全 文 ：林业科学研究摇 圆园员员袁圆源渊圆冤院圆缘远 圆远圆云燥则藻泽贼 砸藻泽藻葬则糟澡
摇 摇 文章编号院员园园员鄄员源怨愿渊圆园员员冤园圆鄄园圆缘远鄄园苑
刚毛柽柳富含甘氨酸 砸晕粤结合蛋白 栽澡郧砸孕员基因克隆与表达分析
姜摇 波袁 高彩球袁 王玉成袁 于丽丽袁 杨传平鄢
渊东北林业大学林学院袁林木遗传育种与生物技术教育部重点实验室袁黑龙江 哈尔滨摇 员缘园园源园冤
关键词院刚毛柽柳曰富含甘氨酸 砸晕粤结合蛋白曰基因克隆曰实时定量 砸栽鄄孕悦砸
中图分类号院杂苑怨猿郾 缘 文献标识码院粤
收稿日期院 圆园员园鄄园苑鄄圆怨
基金项目院 国家自然科学基金面上项目渊猿园怨苑圆猿愿远冤曰东北林业大学研究生科技创新项目渊园园园鄄源员员员园苑员园冤
作者简介院 姜摇 波渊员怨愿源要冤袁女袁黑龙江集贤人袁在读硕士援主要研究方向院林木遗传育种援 耘鄄皂葬蚤造院躁蚤葬灶早遭燥员怨愿源猿苑岳 员远猿援 糟燥皂
鄢通讯作者院教授袁博士生导师援主要研究方向院林木遗传育种援 耘鄄皂葬蚤造院赠葬灶早糟责岳 灶藻枣怎援 藻凿怎援 糟灶
悦造燥灶蚤灶早 葬灶凿 耘曾责则藻泽泽蚤燥灶 粤灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 粤 郧造赠糟蚤灶藻鄄则蚤糟澡 砸晕粤鄄遭蚤灶凿蚤灶早
孕则燥贼藻蚤灶 郧藻灶藻 枣则燥皂 栽葬皂葬则蚤曾 澡蚤泽责蚤凿葬
允陨粤晕郧 月燥袁 郧粤韵 悦葬蚤鄄择蚤怎袁 宰粤晕郧 再怎鄄糟澡藻灶早袁 再哉 蕴蚤鄄造蚤袁 再粤晕郧 悦澡怎葬灶鄄责蚤灶早
渊运藻赠 蕴葬遭燥则葬贼燥则赠 燥枣 云燥则藻泽贼 栽则藻藻 郧藻灶藻贼蚤糟 蚤皂责则燥增藻皂藻灶贼 葬灶凿 月蚤燥贼藻糟澡灶燥造燥早赠 燥枣 酝蚤灶蚤泽贼则赠 燥枣 耘凿怎糟葬贼蚤燥灶袁
晕燥则贼澡藻葬泽贼 云燥则藻泽贼则赠 哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠袁 匀葬则遭蚤灶摇 员缘园园源园袁 匀藻蚤造燥灶早躁蚤葬灶早袁 悦澡蚤灶葬冤
粤遭泽贼则葬糟贼院 栽澡藻 枣怎造造鄄造藻灶早贼澡 糟阅晕粤 燥枣 葬 责则藻泽怎皂藻凿 早造赠糟蚤灶藻鄄则蚤糟澡 则蚤遭燥灶怎糟造藻蚤糟 葬糟蚤凿 渊砸晕粤冤 遭蚤灶凿蚤灶早 责则燥贼藻蚤灶 渊栽澡郧砸孕员冤
早藻灶藻 憎葬泽 蚤泽燥造葬贼藻凿 枣则燥皂 葬 糟阅晕粤 造蚤遭则葬则赠 燥枣 栽葬皂葬则蚤曾 澡蚤泽责蚤凿葬 造藻葬增藻泽援 栽澡藻 栽澡郧砸孕员 早藻灶藻 憎蚤贼澡 愿园园 遭责 蚤灶 造藻灶早贼澡 糟燥灶贼葬蚤灶泽
源猿圆鄄遭葬泽藻 责葬蚤则 渊遭责冤 燥责藻灶 则藻葬凿蚤灶早 枣则葬皂藻 渊韵砸云冤 葬灶凿 藻灶糟燥凿藻泽 葬 员源猿鄄葬皂蚤灶燥鄄葬糟蚤凿 责燥造赠责藻责贼蚤凿藻 憎蚤贼澡 葬 责则藻凿蚤糟贼藻凿 皂燥造藻糟怎鄄
造葬则 憎藻蚤早澡贼 燥枣 员源援 怨缘 噪阅葬 葬灶凿 责陨 燥枣 缘援 猿远援 耘曾责则藻泽泽蚤燥灶 燥枣 栽澡郧砸孕员 蚤灶 则燥燥贼泽袁 泽贼藻皂泽 葬灶凿 造藻葬增藻泽 燥枣 栽援 澡蚤泽责蚤凿葬 憎蚤贼澡 孕耘郧袁
晕葬悦造袁 晕葬匀悦韵猿 燥则 悦凿悦造圆 贼则藻葬贼皂藻灶贼泽 憎葬泽 泽贼怎凿蚤藻凿 怎泽蚤灶早 则藻葬造鄄贼蚤皂藻 孕悦砸援 栽澡藻 则藻泽怎造贼泽 泽澡燥憎藻凿 贼澡葬贼 栽澡郧砸孕员 糟葬灶 遭藻 蚤灶鄄凿怎糟藻凿 遭赠 贼澡藻泽藻 泽贼则藻泽泽藻泽援 耘泽责藻糟蚤葬造造赠袁 贼澡藻 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 燥枣 栽澡郧砸孕员 蚤灶 则燥燥贼泽 燥枣 栽援 澡蚤泽责蚤凿葬 憎葬泽 蚤灶凿怎糟藻凿 怎灶凿藻则 葬造造 泽贼则藻泽泽藻泽
葬贼 远袁 员圆袁 圆源袁 源愿 葬灶凿 苑圆 澡援
运藻赠 憎燥则凿泽院 栽葬皂葬则蚤曾 澡蚤泽责蚤凿葬曰栽澡郧砸孕员曰早藻灶藻 糟造燥灶藻曰则藻葬造 贼蚤皂藻 砸栽鄄孕悦砸
在有机体的生长和发育过程中袁基因表达在转
录尧转录后和翻译水平都受到严格地调控遥 转录调
控是基因表达调控的第一步袁曾被认为是基因表达
的主要调控机制袁但是随着对转录后调控机制越来
越多的了解袁发现转录后调控在基因表达调控中同
样起着重要作用遥 转录后的调控决定着基因表达最
终产物的种类和表达量遥 转录后水平的基因表达调
控主要是通过 砸晕粤 结合蛋白渊砸月孕泽冤直接完成袁或
通过 砸月孕泽控制其它转录因子间接完成的咱员暂 遥
目前已知的 砸晕粤结合蛋白中袁研究最多的一类
是具有 砸砸酝渊砸晕粤 则藻糟燥早灶蚤贼蚤燥灶 皂燥贼蚤枣冤的 砸晕粤 结合蛋
白遥 该类 砸月孕泽 的 晕鄄末端是 砸砸酝泽袁它参与目标
砸晕粤分子的识别和结合曰悦鄄末端包含一些其它的辅
助结构域袁它们可能是在 砸月孕泽蛋白与其它蛋白因子
互作中起作用遥 在 砸月孕泽 中袁晕鄄末端包含 砸砸酝泽袁悦鄄
末端包含富含甘氨酸识别区的蛋白为富含甘氨酸的
砸晕粤 结合蛋白 渊 早造赠糟蚤灶藻鄄则蚤糟澡 砸晕粤鄄遭蚤灶凿蚤灶早 责则燥贼藻蚤灶泽曰
郧砸孕泽冤遥 自 郧燥皂藻扎等咱圆暂首次从玉米中克隆到该蛋白
基因以来袁目前已陆续从多种植物中分离获得了编
码该蛋白的基因袁如拟南芥 渊 粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽 贼澡葬造蚤葬灶葬
渊蕴援 冤 匀藻赠灶造冤咱猿 原源暂 尧烟草渊晕蚤糟燥贼蚤葬灶葬 贼葬遭葬糟怎皂 蕴援 冤咱缘 原 远暂 尧
大麦渊匀燥则凿藻怎皂 增怎造早葬则藻 蕴援 冤 咱苑 原 愿暂 尧油菜渊月则葬泽泽蚤糟葬 灶葬责怎泽
蕴援 冤 咱怨暂 尧多叶南瓜渊耘怎责澡燥则遭蚤葬 藻泽怎造葬 蕴援 冤 咱员园暂 尧白云杉
渊孕蚤糟藻葬 早造葬怎糟澡 渊酝燥藻灶糟澡冤 灾燥泽泽冤 咱员员暂 尧甜樱桃渊悦藻则葬泽怎泽
葬增蚤怎皂 渊 蕴蚤灶灶援 冤 酝燥藻灶糟澡冤 咱员圆暂 和紫花苜蓿 渊酝藻凿蚤糟葬早燥
泽葬贼蚤增葬 蕴援 冤 咱员猿暂等遥 目前对 砸砸酝 砸晕粤 结合蛋白功能
第 圆 期 姜摇 波等院刚毛柽柳富含甘氨酸 砸晕粤结合蛋白 栽澡郧砸孕员 基因克隆与表达分析
的了解还不够深入袁但是已经知道这一类蛋白参与
砸晕粤前体的剪接尧砸晕粤 的细胞定位尧砸晕粤 维持稳定
等多种转录后调控过程袁可以在转录后水平进行基
因的调控遥 郧砸孕基因表达被多种胁迫诱导袁编码蛋
白能增强植物的抗逆性咱员圆暂 遥 毛红柳 渊刚毛柽柳冤
渊栽葬皂葬则蚤曾 澡蚤泽责蚤凿葬 宰蚤造造凿援 冤是柽柳属渊栽葬皂葬则蚤曾 蕴援 冤中
耐盐性很强的一种灌木袁能在含盐量 员园 早窑噪早 原员的
盐碱地上形成天然群落袁并可作为盐碱土指示植物
和风景树咱员源暂 袁是研究基因抗逆性的理想材料之一遥
本研究从刚毛柽柳中克隆了富含甘氨酸 砸晕粤 结合
蛋白基因 栽澡郧砸孕员袁并对其在几种非生物胁迫逆境
渊晕葬悦造尧晕葬匀悦韵猿尧孕耘郧 和 悦凿悦造圆 冤下的表达进行了分
析袁这为以后深入了解 栽澡郧砸孕员 基因的功能及其在
植物抗逆中的作用奠定了基础遥
员摇 材料与方法
供试材料均为大棚中 圆 个月生的盆栽刚毛柽柳
幼苗遥
员援 员摇 郧砸孕基因的克隆
用 园郾 源 皂燥造窑蕴 原员的 晕葬匀悦韵猿溶液浇灌刚毛柽柳
幼苗袁胁迫处理 缘圆 澡后袁取叶部组织提取总 砸晕粤袁应
用试剂盒 悦则藻葬贼燥则栽酝 杂酝粤砸栽栽酝 糟阅晕粤 蕴蚤遭则葬则赠 悦燥灶泽贼则怎糟鄄
贼蚤燥灶 运蚤贼构建 糟阅晕粤文库袁对文库克隆进行随机测序
获得了一个编码 郧砸孕 基因的 耘杂栽 序列咱员缘暂 遥 根据
耘杂栽序列设计引物袁 孕悦砸法克隆获得 郧砸孕基因全长
糟阅晕粤序列渊栽澡郧砸孕员冤遥 对获得的 栽澡郧砸孕员 基因序列
用 韵砸云 枣燥怎灶凿藻则 渊 澡贼贼责院 辕 辕 憎憎憎援 灶糟遭蚤援 灶造皂援 灶蚤澡援 早燥增 辕
早燥则枣援 澡贼皂造冤程序确定其开放读码框遥 用 孕则燥贼孕葬则葬皂
渊澡贼贼责院 辕 辕 葬怎援 藻曾责葬泽赠援 燥则早 辕 贼燥燥造泽 辕 责则燥贼责葬则葬皂援 澡贼皂造冤软件计
算推导的蛋白质分子量及理论等电点曰 对该基因推
导的氨基酸序列用 月造葬泽贼孕程序查找蛋白保守区遥 利
用 杂蚤早灶造孕 猿援 园 杂藻则增藻则 渊 澡贼贼责院 辕 辕 憎憎憎援 糟遭泽援 凿贼怎援 凿噪 辕 泽藻则增鄄
蚤糟藻泽 辕 杂蚤早灶葬造孕冤检测其有无信号肽序列遥 利用 月造葬泽贼程
序 渊澡贼贼责院 辕 辕 憎憎憎援 灶糟遭蚤援 灶造皂援 灶蚤澡援 早燥增 辕 月蕴粤杂栽 辕 冤进行
序列同源性搜索袁选择与其相似程度高的其他 苑 种
不同植物的 郧砸孕蛋白氨基酸序列袁用多序列联配程
序 悦造怎泽贼葬造曾渊员援 愿猿冤进行多序列比对遥 应用该软件构
建了基于 郧砸孕 基因编码的氨基酸序列的系统进化
树遥 用 孕则藻凿蚤糟贼责则燥贼藻蚤灶 渊 澡贼贼责院 辕 辕 憎憎憎援 责则藻凿蚤糟贼责则燥贼藻蚤灶援
燥则早冤预测二级结构遥 以序列相似性为基础袁采用同
源建模的方法预测三级结构袁采用瑞典生物信息研
究所 渊 杂憎蚤泽泽 陨灶泽贼蚤贼怎贼藻 燥枣 月蚤燥蚤灶枣燥则皂葬贼蚤糟泽冤 的 耘曾孕粤杂再
责则燥贼藻燥皂蚤糟泽 泽藻则增藻则服务器上的 郧耘晕韵猿阅 软件在线预
测渊澡贼贼责院 辕 辕 早藻灶燥猿凿鄄责遭蚤造援 蚤遭糟责援 枣则 辕 糟早蚤鄄遭蚤灶 辕 早藻灶燥猿凿赃葬怎贼燥鄄
皂葬贼援 责造钥 责葬早藻 越 辕 郧耘晕韵猿阅 辕 早藻灶燥猿凿赃澡燥皂藻援 澡贼皂造冤曰同
源建模的模板全部来源于蛋白质三维结构数据库
孕阅月渊 澡贼贼责院 辕 辕 憎憎憎援 则糟泽遭援 燥则早 辕 责凿遭 辕 冤的蛋白结构遥 使
用 杂孕阅月灾软件浏览预测的三级结构遥
员援 圆摇 材料处理及 糟阅晕粤的合成
用 园援 源 皂燥造窑蕴 原员 晕葬悦造尧园郾 猿 皂燥造窑蕴 原员 晕葬匀悦韵猿尧
圆园豫 渊宰 辕 灾冤 孕耘郧远园园园尧员缘园 滋皂燥造窑蕴 原员 悦凿悦造圆 胁迫处
理刚毛柽柳袁每种胁迫分别处理 远尧员圆尧圆源尧源愿尧苑圆 澡遥
采用 悦栽粤月 法咱员远暂分别提取对照渊非胁迫处理冤和胁
迫处理的各个时间段的刚毛柽柳根尧茎尧叶三个组织
的总 砸晕粤袁经 阅晕葬泽藻 陨 渊孕则燥皂藻早葬冤消化除去 阅晕粤遥 以
园援 缘 滋早 总 砸晕粤 为起始材料袁采用 孕则蚤皂藻杂糟则蚤责贼栽酝 砸栽
则藻葬早藻灶贼 运蚤贼 渊 栽葬运葬砸葬冤袁按照试剂盒说明进行 糟阅晕粤
合成遥 将合成的第一链的 糟阅晕粤 稀释 员园 倍袁用作定
量 砸栽鄄孕悦砸模板遥
员援 猿摇 实时定量 孕悦砸分析
根据序列特异性分析袁设计实时定量 砸栽鄄孕悦砸
引物袁引物序列见表 员遥
表 员摇 实时定量 砸栽鄄孕悦砸基因及内参引物序列
基因 基因序列号 正向引物渊缘爷 原 猿爷冤 反向引物渊缘爷 原 猿爷冤
栽澡郧砸孕员 郧匝圆园圆圆园圆 栽栽悦栽悦栽栽悦栽粤悦悦悦栽粤栽栽悦栽悦 悦栽栽栽栽郧悦粤栽悦粤郧栽悦粤悦栽栽悦粤悦悦
粤糟贼蚤灶 云允远员愿缘员苑 粤粤粤悦粤粤栽郧郧悦栽郧粤栽郧悦栽郧 粤悦粤粤栽粤悦悦郧栽郧悦栽悦粤粤栽粤郧郧
琢鄄贼怎遭怎造蚤灶 云允远员愿缘员愿 悦粤悦悦悦粤悦悦郧栽栽郧栽栽悦悦粤郧 粤悦悦郧栽悦郧栽悦粤栽悦栽栽悦粤悦悦
茁鄄贼怎遭怎造蚤灶 云允远员愿缘员怨 郧郧粤粤郧悦悦粤栽粤郧粤粤粤郧粤悦悦 悦粤粤悦粤粤粤栽郧栽郧郧郧粤栽郧悦栽
摇 摇 实时定量 砸栽鄄孕悦砸 反应试剂盒为 杂再月砸 郧则藻藻灶
砸藻葬造贼蚤皂藻 孕悦砸 酝葬泽贼藻则 皂蚤曾 渊 栽燥赠燥遭燥 冤遥 用 琢鄄贼怎遭怎造蚤灶
渊云允远员愿缘员愿冤袁粤糟贼蚤灶渊云允远员愿缘员苑冤和 茁鄄贼怎遭怎造蚤灶渊云允远员愿缘员怨冤猿
个基因作为内参基因遥 反应体系为院员园 滋蕴 圆 伊 杂再月砸
责则藻皂蚤曾 耘曾栽葬择袁孕员尧孕圆渊员园 滋皂燥造窑蕴 原员冤各 员 滋蕴袁圆 滋蕴 稀
释的各处理时期的 糟阅晕粤 模板袁加去离子水补足 圆园
滋蕴遥 定量 孕悦砸反应条件为院怨源 益 预变性 猿园 泽曰怨源 益
变性员圆 泽袁缘愿 益退火 源缘 泽袁苑圆 益延伸源缘 泽曰苑愿郾 缘 益读板
员 泽袁共 源缘个循环遥 采用 圆 原吟吟悦贼法进行基因的相对定
量分析咱员苑暂 袁用 郧则葬责澡责葬凿 陨灶泽贼葬贼 猿援 园 软件进行基因表达
苑缘圆
林摇 业摇 科摇 学摇 研摇 究 第 圆源 卷
数据的显著性分析遥
圆摇 结果与分析
圆援 员摇 栽澡郧砸孕员 基因全长 糟阅晕粤 及其推导的氨基酸
序列
通过对构建的柽柳叶部 糟阅晕粤 文库的 耘杂栽 分
析袁获得了 栽澡郧砸孕员 基因的全长 糟阅晕粤 序列袁该基因
糟阅晕粤长 愿园园 遭责遥 经 晕悦月陨的 韵砸云 枣燥怎灶凿藻则确定该基
因的开放阅读框渊韵砸云冤长 源猿圆 遭责袁编码含 员源猿 个氨
基酸的蛋白质袁缘爷非翻译区渊哉栽砸冤苑源 遭责袁猿爷非翻译
区渊哉栽砸冤圆怨源 遭责渊图 员冤遥 该 栽澡郧砸孕员 基因的 糟阅晕粤
序列已经提交 郧藻灶月葬灶噪 注册袁登录号为 郧匝圆园圆圆园圆遥
孕则燥贼孕葬则葬皂预测编码蛋白的分子量为 员源郾 怨缘 噪阅葬袁理
论等电点渊责陨冤为 缘郾 猿远袁此蛋白为一酸性蛋白遥 该蛋
白中相对含量最多的氨基酸是甘氨酸 郧造赠渊圆缘 个袁占
总氨基酸数 员苑郾 缘豫 冤袁其次是丝氨酸 杂藻则渊圆员 个袁占总
氨基酸数 员源郾 苑豫 冤遥 信号肽预测结果表明院该基因
不含信号肽序列遥
猿 郧郧悦 栽栽悦 悦粤粤 粤粤栽 粤粤栽 悦栽栽 悦栽悦 栽栽悦 栽粤悦 悦悦栽 粤栽栽 悦栽悦 郧悦栽 悦粤郧 郧悦栽 源苑
源愿 粤悦栽 粤郧粤 粤郧栽 粤粤郧 粤栽栽 栽粤粤 悦粤栽 粤悦粤 栽粤粤 粤栽郧 郧悦粤 栽栽悦 栽郧悦 粤粤栽 粤郧粤 怨圆
酝 粤 云 悦 晕 砸 缘
怨猿 粤栽栽 郧郧悦 粤郧悦 悦栽栽 粤栽栽 粤郧郧 悦粤郧 粤悦栽 郧栽栽 栽悦悦 悦粤郧 粤粤悦 粤郧栽 郧悦郧 悦悦栽 员猿苑
远 陨 郧 杂 蕴 陨 砸 匝 栽 灾 杂 匝 晕 杂 粤 孕 圆园
员猿愿 粤栽粤 郧粤栽 栽悦栽 粤栽郧 悦栽栽 粤粤栽 栽悦悦 粤栽栽 悦郧郧 栽郧悦 粤栽郧 栽悦栽 栽悦栽 栽悦栽 粤郧粤 员愿圆
圆员 陨 阅 杂 酝 蕴 晕 杂 陨 砸 悦 酝 杂 杂 杂 砸 猿缘
员愿猿 悦栽悦 栽栽栽 郧栽栽 郧郧粤 郧郧栽 悦栽栽 栽悦栽 栽郧郧 郧郧粤 粤悦悦 郧粤悦 郧粤悦 悦粤郧 栽悦栽 栽栽郧 圆圆苑
猿远 蕴 云 灾 郧 郧 蕴 杂 宰 郧 栽 阅 阅 匝 杂 蕴 缘园
圆圆愿 粤粤郧 郧粤悦 郧悦悦 栽栽栽 栽悦栽 粤郧悦 栽栽栽 郧郧栽 郧粤粤 郧栽郧 粤悦栽 郧粤栽 郧悦粤 粤粤粤 郧栽郧 圆苑圆
缘员 运 阅 粤 云 杂 杂 云 郧 耘 灾 栽 阅 粤 运 灾 远缘
圆苑猿 粤栽栽 粤悦栽 郧粤悦 粤郧粤 郧粤粤 粤悦栽 郧郧粤 粤郧粤 栽悦悦 悦郧栽 郧郧粤 栽栽栽 郧郧粤 栽栽栽 郧栽栽 猿员苑
远远 陨 栽 阅 砸 耘 栽 郧 砸 杂 砸 郧 云 郧 云 灾 愿园
猿员愿 粤粤悦 栽栽栽 郧栽栽 郧粤悦 粤粤栽 郧粤郧 郧悦栽 郧悦栽 郧郧栽 栽悦栽 郧悦粤 栽栽郧 栽悦粤 栽悦悦 粤栽郧 猿远圆
愿员 晕 云 灾 阅 晕 耘 粤 粤 郧 杂 粤 蕴 杂 杂 酝 怨缘
猿远猿 郧粤栽 郧郧栽 郧栽郧 郧粤郧 栽栽郧 粤粤栽 郧郧郧 悦郧粤 粤郧悦 粤栽栽 粤郧郧 郧栽郧 粤郧栽 栽栽栽 郧悦栽 源园苑
怨远 阅 郧 灾 耘 蕴 晕 郧 砸 杂 陨 砸 灾 杂 云 粤 员员园
源园愿 悦粤郧 郧粤郧 粤郧粤 栽悦悦 粤郧悦 郧郧栽 悦悦栽 悦郧粤 悦悦栽 郧郧悦 郧郧栽 郧郧栽 郧郧郧 栽栽悦 悦郧栽 源缘圆
员员员 匝 耘 砸 杂 杂 郧 孕 砸 孕 郧 郧 郧 郧 云 砸 员圆缘
源缘猿 郧郧粤 粤粤栽 郧粤栽 郧郧郧 郧郧栽 栽栽悦 郧郧栽 郧郧栽 悦悦粤 栽悦悦 郧郧栽 郧郧粤 栽粤栽 郧郧栽 郧粤栽 源怨苑
员圆远 郧 晕 阅 郧 郧 云 郧 郧 孕 杂 郧 郧 再 郧 阅 员源园
源怨愿 郧郧粤 栽粤栽 栽粤郧 郧栽郧 悦粤郧 悦粤栽 栽悦悦 栽郧悦 栽郧粤 粤栽悦 悦粤悦 栽粤郧 粤栽栽 栽郧郧 粤栽郧 缘源圆
员源员 郧 再 鄢
缘源猿 悦粤郧 郧粤粤 粤悦栽 郧郧栽 栽悦栽 栽郧郧 粤栽粤 粤郧郧 粤郧粤 郧粤栽 栽郧郧 栽粤悦 栽粤郧 悦栽栽 栽栽粤 缘愿苑
缘愿愿 栽栽栽 粤栽悦 悦粤悦 栽栽栽 粤栽郧 栽栽栽 粤郧郧 郧栽栽 栽郧栽 栽栽栽 郧粤栽 郧悦粤 栽粤粤 栽郧栽 栽栽郧 远猿圆
远猿猿 郧郧郧 粤栽栽 郧粤粤 郧栽悦 栽郧粤 栽悦栽 粤栽栽 郧郧郧 栽悦栽 悦栽栽 粤栽悦 栽郧悦 郧悦栽 悦栽悦 栽悦悦 远苑苑
远苑愿 栽粤悦 郧栽郧 郧栽栽 栽悦悦 栽郧悦 栽栽栽 栽栽粤 郧郧栽 悦粤粤 悦粤郧 栽郧粤 粤悦栽 粤栽悦 悦郧悦 悦悦粤 苑圆圆
苑圆猿 栽栽栽 悦栽栽 栽粤栽 郧栽栽 栽粤郧 粤栽栽 悦栽粤 栽粤粤 郧栽悦 粤悦悦 郧郧悦 粤郧悦 栽郧粤 栽粤栽 栽悦栽 苑远苑
苑远愿 郧粤栽 粤粤栽 郧栽粤 郧栽郧 悦粤粤 粤悦粤 粤粤郧 粤郧粤 粤粤悦 郧粤郧 悦悦栽 愿园园
图 员摇 刚毛柽柳 栽澡郧砸孕员 基因的 糟阅晕粤及由此推导的氨基酸序列渊鄢表示终止密码子冤
圆援 圆摇 栽澡郧砸孕员 基因的氨基酸序列分析与系统进化
树分析
利用 月造葬泽贼孕 对 栽澡郧砸孕员 基因的蛋白保守区进行
预测遥 与 栽澡郧砸孕员 匹配的保守区是 砸砸酝鄄员袁与其对
应的蛋白质家族为 责枣葬皂园园园苑远袁该家族的 悦韵郧 分类
为 悦韵郧园苑圆源袁为含有 砸砸酝 渊砸晕粤 则藻糟燥早灶蚤贼蚤燥灶 皂燥贼蚤枣袁
砸晕粤识别基序冤的 砸晕粤结合蛋白遥
对 栽澡郧砸孕员 基因进行 月造葬泽贼曾 分析袁发现该基因
与 郧藻灶月葬灶噪中其他物种的富含甘氨酸 砸晕粤 结合蛋
白序列相似性较高遥 选取与柽柳富含甘氨酸 砸晕粤
结合蛋白相似程度高的其它 苑 种植物的富含甘氨酸
砸晕粤结合蛋白的氨基酸序列袁进行 悦造怎泽贼葬造 载 分析遥
这 苑 种植物分别为马铃薯渊杂燥造葬灶怎皂 贼怎遭藻则燥泽怎皂 蕴援 冤尧
美花烟草 渊晕蚤糟燥贼蚤葬灶葬 泽赠造增藻泽贼则蚤泽 杂责藻早援 冤尧豌豆 渊孕蚤泽怎皂
泽葬贼蚤增怎皂 蕴援 冤尧 截 形 苜 蓿 渊 酝藻凿蚤糟葬早燥 贼则怎灶糟葬贼怎造葬
郧葬藻则贼灶援 冤尧拟南芥尧水稻渊韵则赠扎葬 泽葬贼蚤增葬 蕴援 冤和小立碗藓
渊孕澡赠泽糟燥皂蚤贼则藻造造葬 责葬贼藻灶泽 杂怎遭泽责援 冤遥
悦造怎泽贼葬造载分析结果如图 圆遥 从多序列比对结果
可以看出院这 愿 种植物富含甘氨酸 砸晕粤 结合蛋白的
氨基酸序列都包含一个 砸砸酝结构域渊在刚毛柽柳中
是 猿苑 员园愿 位冤渊用下划线标示冤袁在 悦 段有一段富
含甘氨酸的基序渊在刚毛柽柳中是 员圆员 员源猿 位冤遥
愿缘圆
第 圆 期 姜摇 波等院刚毛柽柳富含甘氨酸 砸晕粤结合蛋白 栽澡郧砸孕员 基因克隆与表达分析
在 砸砸酝结构域中有 圆 个非常保守的基序院愿 个保守
氨基酸的 砸晕孕鄄员渊耘怎噪葬则赠燥贼蚤糟 责怎贼葬贼蚤增藻 砸晕粤鄄遭蚤灶凿蚤灶早 则藻鄄
早蚤燥灶 砸晕孕鄄员 泽蚤早灶葬贼怎则藻冤 渊刚毛柽柳的 苑远 愿猿 位的氨
基酸残基 砸郧云郧云灾晕云冤和 远 个保守氨基酸的 砸晕孕鄄圆
渊耘怎噪葬则赠燥贼蚤糟 责怎贼葬贼蚤增藻 砸晕粤鄄遭蚤灶凿蚤灶早 则藻早蚤燥灶 砸晕孕鄄圆 泽蚤早灶葬鄄
贼怎则藻冤渊刚毛柽柳的 猿远 源圆 位的氨基酸残基 蕴云灾郧鄄
郧蕴冤遥
从构建的 愿 种植物 郧砸孕基因的系统进化树渊图
猿冤可看出院柽柳 郧砸孕 基因与豌豆尧截形苜蓿和拟南
芥亲缘关系比较近曰与水稻尧小立碗藓尧马铃薯和美
花烟草的亲缘关系比较远遥
图 圆摇 愿 种植物的 郧砸孕蛋白多序列比对渊黑色表示氨基酸的统一性和相似性袁灰色表示保守残基遥冤
郧匝圆园圆圆园圆院渊 栽援 澡蚤泽责蚤凿葬 蕴援 冤曰粤月粤源园源缘猿院 渊 杂援 贼怎遭藻则燥泽怎皂 蕴援 冤曰 月粤粤圆圆园愿猿院 渊晕援 泽赠造增藻泽贼则蚤泽 杂责藻早援 冤曰粤粤月苑员源员苑院 渊 孕援 泽葬贼蚤增怎皂 蕴援 冤曰
粤月耘愿怨苑源员院渊酝援 贼则怎灶糟葬贼怎造葬 郧葬藻则贼灶援 冤曰晕孕赃愿源怨猿苑苑院渊粤援 贼澡葬造蚤葬灶葬 渊蕴援 冤 匀藻赠灶造冤曰悦粤粤园缘苑圆怨院渊韵援 泽葬贼蚤增葬 蕴援 冤曰月粤悦园园苑愿苑院渊孕援 责葬贼藻灶泽
杂怎遭泽责援 冤
图 猿摇 基于 愿 种植物 郧砸孕基因编码的氨基酸序列构建的系统进化树
圆援 猿摇 栽澡郧砸孕员 蛋白的高级结构预测
用 孕则藻凿蚤糟贼责则燥贼藻蚤灶 中的 孕匀阅杂藻糟 分析软件对 栽澡鄄
郧砸孕员 蛋白的二级结构进行预测袁利用同源建模的方
法对其三级结构进行预测渊图 源冤袁同源建模选用的
模板分别为院责凿遭圆凿早燥粤尧责凿遭员责燥远粤 和 责凿遭员怎员皂粤遥 结
果表明院栽澡郧砸孕员 蛋白的二级结构模式为 茁琢茁茁琢茁袁
怨缘圆
林摇 业摇 科摇 学摇 研摇 究 第 圆源 卷
该二级结构形成 源 条反向平行 茁 片层结构袁圆 个 琢
螺旋与 茁片层结构的方向相垂直遥 圆 个非常保守的
基序 砸晕孕员 和 砸晕孕圆 位于 茁猿 和 茁员 片层结构的中间
位置遥
员尧圆尧猿 分别为三维图像的不同侧面结果
图 源摇 栽澡郧砸孕员 蛋白三级结构预测
相对表达水平 越处理后转录水平 辕 对照转录水平 渊园 澡冤遥 图中值为平均值 依标准误袁标准误来源于定量 砸栽鄄
孕悦砸的多个重复遥
图 缘摇 源 种逆境胁迫下柽柳中 栽澡郧砸孕员 基因的表达模式
圆援 源摇 栽澡郧砸孕员 基因的表达特征分析
为了研究柽柳 栽澡郧砸孕员 基因与逆境胁迫的应答
关系袁采用实时荧光定量 砸栽鄄孕悦砸技术检测了 晕葬悦造尧
晕葬匀悦韵猿尧孕耘郧和 悦凿悦造圆 等 源 种逆境胁迫下柽柳根尧
茎尧叶中该基因的表达情况遥 结果表明渊图 缘冤院晕葬悦造
胁迫下袁根中 栽澡郧砸孕员 基因在所有时间点的表达都
园远圆
第 圆 期 姜摇 波等院刚毛柽柳富含甘氨酸 砸晕粤结合蛋白 栽澡郧砸孕员 基因克隆与表达分析
显著高于对照渊孕 约 园郾 园员冤袁其中袁胁迫处理 远 澡 后表
达量最高袁是对照渊员冤的 员猿源郾 源 倍曰胁迫 源愿 澡 表达量
最低袁仍为对照的 猿郾 苑 倍遥 在叶中袁栽澡郧砸孕员 基因在
所有胁迫时间点的表达也显著高于对照袁但与根相
比袁表达量相对较低曰在茎中袁该基因除胁迫 员圆 澡 表
达量与对照差异不显著渊孕 跃 园郾 园缘冤外袁其余时间点
的表达量也均高于对照遥 说明 晕葬悦造 胁迫可以诱导
栽澡郧砸孕员 基因在根尧茎尧叶中的表达袁尤其是在根中袁
受强烈诱导遥 晕葬匀悦韵猿 胁迫后袁栽澡郧砸孕员 基因在根中
明显受诱导表达曰茎中袁表达量在胁迫初期渊远 澡冤受
明显抑制渊孕 约 园郾 园员冤袁随后增加袁圆源 澡 达最大渊缘援 远
倍冤曰叶中袁该基因的表达除 圆源 澡与对照差异不明显
外袁其余时间点受明显诱导遥 孕耘郧 胁迫前期袁栽澡鄄
郧砸孕员 基因在根中的表达受明显诱导袁至 苑圆 澡 后袁表
达量又回复到胁迫处理前曰在茎中袁该基因的表达先
受抑制袁随后表达量增加袁苑圆 澡 后达最高水平曰在叶
中袁胁迫前期渊圆源 澡 内冤该基因的表达变化不明显袁
随后受诱导表达遥 悦凿悦造圆 胁迫后袁该基因在根中的表
达受胁迫诱导曰而在茎中袁该基因先被轻微诱导表
达袁随后明显被抑制曰在叶中袁该基因的表达受明显
抑制袁而且表达量随胁迫时间的延长而减少遥 这些
结果表明院栽澡郧砸孕员 基因能对 晕葬悦造尧晕葬匀悦韵猿尧孕耘郧 和
悦凿悦造圆 胁迫做出应答袁尤其在根中袁全部为诱导表达遥
猿摇 讨论
植物中存在两大类 郧砸孕蛋白袁一类在 晕端具有
典型的真核生物信号肽序列袁信号肽序列使合成的
蛋白质导向内质网并最终经细胞分泌系统定位于质
膜外的细胞壁中曰另一类在 晕端含有 愿园 员园园 个氨
基酸组成的 砸晕粤结合区的共有序列袁包括 砸晕孕鄄员 和
砸晕孕鄄圆袁它们定位于细胞核中袁可与新生 皂砸晕粤 前体
分子结合袁参与形成异源核糖核蛋白复合体咱员愿暂 遥 根
据序列分析可以看出袁本研究从刚毛柽柳中克隆的
富含甘氨酸 砸晕粤 结合蛋白基因渊栽澡郧砸孕员冤袁其不含
信号肽序列袁而具有 砸砸酝 结构域渊有 圆 个非常保守
的基序院愿 个保守氨基酸的 砸晕孕鄄员 和 远 个保守氨基
酸的 砸晕孕鄄圆 冤 和富含甘氨酸结构域袁 砸砸酝 的
茁琢茁茁琢茁的二级结构形成 源 条反向平行 茁 片层结
构袁圆 个 琢螺旋与 茁片层结构的方向相垂直渊图 源冤遥
近年来研究发现袁植物中 郧砸孕泽基因的表达可受
盐尧旱尧冷尧机械损伤尧植物激素尧病菌侵染尧紫外辐射
和重金属等多种因素的诱导咱员怨 原 圆园暂 袁表明 郧砸孕泽 基因
可能参与了一些重要的抗逆生理过程袁其表达可能
增强了植物抵抗这些胁迫的能力遥 如院运憎葬噪 等咱员暂利
用实时荧光 砸栽鄄孕悦砸 研究了拟南芥中分离的 愿 个
郧砸孕基因在胁迫后的表达情况袁结果表明 郧砸孕员 基
因受干旱和盐胁迫的诱导遥 运蚤皂 等咱圆员暂证实拟南芥
中 郧砸孕圆 能加速冷胁迫和盐胁迫下种子萌发和植株
生长袁增加拟南芥植株的冷冻忍受能力遥 运蚤皂 等咱圆圆暂
进一步研究证实袁在另一个 郧砸孕 蛋白 郧砸孕苑 能增强
转基因拟南芥的抗旱尧高盐和冷适应能力遥 拟南芥
中的另一个含有 悦悦匀悦 原锌指结构域的 郧砸孕 蛋白
砸在 原 员葬袁也能增强拟南芥植株抗冷 渊冻冤 忍受
能力咱圆猿暂 遥
除模式植物拟南芥外袁在其他植物中也进行了
一些研究袁如 粤灶藻藻贼葬 等咱圆源暂从高粱渊 杂燥则早澡怎皂 遭蚤糟燥造燥则
渊蕴援 冤 酝燥藻灶糟澡冤中分离了一个 郧砸孕 基因袁该基因在
晕葬悦造渊缘园园 皂皂燥造窑蕴 原员冤和 粤月粤渊员园 皂皂燥造窑蕴 原员冤诱导
下上调 源尧苑 倍袁说明它们在植物抗盐及其他逆境过
程中起作用遥 杂贼藻责澡藻灶 等咱员圆暂从野樱桃渊孕则怎灶怎泽 葬增蚤怎皂
蕴援 冤非休眠胚轴 糟阅晕粤 文库中分离到一个 郧砸孕 基
因袁该基因在低温打破休眠处理过程的胚轴中受冷
胁迫诱导表达袁随着低温处理时间延长袁表达量下
降袁当冷胁迫间断恢复到室温渊圆园 益冤后袁该基因的
表达减少到对照水平遥 晕燥皂葬贼葬 等咱圆缘暂从小立碗藓中
分离了 猿 个 郧砸孕 蛋白基因袁发现这 猿 个 郧砸孕泽 的转
录和蛋白表达量在冷处理后都表现为上调表达遥
杂澡蚤灶燥扎怎噪葬 等咱圆远暂从多年生黑麦草渊 责藻则藻灶灶蚤葬造 则赠藻早则葬泽泽
蕴援 冤冷胁迫 糟阅晕粤 文库中分离到一个 郧砸孕 基因袁该
基因在黑麦草的根尧花冠和叶等组织中可以被冷胁
迫尧粤月粤和干旱所诱导遥
本研究的实时定量 砸栽鄄孕悦砸 结果也证明袁柽柳
栽澡郧砸孕员 基因对 晕葬悦造尧晕葬匀悦韵猿尧孕耘郧和 悦凿悦造圆 胁迫具
有应答反应袁说明该基因不仅具有以往研究认识的
的抗旱尧耐盐等功能袁还具有良好的抗镉尧抗盐碱胁
迫渊悦凿悦造圆尧晕葬匀悦韵猿冤遥 在 晕葬悦造胁迫中袁栽澡郧砸孕员 基因
在根尧茎尧叶中的表达受明显诱导袁尤其是在根中袁
晕葬悦造胁迫 远 澡 后的 栽澡郧砸孕员 基因表达量最高袁是未
胁迫处理的 员猿源郾 源 倍渊图 缘冤遥 栽澡郧砸孕员 基因的强烈
诱导表达说明其参与柽柳的盐胁迫应答袁其大量表
达可能提高了柽柳的耐盐能力遥 晕葬匀悦韵猿 胁迫后袁
栽澡郧砸孕员 基因总体也表现为明显受诱导表达袁但在各
组织中的表达趋势与 晕葬悦造 胁迫相比有很大差异遥
这可能是因为 晕葬匀悦韵猿 胁迫实际上是一种盐碱胁
迫曰同时具有盐和碱双重胁迫遥 二者间的差异正反
映了盐和盐碱胁迫在某方面的差异遥
员远圆
林摇 业摇 科摇 学摇 研摇 究 第 圆源 卷
参考文献院
咱员暂 运憎葬噪 运 允袁 运蚤皂 再 韵袁 运葬灶早 匀援 悦澡葬则葬糟贼藻则蚤扎葬贼蚤燥灶 燥枣 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 粤则葬遭蚤鄄
凿燥责泽蚤泽 责造葬灶贼泽 燥增藻则藻曾责则藻泽泽蚤灶早 郧砸鄄砸月孕源 怎灶凿藻则 澡蚤早澡 泽葬造蚤灶蚤贼赠袁 凿藻澡赠凿则葬鄄
贼蚤燥灶袁 燥则 糟燥造凿 泽贼则藻泽泽 咱允暂 援 允 耘曾责 月燥贼袁 圆园园缘袁 缘远渊源圆员冤院 猿园园苑 原 猿园员远
咱圆暂 郧佼皂藻扎 允袁 杂佗灶糟澡藻扎鄄酝葬则贼侏灶藻扎 阅袁 杂贼蚤藻枣藻造 灾袁 藻贼 葬造援 粤 早藻灶藻 蚤灶凿怎糟藻凿 遭赠
贼澡藻 责造葬灶贼 澡燥则皂燥灶藻 葬遭泽糟蚤泽蚤糟 葬糟蚤凿 蚤灶 则藻泽责燥灶泽藻 贼燥 憎葬贼藻则 泽贼则藻泽泽 藻灶糟燥凿藻泽 葬
早造赠糟蚤灶藻鄄则蚤糟澡 责则燥贼藻蚤灶 咱允暂 援 晕葬贼怎则藻袁 员怨愿愿袁 猿猿源渊远员苑怨冤院 圆远圆 原 圆远源
咱猿暂 灾葬灶 晕燥糟噪藻则 杂袁 灾蚤藻则泽贼则葬 砸 阅援 栽憎燥 糟阅晕粤泽 枣则燥皂 粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽 贼澡葬造蚤葬灶葬
藻灶糟燥凿藻 责怎贼葬贼蚤增藻 砸晕粤 遭蚤灶凿蚤灶早 责则燥贼藻蚤灶泽 糟燥灶贼葬蚤灶蚤灶早 早造赠糟蚤灶藻鄄则蚤糟澡 凿燥鄄
皂葬蚤灶泽咱允暂 援 孕造葬灶贼 酝燥造藻糟怎造葬则 月蚤燥造燥早赠袁 员怨怨猿袁 圆员渊源冤院 远怨缘 原 远怨怨
咱源暂 悦葬则责藻灶贼藻则 悦 阅袁 运则藻责泽 允 粤袁 杂蚤皂燥灶 粤 耘援 郧藻灶藻泽 藻灶糟燥凿蚤灶早 早造赠糟蚤灶藻鄄则蚤糟澡
粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽 贼澡葬造蚤葬灶葬 责则燥贼藻蚤灶泽 憎蚤贼澡 砸晕粤鄄遭蚤灶凿蚤灶早 皂燥贼蚤枣泽 葬则藻 蚤灶枣造怎藻灶糟藻凿
遭赠 糟燥造凿 贼则藻葬贼皂藻灶贼 葬灶凿 葬灶 藻灶凿燥早藻灶燥怎泽 糟蚤则糟葬凿蚤葬灶 则澡赠贼澡皂咱 允暂 援 孕造葬灶贼
孕澡赠泽蚤燥造燥早赠袁 员怨怨源袁 员园源渊猿冤院 员园员缘 原 员园圆缘
咱缘暂 匀蚤则燥泽藻 栽袁 杂怎早蚤贼葬 酝袁 杂怎早蚤怎则葬 酝援 糟阅晕粤 泽贼则怎糟贼怎则藻袁 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 葬灶凿
灶怎糟造藻蚤糟鄄葬糟蚤凿 遭蚤灶凿蚤灶早 责则燥责藻则贼蚤藻泽 燥枣 贼澡则藻藻 砸晕粤鄄遭蚤灶凿蚤灶早 责则燥贼藻蚤灶泽 蚤灶 贼燥鄄
遭葬糟糟燥院 燥糟糟怎则则藻灶糟藻 燥枣 贼蚤泽泽怎藻 葬造贼藻则灶葬贼蚤增藻 泽责造蚤糟蚤灶早咱 允暂 援 晕怎糟造藻蚤糟 粤糟蚤凿泽
砸藻泽藻葬则糟澡袁 员怨怨猿袁 圆员渊员苑冤院 猿怨愿员 原 猿怨愿苑
咱远暂 酝燥则蚤早怎糟澡蚤 运袁 杂怎早蚤贼葬 酝袁 杂怎早蚤怎则葬 酝援 杂贼则怎糟贼怎则藻 葬灶凿 泽怎遭糟藻造造怎造葬则 造燥糟葬造蚤鄄
扎葬贼蚤燥灶 燥枣 葬 泽皂葬造造 砸晕粤鄄遭蚤灶凿蚤灶早 责则燥贼藻蚤灶 枣则燥皂 贼葬遭葬糟糟燥咱 允暂 援 栽澡藻 孕造葬灶贼
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咱苑暂 阅怎灶灶 酝 粤袁 月则燥憎灶 运袁 蕴蚤早澡贼燥憎造藻则泽 砸袁 藻贼 葬造援 粤 造燥憎贼藻皂责藻则葬贼怎则藻鄄则藻鄄
泽责燥灶泽蚤增藻 早藻灶藻 枣则燥皂 遭葬则造藻赠 藻灶糟燥凿藻泽 葬 责则燥贼藻蚤灶 憎蚤贼澡 泽蚤灶早造藻鄄泽贼则葬灶凿藻凿 灶怎鄄
糟造藻蚤糟 葬糟蚤凿鄄遭蚤灶凿蚤灶早 葬糟贼蚤增蚤贼赠 憎澡蚤糟澡 蚤泽 责澡燥泽责澡燥则赠造葬贼藻凿蚤灶 增蚤贼则燥咱允暂 援 孕造葬灶贼
酝燥造藻糟怎造葬则 月蚤燥造燥早赠袁 员怨怨远袁 猿园渊缘冤院 怨源苑 原 怨缘怨
咱愿暂 酝燥造蚤灶葬 粤袁 酝藻灶葬 酝袁 悦葬则遭燥灶藻则燥 孕袁 藻贼 葬造援 阅蚤枣枣藻则藻灶贼蚤葬造 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 燥枣
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蚤灶 遭葬则造藻赠咱允暂 援 孕造葬灶贼 酝燥造藻糟怎造葬则 月蚤燥造燥早赠袁 员怨怨苑袁 猿猿渊缘冤院 愿园猿 原 愿员园
咱怨暂 月藻则早藻则燥灶 阅袁 月藻葬怎泽藻蚤早造藻 阅袁 月藻造造藻皂葬则藻 郧援 杂藻择怎藻灶糟藻 葬灶凿 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶
燥枣 葬 早藻灶藻 藻灶糟燥凿蚤灶早 葬 责则燥贼藻蚤灶 憎蚤贼澡 砸晕粤鄄遭蚤灶凿蚤灶早 葬灶凿 早造赠糟蚤灶藻鄄则蚤糟澡 凿燥鄄
皂葬蚤灶泽 蚤灶 月则葬泽泽蚤糟葬 灶葬责怎泽咱 允暂 援 月蚤燥糟澡蚤皂蚤糟葬 藻贼 月蚤燥责澡赠泽糟葬 粤糟贼葬袁 员怨怨猿袁
员圆员远渊员冤院员圆猿 原 员圆缘
咱员园暂 匀燥则增葬贼澡 阅 孕袁 韵造泽燥灶 孕 粤援 悦造燥灶蚤灶早 葬灶凿 糟澡葬则葬糟贼藻则蚤扎葬贼蚤燥灶 燥枣 糟燥造凿则藻早怎鄄
造葬贼藻凿 早造赠糟蚤灶藻鄄则蚤糟澡 砸晕粤鄄遭蚤灶凿蚤灶早 责则燥贼藻蚤灶 早藻灶藻泽 枣则燥皂 造藻葬枣赠 泽责怎则早藻
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糟造燥灶藻泽咱允暂 援 孕造葬灶贼 酝燥造藻糟怎造葬则 月蚤燥造燥早赠袁 员怨怨愿袁 猿愿渊源冤院缘猿员 原 缘猿愿
咱员员暂 砸蚤糟澡葬则凿 杂袁 阅则藻增藻贼 悦袁 允燥怎葬灶蚤灶 蕴袁 藻贼 葬造援 陨泽燥造葬贼蚤燥灶 葬灶凿 糟澡葬则葬糟贼藻则蚤扎葬鄄
贼蚤燥灶 燥枣 葬 糟阅晕粤 糟造燥灶藻 藻灶糟燥凿蚤灶早 葬 责怎贼葬贼蚤增藻 憎澡蚤贼藻 泽责则怎糟藻 早造赠糟蚤灶藻鄄则蚤糟澡
砸晕粤 遭蚤灶凿蚤灶早 责则燥贼藻蚤灶咱允暂 援 郧藻灶藻袁 员怨怨怨袁 圆源园渊圆冤院 猿苑怨 原 猿愿愿
咱员圆暂 杂贼藻责澡藻灶 允 砸袁 阅藻灶贼 运 悦袁 云蚤灶糟澡鄄杂葬增葬早藻 宰 耘援 粤 糟阅晕粤 藻灶糟燥凿蚤灶早 葬
糟燥造凿鄄蚤灶凿怎糟藻凿 早造赠糟蚤灶藻鄄则蚤糟澡 砸晕粤 遭蚤灶凿蚤灶早 责则燥贼藻蚤灶 枣则燥皂 孕则怎灶怎泽 葬增蚤怎皂
藻曾责则藻泽泽藻凿 蚤灶 藻皂遭则赠燥灶蚤糟 葬曾藻泽 咱 允暂 援 郧藻灶藻袁 圆园园猿袁 猿圆园 渊圆苑冤院 员苑苑
原 员愿猿
咱员猿暂 云藻则怎造造燥 允 酝袁 灾藻忆扎蚤灶葬 蕴 孕袁 砸葬蚤造 允袁 藻贼 葬造援 援 阅蚤枣枣藻则藻灶贼蚤葬造 葬糟糟怎皂怎造葬贼蚤燥灶
燥枣 贼憎燥 早造赠糟蚤灶藻则蚤糟澡 责则燥贼藻蚤灶泽 凿怎则蚤灶早 糟燥造凿鄄葬糟糟造蚤皂葬贼蚤燥灶 葬造枣葬造枣葬咱允暂 援 孕造葬灶贼
酝燥造藻糟怎造葬则 月蚤燥造燥早赠袁 员怨怨苑袁 猿猿渊源冤院 远圆缘 原 远猿猿
咱员源暂 冯摇 缨袁 尹林克援 柽柳属植物镜下器官特征描述及分类学意义
咱允暂 援 干旱区研究袁 圆园园园袁 员苑渊猿冤院 源园 原 源缘
咱员缘暂 高彩球援 晕葬匀悦韵猿 胁迫下刚毛柽柳基因表达谱的建立及相关基
因的克隆咱阅暂援哈尔滨院东北林业大学袁圆园园苑
咱员远暂 王玉成袁 杨传平袁 姜摇 静援 紫丁香尧糖槭总 砸晕粤的快速提取方
法咱允暂 援 东北林业大学学报袁 圆园园猿袁 圆怨渊远冤院 怨园 原 怨员
咱员苑暂 蕴蚤增葬噪 运 允袁 杂糟澡皂蚤贼贼早藻灶 栽 阅援 粤灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 则藻造葬贼蚤增藻 早藻灶藻 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 凿葬鄄
贼葬 怎泽蚤灶早 则藻葬造鄄贼蚤皂藻 择怎葬灶贼蚤贼葬贼蚤增藻 孕悦砸 葬灶凿 贼澡藻 圆渊鄄阅藻造贼葬 阅藻造贼葬 悦渊栽冤冤
酝藻贼澡燥凿 咱允暂 援 酝藻贼澡燥凿泽袁 圆园园员袁 圆缘渊源冤院 源园圆 原 源园愿
咱员愿暂 陈万利袁 刘宗旨袁 李文华援 植物富含甘氨酸蛋白质渊郧砸孕冤及其
基因研究进展咱 允暂 援 东北农业大学学报袁 圆园园缘袁 猿远 渊源冤院 缘员圆
原 缘员怨
咱员怨暂 砸蚤灶早造蚤 悦袁 运藻造造藻则 月袁 砸赠泽藻则 哉援 郧造赠糟蚤灶藻鄄则蚤糟澡怎 责则燥贼藻蚤灶泽 葬泽 泽贼则怎糟贼怎则葬造
糟燥皂责燥灶藻灶贼泽 燥枣 责造葬灶贼 糟藻造造 憎葬造造泽咱 允暂 援 悦藻造造 酝燥造 蕴蚤枣藻 杂糟蚤袁 圆园园员袁 缘愿
渊员园冤院 员源猿园 原 员源源员
咱圆园暂 蕴燥则噪燥增蚤糟 在 允援 砸燥造藻 燥枣 责造葬灶贼 砸晕粤鄄遭蚤灶凿蚤灶早 责则燥贼藻蚤灶泽 蚤灶 凿藻增藻造燥责皂藻灶贼袁
泽贼则藻泽泽 则藻泽责燥灶泽藻 葬灶凿 早藻灶燥皂藻 燥则早葬灶蚤扎葬贼蚤燥灶 栽则藻灶凿泽 咱 允暂 援 孕造葬灶贼 杂糟蚤袁
圆园园怨袁 员源渊源冤院 圆圆怨 原 圆猿远
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早造赠糟蚤灶藻鄄则蚤糟澡 砸晕粤鄄遭蚤灶凿蚤灶早 责则燥贼藻蚤灶 圆 蚤灶 粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽 贼澡葬造蚤葬灶葬 怎灶凿藻则
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咱圆圆暂 运蚤皂 允 杂袁 允怎灶早 匀 允袁 蕴藻藻 匀 允袁 藻贼 葬造援 郧造赠糟蚤灶藻鄄则蚤糟澡 砸晕粤鄄遭蚤灶凿蚤灶早 责则燥鄄
贼藻蚤灶 苑 葬枣枣藻糟贼泽 葬遭蚤燥贼蚤糟 泽贼则藻泽泽 则藻泽责燥灶泽藻泽 遭赠 则藻早怎造葬贼蚤灶早 泽贼燥皂葬贼葬 燥责藻灶蚤灶早
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源缘缘 原 源远远
咱圆猿暂 运蚤皂 再 韵袁 运蚤皂 允 杂袁 运葬灶早 匀援 悦燥造凿鄄蚤灶凿怎糟蚤遭造藻 扎蚤灶糟 枣蚤灶早藻则鄄糟燥灶贼葬蚤灶蚤灶早
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渊远冤院 愿怨园 原 怨园园
咱圆源暂 粤灶藻藻贼葬袁 杂葬灶葬灶鄄酝蚤泽澡则葬 晕袁 栽怎贼藻躁葬 晕袁 藻贼 葬造援 杂葬造蚤灶蚤贼赠鄄 葬灶凿 粤月粤鄄蚤灶鄄
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凿蚤灶早 早造赠糟蚤灶藻鄄则蚤糟澡 砸晕粤鄄遭蚤灶凿蚤灶早 责则燥贼藻蚤灶 枣则燥皂 杂燥则早澡怎皂 遭蚤糟燥造燥则咱 允暂 援
月蚤燥糟澡藻皂 月蚤燥责澡赠泽 砸藻泽 悦燥皂皂怎灶袁 圆园园圆袁 圆怨远渊缘冤院 员园远猿 原 员园远愿
咱圆缘暂 晕燥皂葬贼葬 栽袁 运葬遭藻赠葬 再袁 悦造燥灶蚤灶早 杂 晕援 糟澡葬则葬糟贼藻则蚤扎葬贼蚤燥灶 燥枣 早造赠糟蚤灶藻鄄则蚤糟澡
砸晕粤鄄遭蚤灶凿蚤灶早 责则燥贼藻蚤灶 糟阅晕粤泽 蚤灶 贼澡藻 皂燥泽泽 孕澡赠泽糟燥皂蚤贼则藻造造葬 责葬贼藻灶泽咱允暂 援
孕造葬灶贼 悦藻造造 孕澡赠泽蚤燥造袁 圆园园源袁 源缘渊员冤院 源愿 原 缘远
咱圆远暂 杂澡蚤灶燥扎怎噪葬 匀袁 匀蚤泽葬灶燥 匀袁 再燥灶藻赠葬皂葬 杂袁 藻贼 葬造援 郧藻灶藻 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 葬灶凿
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郧藻灶藻贼 郧藻灶燥皂蚤糟泽袁 圆园园远袁 圆苑缘渊源冤院 猿怨怨 原 源园愿
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