全 文 ：第 3 卷 第 3 期
1 9 9 0 年 6 月
林 业 科 学研 究
F O R E S T R ES E A R CH
V o l
。
3 , N o
.
3
Ju n
. , 1 9 9 0
利用棉铃虫为宿主增殖松毛虫质型多角体病毒 *
陈昌洁 王志贤 陶 粮 刘 革
(中国林业科学研究院林业研究所 )
关健词 棉铃 虫 ; 松毛 虫 ; 质型 多角体病毒
应用细胞质多角体病毒 JD S- C PV 在日本防治赤松毛虫 (D e : d l o lf二。 : : p e c , a b玄Ifs) 以 及
在我国台湾省防治马尾松毛虫(D . Pu 解tat us )均取得较好的效果 I’一“〕。 自1 9 8 3年 以来 , 利用
JD S CP V 在我国广东 、 云南、 浙江 、 安徽等省防治松毛虫 , 也都具有很好的效果I’] 。 JD 导
CP V 的复制 , 过去主要是利用林间的松毛虫。 如何使之成为周期性的连续生产 , 宿主 的供
应是个需解决的 间题。
利用宿主的自然种群 , 人工饲料饲养宿主昆虫以及昆虫组织细胞等方式增殖病毒 , 是当
前昆虫病毒复制的几种方法。 JD导CPV 商品制剂“松开命 ”(Mat s u k em in ) 的生产主要是利
用宿主的自然种群在林间大量复制 , 再经室内提取制备而 成。 此法的缺点是受季节性及虫源
限制 , 且往往遭到天敌的寄生或感染 。 va n de rz a nt 工“ “]等开创了应用半合成人工饲料大规模
地饲养昆虫 , 并用于病毒的增殖 。 Ig no ffo (1 9 64) 将此法用于粉纹夜蛾 T : fch op l好l’a 成 N PV
的生产 , 以后又用于棉铃虫、 黄杉毒蛾、 舞毒蛾 N PV 的大量生产川 。
此外 , 利用某些病毒可以感染原宿主以外昆虫的特点 , 可以选择易饲养、 周期短、 生物
量大、 病毒产量高的昆虫为宿主进行病毒工厂化生产 , 如加拿大黄杉毒蛾 N P V 的生产 [s1 。
但至今未见 C PV 有类似的报道。 为了给今后 CPV 工业化生产提供实验 依 据 , 1 9 83一1 9 8 5
年 , 利用棉铃虫为宿主进行了 C PV 的感染试验 , 现将结果报道于后 。
一 、 材料和方法
1
. 病毒来源 供试病毒为日本赤松毛虫质型多角体病毒 (D en d o li二us sP ec tab l’i : CPV ,
简称JD S一CPV ) , 在安徽马尾松毛 虫上感染而获得的一种松毛虫 CPV 新毒株。
2
. 替换宿主 棉铃虫 H el iot 厉: a1 而ge la (H a) 由中国农科院钱纪放 、 赵永巧同志提供
虫卵及饲料配方(配方从略)。
3
. 试虫饲养及病毒接种 用 2 %次氯酸钠液处理卵表 2 m in , 经清洗后置 28 ℃ , 相 对
湿度80 % ~ 90 %条件下孵化 , 幼 虫孵化后48 h ( 2 龄 )接病毒 , 单管饲养单管接毒 , 接 毒 浓
度为。. 056 亿/ 管 , 接毒虫在28 士。. 5 ℃ , 相对湿度80 % ~ 90 % , 光照16 h , 黑暗 s h 条件下
饲养。
本文于 1 98马年1 1月 3 0 日收到。
* 工作中曾得 到钱纪放先生的大力协助 , 中国林科院电俄组协助拍板电俄照片, 特此一并致谢 .
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4
.
R N A 提取 和电泳方法 多角体 、 R NA 提取以及 R N A 电泳分析 , 参照陶粮 等 的方
法 [。l。
二 、 结果与分析
1
. 人工饲料饲养的棉铃虫 , 在28 ℃条件下完成一个世代需 31 ~ 32 天 。 卵期 3 天 , 幼虫期
1 天 , 预蛹 2 一 3 天 , 蛹期10 天 , 成虫 4 ~ 5 天 。 在第二龄幼虫时接毒 , 每管0 . 0 56 亿 , 接毒
后 1 1一1 2天 即可采收。
2
. 松毛虫 CPV 接毒棉铃虫幼虫后 , 中肠肿胀 , 呈白色或黄白色 , 为典型的质型多角体
病毒病 。 镜检病肠 , 可见到大量多角体(图版 I 一 1 ~ 4 )。 根据对 1 46 头棉铃虫幼虫试验 , 每
头分别以 0 . 0 56 亿多角体量的感染检查结果表明 , 感染率可高达 10 % 。 证实棉铃虫不 仅 可
用作松毛虫 C PV 的替换寄主 , 而且可在室内控制条件下进行松毛虫 C PV 的大量增殖 。
3
。 松毛虫 C PV 接毒棉铃虫后 , 到采收时 , 虫体重量的变异幅度不大(表 1 ), 平 均 为
。. 3 8~ 0 . 42 9 / 虫, 多角体产量平均 2 . 83 亿/ 虫 。 这与林间以松毛虫为宿主大量增殖 松 毛 虫
CPV 时多角体的回收量相近似 。 从表 1 看出 , 各取样间平均每虫多角体产量差异 较 大 , 差
数为2 . 45 倍 。 这可能和取样时间的先后有关。 按平均 2 . 83 亿 / 虫的增殖量 , 约 18 头虫所产生
的多角体即可防治一亩林地的松毛虫。
表 1 松毛虫C P v在柏铃虫上的增班t
戮 取 样 数(头 ) 总虫体重 平均单虫体重 ! 总 中肠重 平均单虫 中肠重( g ) ( g ) ( g ) 多角体总 t(亿 ) 平均每虫多角体(亿 )摊,几586..0‘112曰.⋯己且月‘3品J月‘9月毛16,‘n.3.1. .⋯口.jgn扭匕2月吸60书6 。 4 07 . 6 09 。 3 4
1 1
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.
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.
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表 2 松毛虫CP V 在H a 上增殖后
室内对松毛虫的感染
供试浓度
{
供试虫 ,
}
死亡虫 ,
}
死 “ 率
( C p B / m l, } ‘头 , } ‘头 , } ( % )
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}
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}
“
{
C K : {
1 2 1 { 12 {
注 : 试虫为第一代 5 龄幼虫 。
4
. 从表 2 看出 , 在棉铃虫上增殖 的松
毛虫 CPV , 对松毛虫也有较高的致死率 。这
一结果与相同浓度的原病原对原宿主的致死
率相似 。 棉铃虫感病后存活的残留幼虫 , 蛹
期的死亡率还可达1 4 . 8% 。
5
. 松毛虫病毒与在棉铃虫上增殖 的 病
毒以及棉铃虫自身的病毒 , 在包含体外部形
态上较难区别 , 但似乎棉铃虫病毒以锥形为
多 , 而松毛虫病毒则多为六角形和近圆形 (图
版 I 一 i ~ 4 ) 。 根据 CPV 于R N A 电泳图谱 ,
日本原株、 安徽感染株和棉铃虫原株 , 分属三种不同类 型 (图版 I 书~ 8 ) 。 日本原株为 9 条
带 , 10 个基因片段 (图版 工一 5 ) , 棉铃虫则有12 条 带 (图版 工于8 ) 。 据钱纪放等的 研 究‘》, 棉
飞) 钱纪放等, 1 9 86 年 , 杭铃虫质型多角体病禅的荃抽与应用研究 (待发表 )o
3 期 陈昌洁等 : 利用棉铃虫为宿主增殖松毛 虫质型多角体病毒 2 6 5
铃虫病毒的基因组可能有1 4条带以上 , 甚至 多达16 个基因片段 。而松毛虫 CPV 在棉铃虫上的
感染材料则兼具两株病毒的R N A 带谱 。 这可分析为既有感染 , 也有诱发 , 属两株病 毒的混
合物 (图版 工一 7 )。 JD导C PV 在安徽马尾松毛虫上的感染株与原株的 R N A 带谱也不 完 全
相同 。 安徽感染株在 6 、 7 带处各多出一条带 , 经多次复制 , 其带谱稳定(图版 I 一 6 )o
以上试验结果表明 , 松毛虫 CPV 无论在松毛虫上以及棉铃虫上的感染株 , 对 松毛虫种
群都可产生较好的控制效果 。 以棉铃虫为宿主增殖松毛虫 C PV 是完全可行的。
参 考 文 献
〔i 〕 K o y a m a , R . , i o 6 e , o n t he e o n tr o l o f th e p in e c a te r p illa r u s in g S m ith ia v ir u s , T r a n s ii th J .
J a夕 . F o r . S o c . (In j a p a n e s e ) , 3 5。~ 3 7‘.
[ 2 」 Y in g , 5 . L . , 10 7 0 , A p P lie a t io n o f I s a ri a sP . , C y to P la s m ie Po lyh e d r o s is V iru s a n d B a c illu s
才h“ r‘。夕ie ” 5 1: a g a in st t h e p in e e a te r p illa r D e ”d r o li爪u : p u o e ta tu : , Q . J . C h i: e s e F o r . , (魂):
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〔s 〕 Y in g , 5 . L . , 1 , a6 , A d e e a d e o f su e e e s : fu l e o n t r o l o f p in e e a te r p illa r D e o d r o li杭u s 夕u ”e ta t“s
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TH E R E PL!CAT !ON O F D E N D R O L IMU S
尸U N C T A T U S CPV BY H E L IO TH IS A R MIG E R A
Ch e n Cha n g jie W豆19 Z hix ia n Ta o Lia 昭 L iu G e
( T ho R e : e a r e h 1 0 5 *‘f。亡。 o f F o r e : 才r , C A F )
A b str a et T h is s t u由 d ea ls w ith th e r eP lica tio n o f D e nd : oll’m u s
C PV by th e co rto n bo llwo
r m H e li o this 盯m fg e , a -
p 赵刀c t a tu s C PV n o t o n ly ca n b e r e p lica te d by H
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th e v ir u s o f th e h o st
。
U n d e r th e CO n d itio n o f
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Pu 力c t a tu s
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