全 文 ：第 51 卷 第 5 期
2 0 1 5 年 5 月
林 业 科 学
SCIENTIA SILVAE SINICAE
Vol. 51，No. 5
May，2 0 1 5
doi:10．11707 / j．1001-7488．20150519
收稿日期: 2013 － 12 － 23; 修回日期: 2015 － 03 － 03。
基金项目: 国家“十二五”科技支撑计划(2012BAD19B0703) ; 国家林业公益性行业科研专项(201004061) ;江苏高校优势学科建设工程项
(PAPD)。
* 吴小芹为通讯作者。
一种马尾松菌根辅助细菌———短芽孢杆菌的筛选及鉴定*
李 倩 吴小芹 叶建仁
(南京林业大学南方现代林业协同创新中心 南京林业大学林学院 南京 210037)
摘 要: 【目的】菌根辅助细菌与菌根真菌是林木根际重要的微生物菌群，为探讨二者互作关系，采集马尾松人
工林中有外生菌根真菌彩色豆马勃子实体的菌根根际土壤，对分离获得的 74 株细菌进行菌根辅助细菌的筛选。
【方法】通过干皿对抗法筛选获得 1 株能高效促进外生菌根真菌彩色豆马勃( Pt2)和红绒盖牛肝菌(Xc)生长的菌
根辅助细菌 MPt17。【结果】MPt17 菌株对 Pt2 和 Xc 菌丝生长的平均增长率分别为 48. 6%和 25. 0%，其胞外代谢
产物对 Pt2 和 Xc 菌丝生长也有明显的促进作用，平均增长率分别为 129. 6%和 29. 5%，该菌株的胞外代谢产物对
Pt2 和 Xc 的生物量也有相一致的影响，生物量增长率分别为 124. 2%和 34. 2%。盆栽试验结果表明，双接种 Pt2 －
MPt17 处理、双接种 Xc-MPt17 处理、单接种 Pt2、单接种 Xc 和单接种 MPt17 较未接种处理的马尾松苗高分别提高
78. 0%，68. 2%，32. 7%，39. 2%和 53. 4%，地径分别提高 46. 3%，57. 5%，17. 5%，23. 8%和 25. 0%。由此可以确定
MPt17 既是菌根辅助细菌又是根际促生细菌。通过对 MPt17 菌株的菌落形态观察、BIOLOG 细菌自动鉴定仪鉴定
及 16SrDNA 序列测定，初步鉴定该菌株为短芽孢杆菌 ( Brevibacillus reuszeri)，在 GenBank 数据库中的登录号为
KF891383。【结论】MPt17 菌株与外生菌根真菌 Pt2 和 Xc 双接种马尾松幼苗对苗木的生长都具有明显的促进作
用，而且 MPt17 菌株单接种马尾松幼苗也能在一定程度上促进苗木的生长。通过外生菌根真菌(EMF) － 菌根辅
助细菌(MHB) －植物三者互作机制进行植物生长研究的方法，对类似研究具有重要意义。
关键词: 马尾松; 外生菌根真菌; 菌根辅助细菌; 短芽孢杆菌
中图分类号: S718. 8 文献标识码: A 文章编号: 1001 － 7488(2015)05 － 0159 － 06
Isolation and Identification of a Mycorrhiza Helper Bacteria(MHB)—
Brevibacillus reuszeri on Pinus massoniana Ｒoots
Li Qian Wu Xiaoqin Ye Jianren
(Foretry College，Nanjing Forestry University Southern Modern Forestry Cooperative Innovation Center Nanjing 210037)
Abstract: 【Objective】To investigate the interaction between ectomycorrhizal fungi and mycorrhiza helper bacteria，we
screened 74 bacterial strains isolated from the rhizosphere soil of Pinus massoniana that bore the fruiting body of Pisolithus
tinctorius．【Method】The dry-plate confrontation assay was used to screen the bacterial strains，and one strain of MHB was
obtained and defined as MPt17 which can efficiently promote the growth of Pisolithus tinctorius ( Pt2 ) and Xerocamus
chrysenteron (Xc) ． 【Ｒesult】The result showed that obtained MPt17 significantly promoted in vitro hyphal growth of Pt2
and Xc with an increasing rate of 48． 6% and 25． 0% ． The extracellular metabolites of Mpt17 were able to also obviously
promote the increment rate of Pt2 and Xc hypha by 129． 6% and 29． 5%，and consistently influence on Pt2 and Xc
biomass increment with an increasing rate of 124． 2% and 34． 2% ． Compared with the blank control，the pine seedlings
co-inoculated with Pt2 and MPt17 strain，co-inoculated with Xc and MPt17 strain，Pt2 alone，Xc alone，and MPt17 alone
all significantly increased their mean height with increasing rates of 78． 0%，68． 2%，32． 7%，39． 2% and 53． 4%，and
their diameter with increasing rates of 46． 3%，57． 5%，17． 5%，23． 8% and 25． 0% ． According to our results，Mpt17
was not only a Mycorrhiza Helper Bacterium but also a plant growth-promoting rhizobacterium． The MHB stain was
identified based on an analysis of morphologiacal characters，the BIOLOG system and 16SrＲNA gene sequences homology．
MPt17 was identified as Brevibacillus reuszeri，and the 16SrＲNA sequences have been registered at GenBank database
under the accession number of KF891383．【Conclusion】In this experiment the pine seedlings co-inoculated with Pt2 and
林 业 科 学 51 卷
MPt17 strain，and co-inoculated with Xc and MPt17 strain significantly improved the growth of pine seedlings，and MPt17
alone also improved the growth of seedlings to a certain extent． This study method with the interactions of ectomycorrhizal
fungi，Mycorrhiza Helper Bacteriun and plant has important reference implications for similar studies．
Key words: Pinus massoniana; ectomycorrhizal fungi; mycorrhiza helper bacteria; Brevibacillus reuszeri
植物促生根圈细菌 ( plant growth promoting
rhizobacteria)是指根际微生物区系中能够促进植物
生长、防治病害、增加作物产量的细菌。菌根辅助细
菌(mycorrhiza helper bacteria，MHB)是一类特殊的
植物促生根圈细菌，是指能够与菌根真菌特异性结
合，并促进菌根真菌在宿主植物根部的定殖、生长，
从而间接地促进植物生长的细菌 (Garbaye，1994)。
研究表明，菌根辅助细菌与菌根真菌双接种可显著
促进菌根真菌孢子萌发、促进真菌菌丝生长，提高菌
根侵染率等，从而有效地促进寄主植物生长(Aspray
et al．，2006)。因此，菌根真菌与根际有益微生物
(如菌根辅助细菌、植物促生根圈细菌)作为植物微
环境中的重要组成部分，在提高林木产量、维持农林
生态系统的稳定等方面都具有重要作用。
马尾松(Pinus massoniana)是我国南方主要的
速生用材树种之一，也是我国农林生态系统的重要
组成树种。马尾松的生长对菌根真菌依赖性很强，
是典型的外生菌根营养型树种。研究表明，彩色豆
马勃(Pisolithus tinctorius) ( Pt2)是马尾松的优良外
生菌根真菌，对马尾松苗生长有着显著的促进作用
(吴小芹等，2006)。一些根围细菌以及它们的培养
滤液能够促进摩西球囊霉(Glomus mosseae)孢子的
形成(Mosse，1962)。外生菌根真菌覆盖物中大多
数的细菌对黄色须腹菌(Ｒhizopogen luteous) (Ｒl)菌
丝的生长和菌根的形成具有促进作用 (Garbaye et
al．，1989)。一株解磷细菌和外生菌根真菌红绒盖
牛肝菌(Xerocomus chrysenteron) (Xc)双接种处理杨
苗显著促进了其生长并提高了杨苗的菌根侵染率
(刘 辉 等， 2012 )。将 一 株 分 离 自 黑 松 ( P．
thunbergii)的黄色须腹菌 (Ｒl)菌根际的 MHB 菌株
短小芽孢杆菌 ( Bacilus pumilus) HＲ10 与黄色须腹
菌(Ｒl)双接种处理黑松苗显著促进了其生长 (盛
江梅，2014)。本研究从野外马尾松林中采集有彩
色豆马勃子实体的菌根根际土壤，分离筛选根际
细菌并与本试验室前期筛选的优良外生菌根真菌
彩色豆马勃、红绒盖牛肝菌进行离体互作和盆栽
试验等，以期筛选出能够促进马尾松形成菌根并
能促进马尾松生长的菌根辅助细菌，可为找到高
效促进马尾松生长的途径、开发二元或多元生物
肥料提供依据。
1 材料与方法
1. 1 供试菌株 供试外生菌根真菌彩色豆马勃和
红绒盖牛肝菌保存于南京林业大学森林病理实验
室，采用马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)培养。
1. 2 马尾松根际微域土样的采集 2010 年 9 月在
江苏省林业科学研究院 30 ～ 40 年生马尾松人工林
中随机踏查采集彩色豆马勃子实体若干。采集时，
将彩色豆马勃子实体附近的腐殖质轻轻除去，沿着
彩色豆马勃子实体沿着土层向下挖深 10 ～ 20 cm，
采集与其相连的马尾松细根及其土壤。菌根真菌侵
染根后，根尖粗圆且有菌丝包裹，将这些颜色、形态
一致的菌根装入无菌自封袋中，标记后迅速带回实
验室，待用(张海涵等，2007)。
1. 3 马尾松根际土壤细菌的分离 用电子天平称
取根际土和非根际土各 1 g，在加有玻璃珠及 100
mL 无菌生理盐水的 250 mL 三角瓶中，200 r·m － 1
震荡培养 30 min，静置 20 ～ 30 min 后取出悬浮液稀
释至 10 － 4，10 － 3，无菌移液管吸取 50 uL 涂布于
KMB 培养基(蛋白胨 20 g、K2HPO4 1. 5 g、MgSO4·
7H2O 1. 5 g、甘油 10 g、琼脂 20 g、水 1 000 mL、pH
7. 0 ～ 7. 2)，置于 28 ℃培养箱中培养 2 天，观察菌落
形态并挑取单菌落纯化培养，以备后期筛选使用。
1. 4 细菌菌体与外生菌根真菌干皿对抗试验 将
分离获得的 74 株供试细菌接种于装有 50 mL KMB
液体培养基中，28 ℃、180 r·min － 1培养 72 h。将菌
悬液倒入灭菌的离心管中，4 ℃、5 000 r·min － 1离心
5 min，倒去上清液，根据离心管内菌体的数量适量
加入生理盐水，混匀后即为菌体悬浊液。将培养好
的彩色豆马勃和红绒盖牛肝菌菌根真菌菌块分别倒
置放入灭菌的空培养皿中，每皿接种 3 块，三角状放
置，再用无菌移液器吸取 25 μL 供试细菌菌体悬浊
液，滴加于各个真菌菌块上，以滴加生理盐水的作为
对照，置于 25 ℃ 培养箱中培养。每隔 6 天添加
25 μL的葡萄糖溶液，防止菌块干燥。待菌块生长
10 ～ 12 天后，用装有测微尺的体式显微镜观测各个
菌块的菌丝生长情况，计算供试菌株对菌根菌丝的
平均促生长量(Dunstan et al．，1998)。
1. 5 细菌胞外代谢产物对外生菌根真菌的促生测
定 将具菌根辅助细菌潜力的细菌菌株活化后，接
061
第 5 期 李 倩等: 一种马尾松菌根辅助细菌———短芽孢杆菌的筛选及鉴定
种于装有 50 mL KMB 液体培养基中，28 ℃、180 r·
min － 1培养 72 h。将菌悬液倒入灭菌的离心管中，
4 ℃、5 000 r·min － 1离心 5 min，用无菌注射器吸取
上清液，用细菌过滤器(滤膜孔径为 0. 22 μm，直径
为 0. 25 mm)过滤后即为胞外代谢产物的无菌滤液。
1) 细菌胞外代谢产物对外生菌根真菌菌丝生
长的影响 将 1 mL 无菌滤液与 45 ℃、20 mL PDA
混合倒平板，以无菌水处理作为对照。将菌根真菌
菌块接种于培养皿中央，置于 25 ℃恒温培养。10 ～
12 天后观测其菌落半径。
2) 细菌胞外代谢产物对外生菌根真菌生物量
的影响 用灭菌的打孔器打下菌饼( d = 7 mm，￠ =
5 mm)，每 50 mL PDA 液体培养基中加入菌饼 3 块，
同时加入 1 mL 胞外代谢产物，25 ℃、140 r·min － 1共
同摇瓶培养 10 ～ 12 天，定性滤纸过滤，再置于 60 ℃
烘箱中烘至恒质量，然后用电子天平进行测量。以
KMB 培养液为对照。
1. 6 外生菌根菌与细菌双接种的盆栽试验 用芽
苗截根法移栽马尾松幼苗，基质土与固体菌剂比例
为 10 ∶ 1，细菌接种液的量为每株 5 mL。取适量无
菌的盆栽基质装入培养盆中，然后在土层表面覆约
20 g的外生菌根菌剂; 用解剖刀将子叶期的马尾松
幼苗截取少量主根后移栽至培养杯中; 用无菌移液
管吸取 5 mL 的细菌菌体悬浊液，紧贴幼苗根系将其
缓缓注入，然后再覆一层基质土; 浇水定根(孙民琴
等，2007)。以只接种细菌、只接种外生菌根菌和不
接菌 3 种处理作为对照。置于 25 ℃温室培养，适时
浇水，统一管理。待生长 3 个月后测量苗高和地径。
1. 7 MHB 菌株鉴定 1) 生物学特征观察 将筛
选出来的菌根辅助菌株接种于 KMB 培养基中，
28 ℃培养 24 ～ 36 h，待出现单菌落时，挑取菌落进
行菌体形态、菌株培养特征、革兰氏染色、3% 氢氧
化钾 溶 解 性 试 验 和 芽 孢 染 色 试 验 ( 程 丽 娟，
1993)。
2) BIOLOG 系统鉴定 根据革兰氏染色和芽
孢染色结果选用 BIOLOG 鉴定板，采用 BIOLOG 微
生物鉴定系统(ELX808 型)对筛选获得的菌根辅助
细菌菌株进行鉴定，具体步骤参照说明书。
3)细菌 16SrDNA 序列测定及系统发育树的构
建 采用 SDS 法提取 MHB 菌株的 DNA(Ausubel et
al．，1999 )，溶解于适量的 TE 中，采用扩增细菌
16SrDNA 的一对通用引物 (正向引物 16Sf: AGA
GTT TGA TCC TGG CTC AG; 反向引物 16Sr: ACG
GCT ACC TTG TTA CGA CT，进行 PCＲ 产物的扩增
(蒋萍等，2008)。获得的 PCＲ 产物用 QIAGEN 公
司的纯化试剂盒纯化回收。
将得到的序列在 NCBI 上进行 BLAST 比对，选
取数据库中的有代表性的菌株 16SrDNA，采用
MEGA4. 0 软件构建系统发育树。
2 结果与分析
2. 1 MHB 潜力菌株对彩色豆马勃和红绒盖牛肝菌
的促生效应 将供试的 74 株细菌与彩色豆马勃
(Pt2)和红绒盖牛肝菌(Xc)进行干皿对抗试验，其
中 MPt17 菌株对二者菌丝生长的促进作用明显，与
对照相比，菌丝长度增长率分别为 48. 6%和 25. 0%
(表 1，图 1)。因此，可初步将 MPt17 视为具有菌根
辅助细菌潜力的菌株。
表 1 MPt17 对彩色豆马勃(Pt2)和红绒盖牛肝菌(Xc)菌丝生长的影响①
Tab． 1 The effect of the MPt17 bacteria suspension on the hapha growth of P． tinctorius (Pt2) and X． chrysenteron(Xc)
菌株 Strain
彩色豆马勃(Pt2)菌丝长度
Hyphae length of Pisolithus tinctorius (Pt2)
红绒盖牛肝菌(Xc)菌丝长度
Hyphae length of Xerocomus chrysenteron (Xc)
平均值
Average / cm
增长率
Growth rate(% )
平均值
Average / cm
增长率
Growth rate(% )
MPt17 2. 14 ± 0. 09b 48. 6 0. 80 ± 0. 09b 25. 0
CK 1. 44 ± 0. 10a — 0. 64 ± 0. 04a —
①* 不同小写字母表示差异显著(P ＜ 0. 05)Different letters mean significant difference (P ＜ 0. 05) ．下同 The same below．
2. 2 MHB 潜力菌株胞外代谢产物对彩色豆马勃和
红绒盖牛肝菌生长的影响 MPt17 潜力菌株胞外代
谢产物与外生菌根真菌彩色豆马勃( Pt2)和红绒盖
牛肝菌(Xc)的共培养试验表明，MPt17 潜力菌株对
彩色豆马勃 ( Pt2)的生长有明显的促进作用，与对
照相比，菌丝直径增长率为 129. 6% (表 2，图 2 －
A); 其对红绒盖牛肝菌(Xc)也有一定的促进作用，
与对照相比，菌丝直径增长率为 29. 5% ( 表 2，
图 2 － B)。将 MPt17 潜力菌株胞外代谢产物与 2 种
外生菌根真菌液体共培养试验表明，MPt17 胞外代
谢产物对彩色豆马勃(Pt2)和红绒盖牛肝菌(Xc)的
生物量也有不同程度的促进作用，与对照相比，彩色
豆马勃(Pt2)的生物量增长率为 124. 2%，红绒盖牛
肝菌(Xc)的生物增长率为 34. 2%。
161
林 业 科 学 51 卷
表 2 MPt17 胞外代谢产物对彩色豆马勃(Pt2)和红绒盖牛肝菌(Xc)菌丝生长的影响
Tab． 2 The effect of the MPt17 bacteria extracellular metabolites on the hyphagrowth of P． tinctorius (Pt2) and X． chrysenteron (Xc)
菌株
Strain
彩色豆马勃(Pt2)菌丝长度
Hyphae length of P． tinctorius (Pt2)
红绒盖牛肝菌(Xc)菌丝长度
Hyphae length of X． chrysenteron(Xc)
大小
Size / cm
增长率
Growth rate(% )
大小
Size / cm
增长率
Growth rate(% )
MPt17 6. 13 ± 0. 31b 129. 6 5. 27 ± 0. 35b 29. 5
CK 2. 67 ± 0. 56a — 4. 07 ± 0. 19a —
图 1 MPt17 细菌菌体对彩色豆马勃(Pt2)菌丝生长的影响
Fig． 1 The effect of the MPt17 bacteria suspension on the hypha growth of P． tinctorius (Pt2)
图 2 菌株 MPt17 无菌滤液对彩色豆马勃(Pt2)菌落和红绒盖牛肝菌(Xc)菌落生长的影响
Fig． 2 The effect of the MPt17 bacterial extracellular metabolites on the colony growth of P． tinctorius(Pt2) (A) and X． chrysenteron(Xc) (B)
2. 3 MHB 潜力菌株分别与彩色豆马勃和红绒盖牛
肝菌双接种对马尾松生长的影响 单接种彩色豆马
勃(Pt2)或 MPt17 菌株、双接种彩色豆马勃( Pt2)和
MPt17 于马尾松幼苗，3 个月后的生长情况见 (表
3)。与对照相比，单接种(细菌或真菌)和双接种马
尾松苗都对其生长起到了一定的促进作用，且双接
种处理的效果较单接种处理好。单接种菌根辅助细
菌 MPt17 苗高和茎粗比对照增加了 53. 4% 和
25. 0%，单接种彩色豆马勃(Pt2)苗高和茎粗比对照
增加了 32. 7%和 17. 5%，Pt2 + MPt17 双接种的促生
效果 最 好，苗 高 和 茎 粗 比 对 照 增 加 了 78. 0%
和 46. 3%。
MPt17 菌株与红绒盖牛肝菌 (Xc)双接种马尾
松苗 3 个月后生长情况见(表 3)，单接种外生菌根
真菌红绒盖牛肝菌(Xc)苗高和茎粗比对照增加了
39. 2%和 23. 8%，Xc + MPt17 双接种的促生效果最
好，苗高和茎粗比对照增加了 68. 2%和 57. 5%。
2. 4 MPt17 菌株的生物学特征 在 KMB 培养基平
板上，菌落较小，颜色米黄色，圆形，边缘整齐; 菌体
短杆状(图 3)，革兰氏染色阳性，有芽孢。
2. 5 MPt17 菌株 BIOLOG 系统鉴定 MPt17 菌株在
BIOLOG 鉴定板上上培养 16 ～ 24 h 时的读数相似值
(SIM 值)均大于 0. 5，且菌株鉴定结果与数据库中
所比对出的细菌种类的相似性为 99%。结合形态、
生理生化特征及 16SrDNA 序列分析，鉴定 MPt17 为
短芽孢杆菌(Brevibacillus reuszeri)。
图 3 培养 24 h 后的 MHB 菌株的菌体形态
Fig. 3 The cell morphology of MHB strains cultured after 24 h
2. 6 MPt17 菌株 16SrDNA 序列分析及系统发育树
构建 序列去除载体序列后，获得 MPt17 菌株
1 370 bp的 16SrDNA 序列，序列提交 GenBank 数据
库，获 得 的 登 陆 号 为 KF891383。将 MPt17 的
16SrDNA 序列与 GenBank 中的序列进行 BLAST 比
对，获得同源性数值，比对结果中与 MPt17 菌株相
261
第 5 期 李 倩等: 一种马尾松菌根辅助细菌———短芽孢杆菌的筛选及鉴定
似性最高的是短芽孢杆菌，同源性达 99%。从图 4
的进化树可以看出，MPt17 菌株遗传进化距离与短
芽孢杆菌亲缘关系较近。结合 MPt17 菌株的生物
学特征及 BIOLOG 细菌鉴定结果，MPt17 菌株鉴定
为短芽孢杆菌。本菌已保藏于中国典型培养物保藏
中心，保藏编号(CCTCC No．为 M 2011433)。
表 3 MPt17 分别与彩色豆马勃(Pt2)和红绒盖牛肝菌(Xc)双接种对马尾松苗生长的影响
Tab． 3 The effect of the MPt17 strains inoculated with P． tinctorius (Pt2) and X． chrysenteron (Xc) on the
growth of Pinus massoniana seedling
处理
Treatment
苗高
Seedling height / cm
增长率
Growth rate(% )
地径
Ground diameter /mm
增长率
Growth rate(% )
MPt17 + Pt2 14. 10 ± 1. 18d 78. 0 1. 17 ± 0. 70c 46. 3
MPt17 + Xc 13. 32 ± 1. 40c 68. 2 1. 26 ± 0. 30d 57. 5
MPt17 12. 15 ± 0. 34c 53. 4 1. 00 ± 0. 15b 25. 0
Pt2 10. 51 ± 0. 50b 32. 7 0. 94 ± 0. 36b 17. 5
Xc 11. 03 ± 0. 17b 39. 2 0. 99 ± 0. 25b 23. 8
CK 7. 92 ± 0. 57a — 0. 80 ± 0. 21a —
图 4 MHB 菌株 MPt17 的系统发育树
Fig． 4 The phylogenetic tree based on the MHB strain MPt17
3 结论与讨论
MHB 除了能从各种菌根与菌根圈中分离出来，
还能从外生菌根真菌子实体、AMF 的孢子、根瘿、白
蚁堆以及重金属污染的土壤中分离出来(Garbaye et
al．，1989; Xavier et al．，2003; Duponnois et al．，
2006; Bianciotto et al．，1996)。在 MHB 的作用机制
中，促进菌根真菌的生长是最直接、最重要的一个作
用机制，因此这也成为筛选 MHB 的一个重要依据
(盛江梅，2008)。本试验采集马尾松林中长有彩色
豆马勃子实体的菌根根际土壤经传统稀释分离法分
离，获得大量的根际细菌; 并采用干皿对抗法进行
MHB 的筛选，获得 1 株对彩色豆马勃( Pt2)和红绒
盖牛肝菌(Xc) 2 种外生菌根真菌生长都具有促进
作用的细菌; 经形态、生理生化以及 16SrDNA 序列
分析鉴定为短芽孢杆菌。试验进一步证实了 MHB
可以从 EMF 子实体上采集到。
MHB 对不同的真菌种类具有不同的作用效果，
某些 MHB 可以与多种菌根真菌协同作用，具有广
泛性，而有些 MHB 却具有极强的选择性，只能与某
一种真菌相互作用 ( Ｒiedlinger，2006)。本试验筛
选获得的 MHB 菌株 MPt17 对 Pt2 和 Xc 都表现出促
进作用，对美味牛肝菌 (Boletus edulis)和劣味乳菇
(Lactarius insulsus)未表现出促生作用 (数据未发
表)。这一现象表明 MPt17 菌株具有一定的真菌选
择性。
根际细菌对外生菌根真菌的促进作用是通过多
个方面共同作用的结果，其中包括菌体的作用和细
菌分泌的次生代谢物的作用等。本试验筛选出的
MPt17 菌株的菌体和胞外代谢物对 Pt2 和 Xc 菌丝
的生长都有明显的促进作用。
本研究通过温室盆栽试验对离体筛选获得的
MHB 潜力菌株是否具有 MHB 的作用进行了进一步
的验证。试验结果表明，MPt17 菌株与 Pt2 和 Xc 双
接种马尾松幼苗对苗木的生长都具有明显的促进作
用，而且 MPt17 菌株单接种马尾松幼苗也能在一定
程度上促进苗木的生长。可见，MPt17 既是菌根辅
助细菌也是根际促生细菌。
有研究将马尾松林地分离筛选获得的马尾松外
生菌根真菌、马尾松根际土壤溶磷菌进行组合、优
361
林 业 科 学 51 卷
化，制成复合微生物菌剂(黄鹏飞，2012)。本试验
中的短芽孢杆菌 MPt17 菌株与 Pt2、Xc 均表现出对
马尾松生长的协同作用，对其菌剂的制备有待进一
步研究。外生菌根真菌 －菌根辅助细菌 －植物三者
互作机制进行相关的研究将有利于更好地将外生菌
根真菌与菌根辅助细菌的结合，这对促进植物生长、
维持农林业的可持续发展具有重要的意义。
参 考 文 献
程丽娟 ． 1993．微生物实验技术 ．西安:天则出版社 ．
(Chen L J． 1993． Laboratory Manual of Microbiology． Xi’an:Day，Press．
［in Chinese］)
黄鹏飞 ． 2012．马尾松复合微生物菌剂的研制及应用 ．长沙:中南林业
科技大学硕士学位论文 ．
(Huang P F． 2012． Development and application of compound fungal and
bacterial fertilizers of Pinus massoniana． Changsha: MS thesis of
Central South University of Forestry＆Technology．［in Chinese］)
蒋 萍，叶建仁 ． 2008．马尾松叶面拮抗细菌 NA 的分子鉴定 ． 新疆农
业大学学报，31(3) :39 － 42．
( Jiang P，Ye J Ｒ． 2008． Identification on molecular of an antagonistic
bacteria NA isolated from leaf surface of Pinus massoniana． Journal
of Xinjiang Agricultural University，31(3) :39 － 42．［in Chinese］)
刘 辉，吴小芹，任嘉红，等 ． 2012． 荧光假单胞菌及红绒盖牛肝菌接
种对 NL － 895 杨生长和光合特征的影响 ． 西部林业科学，41
(1) :53 － 59．
( Liu H，Wu X Q，Ｒen J H，et al． 2012． Effect of Inoculating Pesudomonas
fluorenscens and Xerocomus chrysenteron on growth and photosynthetic
characteristics of NL-895 poplar． Journal of West China Forestry
Science，41(1) :53 － 59．［in Chinese］)
盛江梅 ． 2014．黑松—黄色须腹菌共生体根际菌根辅助细菌的筛选及
鉴定 ．东北林业大学学报，42(5) :110 － 114．
( Sheng J M． 2014． Isolating and identifying mycorrhiza helper bacteria
from the rhizosphere soil of Pinus thunbergii inoculated with
Ｒhizipogen luteous． Journal of Northeast Forestry University，42(5) :
110 － 114．［in Chinese］)
盛江梅 ． 2008．黑松菌根根际菌根辅助细菌 (MHB)筛选研究 ． 南京:
南京林业大学硕士学位论文 ．
( Sheng J M． 2008． Isolating and Identifying mycorrhiza helper bacteria
from the Pinus thunbergii． Nanjing: MS thesis of Nanjing Forestry
University．［in Chinese］)
孙民琴，吴小芹，叶建仁 ． 2007．外生菌根真菌对不同松树出苗和生长
的影响 ．南京林业大学学报:自然科学版，31(5) :39 － 43．
( Sun M Q，Wu X Q． Ye J Ｒ． 2007． Effects of ectomycorrhizal fungi on
germination and growth of pines． Journal of Nanjing Forestry
University: Natural Sciences Edition，31 ( 5 ) : 39 － 43． ［ in
Chinese］)
吴小芹，孙民琴 ． 2006．七株外生菌根真菌与三种松苗菌根的形成能
力 ．生态学报，26(12) :4186 － 4191．
(Wu X Q， Sun M Q． 2006． Mycorrhizal formation between seven
ectomycorrhizal fungi and seedlings of three pines species． Acta
Ecologica Sinica，26(12) :4186 － 4191．［in Chinese］)
张海涵，唐 明，陈 辉，等 ． 2007． 不同生态条件下油松 ( Pinus
tabulaeformis)菌根根际土壤微生物群落 ． 生态学报，27 ( 12 ) :
5463 － 5470．
(Zhang H H，Tang M，Chen H． 2007． Microbial communities in Pinus
tabulaeformis mycorrhizosphere under different ecological conditions．
Acta Ecologica Sinica，27(12) :5463 － 5470．［in Chinese］)
Aspray T J，Frey-Klett P，Jones J E． 2006． Mycorrhization helper bacteria:
a case of specificity for altering ectomycorrhiza architecture but not
ectomycorrhiza formation． Mycorrhiza，16(8) :533 － 541．
Ausubel F M，Brent Ｒ，Kingston Ｒ E，et al． 1999． Short Protocols in
Molecular Biology． 4th ed． Greene Pub Associates，1 － 1319．
Bianciotto V，Minerdi D，Perotto S． 1996． Cellular interactions between
arbuscular mycorrhizal fungi and rhizosphere bacteria． Protoplasma，
193:123 － 131．
Dunstan W A，Malajczuk N，Dell B． 1998． Effects of bacteria on
mycorrhizal development and growth of container grown Eucalyptus
diversicolor F Muell seedlings． Plant Soil，201:241 － 249．
Duponnois Ｒ，Kisa M． 2006． The possible role of trehalose in the
mycorrhiza helper effect． Can J Bot，84:1005 － 1008．
Garbaye J． 1994． Helper bacteria: a new dimension to the mycorrhizal
symbiosis． New Phytologist，128(2) :197 － 210．
Garbaye J，Bowen G D． 1989． Stimulation of mycorrhizal infection of Pinus
radiata by some micro-organisms associated with the mantle of
ectomycorrhizas． New Phytol，112:383 － 388．
Ｒiedlinger J． 2006． Die stofflichen Grundlagen der Modulation des
Myzelwachstums von sym-biotischen und pathogenen Pilzen durch
Streptomyzeten． PhD thesis of University of Tubingen，Tubingen，
Germany．
Mosse B． 1962． The establishment of vesicular-arbuscular mycorrhiza
under aseptic conditions． J Gen Microbiol，27:509 － 520．
Xavier L J C，Germida J J． 2003． Bacteria associated with Glomus clarum
spores influence mycorrhizal activity． Soil Biol Biochem，35:471 －
478．
(责任编辑 朱乾坤)
461