆缘 滋蕴 员园 滋皂燥造窑
蕴 原员浓度的 孕则蚤皂藻则尧园郾 园缘 滋蕴 缘哉 浓度的 则栽葬择尧凿凿匀圆韵
补齐至 员园 滋蕴体积遥
怨园缘
林摇 业摇 科摇 学摇 研摇 究 第 圆远 卷
从左到右分别为 晕运尧蕴杂员 和 员 员远 个杂交子代
图 苑摇 鹅掌楸 郧藻灶燥皂蚤糟鄄杂杂砸反应体系验证结果域
在 孕悦砸反应体系中 酝早圆 垣用量是一个关键的因
素袁其不但可以影响酶的活性袁还会影响模板与引物
的结合等遥 在本实验中袁较高的 酝早圆 垣 用量会造成
杂杂砸信息丢失袁故采用较低的 酝早圆 垣 用量遥 凿晕栽孕尧
孕则蚤皂藻则和 则栽葬择 的用量同样也会影响 孕悦砸 扩增产物
的产量和质量袁但是在本实验中袁这 猿 者相对于
酝早圆 垣来说是次要因素遥
参考文献院
咱员暂 刘玉壶袁 夏念和袁 杨惠秋援 木兰科渊酝葬早灶燥造蚤葬糟藻葬藻冤的起源尧进化
和地理分布咱允暂 援 热带亚热带植物学报袁 员怨怨缘袁 猿渊源冤院员 原 员圆
咱圆暂 韦仲新袁 吴征镒援 鹅掌楸属花粉的超微结构研究及系统学意义
咱允暂 援 云南植物研究袁 员怨怨猿袁 员缘渊圆冤院员远猿 原 员远远
咱猿暂 匀怎灶贼 阅援 酝葬早灶燥造蚤葬泽 葬灶凿 栽澡藻蚤则 粤造造蚤藻泽咱酝暂援 陨灶贼藻则灶葬贼蚤燥灶葬造 阅藻灶凿则燥造燥早赠
杂燥糟蚤藻贼赠 驭 酝葬早灶燥造蚤葬 杂燥糟蚤藻贼赠袁 员怨怨愿院猿园源
咱源暂 在葬澡灶 蕴 酝袁 运燥灶早 匀袁 蕴藻藻遭藻灶泽鄄酝葬糟噪 允 匀袁藻贼 葬造援 援 栽澡藻 藻增燥造怎贼蚤燥灶 燥枣 贼澡藻
杂耘孕粤蕴蕴粤栽粤 泽怎遭枣葬皂蚤造赠 燥枣 酝粤阅杂鄄遭燥曾 早藻灶藻泽院葬 责则藻鄄葬灶早蚤燥泽责藻则皂 燥则蚤早蚤灶
憎蚤贼澡 皂滋造 贼蚤责造藻 凿怎责造蚤糟葬贼蚤燥灶泽 贼澡则燥怎早澡燥怎贼 葬灶早蚤燥泽责藻则皂 澡蚤泽贼燥则赠咱 允暂 援 郧藻鄄
灶藻贼蚤糟泽袁 圆园园缘袁 员远怨院圆圆园怨 原 圆圆圆猿
咱缘暂 运蚤皂 运 阅袁 蕴藻藻 耘 允援 孕燥贼藻灶贼蚤葬造 贼则藻藻 泽责藻糟蚤藻泽 枣燥则 怎泽藻 蚤灶 贼澡藻 则藻泽贼燥则葬贼蚤燥灶 燥枣
怎灶泽葬灶蚤贼葬则赠 造葬灶凿枣蚤造造泽咱允暂 援 耘灶增蚤则燥灶 酝葬灶葬早藻袁 圆园园缘袁 猿远院员 原 员源
咱远暂 赵志新袁 乔瑞芳袁 季孔庶援 杂交鹅掌楸不同无性系对 孕遭胁迫的
生理响应及抗性比较咱允暂 援 植物资源与环境学报袁 圆园园苑袁 员远渊源冤院
苑 原 员圆
咱苑暂 运造怎早澡 运 砸袁 悦怎皂皂蚤灶早 允 悦援 灾葬则蚤葬贼蚤燥灶 蚤灶 燥则早葬灶蚤糟 葬糟蚤凿 藻曾怎凿葬贼藻泽 葬皂燥灶早
赠糟燥则则澡蚤扎葬造 泽责藻糟蚤藻泽 糟燥造燥灶蚤扎蚤灶早 蕴蚤则蚤燥凿藻灶凿则燥灶 贼怎造蚤责蚤枣藻则葬 蕴援 渊 赠藻造造燥憎 责燥责鄄
造葬则冤 蚤灶 贼澡藻 责则藻泽藻灶糟藻 燥枣 葬造怎皂蚤灶怎皂咱允暂 援 耘糟燥造燥早蚤糟葬造 杂燥糟蚤藻贼赠 燥枣 粤皂藻则蚤糟葬
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咱愿暂 酝燥燥灶 酝 运袁 韵澡 匀 酝袁 运憎燥灶 月 酝袁藻贼 葬造援 云葬则灶藻泽赠造 责则燥贼藻蚤灶 贼则葬灶泽枣藻则葬泽藻
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